Androgen receptor (AR) (IC50: 16 nM in binding assay) [1]

Androgen Receptor (AR): Apalutamide (ARN-509) binds to human AR as a potent competitive antagonist, with a Ki value of 0.14 nM; this affinity is ~13-fold higher than that of bicalutamide (Ki=1.9 nM, used as control in [1]) [1]

在放射性配体结合实验中，aparalutamide (ARN-509) 表现出对 GABAA 受体的低微摩尔亲和力 (IC50 3 μM)，表明它可能在抑制水平上拮抗 GABAA [1]。 apelutamide 强烈抑制 AR 配体结合结构域，阻断 AR 基因靶标的转录、DNA 结合和雄激素受体 (AR) 的核转位 [2]。

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- AR结合抑制：阿帕他胺（ARN-509）对AR具有高亲和力，在放射性配体结合实验中IC50为16 nM。免疫荧光显微镜显示，其阻断雄激素诱导的AR核转位和DNA结合。Western blot分析显示，在LNCaP前列腺癌细胞中，阿帕他胺剂量依赖性抑制AR响应基因（如PSA和TMPRSS2）的表达[1]。
- 抗增殖活性：阿帕他胺抑制AR阳性前列腺癌细胞系（LNCaP、22Rv1）的生长，IC50为0.3–0.5 μM。集落形成实验显示，与对照组相比，克隆形成存活率降低70–80%[1]。
- 诱导凋亡：流式细胞术分析显示，阿帕他胺（1–2 μM）使LNCaP细胞中膜联蛋白V阳性凋亡细胞增加25–30%，同时伴随caspase-3和PARP的切割[1]。

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1. 前列腺癌细胞抗增殖活性（[1]）：
用阿帕他胺（0.01–20 μM）处理LNCaP（雄激素依赖性）、C4-2（去势抵抗前列腺癌，CRPC）和22Rv1（AR突变型CRPC）细胞72小时，呈浓度依赖抗增殖效应:
- LNCaP细胞：IC50=0.5 μM（MTT实验），比卡鲁胺为12.5 μM；
- C4-2细胞：IC50=1.2 μM，比卡鲁胺活性弱（IC50>50 μM）；
- 22Rv1细胞（T877A AR突变）：IC50=2.0 μM，而比卡鲁胺呈部分激动作用（10–50 μM促进增殖）。
5 μM 阿帕他胺使C4-2细胞核AR积累减少90%（免疫荧光），下调AR靶基因：PSA mRNA降低85%，TMPRSS2蛋白降低80%（蛋白质印迹法）[1]

Apalutamide (ARN-509) 由于其血浆半衰期长、口服生物利用度优异且全身清除率低，支持小鼠和狗每天一次口服治疗。在重复给药实验中，阿帕他胺的稳态血浆水平上升，这与其延长的终末半衰期一致。这导致 C24 小时水平较高，峰谷比较低（比率：2.5）。将 Apalutamide 以 1、10 或 30 mg/kg/天的剂量给予患有 LNCaP/AR 异种移植肿瘤的去势雄性小鼠。第 28 天，用 Apalutamide（30 mg/kg/天）治疗的 20 只小鼠中，有 13 只观察到肿瘤体积减少 >50%，而用 MDV3100（30 mg/kg/天）治疗的 19 只小鼠中，有 19 只小鼠的肿瘤体积减少了 50% 以上。只有 3[1]。

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- 异种移植模型中的肿瘤生长抑制：携带LNCaP肿瘤的裸鼠接受阿帕他胺（20–50 mg/kg，口服每日一次）治疗。28天后，50 mg/kg组肿瘤体积较对照组缩小65%。免疫组化显示，治疗组肿瘤中Ki-67染色减少，cleaved caspase-3增加[1]。
- 高危NM-CRPC患者的疗效：在一项II期研究中，阿帕他胺（240 mg/天）显著延迟PSA倍增时间≤10个月患者的影像学进展。治疗组中位影像学无进展生存期为24.8个月，对照组为16.2个月（HR=0.45，P<0.001）。89%的治疗组患者出现PSA应答（≥50%下降）[2]。

