| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
ASK1 (IC50 = 2.87 nM)
ASK1-IN-1 (GS-444217) targets MAP Kinase Kinase Kinase 5 (ASK1, MAP3k5), a redox-sensitive serine threonine kinase; the in vivo EC50 for inhibition of the renal ASK1 pathway in rats is 1.6 μM [1] ASK1-IN-1 (GS-444217) targets ASK1 (MAP3k5), which activates p38 and JNK MAPKs[2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
ASK1-IN-1 是凋亡信号调节激酶 1 (ASK1) 抑制剂（专利 WO2016025474A1 中的化合物 4）的有效抑制剂。在体内肺动脉高压（PH）模型中，它以剂量依赖性方式降低右心室（RV）肥大和肺动脉压。肺血管疾病的特征，例如降低的肺血管阻力(PVR)、改善的肺压、减少的肺血管重塑、改善的血管功能、减少的适应不良的RV肥大和改善的RV功能，都可以通过抑制ASK1来减轻。与PH相关的病理变化也可以通过抑制ASK1信号传导来减缓、避免和/或逆转。
1. 在腺病毒过表达人源ASK1（AdASK1）的HEK293T细胞中，给予浓度范围为0.001~10 μM的ASK1-IN-1 (GS-444217) 处理2小时，可剂量依赖性抑制ASK1及其下游底物（MKK3/6、MKK4、p38、JNK）的磷酸化水平（Western blot检测）；给予1 μM ASK1-IN-1 (GS-444217) 处理1分钟至4小时，可时间依赖性抑制ASK1活性；洗脱药物并更换为无血清培养基后（0~240分钟），ASK1抑制作用具有可逆性 [1] 2. 采用KINOME scan结合实验对442种激酶进行检测，1 μM ASK1-IN-1 (GS-444217) 对ASK1具有高度选择性，仅对核糖体s6激酶4（RSK4）和双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶1A（DYRK1A）有轻微亲和力（实验中球体半径代表抑制剂亲和力，ASK1对应的点尺寸最大） [1] 3. 在腺病毒过表达ASK1的大鼠心肌细胞中，ASK1-IN-1 (GS-444217) 可降低由ASK1激活诱导的p38和JNK磷酸化水平 [2] 4. 在原代小鼠心脏成纤维细胞和肺动脉高压（PAH）患者来源的人肺外膜成纤维细胞中，ASK1-IN-1 (GS-444217) 可降低这些成纤维细胞的活化和迁移能力 [2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在肺动脉高压 (PH) 体内模型中，ASK1-IN-1 剂量依赖性地降低肺动脉压和右心室 (RV) 肥厚。
1. 在金诺芬（30 mg/kg，腹腔注射）诱导氧化应激（OS）激活ASK1通路的SD大鼠模型中，单次口服30 mg/kg ASK1-IN-1 (GS-444217) 可降低肾脏p-ASK1、p-p38、p-JNK水平（Western blot检测），并下调肾脏炎症细胞因子（Il1b、Ccl2、Cxcl2）的mRNA表达及半胱天冬酶活性 [1] 2. 在大鼠肾脏缺血再灌注（I/R）损伤模型中，肾脏双侧缺血30分钟前口服给予30 mg/kg ASK1-IN-1 (GS-444217)，可降低再灌注24小时后血清肌酐和血尿素氮浓度，并减少肾小管坏死（HE染色）和凋亡/坏死（TUNEL染色）评分 [1] 3. 在大鼠单侧输尿管梗阻（UUO）模型中，术前1小时口服给予30 mg/kg ASK1-IN-1 (GS-444217)，并持续每日两次给药7天，可降低肾脏p-p38和p-JNK水平（Western blot检测），减少胶原IV沉积、皮质间质α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）阳性肌成纤维细胞数量、肾脏上皮细胞凋亡/坏死（TUNEL）及Col1a1 mRNA表达 [1] 4. 在10周龄db/db eNOS⁻/⁻ 糖尿病肾病（DKD）小鼠模型中，给予含0.3% ASK1-IN-1 (GS-444217) 的饲料喂养8周，可阻止肾小球滤过率（GFR）下降，降低蛋白尿（尿白蛋白/肌酐比值）、肾小球硬化评分、胶原IV沉积及足细胞丢失（WT-1染色） [1] 5. 在SD大鼠5/6肾切除慢性肾小球损伤模型中，ASK1-IN-1 (GS-444217)（饲料中0.3%添加+每日一次口服30 mg/kg）与依那普利（饮用水中50 mg/L）联合给药4周，相比单药治疗可更显著降低蛋白尿并逆转肾小球硬化；ASK1-IN-1 (GS-444217) 单药也可降低收缩压并延缓肾小球硬化进展 [1] 6. 在两种大鼠肺动脉高压（PAH）模型（野百合碱模型、Sugen/低氧模型）中，口服给予ASK1-IN-1 (GS-444217) 可剂量依赖性降低肺动脉压和右心室（RV）肥厚；即使在疾病已建立的动物中给药仍有疗效，且与ASK1磷酸化水平降低、肺动脉肌化程度减轻及RV纤维化基因表达下调相关 [2] 7. 在肺动脉结扎诱导的小鼠RV压力超负荷模型中，ASK1-IN-1 (GS-444217) 可直接减少心脏纤维化并改善心脏功能 [2] |
