| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Bax (IC50 = 3.3 μM)
BAX (proapoptotic BCL-2 family member) – binds to the BH3 trigger site (α1-α6 groove) with IC50 = 3.3 μM (competitive fluorescence polarization assay against FITC-BIM SAHB); resynthesized BAM7 showed IC50 = 4.4 μM. No binding detected to BCL-XLΔC, MCL-1ΔNΔC, BFL-1/A1ΔC, or BAKΔC at up to 50 μM dosing. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
BAM7 直接结合 BAX N 端此前未被鉴定的 BH3 结合槽。在 BAX 的 N 端，BAM7 特异性识别该 BH3 结合槽。事实上，BAM7 与 BAX 表面 BIM BH3 螺旋激活 BAX 的区域直接相互作用。BAM7 可激活 BAX 的功能。BAM7 以剂量和时间依赖的方式诱导 BAX 从单体转变为寡聚体，当 BAX 与 BAM7 的剂量比为 1:8 时，该过程的动力学接近饱和。体外 BAX 寡聚化、BAX 介导的孔道形成以及 BAX 依赖性细胞死亡均由 BAM7 触发。BAM7 通过触发细胞内 BAX 激活的标志性特征，选择性地诱导 BAX 介导的细胞凋亡。 BAX介导的细胞凋亡的生化和形态学特征仅在含有BAX的细胞系中由BAM7诱导。[1]
BAM7 (10-40 μM) 可剂量和时间依赖性地诱导单体BAX (5 μM) 转化为寡聚体，这可通过尺寸排阻色谱法检测到；当BAX:BAM7比例为1:8时，寡聚化接近饱和。无活性的类似物ANA-BAM16和BAXK21E突变体几乎没有或完全没有作用。[1] BAM7 (5-40 μM) 可剂量依赖性地触发BAX介导的脂质体中包裹的荧光团（ANTS/DPX）的释放，表明功能性孔道的形成；单独的BAX、单独的BAM7或BAX/ANA-BAM16或BAXK21E/BAM7的组合均无作用。 [1] BAM7 (15 μM) 可诱导 Bak−/− MEF 细胞中 N 端 BAX 激活表位（6A7 抗体）的剂量依赖性暴露，这通过免疫沉淀法检测到。[1] BAM7 (15 μM) 可引起 Bak−/− MEF 细胞中线粒体细胞色素 c 的剂量依赖性释放，这通过对上清液和沉淀组分进行蛋白质印迹分析得到证实。[1] BAM7 (15 μM) 可诱导用 EGFP-BAX 重组的 Bax−/−Bak−/− MEF 细胞中 BAX 从胞质溶胶易位至线粒体，这通过共聚焦显微镜观察到。[1] |
| 酶活实验 |
为了绘制直接结合曲线，首先将 FITC-BIM SAHB (50 nM) 与全长 BAX、BCL-XLΔC、MCL-1ΔNΔC、BFL-1/A1ΔC 或 BAKΔC 或 BAKC 的系列稀释液孵育，20 分钟后使用 SpectraMax M5 微孔板读数仪测量荧光偏振。对于竞争性结合实验，将小分子或乙酰化 BIM SAHB (Ac-BIM SAHB) 与 FITC-BIM SAHB (50 nM) 混合，然后加入重组蛋白，其浓度约为 EC75 值（BAX、BAKΔC：500 nM；BCL-XLΔC、MCL-1ΔNΔC、BFL-1/A1ΔC：200 nM），该浓度由直接结合实验确定。 IC50 值是通过 Prism 软件对竞争性结合曲线进行非线性回归分析确定的，分析前需进行 20 分钟的荧光偏振测量。
竞争性荧光偏振结合实验：将重组 BAX (50 nM) 与 FITC 标记的 BIM SAHB (10 nM) 和不同浓度的 BAM7 (0.01–100 μM) 在测定缓冲液（PBS，0.01% Tween-20，pH 7.4）中孵育。平衡后，在激发波长 485 nm 和发射波长 530 nm 处测量荧光偏振。IC50 值通过四参数逻辑方程的非线性回归计算得出。使用 FITC-BIM SAHB 和未标记的竞争物，对 BCL-XLΔC、MCL-1ΔNΔC、BFL-1/A1ΔC 和 BAKΔC 进行了类似的实验。 [1] 核磁共振结合分析：将均匀标记的15N全长BAX或BAXK21E（100 μM）在20 mM磷酸盐缓冲液（pH 6.5）、50 mM NaCl、1 mM DTT和10% D2O中用BAM7（0–200 μM）进行滴定。在600 MHz核磁共振波谱仪上于25°C下采集二维1H-15N HSQC谱图。绘制化学位移变化并与阈值进行比较。 [1] 尺寸排阻色谱寡聚化分析：将单体BAX（5 μM）与BAM7（10–40 μM）在25°C下孵育0–16小时，然后在用20 mM HEPES pH 7.2、150 mM NaCl平衡的Superdex 200柱上进行分离。通过280 nm处的吸光度和Western blot检测洗脱组分。[1] 脂质体释放分析：将由50% POPC、30% POPS和20%胆固醇组成的脂质体加载50 mM ANTS和20 mM DPX。将BAX（1 μM）与BAM7（5–40 μM）预孵育30分钟，然后加入脂质体（最终脂质浓度为50 μM）。监测荧光（激发波长 355 nm，发射波长 520 nm）随时间的变化；用 Triton X-100 测定最大释放量。[1] |
| 细胞实验 |
将 MEF 细胞（每孔 2.5 × 10³ 个细胞）接种于 96 孔不透明板中，培养 18–24 小时后，在 37 °C 下，以 100 μL 的终体积，加入 BAM7、ANA-BAM16 或溶剂（0.15% (v/v) DMSO）的系列稀释液进行孵育。根据制造商的说明，在 24 小时后加入 CellTiter-Glo 试剂检测细胞活力，并使用 SpectraMax M5 微孔板读数仪测量发光值。至少进行三次重复的细胞活力检测，并将数据标准化至载体处理的对照孔。
