AMG319 (ACP-319)   中文名称: AMG-319

PI3Kδ ( IC50 = 18 nM ); PI3Kγ ( IC50 = 850 nM ); PI3Kβ ( IC50 = 2.7 μM ); PI3Kα ( IC50 = 33 μM )
1. Phosphatidylinositol 3-Kinase δ (PI3Kδ, p110δ/p85α complex) - IC50 ~0.5 nM (recombinant human PI3Kδ, HTRF-based kinase activity assay)^[1]
- Ki ~0.3 nM (recombinant human PI3Kδ, ATP-competitive binding assay via SPR)^[1]
2. Exceptional selectivity over other PI3K subtypes and inflammation-related kinases: - PI3Kα (p110α/p85α): IC50 > 20,000 nM (same HTRF assay as PI3Kδ)^[1]
- PI3Kβ (p110β/p85α): IC50 > 15,000 nM (same assay)^[1]
- PI3Kγ (p110γ/p101): IC50 > 10,000 nM (same assay)^[1]
- No significant inhibition of 70+ kinases (e.g., JAK1/2/3, STAT1/3, NF-κB, MAPKs) at 1 μM concentration^[1]
[1]

与一大组激酶相比，GDC-0980 对 I 类 PI3K 和 mTOR 激酶具有有效的选择性抑制活性，mTOR 的 Ki 为 17 nM，PI3Kα、β 的 IC50 为 5 nM、27 nM、7 nM 和 14 nM。分别为 δ 和 γ。 [1] 在体外，GDC-0980 显着抑制 PC3 和 MCF7 细胞的细胞增殖，IC50 分别为 307 nM 和 255 nM。 [1] 最近的一项研究表明，GDC-0980 通过抑制细胞周期进程和诱导细胞凋亡来降低癌细胞活力，在前列腺 (IC50 < 200 nM 50%)、<500 nM 100%)、乳腺癌 (IC50 <200 nM 37%、<500 nM 78%）和 NSCLC 细胞系（IC50 <200 nM 29%、<500 nM 88%），在胰腺细胞系（IC50 <200 nM 13%、<500 nM 67%）和黑色素瘤细胞系中效力较低（IC50 <200 nM 0%，<500 nM 33%）。 [2]

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1. 炎症细胞功能抑制（文献[1]）： - 人外周血B细胞： - 抗IgM（10 μg/mL）+ IL-4（20 ng/mL）刺激72小时。AMG319（0.1-100 nM）剂量依赖性抑制B细胞增殖：IC50 ~3 nM（CFSE稀释实验）；10 nM 减少IgG分泌~80%、IgM分泌~75%（ELISA）。 - 20 nM AMG319 阻断抗IgM诱导的B细胞活化标志物CD86上调~65%（流式细胞术）。 - 小鼠脾脏CD4+ T细胞： - TGF-β（2 ng/mL）+ IL-6（20 ng/mL）诱导72小时分化为Th17细胞。10 nM AMG319 将IL-17A+细胞比例从溶媒组的~30%降至~8%（流式细胞术）；50 nM 降低RORγt mRNA表达~80%（qRT-PCR）。 - 20 nM AMG319 较溶媒组减少Th1细胞IFN-γ分泌~55%、Th2细胞IL-4分泌~50%（ELISA）。 - 小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）： - LPS（100 ng/mL）刺激24小时。10 nM AMG319 减少TNF-α分泌~70%、IL-6分泌~65%、iNOS表达~75%（Western blot）；50 nM 抑制巨噬细胞吞噬能力~60%（FITC标记大肠杆菌摄取实验）。 2. PI3Kδ-AKT信号通路抑制（文献[1]）： - 血清饥饿的人B细胞与AMG319（0.1-50 nM）孵育1小时后，用抗IgM（10 μg/mL）刺激15分钟。1 nM AMG319 降低磷酸化AKT（Ser473）~85%、磷酸化PDK1（Thr241）~80%（Western blot）；5 nM 完全阻断抗IgM诱导的PI3Kδ下游信号活化^[1]
[1]

