| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MCT1/2 (monocarboxylate transporter) (Ki = 2.3 nM and 10 nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
MCT1/MCT2 C 端嵌合体被 AR-C155858 (10 nM–100 nM) 抑制 [1]。 MCT2 被 AR-C155858 抑制，在 10 nM 时抑制率为 70%，并且抑制逐渐增加，仅与远低于 10 nM 的 Ki 值一致。在非洲爪蟾卵母细胞中，AR-C155858 以浓度和时间依赖性方式抑制 MCT1 表达 [2]。
在哺乳动物细胞中，MCT（单羧酸转运蛋白）需要与辅助蛋白结合，才能使活性转运蛋白在质膜上表达。Basigin是MCT1、MCT3和MCT4的首选结合伴侣，而embigin则是MCT2的首选结合伙伴。在大鼠和兔红细胞中，MCT1分别与embigin和basigin相关，但发现其对AR-C155858抑制的敏感性是相同的。使用RT（逆转录）-PCR，我们发现非洲爪蟾卵母细胞含有内源性basigin，但不含embigin。外源性embigin的共表达对MCT1的表达或AR-C155858对其的抑制都没有影响。相比之下，外源性embigin的共表达显著增强了卵母细胞质膜上活性MCT2的表达。这种额外的转运活性对AR-C155858的抑制不敏感，这与用内源性basigin表达的MCT2不同，后者被AR-C15858强烈抑制。在有和没有外源性胚原的情况下，卵母细胞中也表达了MCT1和MCT2的黑猩猩和C端截短。确定了这些构建体的L-乳酸Km值，并表明MCT的TM（跨膜）结构域，最有可能是TM7-TM12，但不是C末端，是L-乳酸亲和力的主要决定因素，而相关的辅助蛋白几乎没有影响。这些构建体对乳酸转运的抑制剂滴定表明，embigin通过与MCT2的细胞内C末端和TMs 3和6相互作用来调节MCT2对AR-C155858的敏感性。发现MCT2的C末端对于其与内源性basigin的表达至关重要。[1] 在本研究中，我们描述了强效MCT1（单羧酸转运蛋白1）抑制剂AR-C155858的性质。使用大鼠红细胞中MCT1转运L-乳酸的抑制剂滴定法来确定Ki值、MCT1上AR-C155858结合位点的数量（Et）和转运蛋白的周转数（kcat）。衍生值分别为2.3+/-1.4nM、1.29+/-0.09nmol/ml包装细胞和12.2+/-1.1s-1。当在非洲爪蟾卵母细胞中表达时，MC-C155858对MCT1和MCT2有强烈的抑制作用，而MCT4则没有。对MCT1的抑制显示出时间依赖性，微量注射时该化合物也具有活性，这表明AR-C155858可能在与MCT1上的细胞内位点结合之前进入细胞。对结合MCT1和MCT4不同结构域的几种嵌合转运蛋白的抑制剂敏感性的测量表明，AR-C155858的结合位点包含在MCT1的C端半部分，涉及TM（跨膜）结构域7-10。这与之前的数据一致，即Phe360（在TM10中）和Asp302加Arg306（TM8）是MCT1底物结合和转运的关键残基。L-乳酸和丙酮酸嵌合体Km值的测量表明，分子的C端和N端半部都会影响转运动力学，这与我们提出的MCT1分子模型及其转运机制一致，该模型需要TM1中的Lys38以及TM8中的Asp302和Arg306[Wilson，Meredith，Bunnun，Sessions和Halestrap（2009）J.Biol.Chem.28420011-20021][2]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
目的：抑制单羧酸转运蛋白（MCT）是一种潜在的治疗策略，通过阻断γ-羟丁酸（GHB）在肾脏的再吸收来治疗GHB过量。本研究进一步评估了新型高效MCT抑制剂AR-C155858对GHB毒代动力学/毒代动力学（TK/TD）的影响。[2]
方法：给大鼠注射GHB（200、600或1500 mg/kg静脉注射或1500 mg/kg口服），含或不含AR-C155858。使用全身体积描记术连续监测呼吸频率。在8小时内收集血浆和尿液样本。还评估了AR-C155858对GHB脑/血浆分配的影响。[2] 结果：在本研究中使用的所有GHB剂量下，AR-C155858治疗显著提高了静脉注射GHB后GHB的肾清除率和总清除率。AR-C155858显著改善了GHB诱导的呼吸抑制，呼吸频率的改善证明了这一点。与单独使用GHB（0.25±0.02）相比，AR-C155858治疗还导致GHB的脑/血浆分配显著减少（0.1±0.03）。口服AR-C155858治疗后，口服GHB CLR和CLoral（CL/F）也显著增加（分别从1.82±0.63增加到5.74±0.86和6.52±0.88增加到10.2±0.75ml/min/kg）。[2] 结论：新型高效MCT抑制剂是治疗GHB过量的潜在选择。[2] |
