Emrusolmin (Anle138b)

Oligomeric aggregation

据信低聚集体是重要的神经毒物。Emrusolmin (Anle138b)强烈抑制所有检查的朊病毒株，混合 BSE 衍生物和人类朊病毒。 Emrusolmin 会膨胀朊病毒蛋白和 α-突触核蛋白致病性聚集体的形成，这些聚集体在帕金森病和其他突触核蛋白病中形成死亡沉积物（例如 Louis Emrusolmin）。 α-突触核蛋白和朊病毒蛋白病理性寡聚体被 emusolmin 严重抑制，其表现出对病理性聚集的结构依赖[1]。
在体外，Emrusolmin（Anle138b）阻断了朊病毒蛋白（PrP（Sc））和α-突触核蛋白（α-syn）病理聚集物的形成，这些聚集物沉积在PD和其他突触核蛋白病中，如路易体痴呆（DLB）和多系统萎缩（MSA）。值得注意的是，anle38b强烈抑制了所有测试的朊病毒菌株，包括BSE衍生的朊病毒和人类朊病毒。[1]

---

与缺乏Emrusolmin (Anle138b)化合物的膜（图5A和B，附录图S5）相比，掺杂Emrusolmin (Anle138b)的膜显示出更少的同时活性孔和显著降低的体积电导率（图5A与B，附录见图S5）。我们的结果表明，用anle38b处理会改变孔隙动力学，导致不稳定和寿命较短的“开放”孔隙。孔稳定性的降低导致同时导电孔的总数减少，并显著降低了膜的电导率。AFM数据显示，anle38b处理不会影响Aβ1‐42孔的表面结构（图EV2），这表明anle38b并不能简单地阻止Aβ1-42进入脂质双层膜并形成孔。相反，anle138b似乎将传导的Aβ孔转化为非传导孔，可能是通过Aβ1-42的膜包埋区域的结构变化，从而提供了一种可能的机制，anle183b可以改善APPPS1ΔE9小鼠的LTP和学习缺陷。当在氧化胆固醇中重复电导测量时，观察到类似的效果[2]。

Emrusolmin 已被证明能够在体外和腔室中与病理性聚集物进行结构结合，并强烈抑制朊病毒蛋白和 α-突触蛋白核病理性寡聚体的产生 [1]。
Emrusolmin（Anle138b）显示出与病理聚集体的结构依赖性结合，并在体外和体内强烈抑制朊病毒蛋白和α-突触核蛋白的病理寡聚体的形成。在朊病毒病的小鼠模型和三种不同的帕金森病小鼠模型中，anle38b都强烈抑制了寡聚体积累、神经元退化和体内疾病进展。Anle138b在治疗剂量下没有可检测到的毒性，具有优异的口服生物利用度和血脑屏障穿透性。我们的研究结果表明，寡聚体调节剂为这些疾病的疾病改善治疗提供了一种新方法，到目前为止，这些疾病只有对症治疗。此外，我们的研究结果表明，神经退行性疾病中的病理寡聚体具有共同的结构特征，尽管主要的蛋白质成分是疾病特异性的，这表明通过靶向结构依赖性表位来调节寡聚体形成的化合物如anle38b在治疗不同的蛋白质聚集性疾病方面具有广泛的活性。[1]

