sigma-1 receptor ( IC50 = 0.86 μM ); muscarinic
Sigma 1 (σ1) receptor (IC₅₀ = 0.86 μM) [2]
Muscarinic receptors (M1-M4) (IC₅₀ = 3.3 – 5.2 μM) [2]
Sodium channel site 2 (IC₅₀ = 5.1 μM) [2]
NMDA receptor (IC₅₀ = 8.0 μM) [2]

预先给予盐酸AVex-73（ANAVEX2-73）可剂量依赖性地减轻东莨菪碱诱导的交替行为缺陷，在1和3 mg/kg剂量下效果显著。预先给予盐酸AVex-73可剂量依赖性地显著降低穿梭潜伏期障碍，剂量大于0.3 mg/kg[1]。1 mg/kg剂量的盐酸AVex-73可显著改善识别记忆缺陷，且呈剂量依赖性。0.1和1 mg/kg剂量的盐酸AVex-73可显著减轻注射Aβ25-35后一天Akt磷酸化水平的显著降低。0.3和1 mg/kg剂量的肽引起的Ser9磷酸化水平降低，在注射后7天，盐酸AVex-73可减轻。 AVex-73 盐酸盐治疗可剂量依赖性地抑制 Aβ25-35 诱导的 Aβ1-42 含量升高，在所研究的最大剂量下表现出显著效果[2]。结合实验表明，ANAVEX2-73 能以低微摩尔级的亲和力与毒蕈碱型乙酰胆碱受体和 σ1 受体结合。它是一种强效的毒蕈碱化合物，对所有 M1-M4 亚型的 Ki 值均低于 500 nM，并且是一种中等强度的 σ1 受体激动剂，但对 σ2 亚型具有选择性。[1]

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在非转基因阿尔茨海默病小鼠模型（脑室内注射 Aβ₂₅₋₃₅ 寡聚体）中，ANAVEX2-73（0.1、0.3、1 mg/kg，腹腔注射）呈剂量依赖性地抑制新物体识别测试中的识别记忆缺陷，在 1 mg/kg 剂量下观察到显著效果[2]。
ANAVEX2-73 治疗（0.1、0.3、1 mg/kg，腹腔注射）显著减弱了 Aβ₂₅₋₃₅ 诱导的小鼠海马 Akt 磷酸化（Ser473）水平在第 10 天的降低。注射后 1 天（0.1 和 1 mg/kg 时显著），并在第 7 天显示出不显著的减弱趋势 [2]。
在 Aβ₂₅₋₃₅ 注射后第 7 天，ANAVEX2-73（0.3、1 mg/kg，腹腔注射）减弱了 GSK-3β 在抑制性 Ser9 位点的磷酸化水平的下降，但未达到统计学显著性。然而，ANAVEX2-73（0.1-1 mg/kg，腹腔注射）在剂量为 0.3 和 1 mg/kg 时显著抑制了 Aβ₂₅₋₃₅ 诱导的 GSK-3β 在激活位点 Tyr216 的磷酸化水平升高 [2]。
ANAVEX2-73（0.1-1 mg/kg，腹腔注射）在小鼠海马中以剂量依赖的方式显著抑制了 Aβ₂₅₋₃₅ 诱导的 Tau 蛋白在生理位点（Ser202、Thr205，AT8 抗体检测）和病理位点（Ser212、Thr214，AT100 抗体检测）的过度磷酸化（第 7 天）[2]。
ANAVEX2-73（1 mg/kg，腹腔注射）显著抑制了 Aβ₂₅₋₃₅ 诱导的内源性 Aβ₁₋₄₂ 含量升高。在第7天，通过ELISA检测小鼠海马中C99片段（APP的β-分泌酶裂解产物）的水平[2]。
ANAVEX2-73（0.3、1 mg/kg，腹腔注射）呈剂量依赖性地显著抑制了Aβ₂₅₋₃₅诱导的小鼠海马中C99片段（APP的β-分泌酶裂解产物）水平在第7天的升高[2]。

