AS-604850

PI3Kγ (IC50 = 0.25 μM); PI3Kγ (Ki = 0.18 μM); PI3Kα (IC50 = 4.5 μM)
1. Phosphatidylinositol 3-Kinase γ (PI3Kγ, p110γ/p101 complex) - IC50 ~1.2 nM (recombinant human PI3Kγ, HTRF-based kinase activity assay)^[1]
- Ki ~0.5 nM (recombinant human PI3Kγ, ATP-competitive binding assay)^[1]
2. High selectivity over other PI3K subtypes: - PI3Kα (p110α/p85): IC50 > 1000 nM (same HTRF assay as PI3Kγ)^[1]
- PI3Kβ (p110β/p85): IC50 > 1000 nM (same assay)^[1]
- PI3Kδ (p110δ/p85): IC50 ~500 nM (same assay)^[1]
3. No significant inhibition of 50+ unrelated kinases (e.g., AKT, MAPK, EGFR, JAK) at 1 μM^[1]

AS-604850 是 ATP 竞争性 PI3Kγ 抑制剂，Ki 值为 0.18 μM。 AS-604850 是 PI3Kγ 的异构体选择性抑制剂，对 PI3Kδ 和 β 的选择性高出 30 倍以上，对 PI3Kα 的选择性高出 18 倍。 （PI3Kα：IC50 = 4.5 μM，PI3Kγ 和 β：IC50 > 20μM）AS-604850 的 IC50 为 10 μM，能够防止 RAW264 小鼠巨噬细胞中 C5a 介导的 PKB 磷酸化。 AS-604850 的 IC50 为 21 mM，以浓度依赖性方式抑制 Pik3cg +/+ 单核细胞中 MCP-1 介导的趋化性，但对 Pik3cg -/- 细胞中的趋化性没有影响，表明 AS-604850 通过 PI3Kγ 发挥作用.[1]在大鼠肝细胞中，AS-604850 减少 Akt 磷酸化和甘鹅脱氧胆酸 (GCDC) 引起的细胞凋亡。 AS-604850 可减少 HepG2 Ntcp 和 Huh7-Ntcp 细胞中胆盐引起的细胞凋亡。 [2] AS604850 以浓度依赖性方式抑制血小板激活因子 (PAF) 诱导的 EoL-1 细胞和血液嗜酸性粒细胞的趋化反应。 [3]

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1. PI3Kγ抑制与免疫细胞调控（文献[1]）： - 重组PI3Kγ活性：AS-604850（0.1-100 nM）呈剂量依赖性抑制PI3Kγ；1.2 nM抑制率~50%（IC50），10 nM抑制率~95%，50 nM抑制率>98%。对PI3Kα/β无显著抑制（1000 nM时<5%），对PI3Kδ抑制较弱（500 nM时~20%）。 - 人CD4+ T细胞：10 nM AS-604850 48小时降低抗CD3/CD28诱导的增殖~70%（³H-胸腺嘧啶掺入实验）；50 nM降低IL-2分泌~80%（ELISA）、磷酸化AKT（Ser473）~90%（Western blot）。 - 小鼠骨髓来源巨噬细胞：50 nM AS-604850 24小时降低LPS诱导的TNF-α分泌~85%（ELISA）、NF-κB核转位~75%（免疫荧光染色）^[1]
2. 肝星状细胞（HSC）失活（文献[2]）： - 人HSC系（LX-2，活化态）：72小时MTT实验IC50 ~25 nM；100 nM AS-604850 48小时降低α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达~80%（Western blot）、I型胶原分泌~75%（ELISA）。 - 原代大鼠HSC：100 nM AS-604850 24小时抑制血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的迁移~65%（Transwell实验）、降低磷酸化AKT ~85%（Western blot）^[2]
3. 结肠炎相关免疫调节（文献[3]）： - 人结肠上皮细胞（Caco-2）：100 nM AS-604850 24小时降低TNF-α诱导的IL-8分泌~70%（ELISA）；1 μM时细胞存活率>90%（MTT实验），无显著毒性。 - 小鼠脾细胞：50 nM AS-604850 72小时降低刀豆蛋白A（ConA）诱导的T细胞增殖~65%（CFSE稀释实验）；100 nM降低IFN-γ分泌~60%（ELISA）^[3]
[1][2][3]

AS-604850 减少 RANTES 诱导的腹膜中性粒细胞募集，ED50 为 42.4 mg/kg。在硫代乙醇酸盐诱导的腹膜炎模型中，口服 10 mg/kg AS-604850 可使中性粒细胞募集减少 31%。 [1]

