| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MET H1094Y (IC50 = 0.22 nM); MET Y1235D (IC50 = 1.7 nM); WT MET (IC50 = 4.2 nM); MET M1250T (IC50 = 6.5 nM); TRKA/NTRK1 (IC50 = 39 nM)
AST487 (NVP-AST487) is a potent inhibitor of RET tyrosine kinase and FMS-like tyrosine kinase 3 (FLT3) (including wild-type and mutant FLT3 variants); the IC50 for RET kinase activity is 8 nM [1]; the IC50 for wild-type FLT3 (wtFLT3) kinase is 5 nM, for FLT3-internal tandem duplication (FLT3-ITD) is 2 nM, and for FLT3-D835Y (PKC412-resistant mutant) is 7 nM [2]; it has weak inhibitory activity against other kinases (e.g., c-Kit, VEGFR2) with IC50 > 100 nM [1][2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在体外激酶测定中，许多其他激酶也类似地被 AST 487 (NVP-AST487) 抑制，包括 KDR (IC50=170 nM)、Flt-4 (IC50=790 nM)、Flt-3 (IC50=520 nM)、c-Kit (IC50=500 nM) 和 c-Abl (IC50=20 nM)。 AST 487 有效抑制具有 RET 激活突变的人类甲状腺癌细胞系的生长，但对没有 RET 突变的细胞系则无效。在 MTC-M 细胞中与 100 nM AST 487 共孵育可显着抑制 GDNF/GFRα1 和 persephin 诱导的降钙素 mRNA [1]。 AST 487 是一种新型突变型 FLT3 抑制剂。 AST 487 在生化测定中测试了对 Flt-3 激酶活性的抑制作用。 Ki 确定为 0.12 μM。除 Flt-3 外，NVP-AST487 还可抑制 RET、KDR、c-Kit 和 c-Abl 激酶，IC50 值低于 1 μM。用 AST 487 处理 FLT3-ITD-Ba/F3 细胞和 D835Y-Ba/F3 细胞可有效抑制细胞增殖 (IC50<5 nM)。用 0.01 μM AST 487 处理 FLT3-ITD-Ba/F3 细胞时，AST 487 会导致细胞完全被杀死，而相同浓度的 AML 患者样本则被杀死约 50%[2]。
1. 髓样甲状腺癌（MTC）细胞：AST487可剂量依赖性抑制RET突变的TT细胞和RET激活的MZ-CRC-1细胞增殖，72小时处理后的IC50分别为15 nM和22 nM[1] 2. MTC中RET信号抑制：Western blot分析显示，AST487（10–100 nM）可浓度依赖性降低TT细胞中RET磷酸化（p-RET）、ERK1/2磷酸化（p-ERK1/2）和AKT磷酸化（p-AKT）水平，50 nM浓度下可完全抑制p-RET表达[1] 3. MTC中降钙素基因调控：AST487（20 nM）处理TT细胞24小时后，可使降钙素mRNA表达降低75%（qPCR检测），培养上清中降钙素蛋白分泌减少60%（ELISA检测），该效应不依赖RET抑制[1] 4. AML细胞增殖抑制：AST487抑制FLT3突变型急性髓系白血病（AML）细胞系增殖：MV4-11（FLT3-ITD，IC50=8 nM）、Ba/F3-FLT3-ITD（IC50=5 nM）、PKC412耐药的Ba/F3-FLT3-D835Y（IC50=12 nM）；对FLT3野生型HL-60细胞无显著抑制作用（IC50>1 μM）[2] 5. AML细胞凋亡诱导：AST487（10 nM）处理MV4-11细胞48小时后，Annexin V+/PI+凋亡细胞比例从6%升至45%，同时伴随caspase-3/7激活和PARP剪切（western blot检测）[2] 6. AML中FLT3信号抑制：AST487（5–50 nM）可剂量依赖性抑制MV4-11和Ba/F3-FLT3-D835Y细胞中FLT3磷酸化（p-FLT3）、STAT5磷酸化（p-STAT5）和ERK1/2磷酸化（p-ERK1/2），20 nM浓度下可完全抑制p-FLT3[2] 7. 原代AML细胞克隆形成实验：AST487（1 nM）可使原代FLT3-ITD AML患者原始细胞的克隆形成减少80%，而相同浓度下对正常CD34+造血祖细胞的克隆形成仅抑制10%[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