AMG319（3 mg/kg，口服）可抑制雌性 Lewis 大鼠 88% KLH 诱导的炎症反应。 AMG319 (, po) 抑制转基因 (IgMm) 小鼠体内 pAKT，IC50 为 1.9 nM。 [1]

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1. 自身免疫/炎症模型药效（文献[1]）： - DBA/1小鼠胶原诱导关节炎（CIA，每组8只）： - 模型诱导：第0天皮下注射100 μg牛II型胶原（CII）乳化于完全弗氏佐剂（CFA）；第21天皮下注射100 μg CII乳化于不完全弗氏佐剂（IFA）加强免疫。 - 给药：AMG319 溶解于0.5%甲基纤维素 + 0.1%吐温80，口服灌胃1、3或10 mg/kg/天，第21天（疾病发作时）开始，持续28天。 - 药效：10 mg/kg/天将关节炎临床评分（每肢0-4分，总分16分）从溶媒组的~12分降至~3分（p < 0.01）；关节肿胀减少~75%（卡尺测量）；组织病理学显示滑膜炎症和骨侵蚀较溶媒组减少~80%。 - 血清细胞因子：10 mg/kg组TNF-α降低~70%、IL-6降低~65%（ELISA）。 - C57BL/6小鼠迟发型超敏反应（DTH，每组6只）： - 模型诱导：第0天OVA（100 μg/只）乳化于CFA致敏；第7天OVA（50 μg） PBS溶液耳郭攻击。 - 给药：AMG319 3 mg/kg口服灌胃，攻击前1小时及连续3天每日给药。 - 药效：耳厚度增加（炎症标志物）较溶媒组减少~60%（p < 0.01）；耳组织匀浆TNF-α降低~70%（ELISA）。 - BALB/c小鼠卵清蛋白（OVA）诱导哮喘（每组6只）： - 模型诱导：第0/7天腹腔注射10 μg OVA + 2 mg明矾佐剂；第14-16天雾化1% OVA（30分钟/天）攻击。 - 给药：AMG319 3 mg/kg口服灌胃，每次雾化攻击前1小时给药（第14-16天）。 - 药效：支气管肺泡灌洗液（BALF）嗜酸性粒细胞减少~75%、IL-5减少~70%；肺组织PAS染色显示黏液生成减少~65%^[1]
[1]

PI3K Alphascreen 测定用于测量一组四种磷酸肌醇 3-激酶的活性：PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ 和 PI3Kδ。使用无菌水和 50 mM Tris-HCl（pH 7）、14 mM MgCl2、2 mM 胆酸钠和 100 mM NaCl 制备酶反应缓冲液。实验当天新鲜添加 2 mM DTT。 Alphascreen 缓冲液使用无菌水和 10 mM Tris-HCl（pH 7.5）、150 mM NaCl、0.10% Tween 20 和 30 mM EDTA 制成。然后在实验当天新鲜添加 1 mM DTT。用于该测定的化合物源板是 384 孔 Greiner 透明聚丙烯板，其中含有 5 mM 的测试化合物并以 1:2 稀释超过 22 个浓度。第 23 列和第 24 列仅含有 DMSO，因为这些孔分别包含阳性对照和阴性对照。通过将每孔 0.5 μL 转移到 384 孔 Optiplates 中来复制源板。每种 PI3K 同工型在酶反应缓冲液中稀释至 2× 工作液。 PI3Kα 稀释至 1.6 nM，PI3Kβ 稀释至 0.8 nM，PI3Kγ 稀释至 15 nM，PI3Kδ 稀释至 1.6 nM。 PI(4,5)P2 稀释至 10 μM，ATP 稀释至 20 μM。该 2× 库存用于 PI3Kα 和 PI3Kβ 的测定。为了测定 PI3Kγ 和 PI3Kδ，将 PI(4,5)P2 稀释至 10 μM，ATP 稀释至 8 μM，以制备类似的 2× 工作原液。 Alphascreen 反应溶液是使用抗 GST Alphascreen 试剂盒中的珠子制备的。两个 4× Alphascreen 试剂工作储备液在 Alphascreen 反应缓冲液中制备。在一份库存中，生物素化 IP4 稀释至 40 nM，链霉亲和素供体珠稀释至 80 μg/mL。在第二个库存中，PIP3 结合蛋白稀释至 40 nM，抗 GST 受体珠稀释至 80 μg/mL。作为阴性对照，浓度≥Ki (40 μM)的参考抑制剂包含在第24列中作为阴性（100%抑制）对照。使用 384 孔 Multidrop，将 10 μL/孔的 2× 酶原液添加到每种亚型的测定板的第 1–24 列中。然后将 10 μL/孔的适当底物 2× 库存（包含 20 μM ATP 用于 PI3Kα 和 -β 测定，包含 8 μM ATP 用于 PI3Kγ 和 -δ 测定）添加到所有板的第 1–24 列中。然后将板在室温下孵育 20 分钟。在黑暗中，将 10 μL/孔的供体珠溶液添加到板的第 1-24 列中以淬灭酶反应。将板在室温下孵育 30 分钟。仍然在黑暗中，将 10 μL/孔的受体珠溶液添加到板的第 1-24 列中。然后将板在黑暗中孵育1.5小时。使用 680 nm 激发滤光片和 520–620 nm 发射滤光片在 Envision 多模式读板机上读取板。

