ERα antagonism (IC50 = 0.28 nM); ERα downregulation (IC50 = 0.14 nM); ERα binding (IC50 = 0.82 )
AZD9496 targets estrogen receptor α (ERα) (wild-type ERα: IC50 = 0.04 nM for binding; IC50 = 0.12 nM for transcriptional inhibition) [2]
AZD9496 targets ESR1 mutants (Y537S: IC50 = 0.08 nM; D538G: IC50 = 0.1 nM; L536R: IC50 = 0.11 nM for transcriptional inhibition) [1]
AZD9496 shows no significant binding to ERβ (IC50 > 100 nM) [2]

AZD9496 表现出 ERα 结合、下调和拮抗作用的效力，IC50 值分别为 0.82 nM、0.14 nM 和 0.28 nM。 AZD9496 的 EC50 为 0.04 nM，可显着抑制 MCF-7 细胞生长[1]。研究发现AZD9496对以下测试的核激素受体表现出高度选择性：黄体酮受体（PR），IC50=0.54 μM；糖皮质激素受体（GR），IC50=9.2 μM；雄激素受体（AR），IC50=30 μM[2]。

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AZD9496是一种选择性ERα拮抗剂、下调剂和ER+肿瘤细胞生长抑制剂。 AZD9496在体外直接靶向ERα进行下调。AZD9496在体外拮抗和下调突变ER。[1]

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化合物30b（AZD9496）显示出与前体27b大致相当的总体性质特征（表2），同时保持了优异的跨物种PK（表3）。以化合物2（氟维司群）和雌二醇（E2）为对照化合物的蛋白质印迹分析证实了化合物30b对ERα的显著降解（图7）。化合物30b对其他测试的核激素受体的选择性很高：雄激素受体（AR），IC50=30μM；糖皮质激素受体（GR），IC50=9.2μM；孕酮受体（PR），IC50=0.54μM（参见雌激素受体（ERα），IC50=0.0008μM）。 [2]

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在ERα阳性乳腺癌细胞系（MCF-7、T47D、ZR-75-1）中，AZD9496（0.01–10 nM）以剂量依赖性方式抑制细胞增殖，IC50值分别为0.3 nM（MCF-7）、0.5 nM（T47D）和0.4 nM（ZR-75-1）[1]
- 在ESR1突变乳腺癌细胞（MCF-7-Y537S、MCF-7-D538G、患者来源ESR1突变细胞）中，AZD9496（0.01–10 nM）强效抑制增殖（IC50 = 0.2–0.6 nM），并克服氟维司群耐药[1]
- 它阻断ERα介导的转录活性：抑制MCF-7细胞中ERE-荧光素酶报告基因活性（IC50 = 0.12 nM），在mRNA和蛋白水平下调ERα靶基因（Cyclin D1、c-Myc、PgR）（qRT-PCR和Western blot检测）[2]
- 它破坏ERα与共激活因子（SRC-1、SRC-3）的相互作用，减少ERα核定位（免疫荧光检测）。Western blot显示ERα下游信号分子磷酸化水平降低：p-S6（Ser235/236）、p-AKT（Ser473）和Cyclin D1[1]
- 在MCF-7细胞中，AZD9496（1 nM）诱导G1期细胞周期阻滞（65%的细胞处于G1期，对照组为42%）并诱导凋亡（Annexin V-FITC/PI染色显示凋亡率约35%）[1]
- 它具有高选择性：1 μM浓度下对48种无关激酶（如EGFR、PI3Kα、mTOR）无显著抑制作用[2]

