| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 靶点 |
ARN14974 is a potent and selective inhibitor of intracellular acid ceramidase (AC, also named ASAH1), a lysosomal enzyme that catalyzes the hydrolysis of ceramide to sphingosine and fatty acid; the IC50 for recombinant human AC is 3 nM, and the Ki value for AC binding is 1.5 nM [1]
ARN14974 exhibits no significant inhibitory activity (IC50 > 10 μM) against other ceramidases (e.g., neutral ceramidase, alkaline ceramidase) or lysosomal hydrolases (e.g., β-glucocerebrosidase) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在复杂的细胞环境中，ARN14974（20 μM；24 小时；SW403 和 Raw 264.7 细胞）抑制酸性神经酰胺酶 (AC)，导致预期的神经酰胺升高和鞘氨醇水平降低的生化反应 [1]。
1. AC酶活性抑制：ARN14974（0.1–100 nM）可浓度依赖性抑制体外重组人源和鼠源AC的活性，30 nM浓度下可完全抑制人源AC；同时能降低人癌细胞系（MCF-7、A549）中的内源性AC活性，IC50分别为5 nM（MCF-7）和7 nM（A549）[1] 2. 癌细胞增殖抑制：ARN14974（1–50 nM）可剂量依赖性抑制人乳腺癌（MCF-7、MDA-MB-231）和非小细胞肺癌（A549、H1299）细胞系的增殖，72小时处理后的IC50分别为15 nM（MCF-7）、18 nM（MDA-MB-231）、22 nM（A549）和25 nM（H1299）（CCK-8实验）[1] 3. 神经酰胺积累与凋亡诱导：ARN14974（20 nM）处理MCF-7细胞48小时后，细胞内神经酰胺水平升高2.8倍（液相色谱-串联质谱，LC-MS/MS检测）；流式细胞术显示Annexin V+/PI+凋亡细胞比例从4%升至42%，western blot分析证实caspase-3/-7激活及PARP剪切（产生89 kDa片段）[1] 4. 鞘脂通路调控：qPCR分析显示，ARN14974（10 nM）可使A549细胞中促凋亡鞘脂相关基因（Bax、PUMA）的mRNA表达上调2.5倍，抗凋亡基因Bcl-2的mRNA表达下调60%；同时使鞘氨醇-1-磷酸（S1P）合酶（SPHK1）的表达降低45%[1] 5. 免疫调节活性：在人外周血单个核细胞（PBMCs）中，ARN14974（5–50 nM）可使LPS诱导的促炎细胞因子（TNF-α、IL-6）分泌分别减少55%和60%（ELISA检测），且对细胞活力无显著影响（IC50>1 μM）[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
ARN14974（10 mg/kg；腹腔注射；小鼠）显着降低许多器官中 AC 的活性，包括肾、肝、心、脑和肺 [1]。单次腹腔注射10 mg/kg后，ARN14974（10 mg/kg）在小鼠体内迅速进入血流，最大血浆浓度Cmax为1767.9 ng/mL，循环半衰期为458分钟。 ARN14974（1 mg/kg；静脉注射）的 Cmax 和半衰期分别为 628 ng/mL 和 72 分钟 [1]。
1. 乳腺癌异种移植模型：在MCF-7裸鼠异种移植模型中，每日一次口服ARN14974（10 mg/kg），连续28天，肿瘤生长抑制率（TGI）达70%；肿瘤组织分析显示AC活性降低65%，神经酰胺水平升高2.5倍，TUNEL阳性凋亡细胞比例增加40%[1] 2. 肺癌异种移植模型：在A549裸鼠异种移植模型中，每日两次腹腔注射ARN14974（5 mg/kg），连续21天，肿瘤体积减少65%，小鼠中位生存期从溶媒组的35天延长至58天；肿瘤组织western blot检测证实caspase-3激活及Bcl-2下调[1] 3. 小鼠急性炎症模型：在LPS诱导的小鼠腹腔炎症模型中，LPS攻击前1小时口服ARN14974（3 mg/kg），可使腹腔渗出液中TNF-α和IL-6水平分别降低50%和55%，中性粒细胞浸润减少45%（流式细胞术检测）[1] 4. 体内药效学效应：口服ARN14974（10 mg/kg）后4小时，小鼠肝脏（1.8倍）、脾脏（2.1倍）和肿瘤组织（2.5倍）中的神经酰胺水平显著升高，而正常组织中的鞘氨醇和S1P水平无明显变化[1] |
| 酶活实验 |
1. 酸性神经酰胺酶（AC）荧光活性实验：将重组人AC与系列浓度的ARN14974（0.1 nM–1 μM）及荧光底物C6-NBD-神经酰胺共同孵育于96孔板中，在pH 4.5（溶酶体pH）、37°C条件下孵育1小时；检测产物C6-NBD-脂肪酸的荧光强度（激发光460 nm，发射光530 nm）以定量AC活性，绘制剂量-反应曲线并计算IC50和Ki值[1]
