Asiatic Acid (Dammarolic acid, Asiantic acid)   中文名称: 积雪草酸

p38 MAPK

两种人乳腺癌细胞系暴露于积雪草酸，积雪草酸以浓度依赖性方式抑制细胞生长，其中 MCF-7 比 MDA-MB-231 更敏感。对于MCF-7和MDA-MB-231，积雪草酸的IC50值分别为5.95M和8.12M。

ERK1/2 和 p38 MAPK 激酶活性测定，以及免疫沉淀/免疫印迹。当 MAPK 抑制剂存在或不存在时，将细胞暴露于 10 μM 积雪草酸中指定的时间。使用加利福尼亚州山景城 BioVision Inc. 制造的细胞凋亡检测试剂盒来分离线粒体和细胞质部分。为了准备用于免疫印迹的细胞，将细胞在含有 50 mM Tris、1% Triton X-100、0.1% SDS、150 mM NaCl、2 mM Na3VO4、2 mM EGTA、12 mM 的溶液中在冰上裂解 40 分钟。 β-甘油磷酸盐、10 mM NaF 和 16 μg/ml 盐酸苯甲脒、10 μg/ml 菲咯啉、10 μg/ml 抑肽酶、10 μg/ml 亮肽素、10 μg/ml 胃酶抑素和 1 mM 苯甲基磺酰氟。细胞裂解液 14,000g 离心 15 分钟后的上清液部分用于免疫印迹。使用 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳解析等量的蛋白质 (10-12%)，然后将其转移到聚偏二氟乙烯膜上。在 Tris 缓冲盐水中的 5% 脱脂奶粉中封闭 1 小时后，将膜与所需的一抗一起孵育 1 至 16 小时。按照制造商的指示，将适当的过氧化物酶缀合二抗应用到膜上后，使用新泽西州皮斯卡塔韦 Amersham Biosciences Inc. 的增强化学发光试剂盒发现免疫反应蛋白。

使用 3'-[1-(苯氨基-羰基)-3,4-四唑]-双(4-甲氧基-6-硝基)苯磺酸水合物钠 (XTT) 测定法测定积雪草酸对细胞的抑制程度增殖。在 96 孔培养板中，细胞以每孔 1 × 104 个的密度铺板。 24 小时孵育期后，将细胞暴露于积雪草酸（0、2.5、5、10 和 20 μM）48 小时。然后每个孔中填充 50 微升 XTT 测试溶液，该溶液是通过将 5 ml XTT 标记试剂与 100 μl 电子偶联试剂混合而制成的。在 492 nm 的测试波长和 690 nm 的参考波长下，孵育 4 小时后使用 ELISA 读数器（Multiskan EX；Labsystem，赫尔辛基，芬兰）测量吸光度。使用公式抑制% = [100 - (ODt/ODs) × 100] 将数据计算为抑制百分比。测试物质和溶剂对照的光密度分别用ODt和ODs表示。根据48小时吸光度值，确定对癌细胞产生50%细胞毒性（IC50）的测试物质浓度。

吸收、分布和排泄
本研究采用一种新的高效液相色谱法(HPLC)测定积雪草总三萜类化合物单次口服（30或60 mg）以及连续7天（每日两次，每次30或60 mg）给药后积雪草酸的药代动力学。12名健康志愿者按照随机交叉设计接受每种治疗，两次试验间隔3周。血浆峰浓度出现时间不受剂量差异或治疗方案的影响。单次服用30或60 mg后计算的血浆峰浓度和0至24小时浓度-时间曲线下面积(AUC0-24)的差异可归因于不同的给药方案。然而，长期服用30 mg和60 mg后，血浆峰浓度、AUC0-24和半衰期均显著高于相应单次给药后的数值。这种现象可以用积雪草酸和积雪草苷之间的代谢相互作用来解释，积雪草苷在体内会转化为积雪草酸。
本研究对12名健康男性和女性志愿者进行了研究，比较了口服等摩尔剂量的积雪草酸（12 mg）或其糖苷衍生物积雪草苷（24 mg）后，积雪草酸的稳态生物利用度。积雪草酸和积雪草苷均为市售皮肤科产品积雪草舒缓剂（Madecassol）的成分。积雪草苷在体内通过糖基水解转化为积雪草酸。两种给药方案下积雪草酸的稳态AUC0-12hr值相似（积雪草酸组为614±250 ng·hr/mL，积雪草苷组为606±316 ng·hr/mL），表明在等摩尔剂量下，两种成分中积雪草酸的生物利用度相当。由于积雪草酸被认为是马德卡索尔中最具治疗活性的成分，目前的数据提示，积雪草苷的治疗作用可能是通过转化为积雪草酸而实现的。