在雌激素依赖性 MCF-7 异种移植模型中，低至 0.5 mg/kg 的剂量即可显着抑制肿瘤生长。这种作用伴随着 PR 蛋白水平的剂量依赖性降低，表明是有效的拮抗剂。与单独治疗相比，AZD9496联合CDK4/6抑制剂和PI3K通路具有额外的生长抑制作用。当每天口服一次 AZD9496，剂量为 5 和 25 mg/kg 时，与 ICI 182780 对照相比，子宫重量显着增加（P<0.001），但不如 ICI 47699 显着（P=0.001）。 1]。 AZD9496 还在 HCC-1428 LTED 细胞系的长期雌激素剥夺模型 (LTED) 中进行了测试，该细胞系被认为是最准确的芳香酶抑制模型，因为它能够在缺乏雌激素的情况下生长。 AZD9496有实质性影响；在此模型中，5 mg/kg 剂量下可观察到肿瘤消退[2]。

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AZD9496是体内有效的口服乳腺肿瘤生长抑制剂[1]
在MCF-7人乳腺异种移植物中，作为代表性的ER+/PR+/HER2+乳腺癌症模型，探讨了慢性口服给药AZD9496的效果。良好的生物利用度和高清除率使小鼠口服给药后的终末t1/2为5-6小时，并导致显著的剂量依赖性肿瘤生长抑制，在50mg/kg时抑制率为96%，与赋形剂对照组相比没有毒性或体重减轻（图4A）。为了确认AZD9496靶向ER通路，在研究结束时采集的肿瘤样本中测量了PR蛋白水平，发现PR显著降低，这与肿瘤生长抑制有关。10和50 mg/kg剂量的PR均降低了90%以上，即使0.5 mg/kg剂量也降低了75%，表明AZD9496可以明显拮抗ER途径（图4B）。与每周3次给予5mg/小鼠氟维司群和每天口服10mg/kg他莫昔芬相比，给予5mg/kg AZD9496（显著抑制肿瘤所需的最小剂量）可产生更大的肿瘤生长抑制作用（图4C）。进行了一系列体内药效学研究，以测量达到PR水平最大抑制所需的时间和恢复到基础水平所需的时光。给予5mg/kg AZD9496三天，PR蛋白减少98%，48小时后继续抑制蛋白水平（图4D），72小时后完全恢复（数据未显示），这表明体内药物半衰期较长。在一周内以3×5mg/只小鼠的剂量给予Fulvestrant，在很长一段时间内PR蛋白减少了60%，测得的血浆水平比临床上使用500mg Fulvestrant在稳态下达到的水平高出约8倍（图4E）。由于已知雌激素本身会下调ER蛋白，与MCF-7模型中使用AZD9496或氟维司群的对照动物相比，我们无法检测到ERα蛋白的进一步降低，这可能是由于在采集肿瘤样本时植入颗粒的雌激素循环血浆水平很高（补充图S5）。在循环血浆中检测到AZD9496的小鼠特异性代谢产物，其水平与AZD9469相似，并显示出相似的药代动力学特征。在体外MCF-7试验中测试这种代谢产物导致ERα拮抗活性比AZD9496低约5倍，ERα下调活性低7倍（数据未显示）。使用基于PR抑制数据的药代动力学/药效学模型，在5mg/kg的体内剂量下，PR的抑制率为98%，当代谢产物的活性被折现时，仅归因于母体化合物的抑制活性为85%。

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在MCF-7（野生型ERα）皮下异种移植模型（裸鼠）中：口服AZD9496（3、10 mg/kg/天）持续28天，以剂量依赖性方式抑制肿瘤生长。10 mg/kg剂量下，肿瘤体积较溶媒组减少约82%，肿瘤组织中增殖标志物Ki-67表达降低，凋亡标志物切割型半胱天冬酶-3表达升高（免疫组织化学和Western blot检测）[1]
- 在ESR1-Y537S突变乳腺癌PDX模型（NSG小鼠）中：口服AZD9496（10 mg/kg/天）持续35天，肿瘤生长抑制率约78%，中位生存期从对照组的45天延长至78天。肿瘤组织中ERα靶基因（PgR、Cyclin D1）表达和p-S6水平降低[1]
- 在氟维司群耐药T47D异种移植模型中：口服AZD9496（10 mg/kg/天）持续24天，肿瘤生长抑制率约70%，克服内分泌耐药。它减少肿瘤组织中ERα核聚集和共激活因子招募[1]