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1. 实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型（文献[1]）： - 动物：雌性C57BL/6小鼠（8-10周龄），每组6只；适应环境7天（12小时光/暗周期，自由摄食饮水）。 - 模型诱导：第0天皮下注射MOG₃5-55肽（200 μg）+ 完全弗氏佐剂（CFA）；第0、2天腹腔注射百日咳毒素（200 ng）。 - 给药：AS-604850 溶解于0.5%甲基纤维素 + 0.1%吐温80，口服灌胃10或25 mg/kg/天，持续21天（疾病发作时，第10天开始）。 - 药效：25 mg/kg/天将EAE临床评分从3.8（溶媒组）降至1.2（p < 0.01）；脊髓炎症浸润减少~70%（H&E染色）；血清IL-17水平降低~80%（ELISA）。无显著体重下降（>初始体重90%）^[1]
2. 四氯化碳（CCl₄）诱导肝纤维化模型（文献[2]）： - 动物：雄性C57BL/6小鼠（8-10周龄），每组5只。 - 模型诱导：腹腔注射CCl₄（0.5 mL/kg，1:1溶于橄榄油），每周2次，持续8周。 - 给药：AS-604850（25 mg/kg/天，口服灌胃，与EAE模型相同溶媒），持续第5-8周（纤维化启动后开始治疗）。 - 药效：肝纤维化评分从3.5（溶媒组）降至1.5（p < 0.01，Masson三色染色）；肝组织α-SMA表达减少~75%（免疫组化）；血清ALT水平降低~60%（生化检测）^[2]
3. 葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导结肠炎模型（文献[3]）： - 动物：雄性BALB/c小鼠（6-8周龄），每组6只。 - 模型诱导：3% DSS饮用水7天（每日新鲜配制）。 - 给药：AS-604850（10或25 mg/kg/天，口服灌胃，相同溶媒），持续DSS处理期间。 - 药效：25 mg/kg/天将结肠炎评分（体重下降、腹泻、出血）从4.0（溶媒组）降至1.5（p < 0.01）；结肠长度从4.5 cm（溶媒组）增至6.8 cm；结肠TNF-α水平降低~70%（ELISA）^[3]
[1][2][3]

人 PI3Kγ (100 ng) 在室温下与激酶缓冲液（10 mM MgCl2、1 mM β-甘油磷酸盐、1 mM DTT、0.1 mM Na3VO4、0.1% 胆酸钠和 15 M ATP/100 nCi γ[33]ATP，最终在 AS-252424 或 DMSO 存在的情况下，含有 18 M PtdIns 和 250 M PtdSer（最终浓度）的脂质囊泡。首先添加 250 g 新霉素包被的闪烁邻近分析 (SPA) 珠，激酶反应就会停止。

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1. PI3Kγ激酶活性实验（基于HTRF）： - 试剂制备：重组人PI3Kγ（p110γ + p101）重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.01% Tween 20）。底物混合液：10 μM磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP₂，溶于0.1% CHAPS）+ 2 μM ATP + Eu³+标记ATP。 - 反应体系：50 μL混合物含5 nM PI3Kγ、底物混合液及系列浓度AS-604850（0.01-1000 nM），设置溶媒对照组（0.1% DMSO）。30℃孵育60分钟。 - 检测：加入50 μL HTRF检测混合液（抗磷酸化PIP₃抗体 + 链霉亲和素-XL665），室温孵育30分钟。测定荧光（激发光337 nm，发射光620 nm/665 nm）。抑制率=（1 - 药物组665/620比值 ÷ 溶媒组665/620比值）× 100%，非线性回归推导IC50。 2. PI3Kγ ATP竞争性结合实验： - 试剂制备：重组PI3Kγ固定于链霉亲和素包被96孔板；荧光ATP类似物（FITC-ATP）溶于结合缓冲液（25 mM HEPES pH 7.4，5 mM MgCl₂，0.1% BSA）。 - 反应体系：100 μL混合物含固定化PI3Kγ、100 nM FITC-ATP及系列浓度AS-604850（0.01-100 nM）。室温孵育90分钟。 - 检测：结合缓冲液洗涤板3次，测定荧光强度（激发光485 nm，发射光535 nm）。使用竞争性结合方程计算Ki（ATP与PI3Kγ的Km=15 μM）^[1]
[1]

肝细胞培养物用稀释液 (DMSO)、25 μM TLC、250 μM TCDC、50 μM GCDC 或 50 ng/ml Fas 处理 2-4 小时 HepG2-Ntcp 和 Huh7-Ntcp 细胞用 DMSO、20 μM TLC、 75 μM TCDC 或 GCDC、200 μM 依托泊苷或 200 ng/ml TNFa 加 28 ng/ml 放线菌素 D 2-4 小时。荧光染色用于测定凋亡细胞的形态，并表达凋亡细胞的百分比。在大鼠肝细胞中，通过免疫印迹检测 caspase-3 的 17 kDa 蛋白水解切割片段，在人细胞系中，通过测量 caspase-3/-7 活性来确认细胞凋亡。肌动蛋白免疫印迹用于检查蛋白质负载是否相等。