OF1 小鼠单次口服 15 mg/kg AST 487 后，0.5 小时后达到 0.505±0.078 μM SE 的平均峰值血浆水平 (Cmax)。口服给药后 6 小时内，小鼠血浆中发现类似的 AST 487 水平，24 小时时的 Clast 为 21±4 nM。经计算，口服生物利用度为 9.7%，t1/2 终末消除时间为 1.5 小时
1. MTC异种移植模型：在TT细胞裸鼠异种移植模型中，每日一次口服AST487（50 mg/kg），连续28天，肿瘤生长抑制率（TGI）达70%，小鼠血清降钙素水平（MTC生物标志物）降低65%；组织学分析显示肿瘤中Ki67阳性增殖细胞减少55%，p-RET表达降低[1] 2. AML异种移植模型（MV4-11）：在携带MV4-11异种移植瘤的NOD/SCID小鼠中，每日两次腹腔注射AST487（30 mg/kg），连续14天，骨髓和脾脏中的白血病细胞负荷降低85%，小鼠中位生存期从溶媒组的21天延长至给药组的42天[2] 3. PKC412耐药AML异种移植模型：在Ba/F3-FLT3-D835Y异种移植模型（BALB/c nu/nu小鼠）中，每日一次腹腔注射AST487（40 mg/kg），连续21天，TGI达65%，外周血原始细胞计数降低70%[2] 4. AML联合治疗：AST487（20 mg/kg）与阿糖胞苷（10 mg/kg）联合给药治疗MV4-11异种移植瘤，表现出协同疗效，TGI达90%且骨髓中未检测到白血病细胞[2] |
| 酶活实验 |
与谷胱甘肽 S-转移酶 (GST) 融合的激酶结构域在杆状病毒中表达后使用谷胱甘肽-琼脂糖进行纯化。在放射性标记的 ATP 存在下，通过纯化的相应蛋白激酶的 GST 融合激酶结构域对合成底物 [聚（Glu，Tyr）] 进行磷酸化，这就是测量激酶活性的方法；对于每种特定激酶，ATP 浓度在 Km 范围内进行优化。总之，每种激酶均在 20 mM Tris-HCl (pH 7.5)、1 至 3 mM MnCl2、3 至 10 mM MgCl2、10 μM Na3VO4、1 mM DTT、0.2 μCi [33P]ATP、1 至 8 μM ATP、3 至8 μg/mL 聚（Glu/Tyr，4:1）和 1% DMSO，总体积为 30 μL，在存在或不存在 NVP-AST487 的情况下，在室温下处理 10 分钟。添加 10 μL 250 mM EDTA 以终止反应后，将反应混合物置于 Immobilon 聚偏二氟乙烯膜上。在液体闪烁计数器中，过滤器在清洗（0.5% H3PO4）、乙醇浸泡并干燥后进行计数。使用抑制百分比的线性回归分析来确定 AST 487 的 IC50。
1. RET激酶活性实验：将重组人RET胞内激酶结构域与系列浓度的AST487、生物素化RET特异性多肽底物及ATP共同孵育；采用抗磷酸酪氨酸抗体通过时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）检测底物磷酸化水平，绘制剂量-反应曲线并计算RET激酶抑制的IC50[1] 2. FLT3激酶活性实验：将重组人wtFLT3、FLT3-ITD和FLT3-D835Y激酶结构域与AST487、荧光多肽底物共同孵育；通过ADP-Glo荧光法检测ADP生成量以评估激酶活性，根据剂量-反应数据计算各FLT3变体的IC50[2] 3. 激酶选择性实验：将20种重组人酪氨酸激酶（c-Kit、VEGFR2、PDGFRβ等）与AST487（100 nM）及各自的多肽底物共同孵育；采用TR-FRET法检测激酶活性，评估AST487对RET和FLT3的选择性[1] |
| 细胞实验 |
台盼蓝排除测定用于评估培养过程中存在或不存在 NVP-AST 487 时有多少细胞增殖。细胞活力表示为对照（未处理）细胞的百分比。除非另有说明，数据是两次独立实验的平均值。每个数据点的平均值标准误差由误差条显示。 annexin-V-Fluos 染色试剂盒用于定量药物处理细胞中的凋亡量。细胞周期分析完成。
1. MTC细胞增殖实验：将TT和MZ-CRC-1细胞以4×10³个/孔接种于96孔板，加入AST487（0.1 nM–1 μM）处理72小时；通过MTT法检测细胞活力（MTT孵育4小时，DMSO溶解后检测570 nm吸光度），从S型剂量-反应曲线计算增殖抑制的IC50[1] 2. 降钙素表达实验：用AST487（5–50 nM）处理TT细胞24小时；提取总RNA并反转录为cDNA，通过qPCR定量降钙素mRNA水平（以GAPDH为内参）；采用ELISA检测上清中降钙素蛋白分泌量[1] 3. RET信号western blot实验：用AST487（10–100 nM）处理TT细胞2小时；提取总蛋白并通过SDS-PAGE分离，转印至硝酸纤维素膜；用p-RET、总RET、p-ERK1/2、总ERK1/2、p-AKT、总AKT和β-actin（内参）抗体孵育膜，再通过化学发光法检测信号[1] 4. AML细胞增殖实验：将MV4-11、Ba/F3-FLT3-ITD和Ba/F3-FLT3-D835Y细胞以2×10³个/孔接种于96孔板，加入AST487（0.1 nM–1 μM）处理72小时；通过CellTiter-Glo荧光法检测ATP水平以评估细胞活力，计算IC50[2] 5. AML凋亡实验：用AST487（0–50 nM）处理MV4-11细胞48小时，经Annexin V-FITC和PI染色后，通过流式细胞术定量凋亡细胞；提取总蛋白并通过western blot检测剪切型caspase-3、剪切型PARP和Bcl-2家族蛋白以分析作用机制[2] 6. AML克隆形成实验：将原代FLT3-ITD AML原始细胞和正常CD34+祖细胞悬浮于含AST487（0–10 nM）的甲基纤维素培养基中，接种于6孔板；孵育14天后，显微镜下计数克隆数（>50个细胞），计算相对于溶媒对照组的克隆形成抑制率[2] |
