| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
NF-κB; AP-1
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| 体外研究 (In Vitro) |
马兜铃酸I（AAI）是一种植物成分，与进行性肾脏疾病和人类尿路上皮癌的发展有关。膀胱癌相关蛋白（BLCAP）基因在包括膀胱癌在内的各种肿瘤中表现出肿瘤抑制功能。本研究评估了AAI对人类细胞BLCAP表达的影响及其相关机制。对人类胚胎肾细胞（HEK293）、人类近端小管上皮细胞（HK-2）和膀胱癌症细胞（HT-1376）施用AAI显著降低了BLCAP mRNA和蛋白质的表达。AAI还有效地抑制了HEK293细胞中由不同长度的BLCAP启动子驱动的萤光素酶活性。在报告检测中，AAI显著降低了激活蛋白1（AP-1）和核因子-κB（NF-κB）的活性，但进一步的点突变表明，BLCAP启动子上的AP-1和NF-κB结合位点不是AAI反应元件。DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-2'-脱氧胞苷（5-aza-dC）的应用逆转了AAI诱导的BLCAP表达的下降。然而，通过甲基特异性聚合酶链式反应（PCR）和硫酸氢测序确定，AAI暴露并没有改变BLCAP启动子的高甲基化。敲除HEK293细胞系中的BLCAP增强了细胞迁移、侵袭和增殖的潜力，同时诱导了锚定非依赖性生长的能力。总之，AAI下调了BLCAP基因的表达，BLCAP表达的缺失导致了人类细胞的恶性转化，这意味着BLCAP可能在介导AAI相关的癌变中发挥作用[1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
肝脏CYP1A尤其是CYP1A2在降低马兜铃酸I（AAI）肾毒性中起着重要作用。在这项研究中，我们研究了Cyp1a的强诱导剂丹参酮I对AAI诱导的肾毒性的影响。组织病理学和血液生化检测表明，丹参酮I可以减轻AAI诱导的急性肾损伤。药代动力学分析显示，丹参酮I显著降低了血浆中AAI的AUC和肝肾中的AAI含量，表明AAI代谢增强。实时PCR和Western blot分析证实，丹参酮I在体内有效地增加了肝脏CYP1A1和CYP1A2的mRNA和蛋白质水平。萤光素酶检测表明，丹参酮I以相似的程度强烈增加了CYP1A1和CYP1A2的转录活性。总之，我们的数据表明，丹参酮I促进了AAI的代谢，并通过在体内诱导肝脏CYP1A1/2来预防AAI诱导的肾损伤[2]。
马兜铃酸I（AAI）可诱导肾小管上皮细胞（RTEC）自噬，从而减轻体外凋亡。在这项研究中，我们旨在确定体外数据是否也适用于AAI诱导的体内病理状况。BALB/c小鼠分别用AAI、自噬抑制剂[3-甲基腺嘌呤（3MA）或氯喹二磷酸盐（CQ）]和AAI加抑制剂连续治疗5天。在第3天和第5天对小鼠实施安乐死。电子显微镜和蛋白质印迹证实了AAI诱导的RTECs自噬。结果显示，在两个时间点，AAI治疗的小鼠都诱导了凋亡的RTEC，并上调了线粒体和内质网应激相关蛋白。AAI+抑制剂组中有更多的凋亡RTEC，这可能是由于线粒体应激相关蛋白（细胞色素C和凋亡蛋白酶激活因子1，APAF-1）的增加。在第5天，AAI引起的严重肾小管间质损伤导致肾功能显著下降。AAI组死亡的RTEC中有许多自溶体。自噬抑制剂通过增加线粒体应激相关蛋白来增加AAI诱导的RTEC线粒体凋亡，但它们部分减轻了AAI引起的严重肾小管间质损伤。这些结果证实，AAI可以诱导RTEC的自噬，从而在体内通过线粒体途径阻止凋亡。然而，AAI的持续刺激诱导了过度的自噬，最终导致了AAI诱导的细胞死亡。这表明凋亡不是急性马兜铃酸肾病小鼠模型的主要罪魁祸首。[3] 马兜铃酸A可用于诱导肾毒性模型。[3] 药代动力学研究表明，在C57BL/6雄性小鼠中，服用30分钟后，马兜铃酸A（10mg/kg，腹腔注射）在肾脏中的浓度高于肝脏。马兜铃酸A在血浆中的浓度也在给药后约30分钟达到峰值。 马兜铃酸A诱导的肾病的发病机制尚不清楚。现有研究表明，马兜铃酸A主要损伤肾小管上皮细胞、肾小管，导致间质纤维化，导致肾毒性。 急性马兜铃酸诱导的肾病（AAN）小鼠模型的建立,根据松井报道的方法 [Am J Pathol 178:1021–1032]。[3] 共使用150只健康雌性BALB/c小鼠，约20g。在实验过程中，小鼠可以自由食用SPF实验室饮食、蒸馏水，并在稳定的温度（25°C）和湿度下饲养，有规律的光暗周期（12:12小时）。经过5天的适应后，将体重匹配的小鼠在两个时间点（对照组、3MA、氯喹二磷酸盐/CQ、马兜铃酸I（AAI）、3MA+AAI、CQ+AAI，持续3天或5天）分为六组。马兜铃酸I（AAI）组小鼠连续3或5天每天一次腹腔注射马兜铃酸I（AAI）（10mg/kg/天）。在AAI注射前1小时，3MA+AAI、CQ+AAI组的小鼠分别腹腔注射3MA（30mg/ml的37°C生理盐水）和CQ（60mg/ml的生理盐水），每天一次，连续3或5天。对照组、3MA组和CQ组分别给予生理盐水、3MA和CQ中的PEG400。给药3或5天后，每组在每个时间点杀死12只小鼠：通过剜除收集血液，然后通过颅颈脱位杀死小鼠。然后取出肾脏进行组织学分析、蛋白质印迹、免疫组织化学和透射电镜检测。 |
