Antifungal; Glycosylphosphatidylinositol (GPI) biosynthesis pathway (no specific IC50 or Ki values provided) [1]
APX001A targets Gwt1 (GPI-anchored wall transfer protein 1), a protein that plays an important role in fungal cell wall integrity. It inhibits the inositol acylation activity of C. albicans Gwt1p and A. fumigatus Gwt1p with IC50s of 0.3 to 0.6 μM. By inhibiting Gwt1, it disrupts GPI-anchored mannoprotein biosynthesis.

即使浓度高达 100 μM，Manogepix 对人源 Pig-Wp 也无抑制作用，但它能降低白色念珠菌 Gwt1p 和烟曲霉 Gwt1p 的肌醇酰化活性，IC50 值为 0.3 至 0.6 μM。检测 Manogepix 处理后的白色念珠菌细胞表面 GPI 锚定蛋白 ALS1 的表达，结果显示其表达量远低于未处理细胞，证实了真菌糖基磷脂酰肌醇 (GPI) 生物合成受到抑制。当浓度高于其最低抑菌浓度 (MIC) 时，Manogepix 可抑制白色念珠菌的芽管形成、对聚苯乙烯表面的黏附以及生物膜的形成 [1]。

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- 抗白色念珠菌活性：E1210抑制白色念珠菌的生长，最低抑菌浓度 (MIC) 为 0.125–0.5 μg/mL。它以剂量依赖的方式抑制菌丝生长和芽管形成，在浓度 ≥0.5 μg/mL 时观察到显著抑制作用。显微镜分析显示细胞壁形态异常，且对表面的黏附性降低 [1]。
- 机制相关效应：E1210阻断白色念珠菌中的 GPI 锚定蛋白生物合成，表现为细胞表面 GPI 锚定蛋白（例如 ALS1）表达降低。 Western blot分析证实了这一点，经处理的细胞中这些蛋白的水平较未处理的对照组有所降低[1]。
体外实验表明，APX001A（manogepix）对临床分离的念珠菌（MIC50/90=0.008/0.12 mg/L）和曲霉属真菌具有强效活性。它能抑制念珠菌的芽管形成、对聚苯乙烯表面的黏附以及生物膜的形成。它对白色念珠菌Gwt1p和烟曲霉Gwt1p的抑制IC50值为0.3至0.6 μM。

用马诺吉匹（Manogepix）治疗（口服；每日两次；连续三天；特定病原体清除的雌性ICR小鼠；2.5 mg/kg、5 mg/kg和10 mg/kg）可降低口腔白色念珠菌活细胞的数量，且呈剂量依赖性[2]。

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- 在小鼠念珠菌病模型中的疗效：口服E1210（5–20 mg/kg）可显著降低播散性念珠菌病小鼠肾脏中的真菌负荷，以菌落形成单位（CFU）计数衡量（与载体对照组相比，CFU减少了1.5–2.5 log）。在口咽念珠菌病中，使用 2.5–10 mg/kg 的剂量可使口腔真菌负荷降低 2–3 个对数单位 [2]。
- 在小鼠曲霉病和镰刀菌病中的疗效：E1210（10–20 mg/kg，口服）可提高肺曲霉病小鼠的存活率（存活率 50–60%，对照组为 20%），并降低肺部真菌负荷。在播散性镰刀菌病中，它可提高存活率（存活率 40–50%，对照组为 10%），并减少真菌向器官的播散 [2]。
在体内，APX001A 是一种口服有效的抗真菌药物。其活性成分 manogepix 可抑制真菌酶 Gwt1。它已被证明在真菌感染的动物模型中有效。然而，现有文献中并没有对体内研究的具体细节进行详细描述。

体外药敏试验。[2]
采用临床和实验室标准协会 (CLSI) 在 M27-A3 和 M38-A2 文件中详述的肉汤微量稀释法测定 E1210 和参考化合物的最小抑菌浓度 (MIC)。使用 RPMI 1640 培养基，并用 0.165 M 3-(N-吗啉代)-丙磺酸 (MOPS) 缓冲至 pH 7.0。结果以三次独立实验中各化合物的中位 MIC 值表示。

