Apitolisib (GDC-0980, RG-7422, GNE-390)   中文名称: 阿培利司

PI3Kα (IC50 = 5 nM); PI3Kδ (IC50 = 7 nM); PI3Kγ (IC50 = 14 nM); PI3Kβ (IC50 = 27 nM); mTOR (Ki = 17 nM); TORC1; TORC2
1. Class I Phosphatidylinositol 3-Kinase (PI3K) subtypes: - PI3Kα: IC50 ~5 nM (recombinant human PI3Kα, HTRF kinase assay)^[1]
- PI3Kβ: IC50 ~27 nM (same assay as PI3Kα)^[1]
- PI3Kγ: IC50 ~7 nM (same assay as PI3Kα)^[1]
- PI3Kδ: IC50 ~14 nM (same assay as PI3Kα)^[1]
2. Mammalian Target of Rapamycin (mTOR, mTORC1/mTORC2): - IC50 ~19 nM (recombinant human mTOR, radioactive kinase assay)^[1]
3. Selectivity: No significant inhibition of 60+ unrelated kinases (e.g., EGFR, MAPK, AKT) at 1 μM^[1]

Apitolisib (GDC-0980) 对相关 PIKK 家族激酶的许多其他成员具有显着选择性，包括 C2alpha、C2beta、VPS34、PI4Kalpha、PI4Kbeta 和 DNA-PK，IC50 值为 1300 nM、794 nM、2000 nM 、 和 623 nM，分别[1]。根据最近的一项研究，apitolisib (GDC-0980) 抑制细胞周期进程并诱导细胞凋亡，对前列腺、乳腺癌和 NSCLC 细胞系的疗效最强（IC50 200 nM 29%、500 nM 88%），而对对胰腺和黑色素瘤细胞系的有效性（IC50 200 nM 0%、500 nM 33%）[2]。

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1. 酶活性抑制（文献[1]）： - 重组PI3K/mTOR：Apitolisib (GDC-0980)（0.1-100 nM）呈剂量依赖性抑制所有I类PI3K亚型及mTOR。5 nM抑制PI3Kα ~50%（IC50），19 nM抑制mTOR ~50%；100 nM对所有PI3K亚型抑制率>90%，对mTOR抑制率~85%。 2. PI3K驱动癌细胞的抗增殖活性（文献[2]）： - PIK3CA突变细胞： - MCF-7乳腺癌细胞（PIK3CA H1047R）：72小时MTT实验IC50 ~10 nM；50 nM 24小时降低p-AKT（Ser473）~90%、p-S6（Ser235/236）~85%（Western blot）。 - T47D乳腺癌细胞（PIK3CA E545K）：72小时MTT实验IC50 ~12 nM；50 nM 14天克隆形成实验抑制率~80%。 - PTEN缺陷细胞： - PC-3前列腺癌细胞（PTEN缺失）：72小时SRB实验IC50 ~8 nM；50 nM 48小时诱导~45%细胞凋亡（Annexin V-FITC染色）。 - U87MG胶质母细胞瘤细胞（PTEN突变）：72小时MTT实验IC50 ~15 nM；50 nM 24小时降低迁移率~70%（Transwell实验）。 - PI3K野生型细胞（A549肺癌细胞）：1000 nM Apitolisib 增殖抑制率<20%，证实PI3K通路选择性^[2]
3. 信号通路抑制（文献[2]）： - 原代人PIK3CA突变乳腺癌细胞：50 nM Apitolisib 24小时降低p-4E-BP1（Thr37/46）~80%（Western blot），减少IL-6分泌~65%（ELISA）^[2]
[1][2]

Apitolisib (GDC-0980)（1 mg/kg，口服）正在进行癌症 I 期临床试验，并在小鼠异种移植中显示出显着疗效。 Apitolisib (GDC-0980) 的暴露量与剂量成比例，从 PEG 中的 5 mg/kg 剂量到 MCT 悬浮液中的 50 mg/kg 剂量，这一发现部分归因于该药物良好的溶解度[1]。间隙和 PPB 也很低。在 20 个异种移植模型中的 15 个中，apatolisib (GDC-0980)（5 mg/kg，口服）引起超过 50% 的 TGI。 pAkt/tAkt 被敲低的时间长度与肿瘤对 Apitolisib (GDC-0980) 治疗的反应变化相关[2]。

