AMG319 (ACP-319)   中文名称: AMG-319

PI3Kδ ( IC50 = 18 nM ); PI3Kγ ( IC50 = 850 nM ); PI3Kβ ( IC50 = 2.7 μM ); PI3Kα ( IC50 = 33 μM )

与一大组激酶相比，GDC-0980 对 I 类 PI3K 和 mTOR 激酶具有有效的选择性抑制活性，mTOR 的 Ki 为 17 nM，PI3Kα、β 的 IC50 为 5 nM、27 nM、7 nM 和 14 nM。分别为 δ 和 γ。 [1] 在体外，GDC-0980 显着抑制 PC3 和 MCF7 细胞的细胞增殖，IC50 分别为 307 nM 和 255 nM。 [1] 最近的一项研究表明，GDC-0980 通过抑制细胞周期进程和诱导细胞凋亡来降低癌细胞活力，在前列腺 (IC50 < 200 nM 50%)、<500 nM 100%)、乳腺癌 (IC50 <200 nM 37%、<500 nM 78%）和 NSCLC 细胞系（IC50 <200 nM 29%、<500 nM 88%），在胰腺细胞系（IC50 <200 nM 13%、<500 nM 67%）和黑色素瘤细胞系中效力较低（IC50 <200 nM 0%，<500 nM 33%）。 [2]

AMG319（3 mg/kg，口服）可抑制雌性 Lewis 大鼠 88% KLH 诱导的炎症反应。 AMG319 (, po) 抑制转基因 (IgMm) 小鼠体内 pAKT，IC50 为 1.9 nM。 [1]

PI3K Alphascreen 测定用于测量一组四种磷酸肌醇 3-激酶的活性：PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ 和 PI3Kδ。使用无菌水和 50 mM Tris-HCl（pH 7）、14 mM MgCl2、2 mM 胆酸钠和 100 mM NaCl 制备酶反应缓冲液。实验当天新鲜添加 2 mM DTT。 Alphascreen 缓冲液使用无菌水和 10 mM Tris-HCl（pH 7.5）、150 mM NaCl、0.10% Tween 20 和 30 mM EDTA 制成。然后在实验当天新鲜添加 1 mM DTT。用于该测定的化合物源板是 384 孔 Greiner 透明聚丙烯板，其中含有 5 mM 的测试化合物并以 1:2 稀释超过 22 个浓度。第 23 列和第 24 列仅含有 DMSO，因为这些孔分别包含阳性对照和阴性对照。通过将每孔 0.5 μL 转移到 384 孔 Optiplates 中来复制源板。每种 PI3K 同工型在酶反应缓冲液中稀释至 2× 工作液。 PI3Kα 稀释至 1.6 nM，PI3Kβ 稀释至 0.8 nM，PI3Kγ 稀释至 15 nM，PI3Kδ 稀释至 1.6 nM。 PI(4,5)P2 稀释至 10 μM，ATP 稀释至 20 μM。该 2× 库存用于 PI3Kα 和 PI3Kβ 的测定。为了测定 PI3Kγ 和 PI3Kδ，将 PI(4,5)P2 稀释至 10 μM，ATP 稀释至 8 μM，以制备类似的 2× 工作原液。 Alphascreen 反应溶液是使用抗 GST Alphascreen 试剂盒中的珠子制备的。两个 4× Alphascreen 试剂工作储备液在 Alphascreen 反应缓冲液中制备。在一份库存中，生物素化 IP4 稀释至 40 nM，链霉亲和素供体珠稀释至 80 μg/mL。在第二个库存中，PIP3 结合蛋白稀释至 40 nM，抗 GST 受体珠稀释至 80 μg/mL。作为阴性对照，浓度≥Ki (40 μM)的参考抑制剂包含在第24列中作为阴性（100%抑制）对照。使用 384 孔 Multidrop，将 10 μL/孔的 2× 酶原液添加到每种亚型的测定板的第 1–24 列中。然后将 10 μL/孔的适当底物 2× 库存（包含 20 μM ATP 用于 PI3Kα 和 -β 测定，包含 8 μM ATP 用于 PI3Kγ 和 -δ 测定）添加到所有板的第 1–24 列中。然后将板在室温下孵育 20 分钟。在黑暗中，将 10 μL/孔的供体珠溶液添加到板的第 1-24 列中以淬灭酶反应。将板在室温下孵育 30 分钟。仍然在黑暗中，将 10 μL/孔的受体珠溶液添加到板的第 1-24 列中。然后将板在黑暗中孵育1.5小时。使用 680 nm 激发滤光片和 520–620 nm 发射滤光片在 Envision 多模式读板机上读取板。

