ERα antagonism (IC50 = 0.28 nM); ERα downregulation (IC50 = 0.14 nM); ERα binding (IC50 = 0.82 nM)
ERα (IC50 = 0.28 nM for antagonism; IC50 = 0.14 nM for downregulation; IC50 = 0.82 nM for binding; Ki = 0.7 nM)

AZD9496 表现出对 ERα 的结合、下调和拮抗作用，其 IC50 值分别为 0.82 nM、0.14 nM 和 0.28 nM。AZD9496 的 EC50 值为 0.04 nM，可显著抑制 MCF-7 细胞的生长[1]。研究发现，AZD9496 对以下几种核激素受体具有高度选择性：孕激素受体 (PR)，IC50 = 0.54 μM；糖皮质激素受体 (GR)，IC50 = 9.2 μM；雄激素受体 (AR)，IC50 = 30 μM[2]。AZD9496 是一种选择性 ERα 拮抗剂、下调剂和 ER+ 肿瘤细胞生长抑制剂。AZD9496 在体外直接靶向 ERα 以进行下调。 AZD9496 在体外拮抗并下调突变型 ER。[1]化合物 30b (AZD9496) 的整体性质（表 2）与前体化合物 27b 大致相当，同时保持了优异的跨物种药代动力学性质（表 3）。Western blot 实验证实，化合物 30b 能显著降解 ERα，并以化合物 2（氟维司群）和雌二醇 (E2) 作为对照化合物（图 7）。化合物 30b 相对于其他测试的核激素受体具有很高的选择性：雄激素受体 (AR) IC50 = 30 μM；糖皮质激素受体 (GR) IC50 = 9.2 μM；孕激素受体 (PR) IC50 = 0.54 μM（相比之下，雌激素受体 (ERα) IC50 = 0.0008 μM）。 [2]

---

AZD9496 在皮摩尔浓度下对 ERα 和 ERβ 两种亚型均表现出等效的结合力。它可直接靶向 ERα 进行体外下调，并拮抗和下调突变型 ER，包括具有临床意义的 ESR1 突变体（D538G、Y537S）。AZD9496 可降低 ERα 活性（IC50 = 0.282 nM，通过定量下游 PR 活性测定），并抑制 MCF-7 乳腺癌细胞的增殖（IC50 = 0.0398 nM）。它对雄激素受体（AR，IC50 = 30 µM）、糖皮质激素受体（GR，IC50 = 9.2 µM）和孕激素受体（PR，IC50 = 0.54 µM）具有高度选择性。该化合物在皮摩尔浓度下即可诱导 ERα 降解，这使其区别于传统的 SERM，并使其成为治疗 ER 阳性乳腺癌的有效 SERD。

在雌激素依赖性MCF-7异种移植模型中，低至0.5 mg/kg的剂量即可显著抑制肿瘤生长。这种抑制作用伴随着PR蛋白水平的剂量依赖性降低，表明其为有效的拮抗剂。与单药治疗相比，AZD9496与CDK4/6抑制剂和PI3K通路抑制剂联合使用具有更强的生长抑制作用。当AZD9496每日口服一次，剂量分别为5 mg/kg和25 mg/kg时，与ICI 182780对照组相比，子宫重量显著增加（P<0.001），但与ICI 47699相比，其增加程度不显著（P=0.001）[1]。 AZD9496 还使用 HCC-1428 LTED 细胞系在长期雌激素剥夺模型 (LTED) 中进行了测试。由于该细胞系能够在缺乏雌激素的情况下生长，因此被认为是芳香化酶抑制最精确的模型。AZD9496 具有显著疗效；在该模型中，5 mg/kg 的剂量即可观察到肿瘤消退[2]。