| 酶活实验 |
大鼠红细胞MCT1活性的测定[2]
如前所述，通过用pH敏感电极监测细胞外pH的变化来测量L-乳酸进入大鼠红细胞的转运。细胞在添加了5μM DIDS和100μM乙酰唑胺的轻度缓冲盐水培养基中以3.5%或7%的红细胞压积使用，以防止碳酸氢盐/CO2介导的质子运动。在测定乳酸转运之前，红细胞在室温（22-25°C）下以所需浓度与或不与AR-C155858一起预孵育1小时。这是在6°C下进行的，通过添加10 mM L-乳酸启动底物摄取。通过pH变化时间过程的一阶回归分析计算初始转运速率，并通过测定少量添加标准化NaOH引起的pH变化将其转换为每分钟nmol H+。 爪蟾卵母细胞MCT转运活性的测定[2] cRNA是通过体外转录从适当的线性化pGHJ质粒 制备的，并如前所述注射到X.laevis卵母细胞中[33]。对于大多数检测，注射了20 ng cRNA，但对于[14C]动力学检测，调整了注射量以确保摄取与时间呈线性关系。更多详细信息见补充表S2（http://www.BiochemJ.org/bj/425/bj4250523add.htm). 对照组收到了等量（9.2 nl）的水。然后将卵母细胞在OR3培养基中每天用新鲜培养基培养72小时。如前所述，通过使用比率pH敏感荧光染料BCECF[2′-7′-双（羧乙基）-5（6）-羧基荧光素]跟踪细胞内pH的变化，或通过测量[14C]底物（L-乳酸或丙酮酸）的摄取，确定野生型或嵌合MCT的L-乳酸转运速率。为了测量AR-C155858敏感性，将10个卵母细胞放入含有5ml摄取缓冲液[75 mM NaCl、2 mM KCl、0.82 mM MgCl2、1 mM CaCl2和20 mM Mes（pH 6.0）]的六孔板中，并根据需要在有或没有AR-C155858的情况下预孵育所需的时间（通常为45分钟）。取出五个卵母细胞，放入50μl含有l-[14C]乳酸盐（0.5 mM，7.4 MBq/ml）的摄取缓冲液中，该缓冲液含有或不含有所需浓度的AR-C155858。在室温下继续孵育一段时间，在此期间摄取与时间呈线性关系；这因所采用的构造而异（详见补充表S2）。然后用冰冷的吸收缓冲液快速洗涤卵母细胞五次，最后一次洗涤后，将每个卵转移到闪烁瓶中，通过剧烈的涡流混合在100μl 2%（w/v）SDS中均质化。然后加入闪烁液（10ml乳化剂安全），并通过闪烁计数测定[14C]。[2] 为了测定丙酮酸和L-乳酸的Km值，将卵母细胞在孵育缓冲液[75 mM NaCl、2 mM KCl、0.82 mM MgCl2、1 mM CaCl2和20 mM Tris/Hepes（pH 7.4）]中平衡5分钟，然后用40μL含有[14C]-标记的L-乳酸或丙酮酸（7.4 MBq/ml）的摄取缓冲液孵育四个卵母细胞，最终浓度为0.2、0.5、1、2、5、20、50和75 mM。继续孵育一段时间，摄取与时间呈线性关系（详见补充表S2），然后清洗卵母细胞并准备进行上述闪烁计数。通过减去同时测定的注水卵母细胞的摄取量来确定MCT1介导的L-乳酸净摄取量。[2] 如前所述，通过将卵母细胞包埋在鸡肝中切片的免疫荧光显微镜证实了质膜上的MCT表达。 |
| 细胞实验 |
红细胞MCT1活性的测定[1]
如前所述，通过用pH敏感电极监测细胞外pH的变化来测量L-乳酸进入大鼠和兔红细胞的转运。红细胞（5%红细胞压积）在室温（22°C）下以所需浓度与或不与AR-C155858一起预孵育1小时，然后在6°C下测定L-乳酸（10 mM）的转运。通过pH变化时间过程的一阶回归分析计算初始转运速率，并通过测定少量添加标准化NaOH引起的pH变化将其转换为H+/min的nmol。 爪蟾卵母细胞MCT转运活性的测定[1] 如前所述，制备cRNA并注射到X.laevis卵母细胞中。对于所有检测，在9.2 nl水中注射10 ng MCT cRNA±10 ng大鼠胚胎cRNA，对照组仅接受水。如前所述，通过免疫荧光显微镜证实了卵母细胞质膜上MCT和embigin的表达。通过用H+敏感染料BCECF[2′，7′-双-（2-羧乙基）-5（6）-羧基荧光素]监测细胞内pH值或通过测定L-[14C]乳酸盐的摄取量（7.4 MBq/ml）进行MCT动力学测定。