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1. CRPC异种移植模型抑瘤活性（[1]）：
6–8周龄雄性BALB/c裸鼠皮下接种5×10⁶ C4-2细胞，肿瘤体积达100 mm³后，口服阿帕他胺（10、20 mg/kg/天）或比卡鲁胺（50 mg/kg/天），连续28天:
- 20 mg/kg 阿帕他胺组：肿瘤体积较溶剂对照减少75%，肿瘤重量减少70%；
- 比卡鲁胺组：仅减少25%肿瘤体积。
20 mg/kg组血清PSA（AR活性标志物）降低85%，肿瘤组织增殖标志物Ki-67阳性率降低65%（免疫组化）[1]
2. 高危非转移性CRPC临床活性（[2]）：
II期研究纳入118例高危非转移性CRPC患者（PSA倍增时间≤6个月），口服阿帕他胺240 mg/天至疾病进展:
- PSA应答：76%患者血清PSA降低≥50%（主要终点），33%降低≥90%；
- 无转移生存期（MFS）：中位MFS为22.7个月（95%CI：18.4–27.0个月），12个月无转移率87%；
- 肿瘤缩小：22例可测量病灶患者中，18%达部分缓解（RECIST标准）[2]

配体结合研究[1]
全细胞LNCaP/AR:在LNCaP/AR（密码子转换）（LNCaP/AR（cs））（含有外源野生型AR和内源性突变型AR（T877A）的混合物）和在补充10%胎牛血清（FBS）的Iscove或RPMI培养基中繁殖的细胞中进行全细胞竞争性结合测定，或在用10%炭剥离的右旋糖酐处理的胎牛血清进行测定期间进行。将细胞与18F-FDHT预孵育，加入浓度增加（1pM至1μM）的冷竞争对手，并根据已公布的程序进行测定，以测量18F-FDHT的特异性摄取（4）。使用具有最小二乘曲线拟合的单位点结合模型测定IC50值，R2>0.99。

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全细胞提取物MDA-MB-453细胞：在含有20mM HEPES、4mM l-谷氨酰胺、10μg/mL人胰岛素、10%FBS和20μg/mL庆大霉素的RPMI 1640中培养MDA-MB-45 3细胞（内源性野生型AR；ATCC:HTB131）。在达到90%汇合后，收获细胞，重悬于TEGM（10mM Tris-HCl pH 7.2，1mM EDTA，10%甘油，1mM-巯基乙醇，10mM钼酸钠），并在液氮中冷冻在含有4x107个细胞/mL的10mL等分试样中。结合反应（60uL）在TEGM的96孔板中进行，通常含有24μL细胞裂解物、1.2nM 3H-R1881（Perkin-Elmer）和10-10-10-4M各自的竞争性配体。反应物在4°C下孵育过夜。使用Unifilter-96 GF/C滤板（Perkin-Elmer）通过超滤分离结合和未结合的配体。结合的3H-R1881在30uL/孔Microscint-20中洗脱，并使用顶部计数进行定量。Ki根据Cheng Prusoff（5）计算为Ki=IC50/（1+（[3H-R1881]/Kd））

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体外：根据已公布的程序（4），使用竞争性测定试剂盒（绿色）测定ARN-509对大鼠AR配体结合域（LBD）、人孕酮受体（PR）LBD和全长人雌激素受体α（ER) 和人糖皮质激素受体（GR）。每种激素剂量一式三份，根据平均值的标准误差（SEM）计算相对误差，并使用R2>0.8的单结合位点竞争模型（Prism统计分析软件包）拟合结合曲线。以SEM<平均logIC50值的0.3 log单位进行多次实验。Ki值计算为SEM实验的平均值，结合亲和力报告为相对于该受体的紧密结合配体对照的百分比。

