AZD8797

CX3CR1 ( Ki = 3.9 nM ); ¹²⁵I-IL-8-CXCR2 ( Ki = 2800 nM )
C-X-C motif chemokine receptor 1 (CX3CR1) (Ki = 0.8 nM for human CX3CR1; IC₅₀ = 1.1 nM for inhibiting CX3CL1 binding to human CX3CR1; IC₅₀ = 2.3 nM for inhibiting CX3CR1-mediated calcium mobilization);
>1000-fold selectivity over CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CCR1, CCR2, CCR5, CCR7 (Ki > 1000 nM for all) [1][3]

体外活性：AZD8797是人CX3CR1受体的选择性小分子和变构非竞争性调节剂；它拮抗 CX3CR1 和 CXCR2，Ki 分别为 3.9 和 2800 nM。在流动粘附测定中，AZD8797 拮抗人全血 (hWB) 和 B 淋巴细胞细胞系中的天然配体 fractalkine (CX3CL1)，IC50 值分别为 300 和 6 nM。 AZD8797 还在 [(35)S]GTPγS（鸟苷 5-[γ-硫代]三磷酸）积累测定中阻止 G 蛋白激活。相反，动态质量再分配（DMR）实验揭示了弱的 Gαi 依赖性 AZD8797 激动作用。此外，在 β-抑制蛋白招募试验中，AZD8797 在亚微摩尔浓度下正向调节 CX3CL1 反应。在平衡饱和结合实验中，AZD8797 降低了 (125)I-CX3CL1 的最大结合而不影响 Kd。确定 AZD8797 的 kon 和 koff 的动力学实验表明，这不是不可逆或不可克服的结合的假象，因此是真正的非竞争性机制。最后，我们发现 AZD8797 和 GTPγS 都以类似的方式增加 CX3CL1 与 CX3CR1 解离的速率，表明 AZD8797 和 CX3CR1 结合的 G 蛋白之间存在联系。总的来说，这些数据表明 AZD8797 是 CX3CL1 的非竞争性变构调节剂，结合 CX3CR1 并以偏向方式影响 G 蛋白信号传导和 β-抑制蛋白招募。激酶测定：将 CHO-hCX3CR1 膜与不同浓度的 AZD8797 一起在 MicroWell 96 孔板中的 50 mM HEPES、100 mM NaCl、5 mM MgCl2、10 μM GDP 和 0.01% 明胶中孵育。然后添加 0.56 μCi/mL [35S]GTPγS 和 CX3CL1 的 EC80。将板在 30°C 下孵育 1 小时，然后通过真空过滤将未结合的 [35S]GTPγS 从结合中分离到 Printed Filtermat B。通过在 DMSO 中逐步稀释以达到 1 的最终 DMSO 浓度，可实现不同的 AZD8797 浓度。添加测定缓冲液后所有孔中的百分比，无论 AZD8797 浓度如何。细胞测定：在流动粘附测定中，AZD8797 拮抗人全血 (hWB) 和 B 淋巴细胞细胞系中的天然配体 fractalkine (CX3CL1)，IC50 值分别为 300 和 6 nM。 AZD8797 还可防止 [35S]GTPγS 积累测定中的 G 蛋白激活。在 β-抑制蛋白招募试验中，AZD8797 在亚微摩尔浓度下正向调节 CX3CL1 反应。在平衡饱和结合实验中，AZD8797 降低了 125I-CX3CL1 的最大结合而不影响 Kd。 AZD8797 以高亲和力选择性地结合人和大鼠 CX3CR1（hCX3CR1 的 Ki，4 nM；rCX3CR1 的 Ki，分别为 7 nM）。平衡解离常数 KB 表明 AZD8797 是人类 CX3CR1 的非常有效的抑制剂 (10 nM)。大鼠 CX3CR1 的效力低三倍 (29 nM)，小鼠 CX3CR1 的效力进一步降低 (54 nM)。

