Saruparib (AZD5305)   中文名称: 沙鲁帕尼

PARP1 ( IC50 = 3 nM ); PARP2 ( IC50 = 1400 nM )
PARP1 (selective inhibitor and DNA trapper; in vitro binding IC50 = 0.003 μM (3 nM) by fluorescence polarization; TIRF-based Kd and Ki show >10,000-fold selectivity over PARP2; apparent proteomic Kd = 0.4 nM in MDA-MB-436 cell lysates) [2];
PARP2 (IC50 = 1.4 μM; >10,000-fold selectivity by TIRF) [2];
Other PARP family members (PARP3, PARP5a/TNKS1, PARP5b/TNKS2, PARP6, PARP7, PARP8, PARP9, PARP10, PARP11, PARP12, PARP14, PARP15, PARP16: no significant competition up to 10,000 nM) [2].

AZD5305 在临床前动物模型中具有优异的药代动力学特性、良好的二级药理学特性和良好的理化性质，并且是 PARP1 的高选择性抑制剂，优于其他 PARP 家族成员。体外实验表明，AZD5305 可减轻对人骨髓祖细胞的抗增殖作用。

---

在 BRCA2 突变型 DLD-1 细胞中，Saruparib 在为期 7 天的实验中抑制细胞增殖，IC50 = 2 nM [2]。
在一系列细胞系中，Saruparib 选择性地杀死同源重组修复 (HRR) 缺陷细胞（例如，BRCA1/2 突变细胞），而对 HRR 功能正常的细胞无害；在HRR功能正常的细胞中观察到的影响极小[2]。
Saruparib能有效抑制PARP1的自身PARylation，并将PARP1捕获在DNA损伤位点，但对PARP2的捕获作用可忽略不计[2]。
体外实验表明，与PARP1/2双重抑制剂talazoparib相比，Saruparib对人造血干/祖细胞（HSPCs）的毒性更低。在100 nM浓度下，46%的HSPCs仍保持活性（talazoparib组为10%），浓度高达10 μM时，最大细胞活力损失为38%[2]。
化合物Saruparib在化学蛋白质组学分析中对17个PARP家族成员表现出高度选择性，仅在低纳摩尔浓度下与PARP1竞争[2]。

AZD5305 在 BRCA 突变型 HBCx-17 PDX 模型中表现出优异的体内疗效，是一种强效且选择性的 PARP1 抑制剂和 PARP1-DNA 捕获剂。[2]

---

AZD5305 在 BRCA 突变型异种移植瘤和 PDX 模型中均显示出持续的抗肿瘤活性。AZD5305 的抗肿瘤疗效与 BRCA1m 肿瘤模型中的药代动力学 (PK) 和药效学 (PD) 相关。AZD5305 与卡铂联合用药在 HBCx-9 PDX 和 SUM149PT 异种移植瘤模型中显示出联合用药优势。与双重 PARP1/2 抑制剂相比，AZD5305 在大鼠临床前模型中显示出更低的血液毒性。 [3]

---

AZD5305 在 BRCAm 异种移植瘤和 PDX 模型中表现出持续的体内抗肿瘤活性[3]
在 BRCAm 异种移植瘤和 PDX 模型中评估了 Saruparib (AZD5305) 单药治疗的体内抗肿瘤疗效。在 MDA-MB-436 BRCA1m TNBC 模型中，每日给予 ≥ 0.1 mg/kg 的 Saruparib (AZD5305) 治疗可导致显著的肿瘤消退（≥90%）。进一步将 AZD5305 剂量降低至 0.03 mg/kg 和 0.01 mg/kg 则导致抗肿瘤疗效降低（分别为 40% 的肿瘤消退和无效；图 3A）。在Capan-1异种移植瘤模型（一种BRCA2突变型胰腺癌模型）中，每日给予1或10 mg/kg的Saruparib (AZD5305)治疗可抑制肿瘤生长，而每日口服0.1 mg/kg剂量则可抑制52%的肿瘤生长[3]。