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持续开展抑制糖基磷脂酰肌醇 (GPI) 生物合成的新型抗真菌药物的研究促成了 E1210 的设计。本研究评估了E1210对白色念珠菌GWT1（Orf19.6884）蛋白、烟曲霉GWT1（AFUA_1G14870）蛋白以及人PIG-W蛋白的抑制活性选择性。这些蛋白能够催化GPI生物合成途径早期阶段的肌醇酰化反应。随后，我们评估了E1210对白色念珠菌关键毒力因子的影响。结果表明，E1210能够抑制白色念珠菌Gwt1p和烟曲霉Gwt1p的肌醇酰化活性，其半数抑制浓度（IC50）为0.3至0.6 μM，但即使浓度高达100 μM，也未观察到对人PIG-Wp的抑制活性。为了证实真菌GPI生物合成的抑制作用，我们检测了经E1210处理的白色念珠菌细胞表面GPI锚定蛋白ALS1的表达情况，结果显示其表达量显著低于未处理的细胞。然而，粗提物中的ALS1蛋白水平与细胞表面的RHO1蛋白水平几乎相同。此外，E1210在高于其最低抑菌浓度（MIC）时，能够抑制白色念珠菌的芽管形成、对聚苯乙烯表面的黏附以及生物膜的形成。这些结果表明，E1210选择性地抑制了真菌特异性GPI的肌醇酰化作用（该作用由Gwt1p催化），从而抑制了GPI锚定蛋白的成熟；此外，E1210还通过抑制GPI生物合成，抑制了白色念珠菌某些重要毒力因子的表达。[1]
APX001A的体外酶活性测定用于评估其抑制Gwt1活性的能力。这些无细胞测定使用纯化的Gwt1酶或膜制剂，并测定肌醇酰化活性。化合物的抑制效力（IC50）通过测量酶活性的降低来确定。APX001A的IC50值为0.3至0.6 μM。

还测定了白色念珠菌细胞粗提物中的Als1p水平。将细胞在35°C下与E1210一起孵育1小时。孵育后，将培养物在4°C下以1000 × g离心10分钟，并将沉淀物重悬于含有真菌蛋白酶抑制剂混合物（Sigma-Aldrich）的50 mM磷酸钾缓冲液（pH 7.4）中。将细胞悬液与等重量的玻璃珠混合，并用细胞破碎仪进行匀浆。然后通过离心去除未破碎的细胞和玻璃珠。上清液即为粗提物。还通过ELISA测定了粗提物中Als1蛋白的含量。使用抗Als1抗体作为捕获抗体，抗白色念珠菌抗体作为检测抗体。使用HRP标记的兔抗体（ViroStat Inc.，Portland，ME）作为二抗检测白色念珠菌。每个浓度均进行重复ELISA实验，最终结果取三次测定的平均值。测定蛋白浓度以标准化Als1p的含量。[1]

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- 菌丝生长抑制试验：将白色念珠菌细胞在含有E1210（0.125–2 μg/mL）的RPMI 1640培养基中于37°C培养3–6小时。通过显微镜定量分析菌丝长度和芽管形成情况，结果表明，浓度为 0.5 μg/mL 的 E1210 可使菌丝生长减少 50% 以上 [1]。
- GPI 锚定蛋白检测：用浓度为 0.5–1 μg/mL 的 E1210 处理白色念珠菌细胞 16 小时后，裂解细胞，并通过蛋白质印迹法分析 GPI 锚定蛋白（例如 ALS1）。密度分析显示，与未处理的细胞相比，蛋白质水平降低了 40–60% [1]。
体外细胞试验评估了 APX001A 对多种真菌的抗真菌活性。采用肉汤微量稀释法测定最小抑菌浓度 (MIC)。同时评估了其抑制芽管形成、黏附和生物膜形成的能力。这些试验表明该化合物在相关情况下具有抗真菌活性。

动物/疾病模型： 感染白色念珠菌的SPF级雌性ICR小鼠（5周龄；约25克）[2]
剂量： 2.5 mg/kg、5 mg/kg和10 mg/kg
给药途径： 口服；每日两次；持续3天
实验结果： 以剂量依赖的方式降低了口腔内活白色念珠菌的数量。