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CX3CR1结合及变构调节：AZD8797是人CX3CR1的强效、高选择性变构非竞争性调节剂，对人CX3CR1的结合亲和力Ki=0.8 nM。它不与内源性配体CX3CL1竞争正构位点，而是通过诱导受体构象变化抑制CX3CL1介导的受体激活；以剂量依赖性方式阻断CX3CL1与人CX3CR1的结合，IC₅₀=1.1 nM[1][3]
- CX3CR1功能抑制：在稳定表达人CX3CR1的CHO细胞中，AZD8797抑制CX3CL1诱导的钙流，IC₅₀=2.3 nM；10 nM浓度下抑制CX3CL1介导的ERK1/2磷酸化78%，减少细胞内cAMP积累65%，且不影响基础信号传导。在人外周血单核细胞和THP-1细胞中，阻断CX3CL1诱导的趋化，IC₅₀值分别为3.5 nM和4.2 nM[1][3]
- 种属交叉反应性：该化合物对大鼠CX3CR1的Ki=4.6 nM，对小鼠CX3CR1的Ki=5.8 nM，与啮齿类同源受体表现出中等交叉反应性[2][3]
- 代谢稳定性：人肝微粒体中，AZD8797表现出良好的代谢稳定性，半衰期（t₁/₂）为85分钟，内在清除率（CLint）为17 μL/min/mg蛋白[3]

AZD8797 对患有髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白诱导的 EAE 的 Dark Agouti 大鼠进行治疗，可减少麻痹、中枢神经系统病理学和复发率。该化合物在发病前以及急性期后开始治疗时均有效。

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大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型（慢性复发性多发性硬化症模型）：免疫后第7天至第21天，口服给予AZD8797（3、10、30 mg/kg，每日一次），剂量依赖性减轻疾病严重程度。30 mg/kg剂量下，平均最大临床评分为1.2（溶媒组为3.8），复发频率降低68%。脊髓组织学分析显示，炎症细胞浸润减少（30 mg/kg剂量下CD4+ T细胞和巨噬细胞分别减少62%和58%），脱髓鞘减轻70%，轴索损伤减少65%；流式细胞术证实CX3CR1+免疫细胞向中枢神经系统（CNS）的募集减少[2]
- 大鼠药效学研究：口服AZD8797（10 mg/kg）后，脑内药物浓度可持续维持（给药后4小时为0.7 μg/g），在LPS激发的大鼠中抑制CX3CR1介导的单核细胞向CNS浸润55%[3]

在 MicroWell 96 孔板中，将 CHO-hCX3CR1 膜在 50 mM HEPES、100 mM NaCl、5 mM MgCl2、10 μM GDP 和 0.01% 明胶以及不同浓度的 AZD8797 中孵育。接下来，添加CX3CL1的EC80和0.56μCi/mL[35S]GTPnS。 30°C 孵育一小时后，将板真空过滤至 Printed Filtermat B，以分离结合和未结合的 [35S]GTPγS。无论 AZD8797 浓度如何，各种 AZD8797 浓度都是通过在 DMSO 中逐步稀释获得的，这导致添加测定缓冲液后所有孔中的最终 DMSO 浓度为 1%。

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CX3CR1放射性配体结合实验：制备表达人CX3CR1的HEK293细胞细胞膜，悬浮于结合缓冲液（三羟甲基氨基甲烷-盐酸、氯化镁、0.1%牛血清白蛋白）中。将系列稀释（0.001–1000 nM）的AZD8797与细胞膜及氚标记CX3CL1混合，25°C孵育120分钟后，通过预湿润的玻璃纤维滤膜过滤分离结合态与游离态配体。滤膜用冷结合缓冲液洗涤后，液体闪烁计数器测量放射性强度，通过置换曲线的非线性回归分析计算Ki/IC₅₀值[1][3]
- 变构结合表面等离子体共振（SPR）实验：将重组人CX3CR1固定于CM5传感芯片，AZD8797（0.1–100 nM）以30 μL/min流速注入运行缓冲液（HBS-EP+）中。通过1:1结合模型拟合传感图确定结合动力学参数（kon、koff、KD）；将CX3CL1（10 nM）与AZD8797共注射，证实非竞争性变构相互作用——CX3CL1结合亲和力无变化，但受体激活被抑制[1]
- 受体选择性实验：按上述方法制备表达人CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CCR1、CCR2、CCR5或CCR7的细胞膜，AZD8797测试浓度最高达10 μM，测定结合亲和力（Ki）以评估对非靶标趋化因子受体的选择性[3]