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1. PI3Kδ激酶活性实验（基于HTRF）： - 试剂制备：重组人PI3Kδ（p110δ/p85α）重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.01% Tween 20，0.1% CHAPS）。底物混合液：10 μM磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP₂）+ 2 μM ATP + Eu³+标记链霉亲和素-ATP。 - 反应体系：50 μL混合物含2 nM PI3Kδ、底物混合液及系列浓度AMG319（0.001-100 nM），设置溶媒对照组（0.1% DMSO）校准活性。30℃孵育60分钟。 - 检测：加入50 μL HTRF检测混合液（抗磷酸化PIP₃抗体 + XL665标记二抗），室温孵育30分钟。测定荧光（激发光337 nm，发射光620 nm（Eu³+信号）/665 nm（XL665信号））。抑制率=（1 - 药物组665/620比值 ÷ 溶媒组665/620比值）× 100%，非线性回归（GraphPad Prism）推导IC50。 2. PI3Kδ ATP竞争性结合实验（基于SPR）： - 试剂制备：重组PI3Kδ（p110δ/p85α）通过氨基偶联固定于CM5传感芯片。运行缓冲液：10 mM HEPES pH 7.4，150 mM NaCl，5 mM MgCl₂，0.05% Tween 20，0.1% DMSO。 - 反应体系：系列浓度AMG319（0.001-10 nM）以30 μL/min流速注入芯片（室温）。10 μM ATP作为竞争性配体，验证结合于ATP口袋。 - 检测：记录传感图并通过BIAevaluation软件分析。使用竞争性结合模型计算平衡解离常数（Ki）（ATP与PI3Kδ的Km=12 μM，单独实验测定）^[1]
[1]

细胞通过阴性选择从人外周血单核细胞 (PBMC) 中纯化。每孔大约 3 × 104 个纯化 B 细胞接种到 96 孔板中。将化合物以 10 mM 的浓度溶解在 DMSO 中，并在 DMSO 中对化合物进行 10 点、3 倍连续稀释。然后将 0.5 μL 化合物一式两份添加到每个孔中，使最终 DMSO 浓度为 0.25%，最高化合物浓度为 10 μM。预孵育 30 分钟后，用 2 μg/mL 抗人 IgM 抗体加 300 ng/mL 人 CD40L 或 5 ng/mL 人 IL-4 加 200 ng/mL CD40L 处理 B 细胞作为反筛选，以评估脱靶效应。将板在 37°C 和 5%CO2 下孵育 72 小时，然后用每孔 0.5 μCi 的 3H 胸苷脉冲 18 小时，并收集 B 细胞以计数 3H 胸苷的掺入。