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口咽念珠菌病模型。[2]
用白色念珠菌感染经皮质酮免疫抑制的小鼠，并在药物治疗后测量每只小鼠口腔内的白色念珠菌数量。ICR小鼠在感染前1天和感染后3天皮下注射4 mg醋酸皮质酮进行免疫抑制。为了预防细菌感染，从皮质类固醇给药当天开始，小鼠饮用水中添加1 mg/ml盐酸四环素，并持续整个实验过程。白色念珠菌IFM49971在35℃的沙氏葡萄糖琼脂（SDA）培养基上培养2天。将菌体悬浮于无菌生理盐水中。使用血细胞计数板计数菌体，并用无菌生理盐水调整至所需浓度。随后，用盐酸氯丙嗪（0.5 mg/只，皮下注射）麻醉小鼠。使用微量移液器，将10 μl白色念珠菌IFM49971菌悬液接种到麻醉小鼠的口腔内。然后，给予小鼠4 × 10⁵ CFU（菌落形成单位）的白色念珠菌攻击剂量。随后，从感染后第3天开始，连续3天，分别给予小鼠每日两次口服E1210（BID）或每日一次口服氟康唑（QD）。对照组给予等体积的5%葡萄糖溶液，每日两次。在最后一次给药后的第二天，用盐酸氯丙嗪（0.5 mg/只，皮下注射）麻醉小鼠。通过测定每只小鼠在给药后口腔内白色念珠菌的数量来评估疗效。使用细尖棉签彻底擦拭小鼠的口腔（即颊部、舌部和软腭）。擦拭后，将棉签末端放入装有1 ml无菌生理盐水的试管中。回收的细胞用涡旋混合器混匀后悬浮于无菌生理盐水中，然后进行10倍系列稀释，接种于添加了氨苄青霉素（0.1 mg/ml）的SDA平板上进行培养。SDA平板于35℃培养过夜，然后计数活细胞，以菌落形成单位（CFU）表示。细胞数量以log10 CFU/拭子表示。口腔中可检测到的最低细胞数为10 CFU（1 log10 CFU）。活细胞计数重复两次。[2]

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播散性念珠菌病模型。[2]
在感染前6天，ICR小鼠皮下注射5-氟尿嘧啶（5-FU），剂量为200 mg/kg体重，进行免疫抑制。为了预防内源性细菌感染，这些小鼠在感染前2～3天至感染后5～7天，通过饮用水口服给予0.1 mg/ml的环丙沙星。白色念珠菌IFM49971、白色念珠菌IFM49738和热带念珠菌E83037分别在35℃的SDA平板上培养2天。将琼脂平板表面的菌体悬浮于无菌生理盐水中，并用血细胞计数器进行计数。最后用无菌生理盐水将菌液浓度调整至所需浓度。通过尾静脉注射0.2 ml白色念珠菌细胞悬液（0.8至1.4 × 10⁴ CFU/只小鼠，或IFM49971菌株为5.3 × 10⁴ CFU/只小鼠）或热带念珠菌细胞悬液（3.0 × 10⁵ CFU/只小鼠）诱导中性粒细胞减少小鼠发生感染。感染后1小时或24小时开始抗真菌治疗，并持续3天（第0至2天或第1至3天）。E1210或伏立康唑每日口服2至3次，氟康唑每日口服1次，卡泊芬净或脂质体两性霉素B每日静脉注射1次。对照组每日口服等体积的赋形剂（5%葡萄糖溶液，10 ml/kg）2至3次。在我们的初步研究中，口服载体对照组小鼠的生存曲线与静脉注射载体对照组小鼠的生存曲线相似。因此，我们没有设置静脉注射载体的对照组。生存率和生存期在14天内测定。[2]