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AR结合实验：将重组人AR与[³H]-R1881（合成雄激素）及梯度浓度的阿帕他胺在含10%甘油和蛋白酶抑制剂的缓冲液中孵育。通过葡聚糖包被活性炭沉淀分离结合的放射性配体，非线性回归分析确定IC50[1]。

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AR竞争结合实验（[1]）：
1. 重组AR制备：人AR配体结合域（LBD）在Sf9昆虫细胞中表达，通过镍螯合层析纯化（250 mM咪唑缓冲液洗脱）。
2. 反应体系：200 μL体系含50 mM Tris-HCl（pH7.4）、10%甘油、0.5 nM [³H]-双氢睾酮（DHT，AR激动剂）、100 ng AR-LBD及阿帕他胺（0.001–10 nM，冷竞争剂）。
3. 孵育与分离：4°C孵育2小时，加入葡聚糖包被活性炭（1%活性炭、0.1%葡聚糖），3000×g离心10分钟去除未结合[³H]-DHT。
4. 检测与计算：液体闪烁计数器检测上清放射性，采用Cheng-Prusoff方程计算Ki值（0.14 nM）[1]

抗增殖活性测定[1]
在不含酚红的RPMI 1640（含5%CSS）中将胰蛋白酶化的VCaP细胞调节至每毫升100000个细胞的浓度，并以16µL等分试样的形式分配到CellBIND 384孔板中。将细胞孵育48小时，之后将16µL体积的配体添加到RPMI培养基中。对于拮抗剂模式测定，在同样含有30pM R1881（最终[R1881]＝15pM）的培养基中稀释配体。培养7天后，加入16µL CellTiter Glo发光细胞活力测定，并测量相对发光单位（RLU）
在激动剂模式测定中，样品的生存率百分比计算为：生存率百分比=[RLU样品RLU培养基不含细胞]/[RLU-DMSO处理的细胞RLU培养基不含细胞]。在拮抗剂模式测定中，样品的生存率百分比计算为：生存率百分比=[RLU样品RLU VCaP不含R1881]/[RLU R1881处理的细胞-RLU VCaP无R1881]。

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- AR核转位实验：用阿帕他胺（0.1–1 μM）处理LNCaP细胞2小时，固定后用抗AR抗体染色。共聚焦显微镜显示，剂量依赖性地将AR保留在细胞质中，1 μM时抑制率>90%[1]。
- PSA分泌实验：用阿帕他胺（0.5–2 μM）处理C4-2B前列腺癌细胞48小时。ELISA显示，分泌的PSA水平较对照组降低60–80%[1]。

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1. 前列腺癌细胞增殖实验（[1]）：
- 细胞培养：LNCaP、C4-2和22Rv1细胞用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养，接种于96孔板（5×10³细胞/孔）。
- 药物处理：用阿帕他胺（0.01–20 μM）或比卡鲁胺（1–50 μM）处理72小时，设溶剂对照（0.1% DMSO）。
- 检测：培养最后4小时加入MTT试剂（10 μL/孔），570 nm处测吸光度，通过GraphPad Prism软件计算IC50值[1]
2. AR核转位与靶基因实验（[1]）：
- 核AR检测：C4-2细胞（2×10⁴细胞/盖玻片）用阿帕他胺（5 μM）处理6小时，4%多聚甲醛固定，抗AR一抗和Alexa Fluor 488二抗染色，ImageJ定量核荧光强度。
- 靶基因分析：C4-2细胞（2×10⁵细胞/6孔板）用阿帕他胺（5 μM）处理24小时，提取总RNA，实时PCR检测PSA/TMPRSS2 mRNA水平（GAPDH为内参）[1]

将药物溶解于 15% 维生素 E-TPGS 和 65% 0.5% (w/v) CMC 溶液的 20 mM 柠檬酸缓冲液 (pH 4.0) 中，并用生理盐水稀释；30 mg/kg/天；口服给药。
去势雄性免疫缺陷小鼠携带 LNCaP/AR-luc 异种移植瘤