---

在小鼠体内达到合适的口服暴露量后，化合物25/Saruparib (AZD5305)在BRCA1突变型三阴性乳腺癌(TNBC)患者来源的肿瘤组织块移植(PDX)模型HBCx-17（法国Xentech公司）中进行了体内疗效测试（图4）。将肿瘤组织块皮下植入小鼠体内，当平均肿瘤体积达到约0.1 cm3时，将小鼠随机分为不同的治疗组。从随机分组后的第二天起，动物每天接受为期 5 周的治疗，分别给予赋形剂、化合物 1（100 mg/kg）或化合物 25（10、1、0.1 和 0.03 mg/kg）。每日给予 10 mg/kg 和 1 mg/kg 的化合物 25 可使肿瘤消退超过 80%，与 100 mg/kg 的化合物 1 的效果相当；而 0.1 mg/kg 的化合物 25 可使肿瘤消退 73%。低至 0.03 mg/kg 的化合物 25 也可使肿瘤消退（25%）[2]。
在 HBCx-17 BRCA1 突变三阴性乳腺癌患者来源的异种移植 (PDX) 模型中，每日口服 Saruparib 5 周，低至 0.03 mg/kg 的剂量即可诱导肿瘤消退（25%）。剂量为 0.1 mg/kg 时，消退率为 73%；剂量为 1 mg/kg 和 10 mg/kg 时，消退率 >80%。 1 mg/kg 剂量下的疗效与 100 mg/kg 奥拉帕尼相当 [2]。
在同一模型中，药效学分析证实肿瘤内 PARylation 持续降低（剂量 ≥1 mg/kg 时抑制率 ≥95%），与肿瘤消退一致 [2]。
在 BRCA1 突变型 SUM149PT TNBC 异种移植瘤中，Saruparib（每日 0.1-1 mg/kg）与卡铂（每周一次）联合用药显示出叠加疗效，且未增加毒性 [1]。
在大鼠模型中，Saruparib 每日以预测有效剂量给药 2 周，未引起血红蛋白、外周血网织红细胞或髓内红系前体细胞的减少，这与双重 PARP1/2 抑制剂奥拉帕尼导致 50% 血红蛋白减少的情况形成鲜明对比 [1][2]。

化合物偶联和竞争性亲和力下拉实验[2]
\nPARP亲和探针通过共价键固定在琼脂糖珠上，所用伯胺化合物101（制备方法见合成实验部分）和羧基如前所述¹⁰。将1 mL NHS活化的琼脂糖和化合物101（2 μmol/mL）在DMSO中平衡。加入15 μL三乙胺启动偶联反应，混合物在黑暗条件下于摇床上孵育20小时。加入50 μL氨基乙醇封闭琼脂糖珠上的游离NHS基团，并在黑暗条件下于摇床上孵育16-20小时。偶联后的琼脂糖珠经洗涤后，在4 °C下避光保存于异丙醇中。竞争性亲和力下拉实验按先前所述方法进行¹⁰。简而言之，将MDA-MB-436细胞裂解于含有0.8% NP40、50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、5%甘油、1.5 mM MgCl2、150 mM NaCl、1 mM Na3VO4、25 mM NaF、1 mM DTT和HALT蛋白酶抑制剂混合物的裂解液中。将裂解液（每份5 mg总蛋白）与递增浓度的竞争物（测试化合物1-5或Saruparib (AZD5305)）（DMSO溶剂，浓度分别为0.64 nM、3.2 nM、16 nM、80 nM、400 nM、2 µM、10 µM和50 µM）在4°C下于摇床上进行45分钟的预孵育。随后，将裂解液与磁珠在4°C下孵育30分钟。洗涤磁珠并通过离心收集。为了评估裂解液中蛋白质的去除程度，使用新鲜磁珠和DMSO对照的流出液进行第二次下拉实验。¹⁰ 将结合的蛋白质在50 mM四乙胺四氢硼酸盐（TEAB）存在下，用胰蛋白酶（2 μg）于37°C进行磁珠上消化12小时。肽段用TMT 10-plex标记，合并成一个样品，然后使用高pH反相高效液相色谱（HPLC，Agilent 1200）在Gemini C18柱（5 μm，110 Å，150 × 2 mm；Phenomenex）上进行离线分级分离，流动相A为20 mM氢氧化铵水溶液，流动相B为20 mM氢氧化铵乙腈溶液。将所得的96个馏分以非连续的方式合并为8个馏分，用于后续的质谱分析。\n\n