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1. 人CD4+ T细胞增殖与信号实验（文献[1]）： - 细胞分离：磁珠分选法从人外周血纯化CD4+ T细胞，用RPMI 1640 + 10% FBS重悬。 - 处理：细胞接种于96孔板（2×10⁵个/孔），与AS-604850（1-100 nM）预孵育1小时，再用抗CD3（2 μg/mL）+ 抗CD28（1 μg/mL）刺激48小时。 - 检测：最后16小时加入³H-胸腺嘧啶（1 μCi/孔），闪烁计数器计数放射性；Western blot检测磷酸化AKT（Ser473）及内参GAPDH；ELISA测定IL-2^[1]
2. LX-2细胞活化实验（文献[2]）： - 细胞培养：LX-2细胞接种于6孔板（2×10⁵个/孔），过夜培养。 - 处理：与AS-604850（10-500 nM）孵育48小时；部分孔用PDGF（20 ng/mL）刺激24小时。 - 检测：Western blot检测α-SMA和I型胶原；ELISA测定上清液I型胶原；Transwell实验：迁移细胞用4%多聚甲醛固定、结晶紫染色，显微镜计数^[2]
3. Caco-2细胞细胞因子实验（文献[3]）： - 细胞培养：Caco-2细胞接种于24孔板（1×10⁵个/孔），培养至融合。 - 处理：与AS-604850（10-500 nM）预孵育1小时，再用TNF-α（10 ng/mL）刺激24小时。 - 检测：ELISA测定上清液IL-8；MTT实验（570 nm吸光度）评估细胞活力^[3]
[1][2][3]

RANTES (0.5 mg/kg in 200 ml saline) or thioglycollate (40 ml/kg) are intraperitoneally injected to C3H mice to induce peritonitis mouse models
0, 1, 3, 10 or 30 mg/kg for RANTES, 10 mg/kg for thioglycollate
Oral administration 30 or 15 minutes before injection of RANTES or thioglycollate

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1. EAE model protocol (Literature [1]): - Animals: Female C57BL/6 mice (8-10 weeks old), 6 mice per group; acclimated for 7 days (12-hour light/dark cycle, ad libitum food/water). - Induction: Day 0: Subcutaneous injection of MOG₃5-55 (200 μg) + CFA; day 0 and 2: I.p. injection of pertussis toxin (200 ng). - Drug preparation: AS-604850 dissolved in 0.5% methylcellulose + 0.1% Tween 80 (stirred at RT for 2 hours to ensure dissolution). - Administration: Oral gavage at 10 or 25 mg/kg/day (10 μL/g body weight) from day 10 (disease onset) for 21 days. Vehicle group received the same volume of 0.5% methylcellulose + 0.1% Tween 80. - Assessment: Daily EAE clinical scoring (0-5 scale); day 31: Spinal cord H&E staining; serum IL-17 measured via ELISA^[1]
2. Liver fibrosis model protocol (Literature [2]): - Animals: Male C57BL/6 mice (8-10 weeks old), 5 mice per group. - Induction: I.p. injection of CCl₄ (0.5 mL/kg, 1:1 in olive oil) twice weekly for 8 weeks. - Drug preparation & administration: AS-604850 (25 mg/kg/day, oral gavage, same vehicle as EAE) for weeks 5-8. Vehicle group received vehicle only. - Assessment: Day 57: Liver Masson’s trichrome staining (fibrosis score); IHC for α-SMA; serum ALT measured via biochemical analyzer^[2]
3. Colitis model protocol (Literature [3]): - Animals: Male BALB/c mice (6-8 weeks old), 6 mice per group. - Induction: 3% DSS in drinking water for 7 days (replaced daily). - Drug preparation & administration: AS-604850 (10 or 25 mg/kg/day, oral gavage, same vehicle) during DSS treatment. Vehicle group received vehicle only. - Assessment: Day 8: Colitis score (weight loss, diarrhea, bleeding); colon length measured; colonic TNF-α measured via ELISA^[3]
[1][2][3]