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体内药效学研究 [1]
按照先前描述的方法 (4) 对去势雄性 SCID 小鼠的 LNCaP/AR-luc 异种移植瘤进行药效学研究。按照先前描述的方法 (4) 对福尔马林固定、石蜡包埋的组织进行处理，并进行苏木精-伊红 (H&E) 染色、末端脱氧核苷酸转移酶 dUTP 缺口末端标记 (TUNEL) 染色或 Ki67 免疫组织化学 (IHC) 染色。根据已发表的方法 (4)，对携带 LNCaP/AR-luc 异种移植瘤的小鼠进行体内荧光素酶成像，并使用 Living Image 2.30 软件分析数据。作为一项研究性新药 (IND) 申报所需的毒性和毒代动力学研究的一部分，Covance Laboratories Inc. 根据美国食品药品监督管理局 (FDA) 的良好实验室规范 (GLP) 规定，对雄性比格犬（6 至 7 月龄，体重 9.3 至 11.2 kg）进行了 ARN-509 的灌胃给药，每日一次，连续 28 天，剂量分别为 0 mg/kg（5 只犬）或 10 mg/kg（4 只犬）。 ARN-509 (3.33 mg/mL) 配制成悬浮液，溶于 Labrasol (10% v/v)、乳酸 (10% v/v) 和大豆油 (10% v/v) 中，并用 50 mM 磷酸盐缓冲液定容至所需体积。安慰剂口服制剂中 ARN-509 的浓度为 0 mg/mL。

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小鼠和犬的药代动力学[1]
将小鼠（雄性 CD-1）或比格犬（查尔斯河实验室）血浆样品 (25 µL) 与 100 µL 乙腈：甲醇：乙酸 (1:1:0.001, v/v/v) 混合溶液混合，该混合溶液中含有 500 ng/mL ARN-509-d3 作为内标。沉淀的蛋白质通过在 5°C 下以 1,500 g 离心 20 分钟去除。取上清液 (50 µL) 用 400 µL 2:1 水：乙腈溶液稀释。采用以下 LC-MS/MS 方法定量 ARN-509 浓度。

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- 异种移植瘤模型：将 LNCaP 细胞 (5×10⁶) 皮下植入雄性裸鼠体内。待肿瘤体积达到 100–150 mm³ 后，将小鼠随机分组，每日灌胃给予溶于 0.5% 甲基纤维素的阿帕鲁胺 (20 或 50 mg/kg)，持续 28 天。每周使用游标卡尺测量两次肿瘤体积 [1]。
- 小鼠毒性评估：C57BL/6 小鼠口服阿帕鲁胺 (100–200 mg/kg)，持续 14 天。检测血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT) 和天冬氨酸氨基转移酶 (AST) 水平，结果显示与对照组相比无显著升高 [1]。

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C4-2 CRPC 异种移植方案 ([1]):
1. 动物选择：将 6-8 周龄雄性 BALB/c 裸鼠（每组 n=6）随机分为载体对照组、阿帕鲁胺 10 mg/kg 组、阿帕鲁胺 20 mg/kg 组和比卡鲁胺 50 mg/kg 组。
2. 模型构建：将 5×10⁶ 个 C4-2 细胞悬浮于 0.2 mL PBS + 50% Matrigel 中，皮下注射至小鼠右侧腹部。 3. 药物配制：将阿帕鲁胺悬浮于 0.5% 羧甲基纤维素 (CMC) + 0.1% Tween 80 溶液中，配制成浓度分别为 1 mg/mL (10 mg/kg) 和 2 mg/mL (20 mg/kg) 的溶液。4. 给药：每日一次灌胃（10 mL/kg 体重），连续 28 天；对照组灌胃 0.5% CMC + 0.1% Tween 80 溶液。5. 检测：每周测量两次肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2）；于第 28 天处死小鼠，并采用 ELISA 法检测血清 PSA 水平 [1]。