---

\n\n使用TIRF显微镜（M&M）进行结合实验[2]
\n为了进行表面固定，采用化学生物素化修饰全长PARP1和PARP2。简而言之，将蛋白质与NHS-PEG12-生物素以1:4的比例孵育4小时。通过SEC去除残留试剂。使用S21 1:1:5的NH4:H2O2:H2O混合物清洗适用于显微镜的384孔玻璃板，加热至约80℃，然后用超纯水（MQ）充分洗涤。为了消除蛋白质和探针的非特异性结合，在加入预混的生物素化PARP1/2和中性链霉亲和素（浓度为1:1，孵育时间>2小时）之前，先用10 μg/mL的PLL-g-PEG-生物素（SuSoS）对表面进行功能化修饰（过夜孵育）。为了测定亲和力，将所有化合物进行3倍稀释，并与Alexa647探针（内部定制合成）混合，最终浓度为2.5 nM，然后加入孔中。由于化合物结合动力学缓慢且效力高，所有样品均孵育>4小时以达到平衡。仅使用探针进行3倍稀释，以确定探针的Kd值，从而计算Ki值。为了测定停留时间，在每个孔中加入500 nM的化合物，待其达到平衡后，使用洗板机（BioTek）进行充分洗涤，然后加入探针。将样品板迅速转移至全内反射荧光显微镜（TIRF）进行延时成像，采集速率为5分钟/帧，以最大程度地减少漂白。使用安装在Ti Eclipse倒置显微镜上的60倍油浸物镜（NA=1.49）对样品进行成像，该显微镜配备Cy5滤光片组、CoolLED pE4000照明系统（635 nm照明）和Orca Flash 4.0 CMOS相机。每个样品采集多张图像（200×200 µm²），所有图像均采用相同的照明条件（曝光时间100 ms）和聚焦方式（通过完美聚焦系统）。通过量化图像强度来确定稳态结合水平，并将其拟合到1:1结合模型以确定IC50值。

---

使用重组全长人PARP1 (6 nM) 或PARP2 (6 nM) 与荧光探针 (2 nM) 在 50 mM Tris pH 8、0.001% Triton X-100、10 mM MgCl2、150 mM NaCl、<1% DMSO 的缓冲液中孵育4小时，进行PARP1和PARP2荧光各向异性结合实验。将测试化合物进行系列稀释后加入；测量各向异性以确定IC50值。对于PARP3，使用100 nM蛋白和6 nM探针；对于PARP5a (TNKS1)，使用160 nM蛋白和6 nM探针；对于PARP6，使用重组GST-PARP6 [2]。
基于全内反射荧光 (TIRF) 显微镜的结合实验：将PARP1或PARP2以低密度固定在功能化表面上。将一系列稀释的抑制剂与荧光探针混合，并加入到固定化的蛋白质中；孵育 4 小时以上以达到平衡后采集图像。结合强度拟合到 1:1 模型以确定 IC50，并结合探针的 Kd 值计算 Ki 值。通过延时成像的洗脱实验，将探针结合恢复拟合到单指数衰减曲线，从而估算停留时间。Saruparib 在 PARP1 上的停留时间为 17 小时 [2]。
化学蛋白质组学：将 MDA-MB-436 细胞裂解液与 PARP 亲和基质和不同浓度的 Saruparib（或对照抑制剂）孵育。洗脱结合的蛋白质，并通过质谱进行鉴定；通过竞争曲线确定相对结合亲和力（表观 Kd）[2]。

使用 Multidrop Combi 系统，将 40 μL DLD-1 细胞分别以 5000 个细胞/mL 和 2.5 × 10⁴ 个细胞/mL 的密度接种到 384 孔板中，培养基为完全培养基。然后将培养板置于 37 °C、5% CO₂ 的条件下培养过夜。在第 0 天，使用 Multidrop Combi 系统向培养板中加入 Sytox Green（5 μL，2 μM）和皂苷（10 μL，0.25% 原液），并在室温下孵育 3 小时以上。然后用黑色粘性盖密封培养板。使用配备 4× 物镜的 Cell Insight Focused 成像系统对细胞进行成像。使用 Echo 555 成像系统加入 AZD5305，并将混合物置于 37 °C、5% CO₂ 的条件下孵育 7 天。第 8 天：向培养板中加入 Sytox Green（5 μL，2 μM）和皂苷（10 μL，0.25% 原液）。用黑色粘性盖密封培养板，并在室温下孵育 3 小时以上。使用 4× Objective Cell Insight 读取每个细胞。