---

口服Emrusolmin（Anle138b）后淀粉样β肽沉积小鼠模型的突触可塑性和记忆功能 为了初步测试Emrusolmin（Anle138b）作为治疗阿尔茨海默病淀粉样蛋白聚集的治疗策略的潜力，我们分析了其在果蝇模型中对淀粉样蛋白诱导的神经毒性的影响。我们观察到，与赋形剂治疗组相比，anle38b治疗组的存活时间有所延长（附录图S1）。基于这些数据，我们决定在淀粉样蛋白沉积的小鼠模型中测试anle38b的疗效。我们想声明的是，目前使用的阿尔茨海默病动物模型都没有完全重现阿尔茨海默病患者的表型，因此，在解释这些数据时必须谨慎。在我们的研究中，我们使用了APPPS1Δ9小鼠（Jankowski等人，2001），这是一种成熟的AD相关淀粉样蛋白沉积模型。由于在患者中，治疗干预通常仅在淀粉样斑块形成后开始，我们决定在两个实验队列中测试anle138b。在“斑块前组”中，治疗是在小鼠2个月大时病理发作之前开始的，而在“斑块后组”中治疗是在6个月大的小鼠淀粉样蛋白沉积和记忆障碍发作之后开始的（图EV1；Jankowski等人，2004；Lalonde等人，2005；Reiserer等人，2007）。在这两个队列中，anle38b都是通过食物颗粒持续提供的。因此，在斑块前组中，小鼠从2个月大开始接受anle38b或安慰剂治疗，并在6个月大时开始进行电生理、行为和生化分析。一组用anle38b治疗的野生型小鼠（WT）作为额外的对照。我们首先通过分析海马长时程增强（LTP）来测量突触可塑性。虽然在用anle38b治疗的WT对照小鼠中观察到Schaffer侧支突触处的强海马LTP（图1A），但在接受安慰剂的APPPS1Δ9小鼠中LTP明显受损（图1B）。值得注意的是，在用anle38b治疗的APPPS1Δ9小鼠中，这种LTP缺陷被完全挽救（图1C）。这些数据表明，口服anle38b可以防止Aβ诱导的海马突触可塑性损伤。为了测试anle38b对海马可塑性的影响是否也改善了海马依赖性记忆功能，另一组anle38b和安慰剂治疗的小鼠接受了Morris水迷宫试验，这是一种用于测定啮齿动物空间记忆的成熟范式（Morris，1984）。Anle138b处理的野生型小鼠表现出强大的空间学习能力，这表明在整个8天的训练中，逃逸潜伏期有所降低（图1D）。相比之下，用安慰剂治疗的APPPS1Δ9小鼠表现出明显受损的逃逸潜伏期（图1D）。在接受anle38b治疗的APPPS1Δ9小鼠中，这种缺陷得到了部分缓解。在8天的训练后进行的探针测试中分析了空间参考记忆。虽然WT小鼠表现出对目标象限的显著偏好，但在安慰剂治疗的APPPS1Δ9小鼠中没有观察到这种影响（图1E），证实了APPPS1Δ7小鼠的记忆障碍。相比之下，经Anle38b处理的APPPS1Δ9小鼠表现出对目标象限的显著偏好，表明空间记忆恢复（图1E）。各组的游泳速度相似（图1F）。我们还研究了anle38b是否会影响基础探索行为（图1G）或基础焦虑（图1H）。各组之间没有发现差异，表明口服anle38b可以保护APPPS1Δ9小鼠免受海马突触可塑性恶化和海马依赖性记忆巩固的影响。
受这些发现的鼓舞，我们研究了当斑块后组已经发生明显的淀粉样蛋白沉积时，Emrusolmin（Anle138b）是否也可以恢复突触可塑性和记忆功能（图EV1）。为此，6个月大的APPPS1Δ9小鼠接受anle38b或安慰剂治疗4个月。用anle38b治疗的野生型小鼠作为另一个对照组。当小鼠10个月大时进行分析。在第一个队列中，我们测量了海马LTP。用anle38b治疗的WT小鼠表现出强大的LTP（图2A），而安慰剂治疗的APPPS1Δ9小鼠的LTP明显受损（图2B）。值得注意的是，在用anle38b治疗的APPPS1Δ9小鼠中，海马LTP完全恢复（图2C）。总之，与斑块前组相似，即使在斑块沉积开始后，anle38b治疗对LTP也有明显的改善作用。

---

目的：在MSA小鼠模型中测试Emrusolmin（Anle138b）的治疗潜力。
方法：在4个月的时间里，将两个月大的PLP-hαSyn小鼠喂食含有两种不同剂量（0.6和2 g/kg）的Emrusolmin（Anle138b）的颗粒，并与健康对照组和喂食安慰剂颗粒的PLP-hαSyn鼠进行比较。治疗结束时，进行行为学和组织学分析。
结果：当PLP-hαSyn小鼠接受两种剂量的Emrusolmin（Anle138b）治疗时，我们观察到运动功能逆转至健康对照水平。组织学和分子分析显示，与未治疗的小鼠相比，喂食anle38b的动物α-突触核蛋白寡聚体和神经胶质细胞质内含物显著减少。这些动物还表现出多巴胺能神经元的保留和SN中小胶质细胞活化的减少，这与观察到的α-突触核蛋白减少有关。
结论：Emrusolmin（Anle138b）可减少PLP-hαSyn小鼠的α-突触核蛋白积累，从而产生神经保护作用，减少小胶质细胞活化，并保护运动功能，支持在未来的MSA临床试验中使用anle38b [3]。