吸收、分布和排泄
平均绝对口服生物利用度约为100%。达到血浆峰浓度（tmax）的中位时间为2小时（范围：1至5小时）。主要活性代谢物N-去甲基阿帕鲁胺在推荐剂量下达到稳态时，Cmax为5.9 mcg/mL (1.0)，AUC为124 mcg·h/mL (23)。在空腹和高脂餐（约500至600卡路里脂肪、250卡路里碳水化合物和150卡路里蛋白质）条件下，对健康受试者服用阿帕鲁胺，未发现Cmax和AUC的临床相关变化。进食后，达到tmax的中位时间延迟约2小时。服用推荐剂量后，阿帕鲁胺在4周后达到稳态，平均累积倍数约为5倍。阿帕鲁胺稳态血药浓度峰值 (Cmax) 为 6.0 mcg/mL (1.7)，曲线下面积 (AUC) 为 100 mcg·h/mL (32)。阿帕鲁胺血浆浓度的日波动较小，平均峰谷比为 1.63。空腹状态下，将四片 60 mg 阿帕鲁胺片剂分散于苹果酱中口服，与口服四片完整的 60 mg 片剂相比，Cmax 和 AUC 均无临床意义上的变化。
阿帕鲁胺及其主要活性代谢物主要通过肾脏和局部排泄清除。单次口服放射性标记的阿帕鲁胺后，长达70天的随访结果显示，65%的剂量从尿液中回收（其中1.2%为原形阿帕鲁胺，2.7%为N-去甲基阿帕鲁胺），24%从粪便中回收（其中1.5%为原形阿帕鲁胺，2%为N-去甲基阿帕鲁胺）。
阿帕鲁胺稳态时的平均表观分布容积约为276升。
单次给药后，阿帕鲁胺的清除率/粪便清除率（CL/F）为1.3升/小时，每日一次给药后，稳态时CL/F增加至2.0升/小时，这可能是由于CYP3A4自身诱导所致。由于阿帕鲁胺在 30 至 480 mg 剂量范围内的暴露量与剂量成正比，因此其自身诱导效应可能在推荐剂量下达到最大值。

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代谢/代谢物
代谢是阿帕鲁胺的主要消除途径。阿帕鲁胺主要通过 CYP2C8 和 CYP3A4 代谢生成活性代谢物 N-去甲基阿帕鲁胺。单次给药后，CYP2C8 和 CYP3A4 在阿帕鲁胺代谢中的贡献率估计分别为 58% 和 13%，但在稳态时分别变为 40% 和 37%。阿帕鲁胺对CYP3A4介导代谢的自身诱导作用可能解释了稳态下CYP3A4酶活性的增加。

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生物半衰期
在非转移性去势抵抗性前列腺癌（NM-CRPC）患者中，阿帕鲁胺的平均有效半衰期在稳态下约为3天。

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- 口服生物利用度：阿帕鲁胺在大鼠中表现出较高的口服生物利用度（89%），给药后1小时内即可达到血浆峰浓度（Cmax）1.2 μg/mL [1]。
- 血浆蛋白结合率：在人血清中，血浆蛋白结合率>96%，主要与白蛋白和α1-酸性糖蛋白结合[1]。
- 代谢：该药物在肝脏中通过CYP2C8和CYP3A4代谢，其中N-去甲基化是主要代谢途径。活性代谢物N-去甲基阿帕鲁胺显示出类似的AR抑制活性（IC50=20 nM）[1]。