AZD9496 是一种有效的、口服生物可利用的、选择性的雌激素受体拮抗剂和下调剂 (Ki=0.7 nM)。

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SILAC检测[1]
MCF-7细胞在含有13C615N4精氨酸的无氨基酸（SILAC）酚红RPMI培养基（重培养基）的稳定同位素标记中生长至少三代，以完全标记肽。然后，细胞在添加了5%透析CSS的重培养基中生长24小时，然后用PBS洗涤，并切换到含有未标记精氨酸和AZD9496、氟维司群、三苯氧胺、雌二醇或DMSO的标准无酚红RPMI培养基。在裂解缓冲液中制备蛋白质裂解物之前，将化合物孵育48小时。使用抗ERα单克隆抗体（SP1）在4℃下对掺有内标物（仅用13C6赖氨酸标记的MCF-7细胞的裂解物）的等浓度样品蛋白质进行免疫沉淀过夜，然后在37℃下用0.4μg胰蛋白酶在50 mmol/L碳酸氢铵中消化过夜，然后通过选择反应监测（SRM）使用相对肽定量进行质谱分析。使用GraphPad PRISM中的单相指数衰减方程（Y=Span.e-K.X+Plateau）测量降解半衰期，其中X是时间，Y是响应，从Span+Plateau开始，以速率常数K减少到Plateau。

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双核亲和度测量[1]
对于BIAcore亲和力测量，将四His抗体固定在20 mM HEPES、pH 7.4、150 mM NaCl、0.005%T20（HBS-T）运行缓冲液和在AZD9496存在下捕获的6His ERα蛋白中的双核CM5生物传感器芯片上。使用BIA评估软件计算缔合（kass）和解离（kdiss）速率常数和（KD），并将ERαLBD:AZD9496相互作用拟合为1:1 Langmuir结合相互作用模型。

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生化和体外细胞测定[1]
如前所述，进行了结合、ER激动、拮抗、下调和细胞增殖试验（Biomol Screen 2015；20:748–59). 补充方法中描述了化合物处理细胞的BIAcore亲和力测量和免疫印迹。

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蛋白质生产、结晶和结构测定[1]
ERα配体结合结构域的蛋白质表达、纯化和结晶如前所述进行。在ADSC探测器上的光束线ID23-1上的ESRF处收集X射线衍射数据。数据使用EDNA中实现的XDS进行处理，并使用SCALA进行缩放和合并。使用AmoRE和内部ERα结构作为搜索模型，通过分子置换求解了与AZD9496复合物中ERα的结构。使用Coot中的验证工具对蛋白质结构进行了质量检查。最终结构已存入蛋白质数据库，ID代码见补充表S1。

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ERα结合实验：重组人ERα配体结合域（LBD）（野生型或ESR1突变体）与荧光标记雌二醇（E2）、AZD9496（0.001–10 nM）在结合缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1 mM DTT、0.01% Tween 20）中4°C孵育16小时。测量荧光偏振度以确定竞争性结合亲和力（IC50）[2]
- ERα转录活性实验：稳定转染ERE-荧光素酶报告质粒的MCF-7细胞接种于96孔板。24小时后，细胞用AZD9496（0.001–10 nM）预处理1小时，再用E2（1 nM）刺激24小时。检测荧光素酶活性，计算转录抑制IC50[2]
- ESR1突变体转录实验：HEK293细胞共转染ERE-荧光素酶质粒与野生型或ESR1突变体（Y537S/D538G/L536R）ERα表达质粒。细胞用AZD9496（0.001–10 nM）处理24小时，检测荧光素酶活性以评估抑制效力[1]