利用Emrusolmin (Anle138b)的固有荧光进行的结合研究 基于Emrusolmin（Anle138b）的分子结构，我们考虑了该化合物具有内在荧光的可能性，可用于直接分子结合研究。我们发现，在300 nm激发的水溶液中，anle138b的消光系数为10000（Mcm）-1，但表现出非常弱的固有荧光（图9）。添加单体α-syn后，anle38b的荧光性质没有变化。然而，当加入预聚集的α-syn时，可以观察到anle38b的荧光强度显著增加了30倍以上，这表明即使在纳摩尔浓度下，anle38b与聚集的α-scyn也有很强的结构依赖性结合（图9b）。

---

使用DOPS和POPE的平面脂质双层电记录[2]
我们使用所谓的涂漆技术制备了平面脂质双层（Mueller等人，1962）Emrusolmin（Anle138b）与DOPS和POPE在氯仿中的1:1（w/w）溶液混合，其浓度相对于脂质体积为10mM。计算中使用了0.8的脂质比重。随后，将该混合物在Rotavapor R‐210（Buchi）中干燥，并重新悬浮在总脂质浓度为20mg/ml的癸烷中。从该溶液中形成了具有包埋anl138b的双层。在Delrin隔膜中直径约250μm的孔上直接添加脂质后，会发生自发膜形成（Warner Instruments，Delrin灌注杯，体积1ml）。在之前的研究中，这种膜组合物被证明在长记录时间内是稳定的（~4小时；Capone等人，2012）。进行了对照实验，以确定添加anle38b形成的膜的稳定性。我们使用150 mM KCl、10 mM HEPES（pH 7.4）和1 mM MgCl2作为电解质.
我们观察到在制备Emrusolmin（Anle138b）负载脂质时存在以下困难。在膜涂之前，Anle138b与脂质一起溶解在癸烷中。由于anle138b可溶于癸烷和脂质，因此脂质沉积在孔上时自发形成的化合物在脂质膜中的分布可能会有所不同。脂质单层结合到隔板的两侧，当单层在中心融合在一起时形成双层膜，不包括周围的癸烷溶剂。该溶剂环充当通往聚甲醛分配的桥梁，对膜稳定性至关重要（White，1972）。如果很大一部分anle38b在癸烷中是可移动的，则化合物可以分配到溶剂环中，而不是掺入膜中，导致BLM结果与没有化合物时aβ1-42的结果相似。这可以解释为什么anle38b仅在50%的情况下调节了孔隙的活性。

---

用于AFM成像的脂质双层制备[2]
对于脂质体制备，DOPS和POPE脂质以1:1的比例使用。通过混合20μl溶解在氯仿中的每种脂质（5mg/ml）制备脂质体，并将同样溶于氯仿的Emrusolmin (Anle138b)加入1000:1的脂质与Anle38b摩尔比中。然后，让脂质体在真空中干燥过夜。干燥的脂质膜（和anle38b）用肽溶液（1:60肽与脂质摩尔比）水合，以促进肽掺入脂质双层，从而形成蛋白脂质体。对于对照组，将干燥的脂质膜（和anle38b）用200μl HEPES缓冲液水合，偶尔涡旋一小时。

CyQUANT[2]
原代神经元培养物由E17.5 CD1瑞士胚胎产生。在DIV中，10个培养物被添加了<强>Emrusolmin（Anle138b）的条件培养基处理，最终浓度为1μM，溶于0.05%DMSO（Roth，A994.2）或0.05%DMSO作为载体。24小时后，以10μM的浓度施加Aβ1-40低聚物、单体或缓冲液（各4个），并孵育48小时。根据制造商的方案，使用CyQUANT®直接细胞增殖试验来确定膜的完整性。孵育30分钟后，用帝肯infinite 200测量荧光。在GraphPad Prism中进行了统计分析。