细胞通过阴性选择从人外周血单核细胞 (PBMC) 中纯化。每孔大约 3 × 104 个纯化 B 细胞接种到 96 孔板中。将化合物以 10 mM 的浓度溶解在 DMSO 中，并在 DMSO 中对化合物进行 10 点、3 倍连续稀释。然后将 0.5 μL 化合物一式两份添加到每个孔中，使最终 DMSO 浓度为 0.25%，最高化合物浓度为 10 μM。预孵育 30 分钟后，用 2 μg/mL 抗人 IgM 抗体加 300 ng/mL 人 CD40L 或 5 ng/mL 人 IL-4 加 200 ng/mL CD40L 处理 B 细胞作为反筛选，以评估脱靶效应。将板在 37°C 和 5%CO2 下孵育 72 小时，然后用每孔 0.5 μCi 的 3H 胸苷脉冲 18 小时，并收集 B 细胞以计数 3H 胸苷的掺入。

Mice[1]
IgM membrane only homozygous transgenic mice (6- to 12-week-old female) are orally dosed with AMG319 or vehicle control (n=5 per group). At 15 min after treatment, mice are tail iv injected with 50 μg of Endotoxin-free FITC-labeled μ chain specific anti-IgM or PBS only control. Blood and spleen tissue are collected after 30 min of stimulation for drug concentration and B cell pAKT analysis via flow cytometry. Briefly, blood and dispersed splenocytes are fixed with BD Phosflow lyse/fix buffer, pelleted, and permeabilized with cold 90% MeOH. Cells are then stained with pAKT and Alexa-647 secondary and B220-Pacific Blue for FACS analysis. Stimulated B220+/anti-IgM FITC+ B cells are analyzed for pAKT levels with B220+/FITC-B cells from anti-IgM untreated mice serving as a control. Mice are maintained and experiments are performed.
Rats[1]
Female Lewis rats (N=8/dose group) are dosed po with AMG319 or vehicle (2% HPMC, 1% Pluronic F68, 10% Captisol, pH 2.0) once a day for 10 days at various doses. Two hours after the first dosing, 200 μL of PBS containing 60 μg of KLH is administered to each rat intravenously. Ten days after the KLH priming, rats are euthanized and blood is taken by cardiac puncture for the measurement of KLH specific IgG and IgM by ELISA.

[1]. J Med Chem. 2015 Jan 8;58(1):480-511.

C21H16FN7

385.397046089172

385.15

C, 65.45; H, 4.18; F, 4.93; N, 25.44

1608125-21-8

1608125-21-8

Solid powder

C[C@H](NC1=C2N=CNC2=NC=N1)C3=CC4=CC=C(F)C=C4N=C3C5=NC=CC=C5

KWRYMZHCQIOOEB-LBPRGKRZSA-N

InChI=1S/C21H16FN7/c1-12(28-21-19-20(25-10-24-19)26-11-27-21)15-8-13-5-6-14(22)9-17(13)29-18(15)16-4-2-3-7-23-16/h2-12H,1H3,(H2,24,25,26,27,28)/t12-/m0/s1

(S)-N-(1-(7-fluoro-2-(pyridin-2-yl)quinolin-3-yl)ethyl)-9H-purin-6-amine

AMG319; ACP319; ACP-319; ACP 319; AMG-319; AMG 319;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~77 mg/mL (199.8 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: 77 mg/mL (199.8 mM)

Solubility in Formulation 1: ≥ 2.5 mg/mL (6.49 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 400 μL PEG300 and mix evenly; then add 50 μL Tween-80 to the above solution and mix evenly; then add 450 μL normal saline to adjust the volume to 1 mL.
Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH₂ O to obtain a clear solution.

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Solubility in Formulation 2: ≥ 2.5 mg/mL (6.49 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of 20% SBE-β-CD physiological saline solution and mix evenly.
Preparation of 20% SBE-β-CD in Saline (4°C，1 week): Dissolve 2 g SBE-β-CD in 10 mL saline to obtain a clear solution.

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Solubility in Formulation 3: ≥ 2.5 mg/mL (6.49 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of corn oil and mix evenly.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。