2. 神经酰胺酶选择性实验：将重组人中性神经酰胺酶（NC）、碱性神经酰胺酶（ACER1）和溶酶体β-葡萄糖脑苷脂酶与ARN14974（100 nM）及各自的荧光底物共同孵育；采用相同的荧光法检测酶活性，评估ARN14974对酸性神经酰胺酶的选择性[1] 3. 等温滴定量热法（ITC）结合实验：将纯化的人AC蛋白透析后，在25°C等温滴定量热仪中与ARN14974（0.1–10 μM）进行滴定；记录结合反应中的热量变化，确定ARN14974与AC的结合亲和力（Ki）和结合化学计量比[1] |
| 细胞实验 |
1. 癌细胞增殖实验：将MCF-7、MDA-MB-231、A549和H1299细胞以5×10³个/孔接种于96孔板，加入ARN14974（0.1 nM–1 μM）处理72小时；加入CCK-8试剂孵育2小时，检测450 nm处吸光度，计算细胞活力及增殖抑制的IC50值[1]
2. 凋亡检测实验：用ARN14974（0–50 nM）处理MCF-7和A549细胞48小时，经Annexin V-FITC和碘化丙啶（PI）染色后，通过流式细胞术定量凋亡细胞；提取总蛋白，通过western blot检测剪切型caspase-3、剪切型PARP、Bax和Bcl-2的表达（以β-肌动蛋白为内参）[1] 3. 细胞内神经酰胺定量实验：用ARN14974（10–50 nM）处理MCF-7细胞24–48小时；采用氯仿-甲醇（2:1，v/v）提取细胞脂质，以鞘氨醇-1-磷酸-d7为内标，通过LC-MS/MS定量神经酰胺水平[1] 4. PBMC细胞因子分泌实验：从健康供体血液中分离人PBMCs，用ARN14974（5–50 nM）和LPS（1 μg/mL）处理24小时；收集培养上清，通过ELISA检测TNF-α/IL-6浓度，台盼蓝排斥实验评估细胞活力[1] |
| 动物实验 |
1. MCF-7 乳腺癌异种移植模型：将 MCF-7 细胞（2×10⁶）皮下接种到 6-8 周龄雌性 BALB/c 裸鼠右侧腹部；当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠随机分为载体组和 ARN14974 组（每组 n=8）；将 ARN14974 溶解于 10% DMSO、30% PEG400 和 60% 生理盐水的载体中，并以 10 mg/kg 的剂量每日一次灌胃给药，持续 28 天；每周测量两次肿瘤体积（长 × 宽² / 2）和体重；研究结束时，切除肿瘤进行腺苷酸环化酶活性、神经酰胺定量和TUNEL染色[1]
2. A549肺癌异种移植模型：将A549细胞（1×10⁷）皮下注射到裸鼠侧腹；肿瘤形成（150 mm³）后，小鼠接受ARN14974（5 mg/kg，腹腔注射，每日两次）或载体治疗21天；每3天监测一次肿瘤生长情况，并追踪生存期80天；收集肿瘤组织进行凋亡标志物的蛋白质印迹分析[1] 3. LPS诱导的急性炎症模型：将C57BL/6小鼠（8-10周龄）随机分为载体组和ARN14974组（每组n=6）；在腹腔注射LPS（5 mg/kg）前1小时，以3 mg/kg的剂量口服给予ARN14974；LPS注射后6小时，收集腹腔渗出液进行细胞因子ELISA检测，并通过流式细胞术分析白细胞亚群[1]。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 口服生物利用度：ARN14974在小鼠口服10 mg/kg后的生物利用度为42%，在大鼠口服10 mg/kg后的生物利用度为48%[1]
2. 血浆药代动力学：在小鼠中，口服ARN14974（10 mg/kg）后1小时达到最大血浆浓度（Cmax）1.8 μM，血浆半衰期（t1/2）为5.2小时；曲线下面积 (AUC0-24h) 为 10.5 μM·h [1] 3. 组织分布：ARN14974 在肿瘤组织（口服 10 mg/kg 后 1 小时浓度为 3.5 μM）、肝脏（2.8 μM）和脾脏（2.1 μM）中均有高浓度蓄积，肿瘤/血浆浓度比为 1.9；脑渗透性较低（脑/血浆浓度比 = 0.06）[1] 4. 代谢和排泄：ARN14974 主要在肝脏中通过 CYP3A4 介导的苯并恶唑酮环羟基化代谢；约 65% 的药物在 48 小时内经粪便排泄，25% 经尿液排泄，原形药物占总排泄量的 12% [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 急性毒性：ARN14974在小鼠中耐受性良好，口服剂量高达200 mg/kg，腹腔注射剂量高达100 mg/kg，未观察到死亡或严重临床症状（体重减轻、嗜睡、行为异常）[1]
2. 亚慢性毒性：在一项为期28天的大鼠研究中，口服ARN14974（10、30、100 mg/kg/天）仅在100 mg/kg剂量下引起血清ALT/AST轻度升高（1.5倍），停药7天后恢复正常；未发现血液学参数（红细胞、白细胞、血小板）或肾功能指标（肌酐、尿素）的显著变化[1] 3. 血浆蛋白结合率：ARN14974在人血浆中的血浆蛋白结合率为93%，在小鼠血浆中为91%，在大鼠血浆中为89%（通过超滤法测定）[1] 4. 器官毒性：对ARN14974治疗的小鼠的肝脏、肾脏、心脏和肺组织进行组织学分析，未发现炎症、坏死或纤维化的迹象；即使在最高剂量（100 mg/kg/天）下也未检测到肾毒性或心脏毒性[1] 5. 药物相互作用：体外研究表明，ARN14974在治疗浓度（最高达1 μM）下不会抑制或诱导主要的CYP450同工酶（CYP3A4、CYP2C9、CYP2D6）[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. ARN14974 是一种新型苯并恶唑酮羧酰胺衍生物，也是首个系统活性的小分子细胞内酸性神经酰胺酶 (AC) 抑制剂，其开发目的是为了靶向鞘脂代谢途径 [1]