预先给予 AVex-73 盐酸盐 (ANAVEX2-73) 可剂量依赖性地减轻东莨菪碱诱导的交替缺陷，在 1 和 3 mg/kg 剂量下效果显著。预先给予 AVex-73 盐酸盐可剂量依赖性地减轻穿行潜伏期障碍，且在高于 0.3 mg/kg 的剂量下效果显著[1]。AVex-73 盐酸盐治疗可剂量依赖性地阻断识别记忆缺陷，在 1 mg/kg 剂量下效果显著。注射后一天，AVex-73盐酸盐（0.1和1 mg/kg剂量）显著减弱了Aβ25-35诱导的Akt磷酸化水平显著降低。注射后七天，AVex-73盐酸盐（0.3和1 mg/kg剂量）减弱了该肽诱导的Ser9磷酸化水平降低。 AVex-73 盐酸盐治疗呈剂量依赖性地抑制 Aβ25-35 诱导的 Aβ1-42 含量增加，在最高测试剂量下效果显著[2]。

我们使用体重为 32±2 g、7-9 周龄的雄性小鼠。将诸如盐酸布拉门辛等物质稀释至适当剂量，并以 100 μL/20 g 体重的剂量进行注射。静脉注射后，动物用于第 1 天至第 9 天的行为学测试，或在进行生化指标测定前处死。

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药物疗效研究给药：** 雄性 Swiss OF-1 小鼠（7-9 周龄）接受脑室内 (icv) 注射，注射物为寡聚体 Aβ₂₅₋₃₅ 肽 (9 nmol) 或作为对照的乱序 Aβ₂₅₋₃₅ 肽。 ANAVEX2-73（0.1、0.3 或 1 mg/kg）溶于生理盐水中，于脑室内注射肽前 20 分钟腹腔注射 (ip)。对照组腹腔注射生理盐水 [2]。
* **新物体识别测试：**该测试在注射后第 6-8 天进行。第 6 天，小鼠在开放场中适应 10 分钟（第 1 阶段）。第 7 天，在开放场中放置两个相同的物体，并记录 10 分钟的探索行为（第 2 阶段）。第 8 天，将一个熟悉的物体替换为一个新物体，并记录 10 分钟的探索行为（第 3 阶段）。计算优先探索指数（与新物体的接触次数/总接触次数）。总接触次数少于10次的动物被排除在外[2]。
* **生化分析 – 组织采集：** 在肽和药物注射后的特定时间点（1天或7天），通过断头处死小鼠。迅速解剖海马，液氮速冻，并储存于-80°C，用于后续的Western blotting或ELISA分析[2]。
* **Western blotting：** 将海马组织在含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液中匀浆。将蛋白质（每泳道20-50 μg）通过SDS-PAGE分离，并转移至PVDF膜。封闭膜后，与针对磷酸化和总Akt、GSK-3β、Tau（AT8、AT100）和C99以及β-微管蛋白（作为上样对照）的一抗在4°C孵育过夜。洗涤后，将膜与HRP标记的二抗孵育。使用ECL显色，并用ImageJ软件进行定量分析。蛋白表达水平以总蛋白或上样对照进行标准化[2]。
* **Aβ₁₋₄₀/₄₂ ELISA：** 将海马组织在Tris-NaCl缓冲液中匀浆并超声处理。离心后收集上清液。使用市售ELISA试剂盒，按照制造商的说明测定小鼠Aβ₁₋₄₀和Aβ₁₋₄₂的浓度。在 450 nm 波长处读取吸光度，并根据标准曲线计算样品浓度，结果以 pg/mg 组织表示 [2]。

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药物疗效研究给药：雄性 Swiss OF-1 小鼠（7-9 周龄）接受脑室内 (icv) 注射，注射物为寡聚体 Aβ₂₅₋₃₅ 肽 (9 nmol) 或作为对照的乱序 Aβ₂₅₋₃₅ 肽。ANAVEX2-73（0.1、0.3 或 1 mg/kg）溶于生理盐水中，并在脑室内注射肽前 20 分钟腹腔注射 (ip)。对照组腹腔注射生理盐水 [2]。
新物体识别测试：该测试在注射后第 6-8 天进行。第6天，小鼠在开放场中适应10分钟（第1组）。第7天，在开放场中放置两个相同的物体，并记录10分钟的探索行为（第2组）。第8天，将一个熟悉的物体替换为一个新物体，并记录10分钟的探索行为（第3组）。计算优先探索指数（与新物体的接触次数/总接触次数）。总接触次数少于10次的动物被排除[2]。
生化分析 – 组织采集：在肽和药物注射后的特定时间点（1天或7天），通过断头处死小鼠。迅速解剖海马，液氮速冻，并储存于-80°C，用于后续的Western blotting或ELISA分析[2]。
Western blotting：将海马组织在含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液中匀浆。将蛋白质（每泳道 20-50 μg）通过 SDS-PAGE 电泳分离后转移至 PVDF 膜。封闭膜后，与针对磷酸化和总 Akt、GSK-3β、Tau（AT8、AT100）和 C99 的一抗以及 β-微管蛋白（作为上样对照）于 4°C 孵育过夜。洗涤后，将膜与 HRP 标记的二抗孵育。使用 ECL 显色，并用 ImageJ 软件进行定量分析。蛋白质表达水平以总蛋白或上样对照进行标准化 [2]。
Aβ₁₋₄₀/₄₂ ELISA：将海马组织在 Tris-NaCl 缓冲液中匀浆并超声处理。离心后收集上清液。使用市售的ELISA试剂盒，按照制造商的说明，测定小鼠Aβ₁₋₄₀和Aβ₁₋₄₂的浓度。在450 nm处读取吸光度，并根据标准曲线计算样品浓度，结果以pg/mg组织表示[2]。