---

造血毒性试验[1]
所有抑制剂均用 DMSO 稀释至 3 mM（他拉唑帕尼）或 10 mM（化合物 25/Saruparib (AZD5305)），并储存在氮气保护下。CD34+ 造血干细胞和祖细胞在添加了 25 ng/mL SCF、50 ng/mL TPO 和 50 ng/mL Flt3-L 的 StemSpan SFEM II 培养基中，于 37 °C、5% CO2 条件下培养过夜。次日，将细胞重悬于 CellExpand 悬浮扩增培养液 BFU 中，以每孔 500 个细胞的密度接种于 96 孔板中，并设置技术重复，分别用载体或一系列浓度的化合物处理。孵育 5 天后，使用 CellTiter-Glo 2.0 检测每孔活细胞数，并在 Envision 酶标仪上进行发光读数。数据以载体对照组进行标准化，并使用 GraphPad Prism (v9) 软件进行非线性回归（曲线拟合）分析，生成剂量-反应曲线。

---

DLD-1 BRCA2 突变细胞增殖实验：将 DLD-1 细胞 (BRCA2 -/-) 接种于 96 孔板中，并用系列稀释的 Saruparib 处理 7 天。使用发光细胞活力检测法（例如 CellTiter-Glo）测定细胞活力。 IC50值由剂量反应曲线计算得出（化合物25的IC50值为3 nM）[2]。
人造血干/祖细胞（HSPC）毒性试验：将CD34+造血干/祖细胞培养于支持其增殖和分化的培养基中。用不同浓度的Saruparib或talazoparib处理细胞5天。通过流式细胞术或代谢试验评估细胞活力。化合物4（talazoparib）的IC50值为27 nM，而Saruparib未达到IC50值，在100 nM浓度下细胞活力为46%，在10 μM浓度下为38%[2]。
这些参考文献中未描述其他细胞试验（例如，Western blot、细胞凋亡检测）。

动物从随机分组后的第二天开始接受治疗。Saruparib (AZD5305)和olaparib (AZD2281) 均采用灌胃法给药，每日一次 (QD)，最终剂量为 10 mL/kg。Olaparib 的配制溶液为 10% DMSO (Sigma) 和 30% Kleptose。Saruparib (AZD5305) 的配制溶液为 pH 3.5–4 的水/HCl 溶液。卡铂在给药当天新鲜配制，并以 10 mL/kg 的最终剂量进行腹腔注射。卡铂的配制溶液为 0.85% 生理盐水。在Xentech的研究中，卡铂原液（Teva或Sandoz）用0.9% NaCl溶液稀释至最终浓度。[3]

---

在单药治疗研究中，大鼠每日口服1 mg/kg的Saruparib (AZD5305)或赋形剂[0.5% w/v羟丙基甲基纤维素(HPMC)/0.1% Tween 80水溶液，pH值调节至3-3.2]，或57 mg/kg的尼拉帕尼或赋形剂（0.5% w/v HPMC），或100 mg/kg的奥拉帕尼（与0.5% w/v HPMC、0.1% Tween 80共同给药，因为这是联合治疗研究中的单药治疗组），或赋形剂（0.5% w/v HPMC/0.1% Tween 80水溶液），持续14天。
在联合治疗研究中，大鼠接受1每日给予大鼠 100 mg/kg 的 Saruparib (AZD5305)、100 mg/kg 的奥拉帕尼或赋形剂。在为期 14 天的研究中，大鼠于第 1 天接受单次 30 mg/kg 卡铂或赋形剂（0.9% w/v 生理盐水）联合给药。在为期 42 天的双周期研究中，大鼠于第 1 天和第 22 天接受单次 40 mg/kg 卡铂或赋形剂联合给药。卡铂或赋形剂对照通过单次缓慢（超过 1 分钟）经尾侧静脉推注给药，随后立即给予赋形剂对照或受试药物。[3]

---

为了对 Saruparib (AZD5305)、尼拉帕尼和奥拉帕尼进行毒代动力学分析和血液学分析，在不同时间点通过尾静脉采血采集血样。所有动物在整个研究过程中均接受监测，并在第15天或第42天处死，即末次给药后约24小时。骨髓（左侧股骨）在处理前用10%中性缓冲福尔马林固定，然后切片并用苏木精-伊红（H&E）染色进行组织病理学评估。右侧股骨用于流式细胞术分析骨髓祖细胞群。[3]