---

AZD9496 是一种强效的口服乳腺肿瘤生长抑制剂[1]。
研究人员在 MCF-7 人乳腺异种移植瘤模型中探索了长期口服 AZD9496 的效果，MCF-7 是一种典型的 ER+/PR+/HER2+ 乳腺癌模型。良好的生物利用度和高清除率使得小鼠口服给药后半衰期（t1/2）为5-6小时，并导致显著的剂量依赖性肿瘤生长抑制，50 mg/kg剂量下抑制率达96%，且与溶剂对照组相比未观察到毒性或体重减轻（图4A）。为证实AZD9496靶向雌激素受体（ER）通路，在研究结束时检测了肿瘤样本中的孕激素受体（PR）蛋白水平，结果显示PR显著降低，且与肿瘤生长抑制相关。10 mg/kg和50 mg/kg剂量下PR均降低超过90%，即使是0.5 mg/kg剂量也降低了75%，表明AZD9496能够有效拮抗ER通路（图4B）。给予 5 mg/kg AZD9496（达到显著抑制肿瘤所需的最低剂量）后，其肿瘤生长抑制效果优于每周 3 次给予 5 mg/只小鼠的氟维司群和每日口服 10 mg/kg 他莫昔芬（图 4C）。我们进行了一系列体内药效学研究，以测量达到 PR 水平最大抑制所需的时间以及恢复至基线水平所需的时间。连续 3 天给予 5 mg/kg AZD9496 后，PR 蛋白水平降低了 98%，并在 48 小时后继续抑制蛋白水平（图 4D），72 小时后完全恢复（数据未显示），这表明其在体内具有较长的药理半衰期。在为期一周的给药过程中，小鼠接受 3 × 5 mg/只剂量的氟维司群治疗，可使 PR 蛋白水平在较长时间内降低 60%，且测得的血浆浓度约为临床稳态下 500 mg 氟维司群治疗浓度的 8 倍（图 4E）。由于已知雌激素本身可下调 ER 蛋白，因此在 MCF-7 模型中，我们未能检测到 AZD9496 或氟维司群治疗组与对照组相比 ERα 蛋白水平的进一步降低，这可能是由于在采集肿瘤样本时，植入的雌激素颗粒导致循环血浆中雌激素水平较高（补充图 S5）。在循环血浆中检测到了 AZD9496 的小鼠特异性代谢物，其浓度与 AZD9496 相似，并显示出相似的药代动力学特征。在体外MCF-7细胞实验中测试该代谢物，结果显示其ERα拮抗活性比AZD9496低约5倍，ERα下调活性低约7倍（数据未显示）。基于PR抑制数据的药代动力学/药效学模型显示，在体内5 mg/kg剂量下（PR抑制率为98%），若排除代谢物的活性，则仅归因于母体化合物的抑制活性为85%。AZD9496在皮摩尔浓度下对ERα和ERβ亚型均表现出等效结合力。它在体外直接靶向ERα进行下调，并拮抗和下调突变型ER，包括具有临床意义的ESR1突变体（D538G、Y537S）。 AZD9496 可降低 ERα 活性（IC50 = 0.282 nM，通过定量下游 PR 活性测定），并抑制 MCF-7 乳腺癌细胞的增殖（IC50 = 0.0398 nM）。它对雄激素受体（AR，IC50 = 30 µM）、糖皮质激素受体（GR，IC50 = 9.2 µM）和孕激素受体（PR，IC50 = 0.54 µM）具有高度选择性。在雌激素依赖性 MCF-7 异种移植模型中，低至 0.5 mg/kg 的剂量即可观察到显著的肿瘤生长抑制，并伴有 PR 蛋白水平的剂量依赖性降低。AZD9496 在延缓肿瘤生长和降低内分泌耐药肿瘤中 ER 水平方面与氟维司群相当。在携带 D538G 突变的 ESR1 突变患者来源的异种移植模型中，它可抑制肿瘤生长。与 PI3K 和 CDK4/6 抑制剂联合使用可增强生长抑制效果。

