| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
ATR ( IC50 = 5 nM ); mTOR ( IC50 = 38 nM ); PI3Kα ( IC50 = 13000 nM )
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：AZ20 对所有 PI3K 亚型以及 ATM 和 DNA-PK 均表现出良好的选择性。在体外，AZ20 以浓度依赖性方式降低 pChk1 Ser345、pChk1 Ser317 和 pChk1 Ser296 水平。长时间暴露于 AZ20 会增加 γH2AX 泛核染色，表明存在复制应激。这与 S 期停滞和磷酸组蛋白 H3 的增加有关。 AZ20 在体外诱导生长抑制和细胞死亡，其活性特征与其他细胞毒剂不同。 AZ20与选择性ATM抑制剂KU-60019联合使用可增强细胞毒作用。激酶测定：用于体外酶测定的 ATR 通过免疫沉淀从 HeLa 核提取物中获得，用兔多克隆抗血清提高到 ATR 氨基酸 400 ~ 480，包含在以下缓冲液中：25 mM HEPES (pH 7.4)、2 mM MgCl2 、250 mM NaCl、0.5 mM EDTA、0.1 mM Na3VO4、10% v/v 甘油和 0.01% v/v Tween 20。通过与 Protein A-Sepharose 珠一起孵育 1 小时，从核提取物中分离出 ATR-抗体复合物。然后通过离心回收珠子。在 96 孔板的孔中，将 10 μL 含有 ATR 的琼脂糖珠与 1 μg 底物谷胱甘肽 S-转移酶-p53N66 在 ATR 测定缓冲液（50 mM HEPES (pH 7.4)、150 mM NaCl、6 mM MgCl2）中孵育、4 mM MnCl2、0.1 mM Na3VO4、0.1 mM DTT 和 10% (v/v) 甘油），37°C，存在或不存在抑制剂。轻轻摇动 10 分钟后，添加 ATP 至终浓度 3 μM，反应在 37°C 下再继续 1 小时。通过添加 100 μL PBS 终止反应，并将反应转移至白色不透明谷胱甘肽包被的 96 孔板中，并在 4°C 下孵育过夜。然后用 PBS/0.05% (v/v) Tween 20 洗涤该板，吸干，并使用磷酸丝氨酸 15 p53 抗体通过标准 ELISA 技术进行分析。磷酸化谷胱甘肽S-转移酶βp53N66底物的检测是与山羊抗小鼠辣根过氧化物酶缀合的二抗组合进行的。使用增强化学发光溶液产生信号，并通过 TopCount 读板器进行化学发光检测。然后使用所得的计算％酶活性来确定化合物的IC50值。细胞测定：AZ20抑制BT-474细胞中的pAKT T308，并抑制HT29细胞中的pATM Ser-1981和pDNA-PK Ser-2056。在 LoVo 结直肠腺癌细胞中，AZ20 诱导生长抑制，GI50 值为 0.20 μM。
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| 体内研究 (In Vivo) |
携带LoVo肿瘤的雌性裸鼠口服AZ20，剂量为25 mg/kg，每日两次或50 mg/kg，每日一次，持续13天，导致显着的肿瘤生长抑制。这与异种移植组织中 γH2AX 全核染色的持续升高有关，但在治疗剂量下小鼠骨髓中的短暂增加，表明有利的治疗指数。评估 AZ20 的药物相互作用 (DDI) 潜力，特别是通过抑制细胞色素 P450 酶。研究发现，10 μM 的 AZ20 可抑制细胞色素 3A4 介导的咪达唑仑代谢达 50%。在低剂量大鼠 PK 研究中，AZ20 具有良好的生物利用度。
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| 酶活实验 |
为了获得用于体外酶测定的 ATR，从 HeLa 核提取物中免疫沉淀了 ATR 氨基酸 400-480 的兔多克隆抗血清。该缓冲区包含 ATR。将 pH 7.4、250 mM NaCl、0.5 mM EDTA、0.1 mM Na3VO4、10% v/v 甘油和 0.01% v/v Tween 20 混合以制备 25 mM HEPES (pH 7.4)。将 Protein A-Sepharose 珠子与来自核提取物的 ATR-抗体复合物一起孵育 1 小时，然后通过离心回收珠子。将 ATR 测定缓冲液（50 mM HEPES (pH 7.4)、150 mM NaCl、6 mM MgCl2、4 mM MnCl2、0.1 mM Na3VO4、0.1 mM DTT 和 10% (v/v) 甘油）与 1 μg 底物谷胱甘肽一起孵育S-转移酶-p53N66 在 96 孔板的孔中。这是在存在或不存在抑制剂的情况下进行的。适度摇动 10 分钟后，反应在 37°C 下再进行一小时，在此期间添加 ATP 至终浓度为 3 μM。使用涂有白色不透明谷胱甘肽的 96 孔板转移反应物并在 4°C 下孵育过夜。加入100μL PBS终止反应。用 PBS/0.05% (v/v) Tween 20 洗涤后，将该板吸干并使用磷酸丝氨酸 15 p53 抗体进行 ELISA 分析。利用与山羊抗小鼠辣根过氧化物酶缀合的二抗，检测磷酸化谷胱甘肽S-转移酶p53N66底物。使用增强化学发光溶液产生信号后，使用 TopCount 读板器进行化学发光检测。然后使用计算所得的酶活性百分比计算化合物的IC50值。
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| 细胞实验 |