---

本研究使用皮下移植HBCx-17 PDX肿瘤（BRCA1突变型三阴性乳腺癌）的雌性裸鼠（balb/c nu/nu）。当肿瘤体积达到约0.1 cm³时，将小鼠随机分组（n未指定，通常每组8-10只），并每日灌胃给予Saruparib，剂量分别为0.03、0.1、1或10 mg/kg，持续5周。论文中未明确描述载体，但通常情况下，AZD5305 的载体为 1% 羟乙基纤维素的 pH 4.5 乙酸铵缓冲液（如 S49076 所述，但可能类似）。奥拉帕尼作为对照药物，每日口服一次，剂量为 100 mg/kg。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积；记录体重。肿瘤消退百分比相对于基线计算 [2]。
在药效学研究中，于单次给药后指定时间点收集肿瘤，裂解后，通过 ELISA 或 Western blot 检测 PARylation 水平 [2]。
在与卡铂联合用药的研究中，用沙鲁帕尼（0.1-1 mg/kg，每日一次，口服）和/或卡铂（每周一次，腹腔注射）治疗携带 SUM149PT 异种移植瘤的雌性裸鼠 [1]。

为了将 Saruparib (AZD5305) 的抗肿瘤疗效与其在 MDA-MB-436 模型中的稳态药代动力学 (PK) 相关联（图 3A），在给药后第 7 天的不同时间点采集血浆样本。在最大疗效剂量组（≥0.1 mg/kg，肿瘤消退率 >90%；图 3A）中，Saruparib (AZD5305) 的游离血浆浓度在 24 小时给药间隔内均高于 DLD-1 BRCA2−/− 细胞集落形成试验的 IC95 (0.0064 μmol/L)（图 4B）。相比之下，在达到 40% 消退率的 0.03 mg/kg 组中，Saruparib (AZD5305) 的游离血浆浓度仅在约 17 小时内高于 IC95；在无效组（0.01 mg/kg）中，游离血浆中沙鲁帕尼（AZD5305）的浓度未达到IC95。这些数据与维持高且持续的靶点结合以实现最大疗效的要求相符。[2]

---

化合物25 [沙鲁帕尼（AZD5305）]的体内临床前药代动力学特征已在小鼠、大鼠、犬和食蟹猴中测定（表7）。化合物25在小鼠、大鼠、犬和猴中均表现出极低的血浆清除率（CLp），分别为0.23、1.1、0.33和0.84 mL/min/kg，且稳态分布容积（Vss）也普遍较低，分别为0.17、0.38、0.30和0.38 L/kg。相应的血浆半衰期分别为 8.0、4.6、10 和 7.1 小时。化合物 25 在所有物种中均显示出较高的口服生物利用度，这与其较低的肝清除率和较高的吸收分数相符。由于其游离清除率 ≤34 mL/min/kg，结合其高活性，预计其体内有效剂量较低；同时，基于同样较低的体外 CLint 值，预测该药物对人体也有效。[1]
在临床前动物和人体的肝细胞中，对化合物 25 的代谢清除途径进行了体外研究。与较低的肝细胞 CLint 值一致，代谢物的生成有限；然而，观察到几种代谢物，主要来源于甲基羧酰胺的连续氧化，导致甲基的丢失，并随后进一步代谢为羧酸。此外，还观察到其他非局部氧化反应（详见补充信息）。 [1]