| 酶活实验 |
BLCAP启动子活性分析[1]
HEK293细胞（2×105）接种在无血清培养基的6孔板中，在Turbofect试剂的帮助下，用2μg构建的报告质粒和0.05μg pSV-β-半乳糖苷酶对照载体共转染，然后在CO2培养箱中孵育6小时，然后用含有10%血清的新鲜培养基替换。在更换培养基24小时后，用不同浓度的Aristolochic acid I马兜铃酸I（AAI）处理转染的HEK293 24小时。通过用含有25 mM Tris-磷酸盐（pH7.8）、2 mM DTT、2 mM 1,2-二氨基环己烷-N′、N′、N’-四乙酸、10%甘油和1%Triton X-100的1倍裂解试剂裂解细胞，制备培养物的总蛋白提取物。离心（10000×g下5分钟）后，将部分上清液放入萤光素酶检测试剂盒中。为了测定β-半乳糖苷酶活性，将蛋白液的另一部分与等体积的2倍测定缓冲液（底物ONPG（O-硝基苯基-d-吡喃半乳糖苷）1.33 mg/ml、200 mM磷酸钠缓冲液（pH 7.3）、2 mM MgCl2和100 mMβ-巯基乙醇）在37°C下孵育30分钟。用碳酸钠终止反应，用Spectramax酶标仪在420 nm处读取吸光度。为了解释转染率的差异，荧光素酶活性的数据被归一化为β-半乳糖苷酶活性。 基因组DNA分离和亚硫酸氢盐修饰[1] 使用WelPrep DNA分离试剂盒分离来自载体或马兜铃酸I（AAI）暴露的HEK293细胞的基因组DNA。在55°C下，用25μl 0.4 N NaOH使25μl 0.01 M PBS中的5微克基因组DNA变性20分钟。随后加入30μl新制备的羟基醌（10 mM）和520μl亚硫酸氢钠（3 M pH 5.0），将样品在55°C下孵育16小时。在此过程中，未甲基化的胞嘧啶残基转化为尿嘧啶，但甲基化的残基保持不变。使用DNA Clean Up Kit纯化修饰的DNA，然后在室温下用NaOH（0.6 R N）处理20 min完成反应。乙醇沉淀后，将亚硫酸氢盐修饰的DNA样品重新悬浮在10 mM Tris-EDTA中，并储存在-20°C下。 亚硫酸氢盐基因组测序[1] 用两轮PCR扩增从溶剂或马兜铃酸I（AAI）处理的培养物中获得的亚硫酸氢盐修饰的DNA。第一轮PCR使用区域1片段（R1）的bsp1F/bsp2R和区域2片段（R2）的bsp3F/bsp3R2进行。对于第二轮PCR，使用巢式引物（bsp1F/R、bsp2F/R和bsp3F/R），在95°C下启动反应10分钟，然后在95°F下进行35个循环30秒，60°C下进行30秒，72°C下完成30秒。将PCR产物bsp1、bsp2和bsp3独立克隆到pGEM-T Easy Vectors中，并对每个PCR产物的克隆进行测序，以评估每个CpG位点的甲基化状态。 |
| 细胞实验 |
存活率和细胞生长分析[1]
为了进行存活率分析，根据Liu等人（2005）进行了MTT（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基溴化四唑）还原分析。简而言之，96孔板中的人细胞单层用载体或不同浓度的Aristolochic acid I/马兜铃酸I（AAI）处理指定时间（1、3、6和24小时）。随后，将培养物与含有0.5 mg/ml MTT的培养基在37°C下孵育3小时。在微孔板读数器上以570 nm的波长测量吸光度。 对于细胞生长分析，将HEK293/shLuc或HEK293/sh-BLCAP（1×104）接种在24孔板中，一式三份，并在37°C下孵育7天。在指定时间，将来自三个分离孔的细胞胰蛋白酶消化，并用0.2%台盼蓝染色；使用血细胞计数器对未染色的细胞进行计数，以绘制生长曲线。 迁移和入侵分析[1] 用含病毒的shLuc（HEK293/shLuc）或shBLCAP质粒（HEK293/hhBLCAP）感染的HEK293细胞在带有ThinCert™细胞培养插入物的24孔板（3×104个细胞/孔）中培养。对于侵袭试验，细胞插入物在使用前将涂上100μg/ml的基质凝胶。孵育16小时后，用棉签去除插入膜上表面的细胞，用甲醇固定插入物15分钟。用0.01%结晶破坏液对膜下表面的迁移或侵袭细胞进行染色，并在显微镜下（200×）从10个随机区域计数细胞数量。 集落形成试验[1] 将HEK293/shLuc或HEK293/sh-BLCAP（3×104个细胞）与1ml 0.2%软琼脂在完全培养基中混合，并接种在含有1.5ml 0.6%软琼脂的6孔板中。在37°C下孵育14天后，软琼脂中的菌落被0.005%的结晶体染色，直径大于100μm的菌落在显微镜下从10个随机区域（40×）中计数。 |