相互作用
积雪草酸是一种存在于药用植物中的五环三萜类化合物。本研究在人结肠腺癌细胞系HT-29中探讨了该化合物的细胞毒性及其对伊立替康盐酸盐（CPT-11）抗癌药物的增强作用。结果表明，积雪草酸呈剂量依赖性地对HT-29细胞表现出细胞毒性。DNA片段化、膜联蛋白阳性凋亡细胞以及caspase-3激活均呈剂量依赖性。caspase-3抑制剂呈浓度依赖性地抑制了DNA梯状条带的形成。积雪草酸处理降低了Bcl-2和Bcl-XL蛋白的表达。这些结果表明，积雪草酸通过激活caspase-3诱导HT-29细胞凋亡。本研究进一步考察了CPT-11与积雪草酸联合治疗对HT-29细胞的细胞毒性作用。同时或先后用积雪草酸和CPT-11处理均显示出叠加效应。当细胞先暴露于CPT-11再暴露于积雪草酸时，观察到协同效应。这些结果表明，积雪草酸可用作提高结肠癌细胞对CPT-11治疗敏感性的药物，或用作降低CPT-11不良反应的药物。
积雪草酸是一种五环三萜类化合物，据报道可诱导多种人类癌细胞凋亡。在本研究中，我们评估了积雪草酸对12-O-十四烷酰佛波醇13-乙酸酯（TPA）介导的、由7,12-二甲基苯并[a]蒽（DMBA）诱导的ICR小鼠皮肤肿瘤发生的抗肿瘤促进作用。在每次应用TPA之前局部应用积雪草酸可显著减少皮肤肿瘤的形成。我们还发现，预先应用积雪草酸可减轻TPA诱导的[3H]胸苷掺入，而[3H]胸苷掺入是皮肤肿瘤促进的常规标志物。此外，积雪草酸抑制TPA诱导的一氧化氮（NO）生成以及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和环氧合酶-2（COX-2）的表达，已知iNOS和COX-2在肿瘤生长中发挥重要作用，尤其是在肿瘤促进阶段。此外，在TPA处理前30分钟局部应用选择性iNOS抑制剂氨基胍（AG）和另一种iNOS抑制剂N(G)-硝基-L-精氨酸甲酯（NAME）可显著抑制TPA诱导的COX-2表达。这些结果表明，积雪草酸可能通过抑制NO和COX-2信号通路发挥抗肿瘤作用。
积雪草酸和科罗索酸是两种在生物膜抑制试验中被鉴定为生物膜抑制剂的天然产物。我们评估了这两种化合物对在旋转圆盘反应器 (RDR) 中与妥布霉素和环丙沙星联合培养的铜绿假单胞菌生物膜的活性。为了确定我们系统的稳定性，我们使用妥布霉素和环丙沙星评估了这些生物膜的抗生素敏感性。结果表明，在 RDR 中产生的生物膜细菌对 10 μg/ml 的环丙沙星表现出显著的耐受性，从而模拟了难治性细菌感染中观察到的耐受性。这些研究进一步表明，非黏液型铜绿假单胞菌菌株可以形成耐受临床相关浓度环丙沙星的生物膜。积雪草酸和科罗索酸均未降低铜绿假单胞菌生物膜的活细胞密度。然而，这两种化合物均增加了生物膜细菌对后续妥布霉素治疗的敏感性，表明积雪草酸和科罗索酸是能增强抗生素活性的化合物。环丙沙星与后续妥布霉素治疗之间也观察到了类似的统计学交互作用。
……本研究探讨了三萜类化合物对D-半乳糖胺（D-GalN）或四氯化碳（CCl4）损伤的原代培养大鼠肝细胞的保护作用及其机制。采用两步胶原酶灌注法分离大鼠肝细胞，并在RPMI 1640培养基中培养。评估了积雪草酸（AA）和β-甘草次酸（GA）对D-GalN（2 mmol/L）或CCl4（10 mmol/L）损伤的肝细胞的保护作用。通过光学显微镜观察细胞形态，采用MTT法测定细胞活力，并使用全自动生化分析仪测定AST和LDH活性。采用荧光法检测活性氧（ROS）、一氧化氮终产物（NOx）和还原型谷胱甘肽（GSH）的水平，并使用JC-1染色法测定线粒体膜电位（ΔPsim）。D-GalN损伤后，AA和GA处理显著降低了培养基中AST和LDH的水平（P<0.05），且AA增强了肝细胞的存活率（P<0.05）。此外，AA和GA显著降低了ROS和NOx的生成，并改善了D-GalN诱导的ΔPsim损失。AA还抑制了D-GalN和CCl4处理引起的GSH水平下降。 AA 和 GA 均能保护肝细胞免受 D-GalN 和 CCl4 损伤，这与降低细胞内 ROS 和 NOx 水平、逆转 GSH 抑制以及改善 ΔPsim 损失有关。
从猕猴桃根的乙酸乙酯提取物中分离得到一种新的香豆酰三萜化合物 3-O-反式-对香豆酰猕猴桃酸 (1)，以及五种已知的三萜化合物：熊果酸 (2)、23-羟基熊果酸 (3)、科罗索酸 (4)、积雪草酸 (5) 和桦木酸 (6)。化合物 1 的结构通过光谱数据解析，特别是通过广泛的一维和二维核磁共振 (NMR) 研究确定。所有分离物 (1-6) 均在体外评估了其对胰脂肪酶 (PL) 的抑制活性。在所有分离物中，新化合物 1 对 PL 的抑制活性最高，IC50 值为 14.95 μM，其次是熊果酸 (2, IC50 = 15.83 μM)。其他四种三萜类化合物 (3-6) 也表现出显著的 PL 抑制活性，IC50 值范围为 20.42 至 76.45 μM。

[1]. J Pharmacol Exp Ther . 2005 Apr;313(1):333-44.