---

Saruparib在临床前动物模型中表现出优异的口服生物利用度和低血浆清除率。小鼠：CLp = 0.23 mL/min/kg，Vss = 0.17 L/kg，t1/2 = 8.0 h，F = 77%，血浆游离分数 (fu) = 0.073，游离 CL = 3.2 mL/min/kg。大鼠：CLp = 1.1 mL/min/kg，Vss = 0.38 L/kg，t1/2 = 4.6 h，F = 13%，fu = 0.032，游离 CL = 34 mL/min/kg。犬：CLp = 0.35 mL/min/kg，Vss = 0.30 L/kg，t1/2 = 10 h，F = 27%，fu = 0.17，游离 CL = 2.1 mL/min/kg。食蟹猴：CLp = 0.84 mL/min/kg，Vss = 0.38 L/kg，t1/2 = 7.1 h，F = 22%，fu = 0.043，游离 CL = 20 mL/min/kg [2]。体外代谢清除率：人肝微粒体 (HLM) 固有清除率 (CLint) <3 μL/min/mg；人肝细胞 CLint <1 μL/min/10^6 个细胞。肝细胞代谢物鉴定显示代谢有限，主要表现为甲基羧酰胺基团的连续氧化，导致甲基丢失并进一步氧化为羧酸。此外还观察到其他无法定位的氧化反应[2]。
这些参考文献中未报告细胞色素P450相互作用或P-gp底物数据，但相关综述指出NMS-03305293（另一种PARP1抑制剂）并非P-gp底物；AZD5305未在此背景下进行讨论[1][2]。

由于骨髓毒性和外周血不良反应是PARP1/2双重抑制剂常见的临床副作用，我们希望尽早了解化合物25 [Saruparib (AZD5305)] 的潜在血液学毒性。为了评估这一点，我们采用体外血液学毒性试验，比较了化合物25 [Saruparib (AZD5305)] 和化合物4在治疗5天后对增殖和分化造血干/祖细胞 (HSPC) 活力的影响。化合物4显示出HSPC活力的剂量依赖性下降，初始浓度为14 nM，IC50为27 nM，最大效应为活力降低1%（图5，红色数据）。相比之下，尽管化合物 25 在浓度低至 3 nM 时即可导致细胞活力下降，但未观察到剂量依赖性效应，因此无法确定其 IC50 值。在 100 nM 的浓度下，46% 的细胞仍保持活力（相比之下，化合物 4 仅为 10%），而在浓度高达 10 μM 时，细胞活力几乎没有进一步下降，最大活力为 38%。因此，这些数据表明，化合物 25 对培养的人造血干细胞的毒性低于化合物 4。[2] 在大鼠临床前模型中，与双重 PARP1/2 抑制剂相比，Saruparib (AZD5305) 显示出更低的血液毒性。 [3] 为了确定Saruparib (AZD5305) 的 PARP1 选择性是否能够减轻在大鼠临床前模型中观察到的双重 PARP1/2 抑制剂的血液毒性，我们进行了一项大鼠对比研究 (16, 17)。Saruparib (AZD5305) 和临床非 PARP1 选择性 PARP 抑制剂每日一次给药，持续 14 天：AZD5305 1 mg/kg，每日一次；奥拉帕尼 100 mg/kg，每日一次；尼拉帕尼 57 mg/kg，每日一次。AZD5305 和奥拉帕尼的暴露剂量旨在覆盖其各自细胞的 IC95 值约 24 小时（图 5A；虚线表示 IC95）。 57 mg/kg 尼拉帕尼剂量产生的游离 AUC (0–24) 为 13.7 μmol/L/小时，这与报道的 300 mg 临床剂量产生的临床游离 AUC 11.4 μmol/L/小时 (18) 基本一致。随后进行了系列外周血血液学分析（图 5B；补充图 S5A–S5C），并在实验结束时通过流式细胞术直接评估了骨髓谱系前体细胞（图 5C；补充图 S5D）。与已报道的奥拉帕尼治疗后贫血的临床结果一致（14, 19, 20），我们观察到与对照组相比，外周血中网织红细胞（未成熟红细胞）数量持续下降，尽管总红细胞计数和血红蛋白水平的变化仅在这项为期14天的研究中开始出现（图5B；补充图S5A）。其他血细胞谱系未观察到显著变化（补充图S5A）。与外周血中观察到的变化一致，骨髓谱系前体细胞的流式细胞术分析显示红系前体细胞数量减少，而髓系和血小板前体细胞未受影响（图5C；补充图S5D）。体外血液毒性：与他拉唑帕尼（双重PARP1/2抑制剂）相比，沙鲁帕尼对人CD34+造血干/祖细胞的毒性显著降低。他拉唑帕尼降低细胞活力，IC50 = 27 nM，最大效应为1%的细胞活力；沙鲁帕尼未显示剂量依赖性毒性，在100 nM浓度下细胞活力为46%，在10 μM浓度下为38%（最大效应）。无法确定IC50值[2]。
在为期2周的大鼠毒理学研究中，每日以预测有效剂量给予Saruparib，未引起血红蛋白、网织红细胞或红系前体细胞的减少，而奥拉帕尼则导致血红蛋白减少50%。在所有小鼠疗效研究中，体重减轻均<5%[1][2]。
这些参考文献中未报告其他毒性数据（例如，LD50、器官毒性、高钙血症、遗传毒性）。

[1]. Cancer J . 2021 Nov-Dec;27(6):521-528.