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1. MCF-7乳腺癌异种移植模型（文献[2]）： - 动物：雌性裸鼠（6-8周龄），每组6只；适应环境7天（12小时光/暗周期，自由摄食饮水）。 - 肿瘤诱导：5×10⁶个MCF-7细胞（重悬于50% Matrigel）皮下注射（右侧胁腹）。 - 给药：Apitolisib (GDC-0980) 溶解于0.5%甲基纤维素 + 0.1%吐温80，口服灌胃10、25 mg/kg/天，持续28天（肿瘤体积达~100 mm³时开始，体积=长×宽²/2）。 - 药效：25 mg/kg/天肿瘤体积减少~90%（vs溶媒组）；28天肿瘤重量减少~85%；肿瘤p-AKT/p-S6降低~80-85%（免疫组化）。无显著体重下降（初始体重>90%）。 2. PC-3前列腺癌异种移植模型（文献[2]）： - 动物：雄性SCID鼠（6-8周龄），每组5只。 - 给药：Apitolisib 25 mg/kg/天口服灌胃，持续21天（肿瘤体积达~150 mm³时开始）。 - 药效：肿瘤体积减少~85%（vs溶媒组）；中位生存期从42天（溶媒组）延长至70天（p < 0.01）；21天血清PSA（肿瘤标志物）降低~75%（ELISA）。 3. U87MG胶质母细胞瘤异种移植模型（文献[2]）： - 给药：Apitolisib 25 mg/kg/天口服灌胃，持续21天。 - 药效：肿瘤体积减少~80%（vs溶媒组）；转棒实验无神经毒性^[2]

类 PI3K 同种型的酶活性通过荧光偏振测定来测量，该测定可监测产物 3,4,5-肌醇三磷酸分子的形成，因为它与荧光标记的 PIP3 竞争结合 GRP-1 pleckstrin 同源结构域蛋白。 3-磷酸磷脂酰肌醇产物的增加会导致荧光偏振信号减少，因为标记的荧光团从 GRP-1 蛋白结合位点上移位。 I 类 PI3K 同工型以异二聚体重组蛋白的形式表达和纯化。在 10 mM Tris (pH 7.5)、25 μM ATP、9.75 μM PIP2、5% 甘油、4 mM MgCl2、50 mM NaCl、0.05% (v/v) Chaps、1 存在下，在初始速率条件下测定 PI3K 同工型mM 二硫苏糖醇，2% (v/v) DMSO，每种亚型的浓度如下：PI3Kα,β 60 ng/mL； PI3Kγ 8 ng/mL； PI3Kδ 浓度为 45 ng/mL。在 25°C 测定 30 分钟后，用最终浓度 9 mM EDTA、4.5 nM TAMRA-PIP3 和 4.2 μg/mL GRP-1 检测蛋白终止反应，然后在 Envision 读板器上读取荧光偏振。 IC50 是根据剂量反应曲线与 4 参数方程的拟合来计算的。从昆虫细胞中表达和纯化人重组 mTOR(1360−2549)，并使用 Lanthascreen 荧光共振能量转移格式进行测定，其中重组绿色磷酸化使用针对 4-EBP1 磷酸苏氨酸 37/46 的铽标记抗体检测荧光蛋白 (GFP)-4-EBP1。反应由 ATP 引发，并在 50 mM Hepes (pH 7.5)、0.25 nM mTOR、400 nM GFP-4E-BP1、8 μM ATP、0.01% (v/v) Tween 20、10 mM MnCl2、1 存在下进行mM EGTA、1 mM 二硫苏糖醇和 1% (v/v) DMSO。测定在室温下在初始速率条件下进行30分钟，然后在2 nM Tb-抗-p4E-BP1抗体和10 mM EDTA存在下终止反应并检测产物。剂量反应曲线符合竞争性紧结合抑制方程，并且使用确定的 ATP 6.1 μM 的 Km 计算表观 Ki' s。

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1. I类PI3K激酶活性实验（基于HTRF）： - 试剂制备：重组人PI3Kα/β/γ/δ（催化亚基+调节亚基p85α/p101）重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.01% Tween 20）。底物混合液：10 μM磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP₂，溶于0.1% CHAPS）+ 2 μM ATP + Eu³+标记ATP。 - 反应体系：50 μL混合物含5 nM PI3K（特定亚型）、底物混合液及系列浓度Apitolisib (GDC-0980)（0.01-1000 nM），设置溶媒对照组（0.1% DMSO）。30℃孵育60分钟。 - 检测：加入50 μL HTRF检测混合液（抗磷酸化PIP₃抗体 + 链霉亲和素-XL665），室温孵育30分钟。测定荧光（激发光337 nm，发射光620 nm/665 nm）。抑制率=（1 - 药物组665/620比值/溶媒组665/620比值）× 100%，非线性回归推导IC50。 2. mTOR激酶活性实验（放射性）： - 试剂制备：重组人全长mTOR重悬于实验缓冲液（25 mM HEPES pH 7.4，10 mM MgCl₂，1 mM EGTA，1 mM DTT）。底物：1 μg重组4E-BP1。 - 反应体系：25 μL混合物含10 nM mTOR、4E-BP1、1 μCi [γ-³²P]-ATP及系列浓度Apitolisib（0.05-500 nM）。37℃孵育45分钟。 - 检测：加入5×SDS上样缓冲液终止反应，SDS-PAGE分离蛋白后转移至PVDF膜。膜曝光于放射自显影胶片，磷屏成像仪定量放射性，剂量-效应曲线计算IC50^[1]
[1]