| 酶活实验 |
ASK1抑制改善血管功能并减少肺血管疾病的体征和症状，例如肺血管阻力(PVR)、肺压力、肺动脉重塑、适应不良的RV肥大和RV功能。通过抑制ASK1信号传导可以减缓、避免或什至逆转与PH相关的病理变化。两种 ASK1-IN-1 剂量（0.1% 为 0.1+0.05 和 0.2% 为 0.1±0.1 ng/mL）均可降低 B 型钠尿肽 (BNP) 的血浆水平。 ASK1-IN-1 治疗使 Su/Hx 大鼠完全肌化的小动脉数量分别减少 35.6% 或 32.6%。
1. 酶促竞争实验：通过在递增浓度的ASK1-IN-1 (GS-444217)（0~24 nM）和ATP（0~2400 μM）存在下检测ASK1酶活性，分析药物与ATP的相互作用，证实ASK1-IN-1 (GS-444217) 是ASK1的ATP竞争性抑制剂 [1] 2. 表面等离子体共振（SPR）实验：采用SPR技术测定ASK1-IN-1 (GS-444217) 与ASK1的结合动力学和亲和力；将实验数据（黑色轨迹）拟合至简单的1:1相互作用模型（红色轨迹），以分析结合特征 [1] 3. KINOME scan结合实验：检测1 μM ASK1-IN-1 (GS-444217) 对442种激酶（涵盖主要激酶家族：TK、TKL、STE、CK1、AGC、CAMK、CMGC及其他家族）的选择性；该实验定量绘制相互作用模式图，球体半径代表抑制剂亲和力，点的尺寸反映药物对ASK1、RSK4和DYRK1A的相对亲和力 [1] |
| 细胞实验 |
1. HEK293T细胞ASK1抑制实验：将腺病毒载体转染HEK293T细胞以过表达人源ASK1（AdASK1）；给予细胞1:3系列稀释的ASK1-IN-1 (GS-444217)（0.001~10 μM）处理2小时，制备细胞裂解液后通过Western blot检测ASK1、MKK3/6、MKK4、p38、JNK的磷酸化水平，以GAPDH作为内参 [1]
2. HEK293T细胞时间进程实验：将过表达AdASK1的HEK293T细胞用1 μM ASK1-IN-1 (GS-444217) 处理1分钟至4小时；通过Western blot检测ASK1通路激活标志物，以明确药物的时间依赖性作用 [1] 3. HEK293T细胞可逆性实验：过表达AdASK1的HEK293T细胞经ASK1-IN-1 (GS-444217) 处理后，洗脱药物并更换为无血清培养基；在洗脱后0~240分钟的时间点收集细胞裂解液，通过Western blot评估ASK1抑制作用的可逆性 [1] 4. 心肌细胞实验：将腺病毒载体转染大鼠心肌细胞以过表达ASK1，随后给予ASK1-IN-1 (GS-444217) 处理；检测p38和JNK的磷酸化水平，以评估药物对ASK1下游信号通路的作用 [2] 5. 成纤维细胞活化/迁移实验：培养原代小鼠心脏成纤维细胞和PAH患者来源的人肺外膜成纤维细胞，给予ASK1-IN-1 (GS-444217) 处理；采用相关细胞功能实验评估这些成纤维细胞的活化状态和迁移能力 [2] |
| 动物实验 |
肺动脉高压（PH）体内模型 1. 大鼠金诺芬诱导的ASK1激活模型：Sprague-Dawley大鼠单次口服30 mg/kg ASK1-IN-1 (GS-444217) 或等体积的溶剂；30分钟后，大鼠腹腔注射金诺芬（30 mg/kg）以诱导氧化应激介导的ASK1激活。金诺芬给药30分钟后收集肾皮质样本，用于Western blot、mRNA表达和caspase活性分析（药物组n=8，溶剂组n=5）[1] 2. 大鼠肾脏缺血/再灌注损伤模型：Sprague-Dawley大鼠在双侧肾脏缺血/再灌注损伤前30分钟口服30 mg/kg ASK1-IN-1 (GS-444217) 或溶剂。缺血。经过24小时再灌注后，采集血清样本以测定肌酐和血尿素氮，并收集肾组织进行肾小管坏死（H&E染色）和细胞凋亡/坏死（TUNEL染色）的病理评分（每组n=5-8）[1] 3. 大鼠单侧输尿管梗阻（UUO）模型：Sprague-Dawley大鼠接受假手术或UUO手术；术前1小时口服ASK1-IN-1 (GS-444217)（30 mg/kg）或载体，并持续7天，每日两次。通过Western blot分析肾脏裂解液中的p-p38和p-JNK，并对肾脏切片进行胶原蛋白IV、α-SMA和TUNEL染色以评估纤维化和细胞死亡；通过RT-PCR检测Col1a1 mRNA（假手术组n=4，UUO组n=8）。 （针对 UUO 组）[1] 4. 小鼠 DKD 模型 (db/db eNOS⁻/⁻)：10 周龄 db/db eNOS⁻/⁻ 小鼠饲喂标准饲料（载体）或含 0.3% ASK1-IN-1 (GS-444217) 的饲料 8 周；基线组于 10 周时处死。