[2]. J Med Chem . 2021 Oct 14;64(19):14498-14512.

[3]. Clin Cancer Res . 2022 Nov 1;28(21):4724-4736.

沙鲁帕尼是一种口服生物利用度高的聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）抑制剂，具有潜在的化疗增敏/放疗增敏和抗肿瘤活性。给药后，沙鲁帕尼选择性地靶向并结合PARP，阻断PARP介导的单链DNA断裂修复（通过碱基切除修复途径）。这会增强DNA链断裂的积累，促进基因组不稳定，最终导致细胞凋亡。这可能增强DNA损伤药物的细胞毒性。PARP催化核蛋白的翻译后ADP-核糖基化修饰，这些修饰可发出信号并募集其他蛋白质来修复受损的DNA；单链DNA断裂会激活PARP。PARP介导的修复途径在多种癌细胞类型中存在异常调控。聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）抑制剂彻底改变了晚期卵巢癌的治疗格局，并拓展了其他肿瘤类型（包括乳腺癌、胰腺癌和前列腺癌）的治疗选择。然而，尽管PARP抑制剂在目前的治疗模式中取得了成功，但由于原发性耐药以及各种获得性耐药机制导致的疾病进展，并非所有患者都能从中获益。此外，PARP抑制剂的毒性，主要是骨髓抑制，会导致部分接受单药治疗的患者出现不良反应，并限制了其在某些合适的联合治疗方案（例如化疗和靶向治疗）中的应用。目前已获批准的PARP抑制剂对PARP1和PARP2酶的疗效大致相当。本文综述了已进入I期临床试验的新一代选择性PARP1抑制剂的研发进展。这些抑制剂在临床前研究中展现出更高的PARP1抑制效力和极高的PARP1选择性——这些特性有望提高临床疗效并拓宽治疗窗口。已启动首次人体临床试验，以确定这些新型药物的安全性、耐受性、II期推荐剂量和抗肿瘤活性。如果成功，下一代选择性PARP1药物有望进一步扩大癌症治疗的疗效，超越现有PARP抑制剂疗法。[1]

---

聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）抑制剂已被批准用于治疗同源重组修复缺陷型肿瘤，包括携带BRCA突变的肿瘤。然而，一些PARP抑制剂与一线化疗联合使用时疗效不佳，通常是由于血液毒性重叠所致。目前已获批准的PARP抑制剂对PARP1的选择性低于PARP2和PARP家族的其他16个成员，我们推测这可能是其毒性的原因之一。近期文献表明，在BRCA突变的情况下，PARP1抑制和PARP1-DNA捕获是疗效的关键。本文描述了化合物 25 (AZD5305) 的结构和性质。AZD5305 是一种高效且选择性极高的 PARP1 抑制剂和 PARP1-DNA 捕获剂，在 BRCA 突变的 HBCx-17 PDX 模型中展现出优异的体内疗效。化合物 25 对 PARP1 的选择性远高于 PARP 家族的其他成员，具有良好的二级药理学和理化性质，在临床前动物模型中表现出优异的药代动力学特征，并且对体外培养的人骨髓祖细胞的影响极小。[2] 目的：我们假设单独抑制和捕获 PARP1 即可实现抗肿瘤活性。特别是，我们旨在实现对 PARP2 的选择性，因为 PARP2 已被证明在动物模型中造血/干细胞祖细胞的存活中发挥着重要作用。我们开发 AZD5305 的目的是提高临床疗效并拓宽治疗窗口。这种新一代PARP抑制剂（PARPi）有望彻底改变第一代PARPi的临床疗效，尤其是在联合治疗方面。实验设计：在体外测试了AZD5305的PARylation抑制、PARP-DNA捕获和抗增殖能力。在小鼠异种移植和PDX模型中评估了其体内疗效。在包括单药治疗和联合治疗在内的大鼠模型中评估了其血液学毒性。结果：AZD5305是一种高效且选择性极高的PARP1抑制剂，其对PARP1的选择性比对PARP2高500倍。AZD5305抑制DNA修复缺陷细胞的生长，对其他细胞的影响极小或无影响。与第一代PARP抑制剂不同，在预测的临床有效剂量下，AZD5305对临床前大鼠模型的血液学参数影响甚微。每日一次接受≥0.1 mg/kg AZD5305治疗的动物模型，其肿瘤消退程度和缓解持续时间均优于每日一次接受100 mg/kg奥拉帕尼治疗的动物模型。结论：AZD5305能够高效且选择性地抑制PARP1，从而产生优异的抗增殖活性，并对DNA修复缺陷细胞和DNA修复功能正常的细胞具有前所未有的选择性。这些数据证实了以下假设：单独靶向PARP1既能保留非选择性PARP抑制剂的治疗优势，又能降低血液毒性风险。AZD5305目前正在进行I期临床试验[3]。