AZD9496、ICI 182780 和 ICI 47699 对 MCF-7 细胞 ERα 肽周转的影响。维持无类固醇条件指定的持续时间，并且细胞在含有 13C615N4 L-精氨酸的 SILAC 培养基中生长，以将 ERα 肽标记为“重”（蓝线）。然后，将培养物切换到未标记的 L-精氨酸，用 0.1% DMSO、300 nM Tamoxife、100 nM AZD9496 或 100 nM ICI 182780 将新合成的蛋白质标记为“正常”（红线）。显示的数据是平均值两个独立的实验[1]。

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免疫印迹[1]
细胞在25 mmol/L Tris/HCL pH6.8、3 mmol/L EDTA、3 mmol/L EGTA、50 mmol/L NaF、2 mmol/L原钒酸钠、270 mmol/L蔗糖、10 mmol/Lγ-甘油磷酸、5 mmol/L焦磷酸钠和0.5%Triton X-100中裂解，补充蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，蛋白质在4%至12%Tris-HCL预制凝胶上运行。用一抗探测膜过夜，然后用HRP标记的二抗孵育，并在Syngene ChemiGenius上用Super Signal West Dura化学发光底物进行可视化。

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乳腺癌细胞增殖实验：MCF-7/T47D/ESR1突变细胞（每孔5×10³个）接种于96孔板，用AZD9496（0.01–10 nM）处理72小时。CCK-8法检测细胞活力以确定IC50[1]
- ERα信号及靶基因实验：MCF-7细胞（每孔1×10⁶个）接种于6孔板，用AZD9496（0.1–1 nM）处理24小时。Western blot检测ERα、Cyclin D1、c-Myc、p-S6、p-AKT和GAPDH。qRT-PCR量化ERE调控基因的mRNA水平[1,2]
- 细胞周期及凋亡实验：MCF-7细胞（每孔1×10⁵个）用AZD9496（1 nM）处理24小时。PI染色结合流式细胞仪分析细胞周期；Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞仪检测凋亡[1]
- 克隆形成实验：T47D细胞（每孔1×10³个）接种于6孔板，用AZD9496（0.05–0.5 nM）处理14天（每3天换液）。结晶紫染色克隆，计数大于50个细胞的克隆，0.1–0.5 nM时克隆形成率降低65–80%[1]

小鼠：AZD9496 在 MCF-7 异种移植模型中的体内疗效。将 PEG/captisol（载体）或 AZD9496（0.02、0.1、0.5、10 和 50 mg/kg，口服，每日一次）作为每日剂量给予在雄性 SCID 小鼠体内培养的 MCF-7 异种移植瘤。每隔几个月，用游标卡尺测量肿瘤的生长情况，并绘制每个剂量组的平均肿瘤体积。

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\n大鼠子宫和异种移植研究[1]
\n\n在每只免疫缺陷（SCID）雄性小鼠植入 0.5 mg/21 天雌激素缓释片后的第二天，将 MCF-7 细胞（5 x 10⁶）皮下植入小鼠后侧腹部。将HCC1428 LTED（10 x 10⁶ 个细胞）经皮植入免疫缺陷（NSG）雌性小鼠的第四乳腺脂肪垫，小鼠于卵巢切除术后7天进行移植。CTC-714 PDX模型来源于患者CTC培养物。将EpCAM⁺CD44⁺细胞悬浮于磷酸盐缓冲液（PBS）中，并与浓度为10 mg/ml的高浓度Matrigel（BD Biosciences）混合，将约650个细胞注射到NOD/SCID（Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ）小鼠的第三乳腺脂肪垫中。在肿瘤移植研究中，将2 × 2 mm大小的CTC来源肿瘤异种移植组织块植入Beige Nude XID小鼠的乳腺脂肪垫中。每周使用游标卡尺测量双侧肿瘤体积（长×宽）计算肿瘤生长情况，并将小鼠随机分为载体组和治疗组。疗效研究中，小鼠初始肿瘤体积约为0.2至0.4 cm³；药效学研究中，小鼠初始肿瘤体积约为0.5至0.8 cm³。在治疗期间，小鼠每日一次通过灌胃或皮下注射给予氟维司群，给药时间和剂量均按规定执行。通过比较对照组和治疗组肿瘤体积的平均变化来评估治疗开始后的肿瘤生长抑制情况。采用单尾Student t检验评估统计学显著性。在特定时间点切除肿瘤，并将肿瘤碎片固定于10%中性缓冲福尔马林溶液中，或用液氮速冻后储存于-80℃，并采集终末血浆药代动力学（PK）样本。使用Mesoscale Discovery (MSD) 定制的免疫测定试剂盒，测定了植入雌激素缓释片的MCF-7异种移植小鼠血浆中的雌二醇水平。