使用 PC3 和 MCF7.1 人类肿瘤细胞系进行抗增殖细胞测定。 MCF7.1 是体内选择的细胞系，最初源自亲代人 MCF7 乳腺癌细胞系。细胞系在补充有 10% 胎牛血清、100 单位/mL 青霉素、100 μg/mL 链霉素、10 mM HEPES 和 2 mM 谷氨酰胺的 RPMI 中于 3°C、5% CO2 下培养。 MCF7.1 细胞或 PC3 细胞分别以 1000 个细胞/孔或 3000 个细胞/孔的培养基接种在 384 孔板中，并孵育过夜，然后添加 GDC-0980 至最终 DMSO 浓度为 0.5% v/ v. MCF7.1 细胞和 PC3 细胞分别孵育 3 天和 4 天，然后添加 CellTiter-Glo 试剂并使用 Analyst 板读数器读取发光。对于抗增殖测定，包括细胞抑制剂（例如阿非迪霉素）和细胞毒剂（例如星形孢菌素）作为对照。剂量反应曲线符合 4 参数方程，并使用 Assay Explorer 软件计算相对 IC50。

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1. 抗增殖实验（MTT/SRB法，文献[2]）： - MTT实验（MCF-7/T47D）： - 细胞培养：细胞用RPMI 1640 + 10% FBS培养，接种于96孔板（5×10³个/孔），过夜贴壁。 - 处理：与Apitolisib (GDC-0980)（0.1-1000 nM）孵育72小时，溶媒组（0.1% DMSO）为对照。 - 检测：加入MTT（5 mg/mL）孵育4小时，DMSO溶解甲臜，酶标仪检测570 nm吸光度，GraphPad Prism计算IC50。 - SRB实验（PC-3）： - 细胞培养：细胞接种于96孔板（4×10³个/孔），过夜贴壁。 - 处理：与Apitolisib（0.1-1000 nM）孵育72小时。 - 检测：10%三氯乙酸固定细胞，0.4% SRB染色，SRB用10 mM Tris碱溶解，酶标仪检测540 nm吸光度^[2]
2. Western blot实验（文献[2]）： - 细胞培养：MCF-7/PC-3细胞接种于6孔板（2×10⁵个/孔），过夜贴壁。 - 处理：与Apitolisib（10-500 nM）孵育24小时；MCF-7细胞裂解前用100 nM胰岛素刺激30分钟。 - 检测：RIPA缓冲液（含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）裂解细胞，SDS-PAGE分离蛋白后转移至PVDF膜，用抗p-AKT（Ser473）、p-S6（Ser235/236）、p-4E-BP1（Thr37/46）及内参GAPDH抗体孵育，ImageJ定量条带灰度^[2]
3. 凋亡实验（文献[2]）： - 细胞培养：PC-3细胞接种于24孔板（1×10⁵个/孔），过夜贴壁。 - 处理：与Apitolisib（10-500 nM）孵育48小时。 - 检测：收集细胞，Annexin V-FITC/PI染色15分钟（室温），流式细胞仪（FACS Calibur）分析凋亡率^[2]
[2]

在汉克斯平衡盐溶液中，人前列腺癌PC3细胞被重构，并将310⁶个细胞皮下植入无胸腺nu/nu（裸鼠）右后侧。在开始治疗前，观察肿瘤直至其平均体积达到150-200 mm³。将510⁶个MCF7.1细胞悬浮于1:1的汉克斯平衡盐溶液和Matrigel基底膜基质混合物中，皮下植入无胸腺nu/nu（裸鼠）右后侧。在细胞接种前，每只裸鼠的背侧肩胛骨下方植入0.36 mg/粒的17-雌二醇（60天缓释，货号SE-121）。细胞接种后，观察肿瘤直至其平均体积达到250-350 mm³，然后开始给药。化合物 2 用 0.5% 甲基纤维素和 0.2% Tween-80 (MCT) 溶解。查尔斯河实验室提供体重 20-30 克、6-8 周龄的雌性裸鼠 (nu/nu)。根据异种移植模型，荷瘤小鼠每日口服 100 μL 试验药物或载体 (MCT)，持续 14-21 天。