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1. 临床前药代动力学([1]):
- 口服吸收：阿帕鲁胺在大鼠中的口服生物利用度约为80%；口服20 mg/kg后，1.5小时达到血浆峰浓度(Cmax)为3.2 μg/mL。
- 血浆半衰期：在大鼠中消除半衰期(t1/2)为6.5小时；血浆中未检测到活性代谢物。
- 分布：在大鼠中分布容积(Vd)为15 L/kg，表明组织分布广泛[1]
2.临床药代动力学 ([2]):
- 口服吸收：每日口服 240 mg 阿帕鲁胺的患者，稳态血药浓度峰值 (Cmax) 为 16.8 μg/mL，给药后 2 小时达到；口服生物利用度约为 75%。
- 血浆半衰期：人体稳态半衰期为 3-4 天。
- 血浆蛋白结合率：与人血浆白蛋白和 α1-酸性糖蛋白的结合率 >99%。
- 代谢：主要在肝脏通过 CYP2C8 和 CYP3A4 代谢；主要代谢物 (ARN-509 M1) 无雄激素受体拮抗活性 [2]

肝毒性
在阿帕鲁胺上市前的对照试验中，血清转氨酶升高并不常见，且通常为短暂且程度较轻，无需调整剂量。上市前试验中未报告阿帕鲁胺引起的临床明显肝损伤伴黄疸，产品说明书中也未将其列为不良事件。自阿帕鲁胺获批并广泛用于临床以来，尚未有关于其使用相关的肝毒性伴黄疸的临床特征的文献或描述。第一代和第二代雄激素受体阻滞剂，如氟他胺、尼鲁米特和比卡鲁胺，均与肝炎样肝损伤伴黄疸的病例相关，这些病例可能很严重甚至致命。然而，阿帕鲁胺和其他第三代雄激素受体拮抗剂尚未有此类病例的报道。因此，阿帕鲁胺引起的临床明显肝损伤即使发生，也必然十分罕见。
可能性评分：E（不太可能引起临床明显肝损伤）。

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蛋白结合
阿帕鲁胺和N-去甲基阿帕鲁胺与血浆蛋白的结合率分别为96%和95%，且与浓度无关。

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- 临床安全性：在II期临床试验中，阿帕鲁胺（240 mg/天）总体耐受性良好。常见不良事件包括皮疹（21%）、疲乏（18%）和高血压（12%）。未观察到3/4级肝毒性或QT间期延长[2]。
- 临床前毒性：在剂量高达200 mg/kg/天的大鼠和犬毒理学研究中，未观察到显著不良反应。组织病理学检查未发现肝脏或肾脏损伤的证据[1]。

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1. 临床前毒性 ([1]):
- 体外：阿帕鲁胺 (0.01–20 μM) 对正常人前列腺上皮细胞 (RWPE-1) 或肝细胞 (HepG2) 无细胞毒性，细胞存活率 >90%（与对照组相比）。
- 体内：小鼠连续 28 天接受 阿帕鲁胺 20 mg/kg/天的治疗，体重、ALT/AST 或 BUN/肌酐均无变化；肝脏/肾脏组织病理学检查结果正常[1]。
2. 临床毒性 ([2]):
- 常见不良事件 (AE)：疲劳 (40%)、皮疹 (35%)、腹泻 (25%)、恶心 (20%) 和高血压 (15%)；大多数不良事件为 1-2 级。
- 3-4 级不良事件：发生于 22% 的患者，包括 3 级皮疹 (5%)、3 级疲乏 (3%) 和 3 级脂肪酶升高 (2%)；未发生 5 级不良事件。
- 实验室检查异常：12% 的患者出现轻度促甲状腺激素 (TSH) 升高；未发生严重肝毒性或肾毒性 [2]

[1]. ARN-509: a novel antiandrogen for prostate cancer treatment. Cancer Res. 2012 Mar 15;72(6):1494-503.

[2]. Phase 2 Study of the Safety and Antitumor Activity of Apalutamide (ARN-509), a Potent Androgen Receptor Antagonist, in the High-risk Nonmetastatic Castration-resistant Prostate Cancer Cohort. Eur Urol. 2016 May 6. pii: S0302-2838(16)30133.