| 动物实验 |
小鼠：雌性无胸腺裸鼠饲养于Makrolon III型笼中，自由摄取食物和水，并保持理想的卫生条件（每笼最多10只小鼠）。分别将1×10⁶个NIH3T3-RETC634W细胞和5×10⁶个TT细胞皮下注射到每只小鼠100 μL的HBSS溶液中，以形成肿瘤。平均肿瘤体积达到100 mm³的肿瘤在注射NIH3T3-RETC634W细胞后10天出现，在注射TT细胞后20天出现，这些肿瘤可用于治疗。NVP-AST487每日灌胃一次。将适量的粉末溶解于 N-甲基吡咯烷酮/PEG300 (1:10 v/v) 混合溶剂中，制备化合物。将小鼠随机分为四组，每组八只。前三组分别以 50、30 和 10 mg/kg 的剂量口服 NVP-AST487，持续三周。第四组采用卡介苗治疗。每周记录两次小鼠的体重和肿瘤生长情况。肿瘤体积的计算公式为：长×直径²×π/6。在疗效研究结束时，即末次给药后六小时，收集肿瘤组织并置于液氮中冷冻保存。1. TT 细胞 MTC 异种移植模型：将 TT 细胞 (5×10⁶) 皮下接种到 6-8 周龄雌性 BALB/c 裸鼠右侧腹部；当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠随机分为载体组和 AST487 组（每组 n=8）；将 AST487 溶解于 10% DMSO、30% PEG400 和 60% 生理盐水中，并以 50 mg/kg 的剂量每日一次灌胃给药，持续 28 天；每周两次测量肿瘤体积（长 × 宽² / 2）和体重；研究结束时，处死小鼠，切除肿瘤并称重，收集血清进行降钙素 ELISA 检测 [1]
2. MV4-11 AML 异种移植模型：将 MV4-11 细胞（1×10⁷）静脉注射到 NOD/SCID 小鼠（6-8 周龄）中； 7天后，小鼠接受AST487（30 mg/kg，腹腔注射，每日两次）或载体（5% DMSO，20% Cremophor EL，75% 生理盐水）治疗14天；每周通过流式细胞术测量外周血原始细胞计数，并监测生存期60天；收集骨髓和脾脏组织进行白血病浸润的组织学分析[2] 3. Ba/F3-FLT3-D835Y AML异种移植模型：BALB/c nu/nu小鼠尾静脉注射Ba/F3-FLT3-D835Y细胞（2×10⁶）；5天后，小鼠接受AST487（40 mg/kg，腹腔注射，每日一次）治疗21天；通过qPCR检测人CD45 mRNA定量骨髓白血病负荷，并测量脾脏重量以评估脾肿大[2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 小鼠初步研究表明，口服 50 mg/kg AST487 后 1 小时，血浆浓度 (Cmax) 达到最大值 1.5 μM，且血浆浓度可持续检测长达 12 小时 [1]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 急性毒性：AST487在小鼠中耐受性良好，口服剂量高达100 mg/kg，腹腔注射剂量高达75 mg/kg，未观察到死亡或严重临床症状（体重减轻、嗜睡）[1][2]
2. 亚慢性毒性：在一项为期14天的大鼠研究中，口服AST487（20、50、100 mg/kg/天）仅在100 mg/kg剂量下引起轻度血小板减少症，停药7天后恢复正常；未发现血清肝功能（ALT/AST）或肾功能（肌酐/尿素）指标有显著变化[2] 3. 血浆蛋白结合率：AST487在人血浆中的血浆蛋白结合率约为90%，在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率为88%（通过超滤法测定）[1] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
1. AST487 (NVP-AST487) 是一种由诺华公司开发的小分子酪氨酸激酶抑制剂，最初被鉴定为用于治疗甲状腺髓样癌 (MTC) 的 RET 抑制剂，后来发现其靶向突变型 FLT3，可用于治疗急性髓系白血病 (AML) [1][2]。2. AST487 通过与 RET 和 FLT3 的 ATP 结合口袋竞争性结合发挥作用，抑制它们的磷酸化及其下游信号通路（RET 的 ERK/AKT；FLT3 的 STAT5/ERK），这对于 MTC/AML 细胞的增殖和存活至关重要 [1][2]。3. 在 MTC 细胞中，AST487 通过阻断 RET 信号通路抑制细胞生长，并通过一种不依赖于 RET 的转录机制降低降钙素的表达 [1]。4. AST487 对……有效PKC412耐药的FLT3-D835Y AML细胞，针对第一代FLT3抑制剂的获得性耐药[2]
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| 分子式 |