---

MTT法[2]
使用与CyQUANT测定相同的样品制备，使用MTT测定法测量细胞存活率。简而言之，在Emrusolmin（Anle138b）和Aβ1-40处理后，向细胞培养基中补充MTT至终浓度为0.5mg/ml，并在标准细胞培养箱中于37°C下培养1小时。随后，移除培养基，将代谢物悬浮在500μl DMSO中。使用Tecan infinite 200测量800nm处的吸收。

动物/疾病模型： 两个月龄的PLP-hαSyn小鼠[3]
剂量： 0.6和2 g/kg
给药途径： 口服
实验结果： 预防PLP-hαSyn小鼠的运动障碍和神经退行性变。

---

\n\n在长期生存实验中，如上所述，将Emrusolmin (Anle138b)溶于DMSO/花生酱中，口服给药。在第一组实验中，从脑室内感染后第80天或第120天开始，每天一次给予5 mg anle138b。从感染后第80天开始，由训练有素的动物饲养员每天监测各治疗组动物的疾病症状。当动物出现临床症状（共济失调、震颤、难以从仰卧位翻身以及尾部僵硬）并发展至疾病终末期时，对其进行安乐死。通常情况下，疾病发展至终末期会导致动物在1至2天内死亡。此外，每个实验组随机选取4只小鼠，并在预定的时间点（如图3c-e所示）进行安乐死。所有动物均取一侧脑半球和半个脾脏，新鲜冷冻于-80℃用于生化分析。另一侧脑半球、剩余的半个脾脏以及所有内脏器官均固定于4%甲醛溶液中，用于组织学分析。在另一项实验中，于脑内感染当天开始给予anle138b治疗，剂量为5 mg，每日两次。 [1]

---

\n\n口服鱼藤酮诱导帕金森病小鼠体内模型[1]
\n一岁大的C57Bl/6J小鼠饲养于恒定光暗循环（12小时/12小时）条件下，自由摄取水和食物。小鼠分为4组（“无鱼藤酮组”、“鱼藤酮/正常饲料组”、“鱼藤酮/安慰剂饲料组”、“鱼藤酮/Emrusolmin (Anle138b)组”）。另设一组小鼠（“鱼藤酮/半侧迷走神经切断术组”）作为对照，该组小鼠在接受鱼藤酮治疗前按照先前描述的方法进行了半侧迷走神经切断术。该手术可部分阻止病理从肠神经系统扩散至中枢神经系统，从而减少多巴胺能细胞死亡。口服鱼藤酮治疗按先前描述的方法进行。简而言之，小鼠每天一次，每周6天，连续4个月，接受0.01 ml/g体重的溶液处理，溶液成分分别为仅含溶剂（4%羧甲基纤维素和1.25%氯仿）或鱼藤酮（0.625 mg/ml鱼藤酮、4%羧甲基纤维素和1.25%氯仿）。给药采用1.2 × 60 mm的灌胃管进行。在治疗期间，两组接受鱼藤酮处理的小鼠饲喂相同批次的饲料，其中一组含有鱼藤酮（“鱼藤酮/anle138b”组），另一组不含anle138b（“鱼藤酮/安慰剂饲料”组）。另外两组（“无鱼藤酮”组和“鱼藤酮/普通饲料”组）饲喂普通饲料。小鼠的运动能力采用转棒加速试验进行测试，具体方法如前所述。该测试每月重复一次，每只动物连续三天每天进行四次测试。此外，每月还进行一次连续四天的1小时粪便收集测试，如前所述，以评估肠道动力和肠神经系统功能。\n

---

\n转基因α-突触核蛋白小鼠模型[1]
\n在C57/Bl6小鼠遗传背景下，使用成熟的小鼠α-突触核蛋白病模型{(Thy1)-h[A30P]α-syn}测试了Emrusolmin (Anle138b)的体内效应。Anle138b治疗与载体（DMSO/花生酱）安慰剂治疗进行比较。此外，还检查了未经治疗的非转基因C57/Bl6小鼠作为年龄匹配的对照。对动物进行临床评估，包括生存时间、运动能力和体重。此外，我们还进行了α-突触核蛋白沉积的组织学尸检评估。分别用anle138b和安慰剂治疗小鼠，均在8周龄时开始。治疗组和安慰剂组的转基因小鼠在窝别和性别上均匹配。anle138b溶于DMSO，并与花生酱混合。在首次给予anle138b前5天，小鼠每日一次服用200 μl花生酱。在治疗的前2周，小鼠每日服用2 mg溶于10 μl DMSO并与200 μl花生酱混合的anle138b。治疗2周后，剂量增加至5 mg溶于10 μl DMSO/200 μl花生酱中。在33周龄时，剂量增加至每日两次，每次5 mg。所有小鼠均每日接受疾病症状监测。每周进行一次详细的临床评估，包括行为和运动情况。每两周监测一次转棒试验结果和体重。\n\n