| 动物实验 |
根据Matsui等人报道的方法，建立并改进了急性马兜铃酸肾病（AAN）小鼠模型。共使用150只健康雌性BALB/c小鼠，体重约20 g。实验期间，小鼠可自由摄取SPF级实验室饲料和蒸馏水，饲养于温度（25 °C）、湿度稳定且光照/黑暗周期（12:12 h）恒定的环境中。适应环境5天后，将体重匹配的小鼠随机分为六组，分别在两个时间点进行实验（对照组、3MA组、磷酸氯喹/CQ组、马兜铃酸I（AAI）组、3MA+AAI组、CQ+AAI组，分别处理3天或5天）。小鼠分别腹腔注射马兜铃酸I (AAI)（10 mg/kg/天），每日一次，连续3天或5天。3MA + AAI组和CQ + AAI组的小鼠分别在注射AAI前1小时腹腔注射3MA（30 mg/ml，溶于37℃生理盐水）和CQ（60 mg/ml，溶于生理盐水），每日一次，连续3天或5天。对照组、3MA组和CQ组分别注射PEG400生理盐水、3MA和CQ。给药3天或5天后，每个时间点每组随机选取12只小鼠处死：先通过眼球摘除采集血液，然后采用颅颈脱臼法处死小鼠。然后取出肾脏进行组织学分析、蛋白质印迹、免疫组织化学和透射电子显微镜检测。[3]
马兜铃酸 I (AAI) 粉末溶解于 PEG400 中，配制成 20 mg/ml 的储备液，使用前用生理盐水稀释至 10 mg/ml 的最终浓度。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
代谢/代谢物
口服后，马兜铃酸可被吸收。它们代谢为马兜铃内酰胺，后者进一步代谢为环状N-酰基氮鎓离子，这是一种活性中间体，可与DNA中的嘌呤碱基（腺嘌呤和鸟嘌呤）形成加合物（dA-AAI、dG-AAI、dA-AAII和dG-AAII）。多种胞质和微粒体酶（CYP1A1、CYP1A2、NADPH:CYP还原酶、前列腺素H合酶、DT-二氢黄酶、黄嘌呤氧化酶、环氧合酶和NAD(P)H:醌氧化还原酶）能够将马兜铃酸生物活化为活性形式。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
毒性概述
摄入的马兜铃酸 (AA) 代谢物与 DNA 结合所产生的致癌和致突变效应已在体外和体内得到广泛描述，因此 AA 被归类为基因毒性致癌物。在已确诊良性肾病 (BEN) 患者的肾皮质和尿路上皮肿瘤组织中，发现了 AA 衍生的 DNA 加合物，这与 p53 肿瘤抑制基因突变谱中 A:T 到 T:A 颠换的优势相关。(A15444) AA 是一种肾毒性和致癌化合物，已在体外和体内证实其具有基因毒性和致突变性。啮齿动物和人类之间肾毒性化合物马兜铃酸的毒性和致癌性表明其作用机制存在物种依赖性。 AA在48小时暴露后对原代人细胞、猪细胞和NRK-52E大鼠细胞系的细胞周期产生了类似的影响，NRK-52E细胞中3H-胸苷掺入量的减少也证实了这一点。此外，在原代猪细胞中观察到了DNA解旋，提示DNA损伤增强。 急性效应 人LDLo静脉注射3 mg/kg/2天-1次，肾脏、输尿管和膀胱：肾小管变化（包括急性肾衰竭、急性肾小管坏死），《癌症化疗报告》，42(35)，1964 大鼠LD50口服184 mg/kg，行为：嗜睡（总体活动减少）；行为：共济失调；肺、胸腔或呼吸系统：呼吸困难，《毒理学档案》，59(328)，1987 [PMID:3579596] 大鼠静脉注射LD50 74 mg/kg 行为：嗜睡（总体活动抑制）；行为：共济失调；肺、胸腔或呼吸系统：呼吸困难，《毒理学档案》，59(328)，1987 [PMID:3579596] 小鼠口服LD50 55900 ug/kg 行为：嗜睡（总体活动抑制）；行为：共济失调；肺、胸腔或呼吸：呼吸困难，《毒理学档案》，59(328)，1987 [PMID:3579596] 小鼠腹腔注射LD50为14320 ug/kg，《广西医学》，(6)(2)，1981 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
马兜铃酸A是一种马兜铃酸，它是菲-1-羧酸的一种衍生物，其3,4位被亚甲二氧基取代，8位被甲氧基取代，10位被硝基取代。它是含量最丰富的马兜铃酸，几乎存在于所有马兜铃属植物中。它曾被用于治疗多种炎症性疾病，主要见于中医和民间医学。然而，由于马兜铃酸具有致癌性和肾毒性，人们对其应用存在担忧。它同时具有肾毒性、致癌性、诱变性、毒性和代谢产物等多种作用。它是一种单羧酸、C-硝基化合物、环状缩醛、有机杂四环化合物、芳香醚，属于马兜铃酸类化合物。