初步代谢研究表明，ANAVEX2-73通过叔胺基团的去甲基化转化为单一的主要代谢物ANAVEX19-144。该代谢物具有药理活性，有助于药物的持久作用，因为母体化合物在淀粉样蛋白挑战前12小时内给药仍有效。相比之下，相关化合物ANAVEX1-41（ANAVEX2-140）的代谢物则无活性。[1]

[1]. Anti-amnesic and neuroprotective potentials of the mixed muscarinic receptor/sigma 1 (σ1) ligand ANAVEX2-73, a novel aminotetrahydrofuran derivative. J Psychopharmacol. 2011 Aug;25(8):1101-17.

[2]. Blockade of Tau Hyperphosphorylation and Aβ1-42 Generation by the Aminotetrahydrofuran Derivative ANAVEX2-73, a Mixed Muscarinic andσ1 Receptor Agonist, in a Nontransgenic Mouse Model of Alzheimer's Disease. Neuropsychopharmacology. 2013 Aug; 38(9): 1706-1723.

另见：Blarcamesine（注释已移至）。

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ANAVEX2-73（四氢-N,N-二甲基-2,2-二苯基-3-呋喃甲胺盐酸盐）是一种氨基四氢呋喃衍生物，其特征是混合型σ1受体和毒蕈碱受体激动剂，具有中等亲和力范围（对σ1受体为亚微摩尔级，对毒蕈碱受体为微摩尔级）[2]。
该化合物已被证明在体内阿尔茨海默病模型中具有神经保护作用，并且在本文发表时正处于I/IIa期临床试验阶段[2]。
在Aβ₂₅₋₃₅小鼠模型中，ANAVEX2-73表现出阻断Tau蛋白过度磷酸化（通过调节Akt/GSK-3β通路）和内源性Aβ₁₋₄₂播散的能力，提示其可能具有神经保护作用。潜在的疾病修饰活性[2]。
ANAVEX2-73 的作用归因于其对毒蕈碱受体（尤其是 M1 受体）和 σ1 受体的协同激活。毒蕈碱受体的激活可以刺激 PLC/PKC 通路，从而抑制 GSK-3β；而 σ1 受体的激活可以调节 Ca²⁺ 信号传导，并可能影响激酶活性和分泌酶功能[2]。
尽管 ANAVEX2-73 对其靶点的亲和力中等（微摩尔级），但其在体内低 mg/kg 剂量下显示出与纳摩尔级亲和力选择性化合物相当的疗效，这可能有助于减少纯高亲和力毒蕈碱激动剂常见的副作用[2]。

C19H24CLNO

317.857

317.154

C, 71.80; H, 7.61; Cl, 11.15; N, 4.41; O, 5.03

195615-84-0

Blarcamesine; 195615-83-9; 195615-84-0 (HCl)

46932299

White to off-white solid powder

12.5

1

2

4

22

298

0

Cl[H].O1C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])N(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])C1(C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H]

FEQOLYDPQKHFTD-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H23NO.ClH/c1-20(2)15-18-13-14-21-19(18,16-9-5-3-6-10-16)17-11-7-4-8-12-17;/h3-12,18H,13-15H2,1-2H3;1H

1-(2,2-diphenyloxolan-3-yl)-N,N-dimethylmethanamine;hydrochloride

Anavex2-73; Anavex 2-73; Anavex-2-73; Anavex-273; AE-37 hydrochloride; Anavex273; Anavex 273

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 25~64 mg/mL (78.7~201.4 mM)
Water: ~64 mg/mL
Ethanol: ~3 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 100 mg/mL (314.61 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。