分别于第 10、14 和 18 周通过菊粉-FITC 清除率测定肾小球滤过率 (GFR)，通过尿白蛋白/肌酐比值 (UACR) 测定蛋白尿，并分析肾组织中的肾小球硬化（PAS 染色）、IV 型胶原沉积和足细胞丢失（WT-1 染色）（每组 n=9–12）[1] 5. 大鼠 5/6 肾切除模型：5/6 肾切除术后 8 周肾切除术后，Sprague-Dawley大鼠根据肾硬化指数（SI）评分随机分组，并分配至对照组（标准饲料）、ASK1-IN-1（GS-444217）（饲料中添加0.3% ASK1-IN-1，每日一次口服30 mg/kg）、依那普利组（饮用水中添加50 mg/L依那普利）或联合用药组，持续4周。评估收缩压、尿白蛋白/肌酐比值（UACR）和肾小球硬化程度（PAS染色）（每组n=12-14）[1] 6. 大鼠肺动脉高压模型（单克罗他林和舒根/缺氧）：对已建立肺动脉高压模型的大鼠口服ASK1-IN-1（GS-444217）；测量肺动脉压、右心室肥大、ASK1磷酸化、肺动脉肌化和右心室纤维化基因表达。 [2] 7. 小鼠右心室压力负荷过重模型（肺动脉束带术）：对右心室压力负荷过重的小鼠口服给予ASK1-IN-1 (GS-444217)；评估心肌纤维化和心脏功能。[2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. ASK1-IN-1 (GS-444217) 是一种强效且选择性的小分子 ASK1 抑制剂，通过基于结构的药物设计，在保持低亲脂性的同时，优化了生化效力和亲脂性配体效率 (LLE) [1]
2. 在糖尿病肾病 (DKD) 患者的肾活检中，肾小球和肾小管区室均观察到 ASK1 激活；ASK1-IN-1 (GS-444217) 可降低模拟 DKD 病理的啮齿动物肾损伤/纤维化模型中 ASK1 通路的激活，并且与依那普利联合使用可增强蛋白尿减少和肾小球硬化消退 [1] 3. 氧化应激通过 MAPK 激活驱动 PAH 中的病理重塑； ASK1-IN-1 (GS-444217)通过抑制ASK1（一种氧化还原敏感的顶端MAPK）来阻止PAH的进展，其机制是通过减少肺血管和右心室重塑，这代表了ASK1在PAH发病机制中起因果作用的首个证据[2] |
| 分子式 |
C₂₃H₂₁N₇O
|
|
|---|---|---|
| 分子量 |
411.46
|
|
| 精确质量 |
411.18
|
|
| 元素分析 |
C, 67.14; H, 5.14; N, 23.83; O, 3.89
|
|
| CAS号 |
1262041-49-5
|
|
| 相关CAS号 |
|
|
| PubChem CID |
57504987
|
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
|
| LogP |
2
|
|
| tPSA |
90.5
|
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
|
| 重原子数目 |
31
|
|
| 分子复杂度/Complexity |
654
|
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
|
| InChi Key |
ZGCMQKWOUIMBEP-UHFFFAOYSA-N
|
|
| InChi Code |
InChI=1S/C23H21N7O/c31-23(20-11-19(8-9-24-20)29-12-21(25-13-29)15-4-5-15)27-17-3-1-2-16(10-17)22-28-26-14-30(22)18-6-7-18/h1-3,8-15,18H,4-7H2,(H,27,31)
|
|
| 化学名 |
4-(4-cyclopropylimidazol-1-yl)-N-[3-(4-cyclopropyl-1,2,4-triazol-3-yl)phenyl]pyridine-2-carboxamide
|
|
| 别名 |
|
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
|
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
|
|||
|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.08 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.08 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.08 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4304 mL | 12.1518 mL | 24.3037 mL | |
| 5 mM | 0.4861 mL | 2.4304 mL | 4.8607 mL | |
| 10 mM | 0.2430 mL | 1.2152 mL | 2.4304 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