治疗用途
积雪草滴定提取物 (TECA) 含有三种主要成分：积雪草苷 (AS)、积雪草酸 (AA) 和羟基积雪草酸 (MA)。已知这些成分对系统性硬皮病、异常瘢痕形成和瘢痕疙瘩具有临床疗效。 ...
/EXPL THER/积雪草酸（一种三萜类化合物，提取自伞形科植物积雪草）已被赫斯特股份公司（Hoechst Aktiengesellschaft）申请专利，用于治疗痴呆症和增强认知功能。
/EXPL/帕金森病（PD）是一种进行性神经退行性疾病，50岁以上人群的患病率为1-2%。PD患者存在线粒体功能障碍，表现为复合物I活性降低15-30%。积雪草酸（AA）是一种三萜类化合物，具有抗氧化作用，常用于治疗抑郁症，但其对PD样损伤的保护作用尚未见报道。本研究旨在探讨AA对H₂O₂或鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤和线粒体功能障碍的保护作用。为了探究AA神经保护的可能机制，本研究在细胞损伤后，检测了经AA预处理或未预处理的细胞的线粒体膜电位（MMP）和电压依赖性阴离子通道（VDAC）的表达。结果表明，AA（0.01-100 nM）预处理能够保护细胞免受鱼藤酮或H₂O₂诱导的毒性损伤。此外，鱼藤酮暴露后MMP降低，而AA处理可以预防这种降低。更有趣的是，预先给予AA可抑制鱼藤酮（100 nM）或H₂O₂（300 μM）诱导的VDAC mRNA和蛋白水平升高。这些数据表明AA可以保护神经元细胞免受线粒体功能障碍损伤，并提示AA可能被开发为帕金森病预防或治疗药物。
/EXPL/ 我们测试了积雪草苷（AS）衍生物对Aβ诱导的细胞死亡的潜在保护作用。在测试的28种AS衍生物中，积雪草酸（AA）、积雪草苷6（AS6）和SM2在1 μM浓度下对Aβ诱导的B103细胞死亡表现出强烈的抑制作用。我们进一步测试了这三种AS衍生物对自由基损伤和细胞凋亡的影响。所有三种AS衍生物均能减少H₂O₂诱导的细胞死亡并降低细胞内自由基浓度，但AA的保护作用最强。相比之下，SM2 是阻断星形孢菌素诱导细胞凋亡最有效的化合物。这些结果表明，这三种AS衍生物通过不同的细胞机制阻断Aβ毒性。当应用于海马切片时，AA、SM2和AS6均未改变CA1区N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）或非NMDA受体介导的突触传递、成对脉冲易化或长时程增强的诱导。这些结果表明，这三种AS衍生物在阻断Aβ诱导细胞死亡的浓度下不会改变海马的生理特性。因此，AS6、AA和SM2可被视为治疗阿尔茨海默病、保护神经元免受Aβ毒性的合理候选药物。
有关ASIATIC ACID（共6种）的更多治疗用途（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

C30H48O5

488.70

488.35

C, 73.73; H, 9.90; O, 16.37

464-92-6

119034

Solid powder

1.2±0.1 g/cm3

609.4±55.0 °C at 760 mmHg

270 °C

336.4±28.0 °C

0.0±4.0 mmHg at 25°C

1.579

6.46

97.99

4

5

2

35

930

12

O([H])[C@@]1([H])[C@@]([H])(C([H])([H])[C@@]2(C([H])([H])[H])[C@]([H])([C@]1(C([H])([H])[H])C([H])([H])O[H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1(C([H])([H])[H])[C@]3(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]4(C(=O)O[H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]([H])(C([H])([H])[H])[C@]([H])(C([H])([H])[H])[C@@]4([H])C3=C([H])C([H])([H])[C@@]12[H])O[H]

JXSVIVRDWWRQRT-UYDOISQJSA-N

InChI=1S/C30H48O5/c1-17-9-12-30(25(34)35)14-13-28(5)19(23(30)18(17)2)7-8-22-26(3)15-20(32)24(33)27(4,16-31)21(26)10-11-29(22,28)6/h7,17-18,20-24,31-33H,8-16H2,1-6H3,(H,34,35)/t17-,18+,20-,21-,22-,23+,24+,26+,27+,28-,29-,30+/m1/s1

(1S,2R,4aS,6aR,6aS,6bR,8aR,9R,10R,11R,12aR,14bS)-10,11-dihydroxy-9-(hydroxymethyl)-1,2,6a,6b,9,12a-hexamethyl-2,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydro-1H-picene-4a-carboxylic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (4.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 22.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (4.26 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。