AZD8797

CX3CR1 ( Ki = 3.9 nM ); ¹²⁵I-IL-8-CXCR2 ( Ki = 2800 nM )

体外活性：AZD8797是人CX3CR1受体的选择性小分子和变构非竞争性调节剂；它拮抗 CX3CR1 和 CXCR2，Ki 分别为 3.9 和 2800 nM。在流动粘附测定中，AZD8797 拮抗人全血 (hWB) 和 B 淋巴细胞细胞系中的天然配体 fractalkine (CX3CL1)，IC50 值分别为 300 和 6 nM。 AZD8797 还在 [(35)S]GTPγS（鸟苷 5-[γ-硫代]三磷酸）积累测定中阻止 G 蛋白激活。相反，动态质量再分配（DMR）实验揭示了弱的 Gαi 依赖性 AZD8797 激动作用。此外，在 β-抑制蛋白招募试验中，AZD8797 在亚微摩尔浓度下正向调节 CX3CL1 反应。在平衡饱和结合实验中，AZD8797 降低了 (125)I-CX3CL1 的最大结合而不影响 Kd。确定 AZD8797 的 kon 和 koff 的动力学实验表明，这不是不可逆或不可克服的结合的假象，因此是真正的非竞争性机制。最后，我们发现 AZD8797 和 GTPγS 都以类似的方式增加 CX3CL1 与 CX3CR1 解离的速率，表明 AZD8797 和 CX3CR1 结合的 G 蛋白之间存在联系。总的来说，这些数据表明 AZD8797 是 CX3CL1 的非竞争性变构调节剂，结合 CX3CR1 并以偏向方式影响 G 蛋白信号传导和 β-抑制蛋白招募。激酶测定：将 CHO-hCX3CR1 膜与不同浓度的 AZD8797 一起在 MicroWell 96 孔板中的 50 mM HEPES、100 mM NaCl、5 mM MgCl2、10 μM GDP 和 0.01% 明胶中孵育。然后添加 0.56 μCi/mL [35S]GTPγS 和 CX3CL1 的 EC80。将板在 30°C 下孵育 1 小时，然后通过真空过滤将未结合的 [35S]GTPγS 从结合中分离到 Printed Filtermat B。通过在 DMSO 中逐步稀释以达到 1 的最终 DMSO 浓度，可实现不同的 AZD8797 浓度。添加测定缓冲液后所有孔中的百分比，无论 AZD8797 浓度如何。细胞测定：在流动粘附测定中，AZD8797 拮抗人全血 (hWB) 和 B 淋巴细胞细胞系中的天然配体 fractalkine (CX3CL1)，IC50 值分别为 300 和 6 nM。 AZD8797 还可防止 [35S]GTPγS 积累测定中的 G 蛋白激活。在 β-抑制蛋白招募试验中，AZD8797 在亚微摩尔浓度下正向调节 CX3CL1 反应。在平衡饱和结合实验中，AZD8797 降低了 125I-CX3CL1 的最大结合而不影响 Kd。 AZD8797 以高亲和力选择性地结合人和大鼠 CX3CR1（hCX3CR1 的 Ki，4 nM；rCX3CR1 的 Ki，分别为 7 nM）。平衡解离常数 KB 表明 AZD8797 是人类 CX3CR1 的非常有效的抑制剂 (10 nM)。大鼠 CX3CR1 的效力低三倍 (29 nM)，小鼠 CX3CR1 的效力进一步降低 (54 nM)。

AZD8797 对患有髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白诱导的 EAE 的 Dark Agouti 大鼠进行治疗，可减少麻痹、中枢神经系统病理学和复发率。该化合物在发病前以及急性期后开始治疗时均有效。

在 MicroWell 96 孔板中，将 CHO-hCX3CR1 膜在 50 mM HEPES、100 mM NaCl、5 mM MgCl2、10 μM GDP 和 0.01% 明胶以及不同浓度的 AZD8797 中孵育。接下来，添加CX3CL1的EC80和0.56μCi/mL[35S]GTPnS。 30°C 孵育一小时后，将板真空过滤至 Printed Filtermat B，以分离结合和未结合的 [35S]GTPγS。无论 AZD8797 浓度如何，各种 AZD8797 浓度都是通过在 DMSO 中逐步稀释获得的，这导致添加测定缓冲液后所有孔中的最终 DMSO 浓度为 1%。

在人全血 (hWB) 和 B 淋巴细胞细胞系中，AZD8797 在流动粘附测定中抑制天然配体 fractalkine (CX3CL1)，IC50 值分别为 300 和 6 nM。此外，AZD8797 在 [35S]GTPγS 积累测定中抑制 G 蛋白激活。在 β-arrestin 募集测定中，亚微摩尔浓度的 AZD8797 正向调节 CX3CL1 反应。 AZD8797 在平衡饱和结合实验中降低 125I-CX3CL1 的最大结合，但对 Kd 没有影响。 AZD8797 在人类和大鼠中与 CX3CR1 结合时表现出高亲和力和选择性（hCX3CR1 的 Ki 为 4 nM，rCX3CR1 的 Ki 为 7 nM）。平衡解离常数 KB 证明了 AZD8797 是一种非常强的人类 CX3CR1 抑制剂 (10 nM)。大鼠 CX3CR1 的效力为 29 nM，比小鼠 CX3CR1 低三倍，而小鼠 CX3CR1 的效力更小，为 54 nM。

[1]. AZD8797 is an allosteric non-competitive modulator of the human CX3CR1 receptor. Biochem J. 2016 Mar 1;473(5):641-9.

[2]. Pharmacological inhibition of the chemokine receptor CX3CR1 attenuates disease in a chronic-relapsing rat model for multiple sclerosis. Proc Natl Acad Sci U S A. 2014 Apr 8;111(14):5409-14.

[3]. Substituted 7-amino-5-thio-thiazolo[4,5-d]pyrimidines as potent and selective antagonists of the fractalkine receptor (CX3CR1). J Med Chem. 2013 Apr 25;56(8):3177-90.

C19H25N5OS2

403.56

403.15

C, 56.55; H, 6.24; N, 17.35; O, 3.96; S, 15.89

911715-90-7

Solid powder

C[C@@H](C1=CC=CC=C1)SC2=NC3=C(C(=N2)N[C@H](CC(C)C)CO)SC(=N3)N

ZMQSLMZOWVGBSM-GXTWGEPZSA-N

InChI=1S/C19H25N5OS2/c1-11(2)9-14(10-25)21-16-15-17(22-18(20)27-15)24-19(23-16)26-12(3)13-7-5-4-6-8-13/h4-8,11-12,14,25H,9-10H2,1-3H3,(H3,20,21,22,23,24)/t12-,14+/m0/s1

(2R)-2-[[2-amino-5-[(1S)-1-phenylethyl]sulfanyl-[1,3]thiazolo[4,5-d]pyrimidin-7-yl]amino]-4-methylpentan-1-ol

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.19 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 5 mg/mL (12.39 mM) in 20% HP-β-CD in Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。