---

\n\n为了研究Emrusolmin (Anle138b)的预防作用，我们对健康、无牙菌斑的成年APPPS1Δ9小鼠进行了为期4个月的治疗，从2月龄到6月龄（牙菌斑前组；图EV1），分别喂食安慰剂或含anle138b的干粮颗粒。同时，我们也对年龄和性别匹配的野生型同窝小鼠进行了治疗，作为对照组。同样，为了研究anle138b的治疗作用，我们对有症状的APPPS1ΔE9小鼠进行了为期4个月的治疗，从6月龄到10月龄（牙菌斑后组；图EV1）。对照组为年龄和性别匹配的野生型同窝小鼠，分别喂食anle138b或安慰剂。Anle138b采用口服给药。制备的干饲料颗粒中每公斤饲料含有2克anle138b（SSNIFF）。这相当于每日约500毫克/公斤的剂量（假设每日饲料消耗量约为6克，平均体重为25克）。基于药代动力学研究，在大部分清醒期，40-70微摩尔浓度的anle138b可到达大脑（Wagner等人，2015）。安慰剂饲料由同一批次的饲料制备，但不含anle138b（SSNIFF）。值得注意的是，我们之前的小鼠药代动力学研究表明，单次推注后，anle138b在大脑中的半衰期约为4小时。 [2]

---

\n\n两个月大的雄性转基因小鼠被随机分为三组：一组喂食安慰剂饲料，一组喂食含有0.6 g/kg饲料的Emrusolmin (Anle138b)饲料，最后一组喂食含有2 g/kg饲料的Anle138b饲料。2 g/kg饲料的Anle138b剂量此前已在小鼠实验中使用⁴³，该剂量可在清醒期使脑内Anle138b浓度达到60 μM。以喂食安慰剂饲料的两个月大的C57/BL6健康非转基因小鼠（WT）作为健康对照组（n = 10）。实验期间，所有动物均喂食安慰剂饲料。治疗4个月后，进行行为学分析，随后处死动物并取出脑组织。[3]

对用于模拟 CJD 和帕金森病的小鼠的不同应用方案进行药代动力学 (PK) 分析（详见下文）表明，Emrusolmin (Anle138b) 具有极佳的口服生物利用度和极佳的血脑屏障穿透性，并且在 PMCA 检测中显示出的活性浓度在大脑中也得到了证实（图 5）。关于药代动力学的主要发现包括：(i) 口服Emrusolmin (Anle138b)可使AUC（曲线下面积）值稳定达到腹腔注射的约50%，表明其具有良好的口服生物利用度；(ii) 与花生酱混合给药可减缓Emrusolmin (Anle138b)的吸收，延长其在体内的生物利用度；(iii) 较高剂量可使血清和脑组织中的药物浓度成比例增加，表明其药代动力学呈线性关系，且未出现清除饱和现象；(iv) 在所有实验组的所有时间点，Anle138b在脑组织中的浓度约为血清浓度的3倍，证实其具有优异的血脑屏障穿透性。因此，与之前研究的几种潜在抗血小板聚集药物相比，Anle138b具有更高的生物利用度，而之前研究的几种药物在脑组织中的浓度较低[56]。体内剂量-反应分析（补充图9）显示，anle138b 的作用与药代动力学数据和体外剂量-反应曲线相符。在某些实验中，anle138b 甚至可以降低 PrPSc 水平（补充图10）。同时，采用高效液相色谱-高分辨率质谱联用技术对脑提取物进行分析，未在脑组织中检测到 anle138b 的代谢产物（补充图11），表明 anle138b 很可能是具有活性的寡聚体调节分子。[1]

[1]. Anle138b: a novel oligomer modulator for disease-modifying therapy of neurodegenerative diseases such as prion and Parkinson's disease. Acta Neuropathol. 2013 Jun;125(6):795-813.