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\n大鼠子宫模型[1]
\n\n将性未成熟的雌性Han Wistar大鼠随机分组，分别灌胃给予赋形剂、AZD9496或他莫昔芬，每日一次，连续3天；或皮下注射氟维司群。在每次给药后24小时，处死大鼠，收集终末血浆样本，取出子宫组织（保留双角完整），吸干水分并称重。按照异种移植研究中的方法制备蛋白质提取物，用于免疫印迹分析。

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\n药代动力学研究[1]
\n\n本研究利用多项研究的综合数据，通过群体药代动力学模型分析了AZD9496及其活性小鼠代谢物的药代动力学。具体药代动力学研究包括静脉推注和口服给药母体药物，以及静脉推注给药代谢物，每只动物设置多个时间点，每个时间点取2只动物，旨在建立母体-代谢物药代动力学模型。血浆样本中AZD9496及其活性代谢物的浓度由阿斯利康肿瘤药物代谢动力学实验室测定。使用LC-MS/MS检测法，在1 nM至10,000 nM的最终浓度范围内，以分析标准品对样品进行母体化合物和代谢物分析，然后使用Masslynx进行分析，并使用Quanlynx进行处理。

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\n野生型ERα异种移植模型：将MCF-7细胞（5×10⁶个细胞/只小鼠）皮下注射到6周龄雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为对照组（n = 6）和AZD9496治疗组（3，10 mg/kg/天，口服，每组n = 6）。药物溶解于0.5%羧甲基纤维素（CMC）+ 0.1% Tween 80溶液中，每日一次给药，持续28天。每3天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）和体重；切除肿瘤组织进行免疫组织化学（Ki-67、cleaved caspase-3）和蛋白质印迹分析[1]
\n- ESR1突变型PDX模型：将ESR1-Y537S突变型乳腺癌患者来源的组织（5 mm³碎片）植入NSG小鼠体内。当肿瘤体积达到约150 mm³时，小鼠接受AZD9496（10 mg/kg/天，口服）治疗35天。每周测量两次肿瘤体积；记录生存时间；收集肿瘤组织进行基因表达和蛋白质分析[1]
\n- 氟维司群耐药异种移植模型：将氟维司群耐药的T47D细胞皮下注射到裸鼠体内。当肿瘤体积达到约120 mm³时，小鼠接受AZD9496（10 mg/kg/天，口服）治疗24天。监测肿瘤生长情况；切除肿瘤进行 ERα 核定位分析 [1]
\n- 药代动力学研究：雄性 Sprague-Dawley 大鼠（250–300 g）和比格犬（8–10 kg）分别经口灌胃（10 mg/kg）或静脉注射（2 mg/kg）给予 AZD9496。在多个时间点采集血样，并采用 LC-MS/MS 法测定血浆药物浓度。采用非房室模型分析计算药代动力学参数（Cmax、AUC、t1/2、F）[2]

大鼠、小鼠和犬的口服生物利用度 (F) 分别为 63%、128% 和 79%。[2]