细胞活力检测：将Bak−/−、Bax−/−和Bax−/−Bak−/− MEF细胞接种于96孔板（2.5×10³个细胞/孔），培养18-24小时，然后用系列稀释的BAM7（0-50 μM）或ANA-BAM16（0-50 μM）处理，培养基为含0.15% DMSO的DMEM，处理24小时。采用CellTiter-Glo发光法检测细胞活力。BAM7选择性地抑制Bak−/− MEF细胞的活力（呈剂量依赖性，浓度最高可达~15 μM），而对Bax−/−或Bax−/−Bak−/− MEF细胞无影响。ANA-BAM16无影响。在用野生型 BAX 或 BAXK21E 重组的 Bax−/−Bak−/− MEF 细胞中，BAM7 仅杀死表达野生型 BAX 的细胞。[1] BAX 构象变化（6A7 免疫沉淀）：将 Bak−/− MEF 细胞（5×10⁵ 个细胞）用 BAM7（0–15 μM）处理 6 小时，在 CHAPS 缓冲液中裂解，并用 6A7 抗体进行免疫沉淀。用 N20 抗 BAX 抗体进行 Western blot 分析，检测到活化的 BAX。 [1] 细胞色素c释放实验：将Bak−/− MEF细胞用BAM7（0–15 μM）处理15小时后，用洋地黄皂苷透化，分离上清液（胞质）和沉淀（线粒体）组分，并通过Western blot分析细胞色素c的表达。[1] BAX易位实验：将Bax−/−Bak−/− MEF细胞转染EGFP-BAX（60%阳性），用BAM7（0–15 μM）处理24小时，用MitoTracker染色，并通过共聚焦显微镜成像。定量分析线粒体BAX定位的细胞百分比。 [1] 活细胞形态学：用BAM7（15 μM）处理Bak−/− MEF细胞，并拍摄延时图像以记录细胞凋亡形态（收缩、起泡）。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
BAM7是一种首创的小分子直接激活剂，可激活促凋亡蛋白BAX。其作用机制涉及与BAX上一个新型的BH3触发位点（不同于抗凋亡蛋白的经典BH3结合槽）结合，诱导一系列变构变化，包括α1-α2环的位移、6A7表位的暴露、BH3结构域的动员以及C端α9螺旋的重排，最终导致BAX寡聚化和线粒体外膜通透性增加。BAM7对BAX具有高度选择性，优于BAK和抗凋亡蛋白BCL-2家族成员。该化合物可作为研究细胞凋亡中BAX直接激活的化学工具，并具有治疗凋亡阻滞型癌症的潜在应用价值。阴性对照试剂包括ANA-BAM16（一种具有间氯取代的结构类似物，不与BAX结合）和BAXK21E点突变体。 [1]
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| 分子式 |
C21H19N5O2S
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|---|---|
| 分子量 |
405.476
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| 精确质量 |
405.125
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| 元素分析 |
C, 62.21; H, 4.72; N, 17.27; O, 7.89; S, 7.91
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| CAS号 |
331244-89-4
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| 相关CAS号 |
331244-89-4
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| PubChem CID |
3101542
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| 外观&性状 |
Pink to red solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
567.3±52.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
296.9±30.7 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.6 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.685
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| LogP |
3.18
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| tPSA |
107.42
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
29
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| 分子复杂度/Complexity |
649
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CCOC1=CC=CC=C1N/N=C2C(C)=NN(C3=NC(C4=CC=CC=C4)=CS3)C\2=O
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| InChi Key |
WRLVHADVOGFZOZ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H19N5O2S/c1-3-28-18-12-8-7-11-16(18)23-24-19-14(2)25-26(20(19)27)21-22-17(13-29-21)15-9-5-4-6-10-15/h4-13,25H,3H2,1-2H3
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| 化学名 |
4-[(2-ethoxyphenyl)diazenyl]-5-methyl-2-(4-phenyl-1,3-thiazol-2-yl)-1H-pyrazol-3-one
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| 别名 |
BAM 7; BAM7; BAM-7
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 2~5 mg/mL (4.9~12.3 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 0.5 mg/mL (1.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 5.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4662 mL | 12.3311 mL | 24.6621 mL | |
| 5 mM | 0.4932 mL | 2.4662 mL | 4.9324 mL | |
| 10 mM | 0.2466 mL | 1.2331 mL | 2.4662 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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