[2]. The diphenylpyrazole compound anle138b blocks Aβ channels and rescues disease phenotypes in a mouse model for amyloid pathology. EMBO Mol Med. 2018;10(1):32-47.

[3]. Anle138b modulates α-synuclein oligomerization and prevents motor decline and neurodegeneration in a mouse model of multiple system atrophy. Mov Disord. 2019;34(2):255-263.

在阿尔茨海默病小鼠模型中，口服化合物Emrusolmin（在病理发生前或发生后）可恢复海马突触和转录可塑性以及空间记忆。

---

药物适应症
治疗多系统萎缩

---

作用机制
有证据表明，anle138b可阻断传导Aβ的孔道活性，而不改变膜内嵌入的Aβ寡聚体结构。

---

阿尔茨海默病是一种毁灭性的神经退行性疾病，最终会导致痴呆。目前尚无有效的治疗方法。本文表明，在阿尔茨海默病小鼠模型中，口服化合物anle138b（在病理发生前或发生后）可恢复海马突触和转录可塑性以及空间记忆。在机制层面，我们提供的证据表明，anle138b 能够阻断 Aβ 通道的活性，而不会改变膜内 Aβ 寡聚体的结构。总之，我们的数据表明，anle138b 是一种新型且有前景的化合物，可用于治疗阿尔茨海默病相关疾病，值得进一步研究。
总之，我们的数据表明，anle138b 可以通过阻断膜上 Aβ 诱导的通道，在淀粉样蛋白病理小鼠模型中恢复突触可塑性和记忆功能。对这种活性的仔细分析表明，寡聚体仍然存在于膜中，但通道的导电特性发生了改变，主要表现为开放时间缩短，并且无法像在缺乏 anle138b 的情况下那样积累大电流。考虑到 anle138b 也被证实能够改善 Tau 蛋白病理小鼠模型中的疾病表型，据我们所知，它是首批似乎能够对阿尔茨海默病 (AD) 两大主要病理特征产生因果影响的化合物之一，我们建议在临床试验中进一步验证 anle138b 治疗 AD 以及其他聚集蛋白病的潜力。[2]

---

多系统萎缩 (MSA) 是一种致命的神经退行性疾病，其特征是自主神经功能衰竭和严重的运动障碍。其主要病理特征是 α-突触核蛋白在少突胶质细胞中的积累，导致神经胶质细胞和神经元功能障碍以及神经退行性变。这些特征在 PLP-hαSyn 小鼠模型中得以重现，该模型在少突胶质细胞中表达人 α-突触核蛋白。目前，尚无有效的疾病修饰疗法。先前的实验表明，聚集抑制剂anle138b可减轻其他蛋白质病小鼠模型中的神经退行性变和行为缺陷。[3]

C16H11BRN2O2

343.18

342

C, 56.00; H, 3.23; Br, 23.28; N, 8.16; O, 9.32

882697-00-9

882697-00-9

44608289

Off-white to light yellow solid powder

1.6±0.1 g/cm3

527.3±50.0 °C at 760 mmHg

272.7±30.1 °C

0.0±1.3 mmHg at 25°C

1.670

4.96

47.1

1

3

2

21

370

0

BrC1C=C(C2NN=C(C3C=C4C(OCO4)=CC=3)C=2)C=CC=1

RCQIIBJSUWYYFU-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C16H11BrN2O2/c17-12-3-1-2-10(6-12)13-8-14(19-18-13)11-4-5-15-16(7-11)21-9-20-15/h1-8H,9H2,(H,18,19)

5-(1,3-Benzodioxol-5-yl)-3-(3-bromophenyl)-1H-pyrazole

Anle 138b; Anle138b; 882697-00-9; Emrusolmin; ANLE-138-b; 3-(1,3-benzodioxol-5-yl)-5-(3-bromophenyl)-1h-pyrazole; Emrusolmin [INN]; E7WRA77JET; 3-(2H-1,3-BENZODIOXOL-5-YL)-5-(3-BROMOPHENYL)-1H-PYRAZOLE; Anle-138b; Anle138b

2934.99.03.00

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 50 mg/mL (~145.70 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.29 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.29 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。