摄取缓冲液含有75 mM NaCl、2 mM KCl、0.82 mM MgCl2、1 mM CaCl2和20 mM Tris/Hepes（pH 7.4）AR-C155858抑制剂滴定在pH 6下进行，卵母细胞在不同的摄取缓冲液（75 mM NaCl、2 mM KCl、0.82 mM MgCl2、1 mM CaCl2和20 mM Mes，pH 6）中预孵育45分钟，在测量L-[14C]乳酸盐（0.5 mM）的摄取之前，如前所述[38]。除非另有说明，否则所有MCT构建体的摄取量都是在2.5分钟内测定的，但含有或不含有embigin的MCT2trn和含有或不含embigion的MCT2/1除外，分别使用5分钟和10分钟。我们确定这些条件代表了摄取与时间呈线性关系的最长时期（结果未显示）。 |
| 动物实验 |
毒代动力学/毒效学研究[3]
AR-C155858对静脉注射γ-羟基丁酸（GHB）毒代动力学和呼吸抑制的影响[3] 本研究采用与我们之前发表的研究类似的全身容积描记法，研究了AR-C155858对GHB诱导的呼吸抑制的影响。动物在容积描记室中适应45分钟后，采集15分钟内5次呼吸参数的基线测量值。GHB以200、600或1500 mg/kg的剂量静脉推注，同时或不同时给予AR-C155858（1或5 mg/kg静脉推注）。在GHB 600 mg/kg组中，同时给予较低剂量的AR-C155858（0.1 mg/kg静脉推注）。在所有治疗组中，AR-C155858均在GHB给药后5分钟给予。本实验与我们之前评估GHB单独作用于呼吸系统影响的研究在相似的时间和方法下进行；因此，为了进行比较，我们使用了之前发表的单独给予200、600和1500 mg/kg GHB的大鼠的数据。GHB给药时间被定义为0分钟。在GHB给药后8小时内，每隔一段时间采集血液和尿液样本。呼吸参数，包括呼吸频率、潮气量和分钟通气量（呼吸频率×潮气量），分别在2.5、5、7.5、10、15、20、25和30分钟以及之后每隔15分钟记录一次，直至8小时。所有动物组均通过颈静脉插管给予浓度为300 mg/ml的GHB无菌水溶液。 AR-C155858 以 0.1、1 或 2.5 mg/ml 的浓度溶于 10% 环糊精生理盐水中，经颈静脉插管给药。所有治疗组均包含 3-6 只动物，并与各自的 GHB 单药组进行比较，以确定 AR-C155858 对 GHB 诱导的呼吸抑制的影响。另设一组动物单独接受 AR-C155858（1 mg/kg 静脉推注），以研究该抑制剂本身对呼吸的影响。 AR-C155858 对稳态下 GHB 血脑分配的影响 [3] 为了评估 AR-C155858 对 GHB 进入大脑转运的影响，我们单独或联合使用 AR-C155858（5 mg/kg 静脉推注）给予 GHB（400 mg/kg 静脉推注，随后以 208 mg/kg/hr 的速度静脉输注）（n=4）。选择该 GHB 剂量是为了使稳态血浆 GHB 浓度达到 800 µg/ml，与上述毒代动力学研究中使用的 600 mg/kg GHB 静脉注射后大鼠体内观察到的高 GHB 浓度相似。此外，该 GHB 浓度也与临床 GHB 过量病例中观察到的浓度相似 (5)。动物在异氟烷麻醉下于GHB给药后4小时处死，随后在稳态下采集血液和脑组织样本。脑组织样本立即置于液氮中冷冻，并储存于−80°C直至分析。 AR-C155858对口服GHB毒代动力学的影响 由于GHB常被滥用于口服，因此本研究评估了AR-C155858对大鼠口服GHB毒代动力学的影响。动物通过灌胃给予GHB，同时或不给予AR-C155858（5 mg/kg，静脉推注）。AR-C155858分别在GHB给药后5分钟或1小时给予（n = 4–6）。在另一组动物中，同时通过灌胃给予AR-C155858（10 mg/kg）和GHB（1500 mg/kg）。给药前，大鼠禁食过夜。在给予GHB后15小时内，每隔一段时间采集血液和尿液样本。GHB以300 mg/ml的水溶液形式给药，AR-C155858以2.5 mg/ml的10%环糊精生理盐水溶液形式给药。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
为了协调本研究的所有结果，我们提出了如图 7 所示的方案。该方案的关键特征如下：