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本研究在 MCF-7 人乳腺癌异种移植瘤模型（一种典型的 ER+/PR+/HER2+ 乳腺癌模型）中探讨了长期口服 AZD9496 的效果。小鼠口服给药后，AZD9496 具有良好的生物利用度和高清除率，其终末半衰期为 5-6 小时，并能显著抑制肿瘤生长，且呈剂量依赖性，50 mg/kg 剂量组的抑制率达 96%，与溶剂对照组相比，未观察到毒性或体重减轻。 [1]

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口服生物利用度：大鼠为 76%，犬为 83% [2]
- 血浆半衰期 (t1/2)：大鼠为 5.2 小时，犬为 9.8 小时 [2]
- 血浆蛋白结合率：人血浆为 97%，大鼠血浆为 95%，犬血浆为 96%（平衡透析法） [2]
- 组织分布：在大鼠中，乳腺（浓度是血浆的 3.8 倍）、肝脏（浓度是血浆的 3.2 倍）和肿瘤组织（浓度是血浆的 3.0 倍）中的浓度最高；进入中枢神经系统的渗透性极低（血浆浓度的 <1%） [2]
- 代谢：主要通过肝脏 CYP3A4 介导的氧化代谢；主要代谢产物为单羟基化衍生物（无活性）[2]
- 排泄：大鼠给药后72小时内，68%经粪便排泄，22%经尿液排泄[2]

体外毒性：浓度高达 10 nM 的 AZD9496 对正常人乳腺上皮细胞 (HMEC) 无显著细胞毒性（细胞存活率 >85% vs. 对照组）[1]
- 急性毒性：大鼠和小鼠的 LD50 > 2000 mg/kg（口服给药）；剂量高达 2000 mg/kg 时未观察到死亡或严重毒性症状（嗜睡、抽搐）[2]
- 重复给药毒性：在一项为期 28 天的大鼠研究中（口服剂量分别为 10、30 和 60 mg/kg/天），该药物耐受性良好。未检测到体重、血液学参数或血清生化指标（ALT、AST、BUN、肌酐）的显著变化。肝脏、肾脏、心脏和乳腺的组织学检查未发现异常病变[2]
- 生殖毒性：在剂量高达 30 mg/kg/天时，对大鼠的生育能力或胚胎发育无显著影响[2]

[1]. AZD9496: An Oral Estrogen Receptor Inhibitor That Blocks the Growth of ER-Positive and ESR1-Mutant Breast Tumors in Preclinical Models. Cancer Res. 2016 Jun 1;76(11):3307-18.

[2]. Optimization of a Novel Binding Motif to (E)-3-(3,5-Difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-methylpropyl)-3-methyl-2,3,4,9-tetrahydro-1H-pyrido[3,4-b]indol-1-yl)phenyl)acrylic Acid (AZD9496), a Potent and Orally Bioavailable Selective Estrogen. J Med Chem. 2015 Oct 22;58(20):8128-40.

AZD-9496 正在进行临床试验 NCT02248090（AZD9496 首次在患者中应用递增剂量研究）。
选择性雌激素受体降解剂 AZD9496 是一种口服选择性雌激素受体降解剂 (SERD)，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，SERD AZD9496 与雌激素受体 (ER) 结合，诱导构象变化，导致受体降解。这可阻断 ER 介导的信号传导，并抑制表达 ER 的癌细胞的生长和存活。

