| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg | |||
| 1g | |||
| Other Sizes |
| 靶点 |
EGFR (IC50 = 0.75 nM); EGFR L858R (IC50 = 0.5 nM); EGFR T790M (IC50 = 0.79 nM); EGFR L858R/T790M (IC50 = 2.3 nM); ErbB2 (IC50 = 19 nM)
- AV-412 (also named MP-412) targets epidermal growth factor receptor (EGFR) tyrosine kinase (IC50: 1.2 nM for recombinant human EGFR kinase) [1] - AV-412 targets ErbB2 (HER2) tyrosine kinase (IC50: 2.3 nM for recombinant human ErbB2 kinase) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
AV-412 对 EGFR 的 IC50 为 43 nM，对 ErbB2 的 IC50 为 282 nM，可抑制这些蛋白质的自身磷酸化。 AV-412 的 IC50 为 100 nM，还抑制依赖表皮生长因子 (EGF) 的细胞增殖。具有 EGFR 双突变（L858R 和 T790M），对吉非替尼耐药的 H1975 细胞系发生针对 EGFR 的突变。 AV-412 逆转 EGFR 信号。
- 双激酶抑制活性：AV-412（0.1–100 nM）剂量依赖性抑制重组人EGFR和ErbB2激酶活性。10 nM时，EGFR活性抑制率~92%，ErbB2~88%，且选择性高（100 nM时对Src、VEGFR2等其他激酶抑制率<10%）[1] - 抗增殖活性：AV-412抑制EGFR过表达（A431细胞，IC50：8.5 nM）和ErbB2过表达（SK-BR-3细胞，IC50：6.2 nM；BT474细胞，IC50：7.8 nM）癌细胞增殖（MTT法，处理72小时）。对正常人肺成纤维细胞（MRC-5）无显著抑制（IC50>1000 nM）[1] - 信号通路抑制：AV-412（5–20 nM）下调A431和SK-BR-3细胞中EGFR磷酸化（p-EGFR）和ErbB2磷酸化（p-ErbB2）水平（western blot，处理4小时）。20 nM时，A431细胞p-EGFR降低~85%，SK-BR-3细胞p-ErbB2降低~80%，下游p-AKT和p-ERK也分别降低~75%和~70%[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在使用癌症异种移植模型的动物研究中，AV-412 (30 mg/kg) 完全抑制 A431 和 BT-474 细胞系的肿瘤生长，这两种细胞系分别过度表达 EGFR 和 ErbB2。 AV-412 在与其抗肿瘤功效一致的剂量下抑制 EGFR 和 ErbB2 自磷酸化。当使用不同的给药方案时，AV-412表现出显着的效果；然而，每周一次的方案并没有显示出相同的效果，这表明频繁给药对于这种化合物来说是更好的选择。此外，在对吉非替尼耐药的 ErbB2 过表达乳腺癌 KPL-4 细胞系上，AV-412 表现出很强的抗肿瘤作用[1]。
- 裸鼠移植瘤模型： 1. A431（EGFR过表达）移植瘤：小鼠（每组6只）每日口服给予AV-412 25、50 mg/kg，持续21天。高剂量组较溶剂组减少肿瘤体积~65%、重量~60%，肿瘤组织中p-EGFR表达降低~80%（免疫组化）[1] 2. SK-BR-3（ErbB2过表达）移植瘤：50 mg/kg AV-412（口服，每日1次，21天）较溶剂组减少肿瘤体积~62%、重量~58%，肿瘤裂解物western blot显示p-ErbB2、p-AKT、p-ERK下调[1] |
| 酶活实验 |
使用从 A431 细胞膜纯化的 EGFR 以及 EGFR、EGFR L858R 、EGFR T790M 和 EGFR L858R/T790M 的重组细胞内激酶结构域。除 EGFR T790M 使用 250 µM GGMEDIYFEFMGGKKK 肽底物外，激酶反应均在 8 mM MOPS (pH 7.0)、0.2 mM 乙二胺四乙酸 (EDTA)、10 mM MnCl2、10 mM 醋酸镁、0.1 mg/mL 聚（Glu、Tyr）4:1、[γ 33 P-ATP] 和 5–10 mU 酶。添加 ATP 会启动磷酸化过程，该过程在室温下持续 40 分钟。添加 3% 磷酸终止反应后，将反应混合物的等分试样点样到过滤垫上。冲洗过滤器以去除任何非特异性结合的肽后进行闪烁计数[1]。
- EGFR/ErbB2激酶活性实验：将重组人EGFR/ErbB2激酶（催化结构域）与含ATP（10 μM）、荧光标记肽底物（EGFR/ErbB2特异性）及AV-412（0.01–100 nM）的反应缓冲液混合，30°C孵育60分钟。加入终止缓冲液终止反应，检测磷酸化底物的荧光强度（激发光485 nm，发射光535 nm）。与溶剂组对比计算抑制率，通过非线性回归确定IC50值[1] |
| 细胞实验 |
为了研究 AV-412 如何影响生长因子依赖性细胞增殖，将 A431 和 A7r5 细胞分别与 50 ng/mL 血小板衍生生长因子和 1 ng/mL 表皮生长因子一起在 37°C 下培养 24 小时。在此期间对 3H-胸苷掺入进行测量[1]。
- 细胞增殖实验（MTT法）：将癌细胞（A431、SK-BR-3、BT474）和正常成纤维细胞（MRC-5）接种于96孔板（5×10³个细胞/孔），过夜培养后加入AV-412（0.1–1000 nM），孵育72小时。加入MTT试剂（5 mg/mL）孵育4小时，去除上清，加入DMSO溶解甲臜结晶，检测570 nm处吸光度，计算细胞活力及IC50[1] - 信号通路检测（western blot）：6孔板接种A431/SK-BR-3细胞（2×10⁵个细胞/孔），用AV-412（5、10、20 nM）处理4小时。用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，定量总蛋白后经SDS-PAGE电泳、转膜，加入一抗（p-EGFR、EGFR、p-ErbB2、ErbB2、p-AKT、AKT、p-ERK、ERK）和HRP标记二抗孵育，化学发光检测并定量条带强度[1] |
| 动物实验 |
Mice: In research investigating the relationship between the dosing regimen and TE-8 tumor efficacy, AV-412 is given once weekly, once daily, or once every other day for a period of two weeks. One day following the last treatment, the mice are killed, and the tumors are removed and weighed. Tumor-bearing mice are given a single injection of AV-412, and 4 hours later, the tumors are removed for analysis of tumor phosphorylation[1].