---

Saruparib (AZD5305) 是一种新一代PARP1选择性抑制剂和DNA捕获剂，旨在避免PARP2介导的血液毒性。与第一代PARP抑制剂（奥拉帕尼、卢卡帕尼、尼拉帕尼、他拉唑帕尼、维利帕尼）对PARP1和PARP2的选择性较低不同，Saruparib在基于TIRF的结合实验中对PARP1的选择性比PARP2高10,000倍以上，在荧光偏振实验中也高500倍以上。它能将PARP1捕获在DNA上，但不能捕获PARP2[2]。
在BRCA突变癌细胞中，合成致死效应完全由PARP1的抑制/捕获驱动，PARP2对疗效并非必需，但有助于靶向血液毒性。选择性 PARP1 抑制有望拓宽治疗窗口，并实现与化疗更安全的联合治疗 [1][2]。
Saruparib 进入 I 期临床试验 PETRA (NCT04644068)：一项首次人体 I/IIa 期研究，评估 Saruparib 作为单药疗法在具有同源重组缺陷 (HRD) 基因组特征的晚期乳腺癌、卵巢癌和去势抵抗性前列腺癌患者中的安全性、药代动力学、药效学和初步疗效。剂量递增试验（约45例患者）之后是剂量扩展队列[1]。
在临床前联合用药研究中，Saruparib与卡铂联用在BRCA1突变型三阴性乳腺癌异种移植瘤中显示出叠加疗效，且未加剧血液毒性，提示其具有与化疗联合应用的潜力[1]。
其化学结构为：5-{4-[(7-乙基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-3-基)甲基]哌嗪-1-基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺。它具有萘啶酮核心结构，并通过哌嗪连接吡啶甲酰胺基团。其结合模式包括通过桥接水分子与His862形成氢键，以及通过甲酰胺NH与Ile879形成氢键[2]。

C22H26N6O2

406.4808

406.21

C, 65.01; H, 6.45; N, 20.68; O, 7.87

2589531-76-8

155586901

Off-white to light yellow solid powder

1.1

90.5

2

6

5

30

660

0

WQAVGRAETZEADU-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H26N6O2/c1-3-16-11-19-20(26-21(16)29)10-15(12-24-19)14-27-6-8-28(9-7-27)17-4-5-18(25-13-17)22(30)23-2/h4-5,10-13H,3,6-9,14H2,1-2H3,(H,23,30)(H,26,29)

5-[4-[(7-ethyl-6-oxo-5H-1,5-naphthyridin-3-yl)methyl]piperazin-1-yl]-N-methylpyridine-2-carboxamide

AZD-5305; AZD5305; 2589531-76-8; Saruparib; 16MZ1V3RBT; AZD-5305 [WHO-DD]; example 4 [WO2021013735]; 5-(4-((7-Ethyl-6-oxo-5,6-dihydro-1,5-naphthyridin-3-yl)methyl)piperazin-1-yl)-N-methylpicolinamide; AZD 5305

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 12.5~20 mg/mL (30.8~49.2 mM)
Ethanol: 2 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 0.56 mg/mL (1.38 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 5.6 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 0.56 mg/mL (1.38 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 5.6 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 0.56 mg/mL (1.38 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 5.6 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

配方 4 中的溶解度: 5%DMSO+ 40%PEG300+ 5%Tween 80+ 50%ddH2O: 0.8mg/ml (1.97mM)

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。