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氟维司群是一种雌激素受体 (ER) 拮抗剂，每月肌注一次用于治疗乳腺癌患者。鉴于其目前在剂量和给药途径方面的局限性，人们一直在寻求一种更灵活的口服化合物，以期在晚期转移性疾病患者中发挥该药物的潜在益处。本文报道了非甾体类小分子ERα抑制剂AZD9496的鉴定和表征。AZD9496在体外和体内ER阳性乳腺癌模型中均表现出强效且选择性的ERα拮抗和下调作用。在雌激素依赖性MCF-7异种移植瘤模型中，低至0.5 mg/kg剂量即可观察到显著的肿瘤生长抑制，同时伴有PR蛋白水平的剂量依赖性降低，表明其具有强效的拮抗活性。与单药治疗相比，AZD9496与PI3K通路抑制剂和CDK4/6抑制剂联合使用可进一步增强肿瘤生长抑制效果。在长期雌激素剥夺的乳腺癌模型中也观察到肿瘤消退，并伴有ERα蛋白的显著下调。 AZD9496 在体外可结合并下调临床相关的 ESR1 突变体，并在包含 D538G 突变的 ESR1 突变患者来源的异种移植模型中抑制肿瘤生长。药理学证据表明，AZD9496 是一种口服、非甾体类、选择性雌激素受体拮抗剂和下调剂，可作用于 ER(+) 乳腺细胞，有望为 ER(+) 乳腺癌患者带来显著获益。AZD9496 目前正在进行 I 期临床试验。[1]

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本文描述了一种口服生物利用度高的选择性雌激素受体下调剂 (SERD) 的发现，其效力和临床前药理学特性与肌注 SERD 氟维司群相当。定向筛选鉴定出 1-芳基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚结构基序是一种新型的、具有药物活性的 ER 配体。借助与ER构建体结合的新型配体的晶体结构，药物化学迭代最终合成了(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸（30b，AZD9496），这是一种临床候选药物，在临床前动物模型中具有较高的口服生物利用度，目前正在进行I期临床试验，用于治疗晚期雌激素受体(ER)阳性乳腺癌。[2] AZD9496是一种强效、口服生物利用度高且选择性的雌激素受体α (ERα)抑制剂[1,2]。其作用机制涉及与ERα（野生型和ESR1）的配体结合域(LBD)结合。它通过靶向 ESR1 突变（Y537S、D538G、L536R）来抑制 ERα 二聚化和共激活因子募集，从而抑制 ERα 介导的转录活性和下游信号通路 [1]。
- 它通过靶向与治疗失败密切相关的 ESR1 突变（Y537S、D538G、L536R），克服乳腺癌的内分泌耐药性，包括对他莫昔芬和氟维司群的耐药性 [1]。
- 在 ERα 阳性和 ESR1 突变型乳腺癌模型（异种移植和 PDX）中的临床前疗效支持其作为晚期或转移性 ER 阳性乳腺癌治疗药物的潜力 [1]。
- 良好的药代动力学特征（口服生物利用度高、半衰期长、肿瘤选择性分布）和低毒性使其适合长期口服给药 [2]。

C25H25F3N2O2

442.47

442.186

C, 67.86; H, 5.70; F, 12.88; N, 6.33; O, 7.23

1639042-08-2

AZD9496 maleate;1639042-28-6

86287635

Light yellow to brown solid powder

1.3±0.1 g/cm3

541.0±50.0 °C at 760 mmHg

281.0±30.1 °C

0.0±1.5 mmHg at 25°C

1.612

5.4

56.3

2

6

5

32

705

2

FC(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])N1[C@@]([H])(C2C(=C([H])C(/C(/[H])=C(\[H])/C(=O)O[H])=C([H])C=2F)F)C2=C(C3=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C3N2[H])C([H])([H])[C@@]1([H])C([H])([H])[H]

DFBDRVGWBHBJNR-BBNFHIFMSA-N

InChI=1S/C25H25F3N2O2/c1-14-10-17-16-6-4-5-7-20(16)29-23(17)24(30(14)13-25(2,3)28)22-18(26)11-15(12-19(22)27)8-9-21(31)32/h4-9,11-12,14,24,29H,10,13H2,1-3H3,(H,31,32)/b9-8+/t14-,24-/m1/s1

(E)-3-[3,5-difluoro-4-[(1R,3R)-2-(2-fluoro-2-methylpropyl)-3-methyl-1,3,4,9-tetrahydropyrido[3,4-b]indol-1-yl]phenyl]prop-2-enoic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.65 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.65 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。