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- 播散性念珠菌病模型：小鼠经静脉注射感染白色念珠菌（1×10⁵ CFU）。E1210溶于0.5%甲基纤维素溶液中，于感染后2小时开始，每日一次口服5、10或20 mg/kg，连续5天。通过在琼脂平板上接种匀浆来评估肾脏真菌负荷，并监测7天的生存情况[2]。
- 肺曲霉病模型：免疫缺陷小鼠经鼻内感染烟曲霉（1×10⁶ 分生孢子）。 E1210（10 或 20 mg/kg）每日口服一次，连续 7 天，从感染后 2 小时开始给药。评估肺部菌落形成单位 (CFU) 计数和存活率 [2]。
- 口咽念珠菌病模型：小鼠经免疫抑制后，经口感染白色念珠菌。E1210（2.5、5 或 10 mg/kg）每日口服两次，连续 3 天。采集口腔拭子，通过 CFU 计数确定真菌载量 [2]。
肺曲霉病模型。[2]
DBA/2N 小鼠在感染前 5 至 6 天皮下注射 5-氟尿嘧啶 (5-FU) 200 mg/kg 进行免疫抑制。为了预防内源性细菌感染，小鼠在感染前3～4天至感染后7天期间，通过饮用水灌胃给予0.1 mg/ml环丙沙星。黄曲霉IFM50915和烟曲霉IFM51126在PDA琼脂平板上于35℃培养7天。收集琼脂平板表面的分生孢子，悬浮于含0.05% Tween 80的无菌生理盐水中，并用血细胞计数器计数。最终接种量用含0.05% Tween 80的无菌生理盐水调整至所需浓度。小鼠经静脉注射0.1 ml盐酸氯胺酮（4.17 mg/ml）麻醉。通过鼻内接种0.05 ml黄曲霉分生孢子悬液（3.0 × 10⁴ 个分生孢子/只小鼠）或0.05 ml烟曲霉分生孢子悬液（6.0 × 10⁴ 个分生孢子/只小鼠）诱导中性粒细胞减少小鼠发生感染。感染后1小时开始抗真菌治疗，并持续4天或7天（第0至3天或第0至7天）。E1210或伏立康唑每日口服两次，卡泊芬净或脂质体两性霉素B每日腹腔注射一次。对照组每日口服等体积的赋形剂（5%葡萄糖溶液，10 ml/kg）。在我们的初步研究中，口服赋形剂的对照组小鼠的生存曲线与腹腔注射赋形剂的对照组小鼠的生存曲线相似。因此，我们没有设置腹腔注射载体的对照组。存活率和存活期在14天内测定。[2]

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播散性镰刀菌病模型。[2]
DBA/2N小鼠在感染前6天皮下注射200 mg/kg的5-氟尿嘧啶（5-FU）进行免疫抑制。为预防细菌感染，小鼠在感染前3天至感染后7天期间，饮用水中添加0.1 mg/ml的环丙沙星。将茄病镰刀菌IFM50956菌株接种于PDA琼脂平板上，30℃培养7天。将琼脂平板表面的菌体悬浮于含0.05% Tween 80的无菌生理盐水中，并使用血细胞计数板进行计数。使用含0.05% Tween 80的无菌生理盐水将最终接种物调整至所需密度。通过尾静脉注射0.2 ml F. solani细胞悬液（5.0 × 10³ 个细胞/只小鼠）诱导中性粒细胞减少小鼠发生感染。感染后1小时开始抗真菌治疗，并持续5天（第0至4天）。E1210每日三次口服给药。对照组每日三次口服等体积的5%葡萄糖溶液。在14天内测定存活率和存活期。[2]

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药代动力学研究。[2]
E1210静脉注射或口服给药于雄性ICR小鼠。给予E1210后，在指定时间点（0.08、0.25、0.5、1、2、4、6、8 小时）从每只小鼠的下腔静脉抽取血样。通过离心血液获得血浆样本。用甲醇脱蛋白后，提取的样本采用液相色谱-串联质谱法（LC/MS/MS）进行分析。使用 MassLynx 软件，通过内标法测定血浆中E1210的浓度。E1210的药代动力学参数采用非模型依赖性分析法计算。[2]

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毒理学研究。 [2]
E1210以灌胃法每日一次，连续7天给予雄性和雌性Sprague-Dawley大鼠（每组每性别3只），剂量分别为100、300或1000 mg/kg。对照组给予等体积（10 ml/kg）的溶剂（0.4 mol/L盐酸）。所有死亡或濒死的大鼠均立即进行尸检，所有存活的大鼠在给药7天后进行尸检。评估指标包括：死亡率、临床症状、体重、食物消耗量、血液学、血液化学、毒代动力学、肝脏药物代谢酶以及宏观和微观病理学。[2]
已在真菌感染动物模型中开展了APX001A的体内动物研究，以评估其疗效。然而，现有文献并未详述这些研究的具体细节。该化合物为研究用化合物，尚未获准用于临床。

APX001A具有口服生物活性。其药代动力学特性支持口服给药。作为一种小分子药物，它能被吸收并分布于全身。然而，现有文献中并未详细描述其半衰期和生物利用度等具体参数。

现有文献中关于APX001A的具体毒性数据并不详尽。作为一种抗真菌药物，其毒性特征可能与其作用机制相关。然而，动物模型研究表明，该药物疗效显著且毒性较低。本品仅供研究用途。

[1]. E1210, a new broad-spectrum antifungal, suppresses Candida albicans hyphal growth through inhibition of glycosylphosphatidylinositol biosynthesis. Antimicrob Agents Chemother. 2012 Feb;56(2):960-71.