AZD9496 是一种强效且口服生物利用度高的选择性雌激素受体拮抗剂和下调剂（Ki=0.7 nM）。

---

SILAC 检测 [1]
MCF-7 细胞在不含酚红的 RPMI 培养基（重培养基）中培养至少三代，该培养基含有 13C615N4 精氨酸，用于氨基酸稳定同位素标记 (SILAC)，以充分标记肽段。然后将细胞在添加 5% 透析 CSS 的重培养基中培养 24 小时，之后用 PBS 洗涤，并换用含有未标记精氨酸和 AZD9496、氟维司群、他莫昔芬、雌二醇或 DMSO 的标准无酚红 RPMI 培养基。化合物孵育 48 小时后，用裂解缓冲液制备蛋白裂解液。将等浓度的样品蛋白与内标物（仅用 13C6 赖氨酸标记的 MCF-7 细胞裂解物）混合，在 4℃ 下用抗 ERα 单克隆抗体 (SP1) 进行免疫沉淀过夜，然后在 37℃ 下用 0.4 μg 胰蛋白酶在 50 mmol/L 碳酸氢铵中消化过夜，之后通过质谱分析，利用选择反应监测 (SRM) 进行相对肽定量。使用 GraphPad PRISM 中的单相指数衰减方程 (Y=Span.eK.X+Plateau) 测量降解半衰期，其中 X 为时间，Y 为响应，初始值为 Span+Plateau，并以速率常数 K 下降至 Plateau。

---

Biacore 亲和力测量 [1]
对于 BIAcore 亲和力测量，将四组氨酸抗体固定在 biacore CM5 生物传感器芯片上，使用 20 mM HEPES、pH 7.4、150 mM NaCl、0.005% T20 (HBS-T) 运行缓冲液，并在 AZD9496 存在下捕获 6His-ERα 蛋白。使用BIAevaluation软件计算结合速率常数(kass)和解离速率常数(kdiss)以及解离常数(KD)，并将ERα LBD:AZD9496相互作用拟合到1:1 Langmuir结合相互作用模型。

---

生化和体外细胞实验[1]
结合、ER激动、拮抗、下调和细胞增殖实验均按先前所述方法进行（Biomol Screen 2015;20:748–59）。化合物处理细胞的BIAcore亲和力测量和免疫印迹分析方法见补充方法。

---

蛋白质生产、结晶和结构测定[1]
ERα配体结合域的蛋白质表达、纯化和结晶按先前所述方法进行。X射线衍射数据在ESRF的ID23-1光束线上使用ADSC检测器收集。数据处理采用 EDNA 中实现的 XDS 程序，并使用 SCALA 程序进行缩放和合并。ERα 与 AZD9496 复合物的结构通过分子置换法解析，使用 AmoRE 程序，并以 ERα 内部结构作为搜索模型。蛋白质结构的质量检查使用 Coot 中的验证工具进行。最终结构已存入蛋白质数据库 (PDB)，ID 代码见补充表 S1。ERα 结合亲和力通过 [³H]-雌二醇放射性配体结合实验进行评估。化合物处理后，通过蛋白质印迹分析 MCF-7 细胞中 ERα 蛋白水平来检测 ERα 的下调。ERα 拮抗作用通过报告基因实验进行评估，该实验检测 ERα 介导的转录活性。选择性分析采用竞争性结合实验和功能性实验，针对其他核激素受体，包括雄激素受体 (AR)、糖皮质激素受体 (GR) 和孕激素受体 (PR) 进行。

AZD9496、ICI 182780 和 ICI 47699 对 MCF-7 细胞 ERα 肽周转的影响。在无类固醇条件下维持指定时间，并在含有 13C615N4 L-精氨酸的 SILAC 培养基中培养细胞，以将 ERα 肽标记为“重”（蓝线）。之后，将培养基更换为未标记的 L-精氨酸，以将新合成的蛋白质标记为“正常”（红线），并分别加入 0.1% DMSO、300 nM 他莫昔芬、100 nM AZD9496 或 100 nM ICI 182780。所示数据为两次独立实验的平均值 [1]。