C26H30F3N7O2
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|---|---|
| 分子量 |
529.557315349579
|
| 精确质量 |
529.241
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| 元素分析 |
C, 58.97; H, 5.71; F, 10.76; N, 18.51; O, 6.04
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| CAS号 |
630124-46-8
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| 相关CAS号 |
630124-46-8
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| PubChem CID |
11409972
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
5.205
|
| tPSA |
94.65
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
10
|
| 可旋转键数目(RBC) |
8
|
| 重原子数目 |
38
|
| 分子复杂度/Complexity |
730
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
FC(C1C=C(C=CC=1CN1CCN(CC)CC1)NC(NC1C=CC(=CC=1)OC1C=C(N=CN=1)NC)=O)(F)F
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| InChi Key |
ODPGGGTTYSGTGO-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C26H30F3N7O2/c1-3-35-10-12-36(13-11-35)16-18-4-5-20(14-22(18)26(27,28)29)34-25(37)33-19-6-8-21(9-7-19)38-24-15-23(30-2)31-17-32-24/h4-9,14-15,17H,3,10-13,16H2,1-2H3,(H,30,31,32)(H2,33,34,37)
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| 化学名 |
1-[4-[(4-ethylpiperazin-1-yl)methyl]-3-(trifluoromethyl)phenyl]-3-[4-[6-(methylamino)pyrimidin-4-yl]oxyphenyl]urea
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| 别名 |
AST 487; NVP AST 487; NVP-AST487; AST487; AST-487; NVP-AST-487; NVP-AST 487; NVP AST-487; NVP AST487
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~11 mg/mL (~20 mM)
Ethanol: ˂1 mg/mL Water: ˂1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.72 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.72 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.72 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8884 mL | 9.4418 mL | 18.8836 mL | |
| 5 mM | 0.3777 mL | 1.8884 mL | 3.7767 mL | |
| 10 mM | 0.1888 mL | 0.9442 mL | 1.8884 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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RET Y791F Recombinant Human Active Protein Kinase
RET V804M Recombinant Human Active Protein Kinase
RET M918T Recombinant Human Active Protein Kinase
RET L730M Recombinant Human Active Protein Kinase
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