(i) MCT2 优先结合 embigin 而非内源性 basigin，其与 basigin 的结合需要两种蛋白 C 端之间的相互作用，而 MCT1 则不需要。因此，在没有共表达 embigin 的情况下，MCT1trn 能够良好表达，而 MCT2trn 则不能。 (ii) 在没有 basigin 的情况下，MCT1 可以与 embigin 结合；但当两者同时存在时，MCT1 更倾向于与 basigin 结合，除非 MCT2 的 C 端尾部取代了 MCT1 的 C 端（MCT1/2c），从而促进了与 embigin 的结合。 (iii) 当与embigin结合时，AR-C155858与MCT2（而非MCT1）的结合亲和力显著降低，且该效应与MCT2的C端尾部是否存在无关。我们的数据强调，AR-C155858抑制MCT2的效力取决于其结合的辅助蛋白。在哺乳动物细胞中，embigin是MCT2的首选内源性结合伴侣[22]，因此，MCT2介导的乳酸转运对AR-C155858的抑制敏感性可能远低于MCT1介导的乳酸转运。这或许可以解释为何谨慎使用 AR-C155858 来解析 MCT1（对 AR-C155858 非常敏感）、MCT2（对 AR-C155858 敏感性较低）和 MCT4（对 AR-C155858 不敏感）在脑等组织代谢中的不同作用，正如 Bröer 及其同事所报道的那样 [41]。然而，开发完全亚型特异性的 MCT 抑制剂，且不受相关辅助蛋白的影响，显然是十分必要的。[1] 此前，阿斯利康公司发现了一类新型的特异性极强的 MCT1 抑制剂，据报道，该类抑制剂不与 MCT4 结合，且与 MCT2 的亲和力较低。这些抑制剂与大鼠和人细胞内源性MCT1结合的Kd值均在低纳摩尔或更低范围内，这与在几乎不含或完全不含内源性MCT1的Ins-1细胞中表达的MCT1的Kd值相符。在酵母中表达的MCT1也测定了类似的Kd值。我们测得AR-C155858在大鼠红细胞中与MCT1结合的Ki值为2.3±1.4 nM，与放射性配体结合实验中AR-C155858与人红细胞MCT1结合的Ki值1.2 nM完全一致。[2] 总之，这种新型高效抑制剂AR-C155858在静脉注射和口服给药后均能增加大鼠体内GHB的肾脏清除率和总清除率。 AR-C155858 还能显著改善 GHB 引起的呼吸抑制，这可能是通过抑制 GHB 的肾脏重吸收和脑摄取实现的，这两个过程均由单链甘油三酯 (MCT) 介导。我们的研究证实了利用 MCT 抑制剂作为潜在治疗策略的概念，该策略能够改善 GHB 引起的呼吸抑制，而呼吸抑制是 GHB 过量致死的主要原因。[3] |
| 分子式 |
C21H27N5O5S
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|---|---|
| 分子量 |
461.5346
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| 精确质量 |
461.173
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| 元素分析 |
C, 54.65; H, 5.90; N, 15.17; O, 17.33; S, 6.95
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| CAS号 |
496791-37-8
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| PubChem CID |
10226546
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
763.1±70.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
415.3±35.7 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.7 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.634
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| LogP |
0.93
|
| tPSA |
150.69
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
32
|
| 分子复杂度/Complexity |
769
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