---

免疫印迹[1]
将细胞裂解于含有 25 mmol/L Tris/HCl pH6.8、3 mmol/L EDTA、3 mmol/L EGTA、50 mmol/L NaF、2 mmol/L 原钒酸钠、270 mmol/L 蔗糖、10 mmol/L β-甘油磷酸钠、5 mmol/L 焦磷酸钠和 0.5% Triton X-100 的溶液中，并添加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，然后将蛋白质在 4% 至 12% Tris-HCl 预制胶上进行电泳。将膜与一抗孵育过夜，随后与HRP标记的二抗孵育，并在Syngene ChemiGenius显色仪上用Super-Signal West Dura化学发光底物进行显色。MCF-7细胞在无类固醇条件下培养，并用不同浓度的AZD9496处理。使用CellTiter-Glo试剂盒检测细胞活力，以确定生长抑制的EC50值。通过Western blot和免疫荧光法评估ERα蛋白的下调。使用SILAC标记法检测ERα肽的周转率，以追踪蛋白降解动力学。这些实验证实了该化合物在皮摩尔浓度下诱导ERα降解的能力。

小鼠：AZD9496 在 MCF-7 异种移植模型中的体内疗效。将 PEG/captisol（载体）或 AZD9496（0.02、0.1、0.5、10 和 50 mg/kg，口服，每日一次）作为每日剂量给予在雄性 SCID 小鼠体内培养的 MCF-7 异种移植瘤。每隔几个月，用游标卡尺测量肿瘤的生长情况，并绘制每个剂量组的平均肿瘤体积。

---

大鼠子宫和异种移植研究 [1]
将 MCF-7 细胞（5 x 10⁶）皮下植入免疫缺陷（SCID）雄性小鼠的后侧腹部，每只小鼠在手术植入 0.5 mg/21 天的雌激素缓释片后第二天进行植入。将HCC1428 LTED（10 x 10⁶ 个细胞）经皮植入免疫缺陷（NSG）雌性小鼠的第四乳腺脂肪垫，小鼠于卵巢切除术后7天进行移植。CTC-714 PDX模型来源于患者CTC培养物。将EpCAM⁺CD44⁺细胞悬浮于磷酸盐缓冲液（PBS）中，并与浓度为10 mg/ml的高浓度Matrigel（BD Biosciences）混合，将约650个细胞注射到NOD/SCID（Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ）小鼠的第三乳腺脂肪垫中。在肿瘤移植研究中，将2 × 2 mm大小的CTC来源肿瘤异种移植组织块植入Beige Nude XID小鼠的乳腺脂肪垫中。每周使用游标卡尺测量双侧肿瘤体积（长×宽）计算肿瘤生长情况，并将小鼠随机分为载体组和治疗组。疗效研究中，小鼠初始肿瘤体积约为0.2至0.4 cm³；药效学研究中，小鼠初始肿瘤体积约为0.5至0.8 cm³。在治疗期间，小鼠每日一次通过灌胃或皮下注射给予氟维司群，给药时间和剂量均按规定执行。通过比较对照组和治疗组肿瘤体积的平均变化来评估治疗开始后的肿瘤生长抑制情况。采用单尾Student t检验评估统计学显著性。在特定时间点切除肿瘤，并将肿瘤碎片固定于10%中性缓冲福尔马林溶液中，或用液氮速冻后储存于-80℃，并采集终末血浆药代动力学（PK）样本。使用Mesoscale Discovery (MSD) 定制的免疫分析试剂盒，测定了植入雌激素缓释片的MCF-7异种移植小鼠模型血浆中的雌二醇水平。

---

大鼠子宫模型[1]
将性未成熟的雌性Han Wistar大鼠随机分组，分别灌胃给予赋形剂、AZD9496或他莫昔芬，每日一次，连续3天；或皮下注射氟维司群。在每次给药后24小时，处死大鼠，收集终末血浆样本，取出子宫组织（保留双角），吸干水分并称重。按照异种移植研究中所述的方法制备蛋白质提取物，用于免疫印迹分析。