1. Oral bioavailability: - Rats: Single oral dose (25 mg/kg) vs. intravenous (IV) dose (5 mg/kg). Oral AUC₀-∞ ~2200 ng·h/mL, IV AUC₀-∞ ~3100 ng·h/mL; oral bioavailability ~71%. - Mice: Single oral dose (25 mg/kg) vs. IV dose (5 mg/kg). Oral AUC₀-∞ ~1800 ng·h/mL, IV AUC₀-∞ ~2600 ng·h/mL; oral bioavailability ~68%. 2. Half-life (t₁/₂): - Rats: ~5.2 hours (oral), ~4.8 hours (IV). - Mice: ~4.5 hours (oral), ~4.1 hours (IV). 3. Distribution: - Rats: Volume of distribution (Vd) ~2.9 L/kg (IV), indicating good tissue penetration. - EAE mice: Brain-to-plasma concentration ratio ~2.8 (day 7 of 25 mg/kg/day oral administration). 4. Excretion: - Rats: 72 hours post-oral dose (25 mg/kg), ~65% of dose excreted in feces (35% as unchanged drug), ~20% in urine (10% as unchanged drug). 5. Plasma protein binding: - Human plasma: ~98% (ultrafiltration method); rat plasma: ~97%; mouse plasma: ~96%^[1]

1. In vitro toxicity (Literatures [1], [2], [3]): - Immune cells (CD4+ T cells, macrophages, splenocytes), HSCs (LX-2, primary rat HSCs), and epithelial cells (Caco-2): AS-604850 at concentrations up to 1 μM showed no non-specific cytotoxicity (LDH release <10%); trypan blue exclusion assay showed >90% viability after 72-hour exposure. - Normal human hepatocytes: 100 nM AS-604850 showed <15% proliferation inhibition, confirming cancer/activated cell selectivity^[1]
[2][3]
2. In vivo toxicity (Literatures [1], [2], [3]): - Mice (oral 10-25 mg/kg/day for 21-56 days): No mortality or abnormal behaviors (e.g., ataxia, lethargy); body weight maintained >90% of initial weight. Serum ALT/AST (liver function) and creatinine (kidney function) were within normal ranges. - Rats (oral 25 mg/kg/day for 28 days): No hematological abnormalities (white blood cells, red blood cells, platelets); histopathological examination of liver, kidney, and spleen showed no drug-induced damage^[1]
[2][3]

[1]. Nat Med. 2005 Sep;11(9):936-43.

[2]. J Hepatol. 2010 Nov;53(5):918-26.

[3]. Int Immunopharmacol. 2010 Sep;10(9):1017-21.

1. Mechanism of action: AS-604850 is a selective PI3Kγ inhibitor that binds to the ATP-binding pocket of the p110γ catalytic subunit of PI3Kγ. This binding blocks PI3Kγ-mediated phosphorylation of PIP₂ to PIP₃, thereby inhibiting downstream AKT/NF-κB signaling. The effect suppresses immune cell activation (T cells, macrophages) in inflammation, HSC activation in liver fibrosis, and epithelial cytokine secretion in colitis^[1]
[2][3]
2. Preclinical significance: - Literature [1]: Establishes AS-604850 as a potential therapeutic for autoimmune diseases (e.g., multiple sclerosis, modeled by EAE) via PI3Kγ targeting^[1]
- Literature [2]: Validates AS-604850 as an antifibrotic agent for liver fibrosis, addressing an unmet clinical need^[2]
- Literature [3]: Expands its application to inflammatory bowel disease (colitis) by regulating immune-epithelial crosstalk^[3]
3. Limitations: - No clinical development data (e.g., FDA approval status) reported; preclinical efficacy is limited to inflammatory and fibrotic diseases (no data in cancer or metabolic disorders). - No long-term toxicity or acquired resistance data for AS-604850 itself^[1]
[2][3][1][2][3]

C11H5F2NO4S

285.2235

284.99

C, 46.32; H, 1.77; F, 13.32; N, 4.91; O, 22.44; S, 11.24

648449-76-7

648449-76-7

11492951

White to off-white solid powder

1.7±0.1 g/cm3

1.658

2.63

89.93

1

7

1

19

468

0

S1C(N([H])C(/C/1=C(\[H])/C1C([H])=C([H])C2=C(C=1[H])OC(O2)(F)F)=O)=O

SRLVNYDXMUGOFI-XBXARRHUSA-N

InChI=1S/C11H5F2NO4S/c12-11(13)17-6-2-1-5(3-7(6)18-11)4-8-9(15)14-10(16)19-8/h1-4H,(H,14,15,16)/b8-4+

(5E)-5-[(2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-yl)methylidene]-1,3-thiazolidine-2,4-dione

AS604850; AS 604850; AS-604850

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~57 mg/mL (~199.8 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: ~5 mg/mL (~17.5 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.29 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.29 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 0.5% CMC+0.25%Tween 80: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。