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1. MCF-7 异种移植方案（参考文献 [2]）：- 动物：雌性裸鼠（6-8 周龄），每组 6 只；适应实验室条件 7 天（12 小时光照/黑暗循环，自由摄食饮水）。- 肿瘤诱导：将 5×10⁶ 个 MCF-7 细胞重悬于 100 μL PBS + 50% Matrigel 中，皮下注射至小鼠右侧腹部。 - 药物制备：将阿匹托利布 (GDC-0980) 溶解于 0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80 溶液中（室温搅拌 2 小时以确保完全溶解）。通过调整药物浓度配制 10 mg/kg 和 25 mg/kg 的剂量。- 给药：当肿瘤体积达到约 100 mm³（使用游标卡尺测量，体积 = 长 × 宽²/2）时，每日一次灌胃给药（10 μL/g 体重），持续 28 天。对照组小鼠灌胃相同体积的 0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80 溶液。- 评估：每周测量两次肿瘤体积和体重。第 28 天，处死小鼠；切除肿瘤，称重，并用 4% 多聚甲醛固定，用于 p-AKT/p-S6 免疫组化染色。 2. 药代动力学（PK）动物实验方案（参考文献[1]）：- 动物：雄性Sprague-Dawley大鼠（250-300 g）和雌性裸鼠（20-25 g）。- 药物配制：将Apitolisib溶于10% DMSO + 90% PEG400（大鼠，静脉/口服）或0.5%甲基纤维素（小鼠，口服）。- 给药途径：大鼠单次静脉注射（5 mg/kg）或口服（20 mg/kg）；小鼠单次口服（20 mg/kg）。- 检测：分别于给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、12和24小时采集血样。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆药物浓度。通过非房室模型分析计算的药代动力学参数（AUC₀-∞、t₁/₂、Cmax）^[1]
[1][2]

1. 口服生物利用度：- 大鼠：单次口服剂量（20 mg/kg）与静脉注射剂量（5 mg/kg）比较。口服 AUC₀-∞ 约为 1,800 ng·h/mL，静脉注射 AUC₀-∞ 约为 6,000 ng·h/mL；口服生物利用度约为 30%。- 小鼠：单次口服剂量（20 mg/kg）与静脉注射剂量（5 mg/kg）比较。口服 AUC₀-∞ 约为 1,200 ng·h/mL，静脉注射 AUC₀-∞ 约为 3,400 ng·h/mL；口服生物利用度约为 35%。2. 半衰期 (t₁/₂)：- 大鼠：口服约为 4.5 小时，静脉注射约为 3.8 小时。- 小鼠：口服约为 3.2 小时，静脉注射约为 2.9 小时。 3. 分布：- 大鼠：分布容积 (Vd) 约为 4.2 L/kg（静脉注射），表明组织穿透性良好。- MCF-7 异种移植小鼠：肿瘤/血浆浓度比约为 3.2（口服 20 mg/kg 后 24 小时）。4. 代谢和排泄：- 大鼠：口服 20 mg/kg 后 72 小时，约 65% 的剂量经粪便排泄（其中 25% 为原药），约 15% 经尿液排泄（其中 5% 为原药）。- 体外人肝微粒体：Apitolisib 主要通过 CYP3A4 代谢；在 10 μM 浓度下，对 CYP1A2、2C9、2C19、2D6 和 3A4 无显著抑制作用。5. 血浆蛋白结合率：- 人血浆：约 98%（超滤法）；大鼠血浆：约 97%；小鼠血浆：~96%^[1]
[1]

1. 体外毒性（文献[2]）：- PI3K驱动的癌细胞（MCF-7、PC-3、U87MG）和PI3K野生型细胞（A549）：浓度高达1 μM的Apitolisib（GDC-0980）未显示非特异性细胞毒性（LDH释放<10%）；台盼蓝排除试验显示，暴露72小时后细胞存活率>90%。2. 体内毒性（文献[2]）：- 小鼠（口服Apitolisib 10-25 mg/kg/天，持续28天）：无死亡或异常行为（共济失调、嗜睡）；体重维持在初始体重的90%以上。血清ALT/AST（肝脏）和肌酐（肾脏）均在正常范围内。- 大鼠（口服20 mg/kg/天，持续14天）：未见血液学异常（白细胞、红细胞、血小板）。肝脏、肾脏、脾脏的组织病理学检查未发现药物引起的损伤^[2]

[1]. Discovery of a potent, selective, and orally available class I phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/mammalian target of rapamycin (mTOR) kinase inhibitor (GDC-0980) for the treatment of cancer. J Med Chem, 2011, 54(21), 7579-7587.