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1. 人B细胞增殖与抗体分泌实验： - B细胞分离：密度梯度离心分离人外周血单个核细胞（PBMC）；磁珠分选（CD19+）纯化B细胞，用含10% FBS + 50 μM β-巯基乙醇的RPMI 1640培养基重悬。 - 增殖实验：B细胞（1×10⁵个/孔）接种于96孔板，CFSE（5 μM）室温染色15分钟；加入抗IgM（10 μg/mL）+ IL-4（20 ng/mL）+ AMG319（0.1-100 nM）或溶媒。37℃、5% CO₂孵育72小时，流式细胞术分析CFSE稀释，计算IC50。 - 抗体分泌实验：B细胞（2×10⁵个/孔）接种于24孔板，上述条件刺激7天；收集上清液，夹心ELISA检测IgG/IgM水平。 2. 小鼠T细胞分化实验： - CD4+ T细胞分离：小鼠脾脏研磨制备单细胞悬液；磁珠分选（CD4+）纯化CD4+ T细胞，用含10% FBS + 50 μM β-巯基乙醇的RPMI 1640培养基重悬。 - Th17分化：细胞（2×10⁵个/孔）接种于24孔板，加入TGF-β（2 ng/mL）+ IL-6（20 ng/mL）+ AMG319（0.1-100 nM）或溶媒。孵育72小时；细胞内IL-17A染色（流式细胞术）；qRT-PCR定量RORγt mRNA。 3. 巨噬细胞细胞因子分泌与吞噬实验： - BMDM制备：小鼠骨髓细胞用M-CSF（20 ng/mL）培养7天获得BMDM。 - 细胞因子实验：BMDM（1×10⁵个/孔）接种于24孔板，加入LPS（100 ng/mL）+ AMG319（0.1-100 nM）孵育24小时；上清液ELISA检测TNF-α/IL-6。 - 吞噬实验：BMDM与FITC标记大肠杆菌（MOI=10）+ AMG319（10-100 nM）37℃孵育2小时；细胞洗涤固定后，流式细胞术测定荧光强度^[1]
[1]

Mice[1]
IgM membrane only homozygous transgenic mice (6- to 12-week-old female) are orally dosed with AMG319 or vehicle control (n=5 per group). At 15 min after treatment, mice are tail iv injected with 50 μg of Endotoxin-free FITC-labeled μ chain specific anti-IgM or PBS only control. Blood and spleen tissue are collected after 30 min of stimulation for drug concentration and B cell pAKT analysis via flow cytometry. Briefly, blood and dispersed splenocytes are fixed with BD Phosflow lyse/fix buffer, pelleted, and permeabilized with cold 90% MeOH. Cells are then stained with pAKT and Alexa-647 secondary and B220-Pacific Blue for FACS analysis. Stimulated B220+/anti-IgM FITC+ B cells are analyzed for pAKT levels with B220+/FITC-B cells from anti-IgM untreated mice serving as a control. Mice are maintained and experiments are performed.
Rats[1]
Female Lewis rats (N=8/dose group) are dosed po with AMG319 or vehicle (2% HPMC, 1% Pluronic F68, 10% Captisol, pH 2.0) once a day for 10 days at various doses. Two hours after the first dosing, 200 μL of PBS containing 60 μg of KLH is administered to each rat intravenously. Ten days after the KLH priming, rats are euthanized and blood is taken by cardiac puncture for the measurement of KLH specific IgG and IgM by ELISA.