---

药代动力学研究[1]
本研究利用多项研究的综合数据，通过群体药代动力学模型分析了AZD9496及其活性小鼠代谢物的药代动力学。具体的药代动力学研究包括静脉推注和口服给药母体药物，以及静脉推注给药代谢物，每只动物设置多个时间点，每个时间点取2只动物，旨在建立母体-代谢物药代动力学模型。血浆样本中AZD9496及其活性代谢物的浓度由阿斯利康肿瘤药物代谢动力学实验室测定。使用LC-MS/MS检测法，在1 nM至10,000 nM的最终浓度范围内，以分析标准品对样品进行母体化合物和代谢物分析，之后使用Masslynx进行分析，并使用Quanlynx进行处理。

---

携带MCF-7异种移植瘤的雌性小鼠口服AZD9496，剂量范围从0.5 mg/kg起。评估肿瘤生长抑制、ERα蛋白下调和PR蛋白水平。在ESR1突变PDX模型中评估肿瘤生长抑制。测量肿瘤组织中包括ERα和PR表达在内的药效学标志物。该化合物在体内延缓肿瘤生长和降低内分泌耐药肿瘤中ER水平的疗效与氟维司群相当。

在大鼠、小鼠和犬中，AZD9496的口服生物利用度（F）分别为63%、128%和79%。[2] 在MCF-7人乳腺癌异种移植模型（一种典型的ER+/PR+/HER2+乳腺癌模型）中研究了长期口服AZD9496的效果。良好的生物利用度和高清除率使得小鼠口服给药后的终末半衰期（t1/2）为5-6小时，并导致显著的剂量依赖性肿瘤生长抑制，在50 mg/kg剂量下抑制率达96%。与溶剂对照组相比，未观察到毒性或体重减轻。[1] 在首次人体I期研究中，AZD9496表现出剂量依赖性的非线性药代动力学特征。第1天Cmax范围为260 ng/mL（20 mg，每日一次）至7,313 ng/mL（600 mg，每日两次）。AUCinf范围为546至36,390 h·ng/mL。末端半衰期在不同剂量下为1.37至5.72小时。该化合物的人血浆游离分数为0.15%。AZD9496是CYP3A4和CYP2C8的底物。该化合物具有良好的口服药代动力学特性，并在术前药效学研究中进行了评估，比较了其与氟维司群的生物学效应。

在 I 期临床试验中，AZD9496 已在 ER+/HER2- 晚期乳腺癌患者中评估了其安全性、耐受性和药代动力学。该化合物在研究剂量下耐受性良好。全面的毒性数据来源于这些临床研究和临床前毒理学评估。研究人员监测不良事件，并评估剂量限制性毒性，以确定最大耐受剂量和 II 期推荐剂量。

[1]. AZD9496: An Oral Estrogen Receptor Inhibitor That Blocks the Growth of ER-Positive and ESR1-Mutant Breast Tumors in Preclinical Models. Cancer Res. 2016 Jun 1;76(11):3307-18.

[2]. Optimization of a Novel Binding Motif to (E)-3-(3,5-Difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-methylpropyl)-3-methyl-2,3,4,9-tetrahydro-1H-pyrido[3,4-b]indol-1-yl)phenyl)acrylic Acid (AZD9496), a Potent and Orally Bioavailable Selective Estrogen.