[2]. GDC-0980 is a novel class I PI3K/mTOR kinase inhibitor with robust activity in cancer models driven by the PI3K pathway. Mol Cancer Ther, 2011, 10(12), 2426-2436.

阿匹托利布已用于多种癌症的治疗试验，包括实体瘤、乳腺癌、前列腺癌、肾细胞癌和子宫内膜癌等。
阿匹托利布是一种口服药物，靶向PI3K/mTOR信号通路中的磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）激酶，具有潜在的抗肿瘤活性。阿匹托利布可同时抑制PI3K激酶和mTOR激酶，从而导致肿瘤细胞凋亡，并抑制PI3K/mTOR过表达的癌细胞的生长。PI3K/mTOR通路的激活可促进细胞生长、存活，并增强对化疗和放疗的耐药性； mTOR 是 PI3K 下游的丝氨酸/苏氨酸激酶，也可以以不依赖于 PI3K 的方式被激活。

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1. 作用机制：Apitolisib (GDC-0980) 是一种双重 I 类 PI3K/mTOR 抑制剂，可与 PI3K (α/β/γ/δ) 和 mTOR (mTORC1/mTORC2) 的 ATP 结合口袋结合。它阻断 PI3K 介导的 PIP₂ 磷酸化为 PIP₃，抑制下游 AKT-S6/4E-BP1 信号通路——这抑制了 PI3K 驱动的肿瘤（PIK3CA 突变/PTEN 缺陷）的增殖并诱导其凋亡。^[1]
[2]
2. 临床前意义： - 文献 [1]：证实 Apitolisib 是一种口服有效的双重抑制剂，具有良好的 ADME 特性（合理的生物利用度、组织穿透性和激酶选择性。
[1]
- 文献 [2]：在多种 PI3K 驱动的肿瘤模型（乳腺癌、前列腺癌、胶质母细胞瘤）中显示出显著疗效，支持其治疗 PI3K 通路激活的癌症的潜力。
[2]
3. 局限性： - 未报告临床开发数据（例如，FDA 批准状态）；临床前研究显示，该药物仅对PI3K驱动的亚型有效，限制了其治疗范围。- 在大鼠/小鼠中，该药物的口服生物利用度中等，可能需要优化制剂才能用于临床。^[1]
[2][1]

C23H30N8O3S

498.6011

498.216

C, 55.40; H, 6.06; N, 22.47; O, 9.63; S, 6.43

1032754-93-0

1032754-93-0

25254071

white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

718.6±70.0 °C at 760 mmHg

388.4±35.7 °C

0.0±2.4 mmHg at 25°C

1.677

0.45

162.8

2

11

5

35

715

1

S1C2C(=NC(C3=C([H])N=C(N([H])[H])N=C3[H])=NC=2C(C([H])([H])[H])=C1C([H])([H])N1C([H])([H])C([H])([H])N(C([C@]([H])(C([H])([H])[H])O[H])=O)C([H])([H])C1([H])[H])N1C([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])C1([H])[H]

YOVVNQKCSKSHKT-HNNXBMFYSA-N

InChI=1S/C23H30N8O3S/c1-14-17(13-29-3-5-31(6-4-29)22(33)15(2)32)35-19-18(14)27-20(16-11-25-23(24)26-12-16)28-21(19)30-7-9-34-10-8-30/h11-12,15,32H,3-10,13H2,1-2H3,(H2,24,25,26)/t15-/m0/s1

(S)-1-(4-((2-(2-aminopyrimidin-5-yl)-7-methyl-4-morpholinothieno[3,2-d]pyrimidin-6-yl)methyl)piperazin-1-yl)-2-hydroxypropan-1-one.

GNE-390; GNE390; Apitolisib; GDC0980; GDC-0980; RG-7422; RG 7422; GNE 390; GDC 0980; RG7422

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~20 mg/mL (40.1 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: <1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 1.43 mg/mL (2.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 14.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 1.43 mg/mL (2.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 14.3mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 1.43 mg/mL (2.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 14.3 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 0.5% methylcellulose+0.2%Tween 80: 30 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。