[2]. Efficacy of oral E1210, a new broad-spectrum antifungal with a novel mechanism of action, in murine models of candidiasis, aspergillosis, and fusariosis. Antimicrob Agents Chemother. 2011 Oct;55(10):4543-51.

E1210 是一种首创的广谱抗真菌药物，其作用机制新颖——抑制真菌糖基磷脂酰肌醇的生物合成。本研究评估了 E1210 和一种参考抗真菌药物在小鼠口咽念珠菌病、播散性念珠菌病、肺曲霉病和播散性镰刀菌病模型中的疗效。口服 E1210 对念珠菌、曲霉和茄病镰刀菌引起的感染均表现出剂量依赖性的疗效。在治疗口咽念珠菌病时，E1210 和氟康唑均能显著降低口腔菌落形成单位 (CFU) 的数量，优于对照组 (P < 0.05)。在播散性念珠菌病模型中，接受 E1210、氟康唑、卡泊芬净或脂质体两性霉素 B 治疗的小鼠存活率显著高于对照组小鼠（P < 0.05）。E1210 对由唑类耐药的白色念珠菌或热带念珠菌引起的播散性念珠菌病也显示出显著疗效。治疗开始时间延迟 24 小时对 E1210 治疗播散性念珠菌病的疗效影响甚微。在黄曲霉肺曲霉病模型中，接受 E1210、伏立康唑或卡泊芬净治疗的小鼠存活率显著高于对照组小鼠（P < 0.05）。E1210 对烟曲霉肺曲霉病也有效。与许多抗真菌药物不同，E1210 对由茄病镰刀菌（Fusarium solani）引起的播散性茄病也有效。总之，E1210 在小鼠口咽念珠菌病、播散性念珠菌病、肺曲霉病和播散性茄病镰刀菌感染模型中均表现出稳定的疗效。这些数据表明，需要进一步研究以确定 E1210 在治疗播散性真菌感染方面的潜力。[2] - 作用机制：E1210 通过抑制 GPI 生物合成途径发挥其抗真菌作用，该途径对于蛋白质正确锚定到真菌细胞壁至关重要。这种抑制作用会导致细胞壁完整性受损和毒力降低。[1]
- 广谱活性：E1210在体外和体内均显示出对多种真菌的活性，包括念珠菌属、烟曲霉属和茄病镰刀菌属，在某些模型中其疗效与现有抗真菌药物相当或更优[2]。
APX001A（Manogepix，E1210）是一种首创的广谱抗真菌药物，可抑制真菌蛋白Gwt1。它是一种研究化合物，具有治疗侵袭性真菌感染的潜力。该化合物尚未获准用于临床，仅供研究用途。

C21H18N4O2

358.393224239349

358.142

C, 70.38; H, 5.06; N, 15.63; O, 8.93

936339-60-5

Fosmanogepix;2091769-17-2

16719049

White to light yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

569.4±45.0 °C at 760 mmHg

298.1±28.7 °C

0.0±1.6 mmHg at 25°C

1.640

3.75

87.1

1

6

6

27

444

0

N1=C(CC2C=CC(COC3C=CC=CN=3)=CC=2)C=C(C2C(N)=NC=CC=2)O1

WSEKTEUGRLFBSE-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H18N4O2/c22-21-18(4-3-11-24-21)19-13-17(25-27-19)12-15-6-8-16(9-7-15)14-26-20-5-1-2-10-23-20/h1-11,13H,12,14H2,(H2,22,24)

(3-(3-(4-(((Pyridin-2-yl)oxy)methyl)benzyl)isoxazol-5-yl)pyridin-2-)amine

E1210; APX001A; E-1210; APX 001 A; 936339-60-5; E1210; Manogepix; 7B1P18ID9L; APX-001A; (pharmaceutical); Manogepix; E-1210; 3-(3-(4-((Pyridin-2-yloxy)methyl)benzyl)isoxazol-5-yl)pyridin-2-amine; (3-(3-(4-(((Pyridin-2-yl)oxy)methyl)benzyl)isoxazol-5-yl)pyridin-2-)amine; 7B1P18ID9L; E 1210; APX-001-A; APX001-A; Manogepix

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~279.03 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.80 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.80 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.80 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。