AZD-9496 正在临床试验 NCT02248090（AZD9496 首次人体剂量递增研究）中进行研究。AZD9496 是一种口服选择性雌激素受体降解剂 (SERD)，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，SERD AZD9496 与雌激素受体 (ER) 结合，诱导构象变化，导致受体降解。这阻断了 ER 介导的信号传导，抑制了表达 ER 的癌细胞的生长和存活。氟维司群是一种雌激素受体 (ER) 拮抗剂，每月肌注一次，用于治疗乳腺癌患者。鉴于其目前在剂量和给药途径方面的局限性，人们一直在寻找一种更灵活的口服化合物，以期在晚期转移性疾病患者中发挥其潜在益处。本文报道了非甾体类小分子 ERα 抑制剂 AZD9496 的鉴定和表征。 AZD9496在体外和体内ER阳性乳腺癌模型中均表现出强效且选择性的ERα拮抗和下调作用。在雌激素依赖性MCF-7异种移植瘤模型中，低至0.5 mg/kg的剂量即可观察到显著的肿瘤生长抑制，并伴有PR蛋白水平的剂量依赖性降低，表明其具有强效的拮抗活性。与单药治疗相比，AZD9496与PI3K通路抑制剂和CDK4/6抑制剂联合使用时，可进一步增强肿瘤生长抑制效果。在长期雌激素剥夺的乳腺癌模型中，也观察到肿瘤消退，并伴有ERα蛋白的显著下调。AZD9496可在体外结合并下调临床相关的ESR1突变体，并抑制携带D538G突变的ESR1突变患者的异种移植瘤模型中的肿瘤生长。药理学证据表明，AZD9496 是一种口服、非甾体类、选择性雌激素受体拮抗剂和下调剂，作用于 ER(+) 乳腺细胞，有望为 ER(+) 乳腺癌患者带来显著获益。AZD9496 目前正在进行 I 期临床试验。[1]

---

本文描述了一种口服生物利用度高的选择性雌激素受体下调剂 (SERD) 的发现，其效力和临床前药理学特性与肌注 SERD 氟维司群相当。靶向筛选鉴定出 1-芳基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚结构单元是一种新型的、具有药理活性的 ER 配体。借助与 ER 结构结合的新型配体的晶体结构，药物化学迭代得到了 (E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸 (30b, AZD9496)，这是一种临床候选药物，在临床前动物中具有较高的口服生物利用度，目前正在 I 期临床试验中评估其治疗晚期雌激素受体 (ER) 阳性乳腺癌的疗效。 [2] AZD9496 已在多项 I 期临床试验（NCT02248090、NCT02780713、NCT03236974）中针对 ER 阳性乳腺癌（包括对三苯氧胺或芳香化酶抑制剂耐药的病例）进行了研究。该化合物表现出良好的口服药代动力学特性，并在术前药效学研究中进行了评估，以比较其与氟维司群的生物学效应。AZD9496 目前正在进行临床试验，可能对 ER 阳性乳腺癌的治疗有效。该化合物在皮摩尔浓度下即可诱导 ERα 降解，且具有良好的口服生物利用度，使其成为治疗内分泌耐药性乳腺癌的一种有前景的选择性雌激素受体降解剂 (SERD)。

C29H29F3N2O6

558.5456

442.19

C, 67.86; H, 5.70; F, 12.88; N, 6.33; O, 7.23

1639042-28-6

AZD9496;1639042-08-2

92044376

Light yellow to brown solid powder

131

4

10

7

40

824

2

C[C@@H]1CC2=C([C@H](N1CC(C)(C)F)C3=C(C=C(C=C3F)/C=C/C(=O)O)F)NC4=CC=CC=C24.C(=C\C(=O)O)\C(=O)O

GYRUZXFUFGWTAG-DMSKNVGDSA-N

InChI=1S/C25H25F3N2O2.C4H4O4/c1-14-10-17-16-6-4-5-7-20(16)29-23(17)24(30(14)13-25(2,3)28)22-18(26)11-15(12-19(22)27)8-9-21(31)32;5-3(6)1-2-4(7)8/h4-9,11-12,14,24,29H,10,13H2,1-3H3,(H,31,32);1-2H,(H,5,6)(H,7,8)/b9-8+;2-1-/t14-,24-;/m1./s1

(Z)-but-2-enedioic acid;(E)-3-[3,5-difluoro-4-[(1R,3R)-2-(2-fluoro-2-methylpropyl)-3-methyl-1,3,4,9-tetrahydropyrido[3,4-b]indol-1-yl]phenyl]prop-2-enoic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (4.92 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 27.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80 +，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。