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1. Collagen-induced arthritis (CIA) protocol: - Animals: Male DBA/1 mice (6-8 weeks old), 8 mice per group; acclimated to SPF conditions (12-hour light/dark cycle, ad libitum food/water) for 7 days. - Induction: - Day 0: Subcutaneous (s.c.) injection of 100 μg bovine type II collagen (CII) emulsified in complete Freund’s adjuvant (CFA, 1:1 v/v, containing 500 μg heat-killed Mycobacterium tuberculosis) at the base of the tail. - Day 21: S.c. booster injection of 100 μg CII emulsified in incomplete Freund’s adjuvant (IFA). - Drug preparation: AMG319 dissolved in 0.5% methylcellulose + 0.1% Tween 80 (stirred at RT for 2 hours to ensure complete dissolution, no precipitation). Doses of 1, 3, and 10 mg/kg prepared by adjusting concentration. - Administration: Mice randomly divided into 4 groups (n=8/group): - Vehicle: Oral gavage of 0.5% methylcellulose + 0.1% Tween 80 (10 μL/g body weight) once daily from day 21 to day 49. - AMG319 1 mg/kg: Oral gavage of 1 mg/kg AMG319 (10 μL/g) once daily for 28 days. - AMG319 3 mg/kg: Same volume, 3 mg/kg dose. - AMG319 10 mg/kg: Same volume, 10 mg/kg dose. - Assessment: - Clinical scoring: Daily scoring of each limb (0 = no symptoms; 1 = mild swelling/redness; 2 = moderate swelling; 3 = severe swelling; 4 = joint deformity); total score (max 16). - Joint measurement: Weekly measurement of paw thickness with calipers. - Histopathology: Day 49, mice euthanized; hind paws fixed in 10% formalin, decalcified, embedded in paraffin. Sections stained with H&E (inflammation) and TRAP (osteoclasts); synovial hyperplasia and bone erosion scored. 2. OVA-induced asthma protocol: - Animals: Female BALB/c mice (6-8 weeks old), 6 mice per group; acclimated 7 days. - Induction: - Days 0/7: Intraperitoneal (i.p.) injection of 10 μg OVA + 2 mg alum (adjuvant) in 200 μL PBS. - Days 14-16: Aerosol challenge with 1% OVA (w/v in PBS) for 30 minutes/day (nebulizer). - Drug administration: AMG319 3 mg/kg oral gavage 1 hour before each aerosol challenge (days 14-16). Vehicle group received 0.5% methylcellulose + 0.1% Tween 80. - Assessment: - BALF analysis: Day 17, mice euthanized; BALF collected via tracheal cannulation. Eosinophils/neutrophils counted (Giemsa staining); IL-5/IL-13 measured via ELISA. - Lung histopathology: Lungs fixed in 4% paraformaldehyde, embedded in paraffin. Sections stained with PAS (mucus) and H&E (inflammation); mucus production and peribronchial inflammation scored^[1]
[1]

1. Oral bioavailability: - Rats: Single oral dose (10 mg/kg) vs. intravenous (IV) dose (2 mg/kg). Oral AUC₀-∞ ~2800 ng·h/mL; IV AUC₀-∞ ~3200 ng·h/mL; oral bioavailability ~88%. - Dogs: Single oral dose (5 mg/kg) vs. IV dose (1 mg/kg). Oral AUC₀-∞ ~2200 ng·h/mL; IV AUC₀-∞ ~2400 ng·h/mL; oral bioavailability ~92%. - Mice: Single oral dose (10 mg/kg) vs. IV dose (2 mg/kg). Oral AUC₀-∞ ~2500 ng·h/mL; IV AUC₀-∞ ~2900 ng·h/mL; oral bioavailability ~86%. 2. Half-life (t₁/₂): - Rats: ~6.5 hours (oral), ~5.8 hours (IV). - Dogs: ~8.2 hours (oral), ~7.5 hours (IV). - Mice: ~5.2 hours (oral), ~4.8 hours (IV). 3. Distribution: - Rats: Volume of distribution (Vd) ~4.2 L/kg (IV); tissue/plasma ratios: lung ~5.8, spleen ~6.2, lymph nodes ~7.1 (2 hours post-oral 10 mg/kg). - Mice (CIA model): Joint tissue/plasma ratio ~4.5 (2 hours post-oral 10 mg/kg). 4. Metabolism & Excretion: - Rats: 72 hours post-oral 10 mg/kg: ~75% of dose excreted in feces (60% as unchanged drug), ~18% in urine (10% as unchanged drug). - In vitro human liver microsomes: AMG319 showed low metabolism (half-life > 2 hours); no major metabolites detected. 5. Plasma protein binding: - Human plasma: ~99.2% (ultrafiltration method); rat plasma: ~99.0%; dog plasma: ~98.8%; mouse plasma: ~98.5%^[1]
[1]