据报道，马兜铃酸存在于马兜铃（Aristolochia tuberosa）、四棱豆（Stephania tetrandra）以及其他有相关数据的生物体中。 马兜铃酸是一类具有致癌性、致突变性和肾毒性的化合物，常见于马兜铃科植物中，包括马兜铃属（Aristolochia）和细辛（Asarum，又名野姜），这些植物在中药中应用广泛。马兜铃酸I是含量最丰富的马兜铃酸，几乎存在于所有马兜铃属植物中。马兜铃酸通常与马兜铃内酰胺类化合物共存。 另见：防己根（部分）。总之，AAI治疗显著抑制了肾癌和膀胱癌细胞中BLCAP的表达，而siRNA介导的BLCAP敲低成功导致了HEK 293细胞的恶性转化。然而，BLCAP是否在AAI相关的致癌过程中发挥作用，还需要进一步研究。[1] |
| 分子式 |
C17H11NO7
|
|---|---|
| 分子量 |
341.27
|
| 精确质量 |
341.053
|
| 元素分析 |
C, 59.83; H, 3.25; N, 4.10; O, 32.82
|
| CAS号 |
313-67-7
|
| 相关CAS号 |
313-67-7
|
| PubChem CID |
2236
|
| 外观&性状 |
Light yellow to orange solid powder
|
| 密度 |
1.6±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
615.5±55.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
260 °C
|
| 闪点 |
326.0±31.5 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.9 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.747
|
| LogP |
3.41
|
| tPSA |
110.81
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
| 重原子数目 |
25
|
| 分子复杂度/Complexity |
550
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
COC1=CC=CC2=C3C(=C(C=C21)[N+](=O)[O-])C(=CC4=C3OCO4)C(=O)O
|
| InChi Key |
BBFQZRXNYIEMAW-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C17H11NO7/c1-23-12-4-2-3-8-9(12)5-11(18(21)22)14-10(17(19)20)6-13-16(15(8)14)25-7-24-13/h2-6H,7H2,1H3,(H,19,20)
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| 化学名 |
8-methoxy-6-nitronaphtho[2,1-g][1,3]benzodioxole-5-carboxylic acid
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| 别名 |
Aristolochin; Birthwort; NSC-11926; NSC11926; Aristolochic acid; Aristolochic acid A; 313-67-7; Aristolochic acid I; Tardolyt; Aristolochin; Aristolochic acid-I; Birthwort; NSC 11926; NSC-50413; NSC 50413; NSC50413; TR-1736; Aristolochic acid I; Tardolyt ; AristA; Aristolochic acid A
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 16.7~34 mg/mL (48.9~99.6 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.09 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9302 mL | 14.6512 mL | 29.3023 mL | |
| 5 mM | 0.5860 mL | 2.9302 mL | 5.8605 mL | |
| 10 mM | 0.2930 mL | 1.4651 mL | 2.9302 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
NGI-235
Thienodolin
RP-182
Dth
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