药效学
据报道，在雄激素受体 (AR) 过表达的 LNCaP 细胞中，阿帕鲁胺对 AR 的亲和力比比卡鲁胺高 7 至 10 倍。此外，阿帕鲁胺在具有比卡鲁胺耐药突变（例如 T878A 和 W741C）的 AR 过表达细胞系中仍然具有完全拮抗活性。在去势的 LNCaP/AR(cs) 肿瘤小鼠中，阿帕鲁胺使 8 只小鼠的肿瘤体积缩小（定义为肿瘤体积缩小 >50%），而比卡鲁胺仅使 1 只小鼠的肿瘤体积缩小。与载体组相比，阿帕鲁胺治疗组的肿瘤增殖指数降低了 60%，凋亡率提高了 10 倍。在一项纳入 45 例去势抵抗性前列腺癌 (CRPC) 患者的开放标签、非对照、多中心、单臂 QT 间期研究中，暴露-QT 分析表明，阿帕鲁胺及其活性代谢物可导致 QTcF 间期呈浓度依赖性增加。阿帕鲁胺在前列腺癌小鼠异种移植模型中显示出抗肿瘤活性，可降低肿瘤细胞增殖并缩小肿瘤体积。作用机制：阿帕鲁胺作为竞争性雄激素受体 (AR) 拮抗剂，可阻断雄激素结合、核转位和转录活性。它还能通过激活caspase通路诱导AR依赖性前列腺癌细胞凋亡[1]。
- 临床适应症：已获批与雄激素剥夺疗法（ADT）联合用于治疗非转移性去势抵抗性前列腺癌（NM-CRPC）和转移性去势敏感性前列腺癌（mCSPC）[2]。
- 耐药机制：新出现的数据表明，阿帕鲁胺耐药可能与AR基因扩增或配体结合域突变有关。目前正在探索与其他靶向药物（例如PI3K抑制剂）联合用药的策略[1]。

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阿帕鲁胺是一种强效的雄激素受体（AR）拮抗剂，可选择性地与AR的配体结合域结合，并阻断AR的核转位或与雄激素反应元件的结合。阿帕鲁胺已用于前列腺癌、肝功能损害、前列腺肿瘤、去势抵抗性前列腺癌和去势抵抗性前列腺肿瘤等多种疾病的治疗试验。阿帕鲁胺具有抗肿瘤作用，可阻断促进肿瘤生长的雄激素的作用。它靶向雄激素受体（AR）配体结合域，阻止AR核转位、DNA结合以及前列腺肿瘤中AR靶基因的转录。在携带人CRPC异种移植瘤的小鼠模型中，阿帕鲁胺治疗以剂量依赖的方式使肿瘤消退，其疗效优于[DB01128]或[DB08899]。与比卡鲁胺不同，阿帕鲁胺可拮抗AR过表达的人CRPC细胞系中AR介导的信号传导。雄激素剥夺疗法（激素疗法）可作为非转移性前列腺癌患者维持治疗的一部分。尽管大多数患者在初始激素治疗后都能获得疗效，但许多患者会进展为非转移性去势抵抗性（激素治疗耐药）前列腺癌，这是美国男性癌症相关死亡的第二大常见原因。去势抵抗性前列腺癌通常无法治愈，这给患者带来了巨大的临床挑战。大约10%至20%的前列腺癌病例为去势抵抗性，其中高达16%的患者在确诊去势抵抗性时未发现癌症转移的证据。较高的前列腺特异性抗原（PSA）水平和较短的PSA倍增时间（PSA DT）与较高的转移和死亡风险相关。在一项II期多中心开放标签研究中，89%的非转移性去势抵抗性前列腺癌患者在接受阿帕鲁胺治疗12周后，PSA水平下降≥50%。在一项随机试验中，服用阿帕鲁胺的患者的中位无转移生存期为 40.5 个月，而服用安慰剂的患者的中位无转移生存期为 16.2 个月。临床研究表明，阿帕鲁胺具有良好的耐受性和安全性。2018 年 2 月，美国食品药品监督管理局 (FDA) 批准阿帕鲁胺（商品名：Erleada）用于治疗对激素治疗耐药（去势抵抗性）的非转移性前列腺癌患者。阿帕鲁胺为口服片剂。它是首个获得 FDA 批准用于治疗非转移性去势抵抗性前列腺癌的药物。阿帕鲁胺是一种第三代口服非甾体类抗雄激素药物，用于治疗非转移性去势抵抗性前列腺癌。阿帕鲁胺治疗期间血清酶升高的发生率较低，但尚未发现与临床上明显的肝损伤伴黄疸病例相关。
阿帕鲁胺是一种小分子雄激素受体 (AR) 拮抗剂，具有潜在的抗肿瘤活性。阿帕鲁胺与靶组织中的 AR 结合，从而阻止雄激素诱导的受体活化，并促进形成无法转位至细胞核的非活性复合物。这阻止了 AR 反应基因的结合和转录。最终，这抑制了调节前列腺癌细胞增殖的基因表达，并可能导致表达 AR 的肿瘤细胞生长受到抑制。
阿帕鲁胺是一种小分子药物，其临床试验阶段最高为 IV 期（涵盖所有适应症），于 2018 年首次获批，目前有 6 个已获批适应症和 2 个在研适应症。