使用 Labcyte Echo 声学分配装置，通过在 100% DMSO 中稀释，然后进一步加入测定介质（EMEM、10% FCS、1% 谷氨酰胺）中来创建化合物剂量范围。细胞板在 40 μL EMEM、10% FCS 和 1% 谷氨酰胺中生长 24 小时。将细胞以每 mL 9×104 细胞铺板于 384 孔 Costar 板中。添加化合物后，将细胞孵育六十分钟。使用 Labcyte Echo，添加终浓度 3 μM 4NQO（在 100% DMSO 中制备），并将细胞再孵育 60 分钟。向细胞中添加 40 μL 3.7% v/v 甲醛溶液，固定细胞 20 分钟。从细胞中除去固定物，然后将其在含有 0.1% Triton X-100 的 40 μL PBS 中透化，并用 PBS 清洗。洗涤后，将 15 μL pChk1 Ser345 一抗溶液添加到细胞中。将托盘在 4°C 下孵育整夜。消除一抗后，加入 20 μL 二抗溶液和 1 μM Hoechst 33258，并在室温下静置 90 分钟。清洗后，将板置于 40 μL PBS 中。之后，使用 ArrayScan VTI 仪器测量板上的染色强度。然后收集剂量反应并用于计算化合物的 IC50 值。
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| 动物实验 |
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| 参考文献 |
| 分子式 |
C21H24N4O3S
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|---|---|---|
| 分子量 |
412.51
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| 精确质量 |
412.16
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| 元素分析 |
C, 61.14; H, 5.86; N, 13.58; O, 11.64; S, 7.77
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| CAS号 |
1233339-22-4
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| 相关CAS号 |
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| 外观&性状 |
White solid powder
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| SMILES |
C[C@@H]1COCCN1C2=NC(=NC(=C2)C3(CC3)S(=O)(=O)C)C4=C5C=CNC5=CC=C4
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| InChi Key |
SCGCBAAYLFTIJU-CQSZACIVSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H24N4O3S/c1-14-13-28-11-10-25(14)19-12-18(21(7-8-21)29(2,26)27)23-20(24-19)16-4-3-5-17-15(16)6-9-22-17/h3-6,9,12,14,22H,7-8,10-11,13H2,1-2H3/t14-/m1/s1
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| 化学名 |
(3R)-4-[2-(1H-indol-4-yl)-6-(1-methylsulfonylcyclopropyl)pyrimidin-4-yl]-3-methylmorpholine
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外) |
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| 溶解度 (体内) |
Solubility in Formulation 1: ≥ 2.5 mg/mL (6.06 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 400 μL PEG300 and mix evenly; then add 50 μL Tween-80 to the above solution and mix evenly; then add 450 μL normal saline to adjust the volume to 1 mL. Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH₂ O to obtain a clear solution. Solubility in Formulation 2: ≥ 2.5 mg/mL (6.06 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution. For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of 20% SBE-β-CD physiological saline solution and mix evenly. Preparation of 20% SBE-β-CD in Saline (4°C，1 week): Dissolve 2 g SBE-β-CD in 10 mL saline to obtain a clear solution. 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4242 mL | 12.1209 mL | 24.2418 mL | |
| 5 mM | 0.4848 mL | 2.4242 mL | 4.8484 mL | |
| 10 mM | 0.2424 mL | 1.2121 mL | 2.4242 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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Ceralasertib (AZD-6738)
ETP-46464
VE-821
KU-55933
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