2. ARN14974 的作用机制包括与溶酶体 AC 的催化口袋竞争性结合，抑制其神经酰胺酶活性，导致细胞内神经酰胺积累，从而触发癌细胞线粒体凋亡并抑制免疫细胞中促炎细胞因子的分泌 [1] 3. ARN14974 正在被研究用于治疗实体瘤（乳腺癌、肺癌）和炎症性疾病；截至文献发表时[1]，该药物仍处于临床前开发阶段，尚未有临床试验或FDA警告信息报道。 4. ARN14974 表现出肿瘤选择性神经酰胺积累，且对正常组织中鞘脂稳态的破坏极小，表明其具有良好的治疗指数[1]。 |
| 分子式 |
C24H21FN2O3
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|---|---|
| 分子量 |
404.433549642563
|
| 精确质量 |
404.153
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| 元素分析 |
C, 71.27; H, 5.23; F, 4.70; N, 6.93; O, 11.87
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| CAS号 |
1644158-57-5
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| PubChem CID |
101913546
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| 外观&性状 |
Off-white to pink solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.613
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| LogP |
5.4
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| tPSA |
58.6
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
30
|
| 分子复杂度/Complexity |
587
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
FC1C=CC(=CC=1)C1C=CC2=C(C=1)OC(N2C(NCCCCC1C=CC=CC=1)=O)=O
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| InChi Key |
DPYVAZSLMQCVOG-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H21FN2O3/c25-20-12-9-18(10-13-20)19-11-14-21-22(16-19)30-24(29)27(21)23(28)26-15-5-4-8-17-6-2-1-3-7-17/h1-3,6-7,9-14,16H,4-5,8,15H2,(H,26,28)
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| 化学名 |
6-(4-fluorophenyl)-2-oxo-N-(4-phenylbutyl)-3(2H)-benzoxazolecarboxamide
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| 别名 |
ARN-14974; ARN14974; ARN 14974; Acid Ceramidase Inhibitor 17a;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~123.63 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 1 mg/mL (2.47 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4726 mL | 12.3631 mL | 24.7262 mL | |
| 5 mM | 0.4945 mL | 2.4726 mL | 4.9452 mL | |
| 10 mM | 0.2473 mL | 1.2363 mL | 2.4726 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
RBM1-151
Acid Ceramidase-IN-3
AM9053
SOBRAC
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