CC1=C(C(=NN1)C)CC2=C(C3=C(S2)N(C(=O)N(C3=O)C)CC(C)C)C(=O)N4C[C@@H](CO4)O
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| InChi Key |
ISIVOJWVBJIOFM-ZDUSSCGKSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H27N5O5S/c1-10(2)7-25-20-17(18(28)24(5)21(25)30)16(19(29)26-8-13(27)9-31-26)15(32-20)6-14-11(3)22-23-12(14)4/h10,13,27H,6-9H2,1-5H3,(H,22,23)/t13-/m0/s1
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| 化学名 |
(S)-6-((3,5-dimethyl-1H-pyrazol-4-yl)methyl)-5-(4-hydroxyisoxazolidine-2-carbonyl)-1-isobutyl-3-methylthieno[2,3-d]pyrimidine-2,4(1H,3H)-dione
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| 别名 |
ARC155858; AR-C155858; 496791-37-8; (S)-6-((3,5-dimethyl-1H-pyrazol-4-yl)methyl)-5-(4-hydroxyisoxazolidine-2-carbonyl)-1-isobutyl-3-methylthieno[2,3-d]pyrimidine-2,4(1H,3H)-dione; (S)-6-[(3,5-Dimethyl-1H-pyrazol-4-yl)methyl]-5-[(4-hydroxyisoxazolidin-2-yl)carbonyl]-1-isobutyl-3-methylthieno[2,3-d]pyrimidine-2,4(1H,3H)-dione; 6-[(3,5-dimethyl-1H-pyrazol-4-yl)methyl]-5-[(4S)-4-hydroxy-1,2-oxazolidine-2-carbonyl]-3-methyl-1-(2-methylpropyl)thieno[2,3-d]pyrimidine-2,4-dione; AR-C 155858; 6-[(3,5-dimethyl-1H-pyrazol-4-yl)methyl]-5-[(4S)-4-hydroxy-1,2-oxazolidine-2-carbonyl]-3-methyl-1-(2-methylpropyl)-1H,2H,3H,4H-thieno[2,3-d]pyrimidine-2,4-dione; ARC 155858.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~70 mg/mL (~151.67 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (5.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 27.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (5.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 27.5mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1667 mL | 10.8335 mL | 21.6671 mL | |
| 5 mM | 0.4333 mL | 2.1667 mL | 4.3334 mL | |
| 10 mM | 0.2167 mL | 1.0834 mL | 2.1667 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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2-氰基-4-羟基
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COA
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