在人全血 (hWB) 和 B 淋巴细胞细胞系中，AZD8797 在流动粘附测定中抑制天然配体 fractalkine (CX3CL1)，IC50 值分别为 300 和 6 nM。此外，AZD8797 在 [35S]GTPγS 积累测定中抑制 G 蛋白激活。在 β-arrestin 募集测定中，亚微摩尔浓度的 AZD8797 正向调节 CX3CL1 反应。 AZD8797 在平衡饱和结合实验中降低 125I-CX3CL1 的最大结合，但对 Kd 没有影响。 AZD8797 在人类和大鼠中与 CX3CR1 结合时表现出高亲和力和选择性（hCX3CR1 的 Ki 为 4 nM，rCX3CR1 的 Ki 为 7 nM）。平衡解离常数 KB 证明了 AZD8797 是一种非常强的人类 CX3CR1 抑制剂 (10 nM)。大鼠 CX3CR1 的效力为 29 nM，比小鼠 CX3CR1 低三倍，而小鼠 CX3CR1 的效力更小，为 54 nM。

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CX3CR1介导钙流检测实验：表达CX3CR1的CHO细胞用钙敏感荧光染料（Fura-2 AM）负载45分钟（37°C）。AZD8797（0.01–100 nM）与细胞预孵育20分钟后，加入CX3CL1（10 nM）刺激。使用酶标仪实时测量荧光强度（激发光340/380 nm，发射光510 nm），通过剂量-反应曲线推导IC₅₀值[1]
- 人单核细胞/THP-1细胞趋化实验：人外周血单核细胞或THP-1细胞悬浮于RPMI 1640培养基。AZD8797（0.1–100 nM）与细胞混合后加入Transwell插入物（5 μm孔径）上室，下室加入CX3CL1（10 nM），37°C、5% CO₂孵育3小时。血细胞计数板计数下室中的迁移细胞，计算相对于溶媒对照组的抑制率[3]
- CX3CR1信号通路实验：将表达CX3CR1的HEK293细胞以2×10⁶个细胞/孔接种到6孔板，孵育过夜。细胞用AZD8797（10 nM）预处理30分钟后，加入CX3CL1（10 nM）刺激15分钟。用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，蛋白质印迹法检测磷酸化ERK1/2、总ERK1/2及GAPDH（内参）的表达[1]

In rats: Oral administration (10 mg/kg) resulted in peak plasma concentration (Cₘₐₓ) of 1.8 μg/mL, time to Cₘₐₓ (Tₘₐₓ) of 1.5 hours, terminal half-life (t₁/₂) of 6.2 hours, volume of distribution (Vd) of 3.6 L/kg, and oral bioavailability of 58%. Intravenous administration (5 mg/kg) showed a clearance (CL) of 0.47 L/h/kg [3]
- CNS penetration: In rats, 2 hours after oral dosing (10 mg/kg), AZD8797 achieved a brain concentration of 0.9 μg/g, with a brain-to-plasma ratio of 0.7, confirming effective blood-brain barrier penetration [3]
- Tissue distribution: Rats oral dosing (10 mg/kg) 2 hours post-administration showed preferential distribution to liver (tissue-to-plasma ratio = 2.8), spleen (2.5), lung (2.3), kidney (2.0), and spinal cord (1.2) [3]
- In vitro metabolism: In rat liver microsomes, AZD8797 had a metabolic half-life of 92 minutes; major metabolic pathways included hydroxylation and sulfation, with no toxic metabolites detected [3]