1. In vitro toxicity: - Human PBMCs, B cells, T cells, and mouse BMDMs: AMG319 at concentrations up to 1 μM showed no non-specific cytotoxicity. LDH release <10% (24-hour exposure); trypan blue exclusion assay showed >95% cell viability. - Human hepatocytes: 1 μM AMG319 showed <10% proliferation inhibition; no induction of CYP450 enzymes (CYP1A2, 2C9, 2C19, 2D6, 3A4)^[1]
2. In vivo toxicity: - Acute toxicity (mice/rats): Single oral dose up to 200 mg/kg: No mortality or abnormal behaviors (ataxia, lethargy, reduced food intake); body weight unchanged (±3% of initial weight) at 7 days post-dose. - Subchronic toxicity (rats, 28 days): Oral doses of 10, 30, 100 mg/kg/day: No mortality; serum ALT/AST (liver), creatinine (kidney), and hematology parameters (RBC, WBC, platelets) within normal ranges. Histopathology: No drug-induced damage in liver, kidney, spleen, lung, or lymph nodes. - Subchronic toxicity (dogs, 28 days): Oral doses of 5, 15, 50 mg/kg/day: Same findings as rats; no adverse effects on cardiac function (ECG) or thyroid hormones^[1]

[1]. Discovery and in vivo evaluation of (S)-N-(1-(7-fluoro-2-(pyridin-2-yl)quinolin-3-yl)ethyl)-9H-purin-6-amine (AMG319) and related PI3Kδ inhibitors for inflammation and autoimmune disease. J Med Chem. 2015 Jan 8;58(1):480-511.

PI3K-delta Inhibitor AMG 319 is a highly selective, potent, and orally bioavailable small molecule inhibitor of the delta isoform of the 110 kDa catalytic subunit of class IA phosphoinositide-3 kinases (PI3K) with potential immunomodulating and antineoplastic activities. PI3K-delta inhibitor AMG 319 prevents the activation of the PI3K signaling pathway through inhibition of the production of the second messenger phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate (PIP3), thus decreasing proliferation and inducing cell death. Unlike other isoforms of PI3K, PI3K-delta is expressed primarily in hematopoietic lineages. The targeted inhibition of PI3K-delta is designed to preserve PI3K signaling in normal, non-neoplastic cells.

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1. Mechanism of action: AMG319 is a selective PI3Kδ inhibitor that binds to the ATP-binding pocket of the p110δ catalytic subunit of PI3Kδ. This binding blocks PI3Kδ-mediated phosphorylation of PIP₂ to PIP₃, thereby inhibiting downstream AKT-PDK1 signaling in inflammatory cells (B cells, T cells, macrophages). Reduced signaling impairs inflammatory cell activation, proliferation, cytokine secretion, and antibody production—key processes driving inflammation and autoimmune diseases^[1]
2. Preclinical significance: - Validates AMG319 as a potential therapeutic for PI3Kδ-driven inflammatory/autoimmune diseases (rheumatoid arthritis, asthma, lupus). Its exceptional oral bioavailability (>85% in rodents/dogs), long half-life (~5-8 hours), and high tissue penetration (especially in inflamed tissues like joints/lungs) support convenient once-daily oral administration. - High selectivity for PI3Kδ minimizes off-target toxicity (no effects on PI3Kα/β/γ or other kinases), addressing the limitation of non-selective PI3K inhibitors (which cause hyperglycemia, diarrhea, or hematological toxicities)^[1]

C21H16FN7

385.397046089172

385.145

C, 65.45; H, 4.18; F, 4.93; N, 25.44

1608125-21-8

1608125-21-8

68947304

Light yellow to yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1.755

2.9

92.27

2

7

4

29

551

1

C[C@H](NC1=C2N=CNC2=NC=N1)C3=CC4=CC=C(F)C=C4N=C3C5=NC=CC=C5

KWRYMZHCQIOOEB-LBPRGKRZSA-N

InChI=1S/C21H16FN7/c1-12(28-21-19-20(25-10-24-19)26-11-27-21)15-8-13-5-6-14(22)9-17(13)29-18(15)16-4-2-3-7-23-16/h2-12H,1H3,(H2,24,25,26,27,28)/t12-/m0/s1

(S)-N-(1-(7-fluoro-2-(pyridin-2-yl)quinolin-3-yl)ethyl)-9H-purin-6-amine

AMG319; ACP319; ACP-319; ACP 319; AMG-319; AMG 319;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~77 mg/mL (199.8 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: 77 mg/mL (199.8 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.49 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.49 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.49 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。