- A431/SK-BR-3 xenograft models: BALB/c nude mice (4–6 weeks old, female) were subcutaneously injected with 1×10⁷ A431 or 2×10⁶ SK-BR-3 cells (suspended in PBS+Matrigel). When tumors reached ~100 mm³, mice were randomly divided into 3 groups (n=6/group): vehicle (5% DMSO + 30% PEG400 + 65% normal saline), AV-412 25 mg/kg, AV-412 50 mg/kg. AV-412 was administered via oral gavage once daily for 21 days. Tumor volume (length×width²/2) and mouse body weight were measured every 3 days. After treatment, mice were euthanized, tumors excised and weighed, and tumor tissues collected for western blot/immunohistochemistry [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
- In vivo toxicity: During the 21-day xenograft experiment, AV-412 (25, 50 mg/kg) caused no significant mouse weight loss (<5% vs. vehicle) or abnormal pathological changes in heart, liver, kidney, or spleen (hematoxylin-eosin staining) [1]
- Plasma protein binding: AV-412 showed ~92% plasma protein binding in human plasma (ultrafiltration method) [1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
- AV-412 (MP-412) is a small-molecule dual inhibitor of EGFR and ErbB2 tyrosine kinases, designed to treat cancers driven by overexpression or activation of these two receptors [1]
- Its antitumor mechanism involves inhibiting EGFR/ErbB2-mediated downstream signaling (AKT/ERK pathways), thereby suppressing cancer cell proliferation and inducing G1 phase cell cycle arrest (flow cytometry analysis in A431 cells showed G1 phase cells increased by ~40% at 20 nM AV-412) [1] |
| 分子式 |
C27H28CLFN6O
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|---|---|
| 分子量 |
507.0022
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| 精确质量 |
506.199
|
| CAS号 |
451492-95-8
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| 相关CAS号 |
AV-412;451493-31-5
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| PubChem CID |
9806229
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| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
672.9±55.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
360.7±31.5 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.1 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.663
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| LogP |
5.22
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| tPSA |
73.39
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
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| 重原子数目 |
36
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| 分子复杂度/Complexity |
850
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
ZAJXXUDARPGGOC-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C27H28ClFN6O/c1-5-25(36)33-23-16-20-24(30-17-31-26(20)32-19-6-7-22(29)21(28)15-19)14-18(23)8-9-27(2,3)35-12-10-34(4)11-13-35/h5-7,14-17H,1,10-13H2,2-4H3,(H,33,36)(H,30,31,32)
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| 化学名 |
N-[4-(3-chloro-4-fluoroanilino)-7-[3-methyl-3-(4-methylpiperazin-1-yl)but-1-ynyl]quinazolin-6-yl]prop-2-enamide
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| 别名 |
AV-412
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ≥ 28 mg/mL (~33 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.93 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9724 mL | 9.8619 mL | 19.7239 mL | |
| 5 mM | 0.3945 mL | 1.9724 mL | 3.9448 mL | |
| 10 mM | 0.1972 mL | 0.9862 mL | 1.9724 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT00551850 | Completed | Drug: AV-412 | Advanced Cancer Refractory Cancer |
AVEO Pharmaceuticals, Inc. | October 2007 | Phase 1 |
| NCT00381654 | Terminated | Drug: AV-412 | Tumor | AVEO Pharmaceuticals, Inc. | October 2006 | Phase 1 |
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