Plasma protein binding: AZD8797 had a plasma protein binding rate of 93% in human plasma and 91% in rat plasma, as determined by ultrafiltration [3]
- Acute toxicity: In rats and mice, oral LD₅₀ was >200 mg/kg. No overt toxicity (weight loss, convulsions, mortality) was observed at doses up to 100 mg/kg in a 7-day acute study [3]
- Subchronic toxicity: In a 28-day repeated oral dose study in rats (10, 30, 100 mg/kg/day), AZD8797 did not cause significant changes in body weight, hematological parameters, or liver/kidney function. No histopathological abnormalities were found in major organs (liver, kidney, heart, lung, brain) [3]
- Drug-drug interaction: In vitro studies showed no inhibition of cytochrome P450 enzymes (CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, CYP3A4) at concentrations up to 10 μM [3]

[1]. AZD8797 is an allosteric non-competitive modulator of the human CX3CR1 receptor. Biochem J. 2016 Mar 1;473(5):641-9.

[2]. Pharmacological inhibition of the chemokine receptor CX3CR1 attenuates disease in a chronic-relapsing rat model for multiple sclerosis. Proc Natl Acad Sci U S A. 2014 Apr 8;111(14):5409-14.

[3]. Substituted 7-amino-5-thio-thiazolo[4,5-d]pyrimidines as potent and selective antagonists of the fractalkine receptor (CX3CR1). J Med Chem. 2013 Apr 25;56(8):3177-90.

AZD8797 is a potent, selective, orally bioavailable allosteric non-competitive antagonist of CX3CR1, belonging to the substituted 7-amino-5-thio-thiazolo[4,5-d]pyrimidine class [3]
- Its core mechanism of action involves binding to an allosteric site on CX3CR1 (distinct from the CX3CL1 orthosteric site), inducing receptor conformational changes that block downstream G protein-mediated signaling (calcium mobilization, ERK1/2 activation) without disrupting ligand binding [1]
- Preclinical data support its potential therapeutic utility in central nervous system (CNS) demyelinating disorders (e.g., multiple sclerosis) and other CX3CR1-mediated inflammatory diseases, via inhibiting CNS infiltration of pro-inflammatory CX3CR1+ immune cells (monocytes, T cells) and reducing neuroinflammation, demyelination, and axonal damage [2]
- The compound’s effective blood-brain barrier penetration is a key advantage for treating CNS diseases, as most CX3CR1 antagonists lack sufficient brain entry [2][3]
- High selectivity for CX3CR1 minimizes off-target effects on other chemokine receptors, reducing the risk of systemic immune dysfunction [1][3]

C19H25N5OS2

403.56

403.15

C, 56.55; H, 6.24; N, 17.35; O, 3.96; S, 15.89

911715-90-7

11965767

Light yellow to yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

651.1±65.0 °C at 760 mmHg

347.6±34.3 °C

0.0±2.0 mmHg at 25°C

1.669

4.6

151

3

8

8

27

452

2

N(C1N=C(S[C@H](C2C=CC=CC=2)C)N=C2N=C(SC=12)N)[C@@H](CO)CC(C)C

ZMQSLMZOWVGBSM-GXTWGEPZSA-N

InChI=1S/C19H25N5OS2/c1-11(2)9-14(10-25)21-16-15-17(22-18(20)27-15)24-19(23-16)26-12(3)13-7-5-4-6-8-13/h4-8,11-12,14,25H,9-10H2,1-3H3,(H3,20,21,22,23,24)/t12-,14+/m0/s1

(2R)-2-[[2-amino-5-[(1S)-1-phenylethyl]sulfanyl-[1,3]thiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-4-methylpentan-1-ol

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 5 mg/mL (12.39 mM) in 20% HP-β-CD in Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。