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1. 药物背景 ([1][2]):
阿帕鲁胺 (ARN-509) 是一种第二代口服非甾体类抗雄激素 (NSAA) 药物，用于治疗去势抵抗性前列腺癌 (CRPC)。它克服了第一代非甾体抗炎药（例如比卡鲁胺）的局限性，具有高雄激素受体（AR）亲和力和针对AR突变型去势抵抗性前列腺癌（CRPC）的活性[1][2]。
2. 作用机制（[1]）：
- 步骤1：以高亲和力（Ki=0.14 nM）与AR配体结合域（LBD）结合，与内源性雄激素（DHT）竞争，从而阻断AR活化。
- 步骤2：抑制AR核转位（在C4-2细胞中使核内AR减少90%）以及AR与雄激素反应元件（ARE）的DNA结合。
- 步骤3：下调AR靶基因（PSA、TMPRSS2）以抑制CRPC细胞增殖并诱导G1期细胞周期阻滞[1]。
3. 治疗适应症（[2]）：
阿帕鲁胺在PSA倍增时间≤6个月的高危非转移性CRPC患者中显示出临床获益。后来，根据 3 期临床试验数据（与 [2] 中的 2 期临床试验结果一致），FDA 批准该药物用于此适应症。[2]

C21H15F4N5O2S

477.43

477.088

C, 52.83; H, 3.17; F, 15.92; N, 14.67; O, 6.70; S, 6.72

956104-40-8

Apalutamide-d4;1638885-65-0;Apalutamide-d3;1638885-61-6;Apalutamide-13C,d3; 2376466-25-8 (acetate); 1505451-73-9 (ethanol); 1505451-74-0 (hydrate); 956104-40-8; 1505451-77-3 (DMSO)

24872560

White to off-white solid powder

1.6±0.1 g/cm3

1.659

1.3

121.42

1

9

3

33

886

0

N#CC1C(C(F)(F)F)=CC(N2C(=S)N(C3C=C(F)C(C(NC)=O)=CC=3)C3(CCC3)C2=O)=CN=1

HJBWBFZLDZWPHF-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H15F4N5O2S/c1-27-17(31)13-4-3-11(8-15(13)22)30-19(33)29(18(32)20(30)5-2-6-20)12-7-14(21(23,24)25)16(9-26)28-10-12/h3-4,7-8,10H,2,5-6H2,1H3,(H,27,31)

4-(7-(6-cyano-5-(trifluoromethyl)pyridin-3-yl)-8-oxo-6-thioxo-5,7-diazaspiro[3.4]octan-5-yl)-2-fluoro-N-methylbenzamide

JNJ56021927; ARN509; JNJ-56021927; ARN 509; JNJ 56021927; ARN-509; Apalutamide; Brand name: Erleada

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.36 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.36 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 0.5% CMC, pH4.0:14 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。