Bay 60-7550

Ki: 3.8±0.2 nM (PDE2)[1]
In comparison to the control, Bay 60-7550 (1 μM) raises cGMP in neuronal cells [F (6,14) for Bay 60-7550=12.97, p<0.05]. In comparison to NMDA alone, Bay 60-7550 increased cGMP even more when NMDA (30 μM) was present. The rise in cGMP in neuronal cultures caused by Bay 60-7550+NMDA is blocked by the NMDA receptor antagonist MK -801 (10 μM) [1]. Comparing IPAH patients' PASMC proliferation to untreated control cells, BAY 60-7550 (1 μM) dramatically inhibited it [2].

与对照相比，Bay 60-7550 (1 μM) 提高神经元细胞中的 cGMP [Bay 60-7550 的 F (6,14)=12.97，p<0.05]。与单独使用 NMDA 相比，当存在 NMDA (30 μM) 时，Bay 60-7550 可以进一步提高 cGMP。 Bay 60-7550+NMDA 引起的神经元培养物中 cGMP 的升高可被 NMDA 受体拮抗剂 MK -801 (10 μM) 阻断 [1]。将 IPAH 患者的 PASMC 增殖与未处理的对照细胞进行比较，BAY 60-7550 (1 μM) 显着抑制它 [2]。

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在大鼠大脑皮层神经元原代培养物中，Bay 60-7550（1 μM）增加了基础的cGMP水平。当与NMDA（30 μM）共同给药时，它能进一步增加NMDA刺激的cGMP水平。NMDA受体拮抗剂MK-801（10 μM）阻断了Bay 60-7550与NMDA联合引起的cGMP升高。[1]
在同一神经元培养物中，Bay 60-7550（1 μM）增加了基础的cAMP水平，尽管其增加幅度小于对cGMP的影响。与NMDA（30 μM）共同给药相比单独使用NMDA进一步增加了cAMP水平，且此效应不被MK-801（10 μM）阻断。[1]
Bay 60-7550（1 μM）增加了由NO供体detanonoate（10 μM）刺激的神经元培养物中的cGMP水平。NOS抑制剂L-NAME（10 μM）阻断了detanonoate引起的cGMP增加。[1]

与车辆 + 约束压力设置相比，PDE2 抑制剂 Bay 60-7550 (1 mg/kg) 纠正了约束压力引起的行为改变，导致开臂进入百分比和开臂时间增加。将媒介物治疗组与未应激小鼠进行比较，Bay 60-7550 表现出开臂进入百分比和开臂时间呈剂量依赖性增加；剂量为 3 mg/kg 时出现显着增加。与给予媒介物的小鼠相比，使用 Bay 60-7550 治疗的非应激小鼠的头部浸入次数和时间长度均呈剂量依赖性增加；在剂量为 1 和 3 mg/kg 时，出现了显着的增加 [1]。

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在遭受束缚应激的小鼠中，Bay 60-7550（1 mg/kg，腹腔注射）逆转了在高架十字迷宫（增加开臂进入次数百分比和时间百分比）、洞板实验（增加探头次数和探头时间）和旷场实验（减少进入延迟，增加走动和站立次数）中由应激引起的焦虑样效应。[1]
在非应激小鼠中，Bay 60-7550（3 mg/kg，腹腔注射）在高架十字迷宫产生抗焦虑效应（增加开臂进入次数百分比和时间百分比）。在1 mg/kg剂量下，它在洞板实验增加了探头次数和探头时间，在旷场实验减少了进入延迟并增加了站立次数。[1]
Bay 60-7550（3 mg/kg）在高架十字迷宫和洞板实验中的抗焦虑效应可被鸟苷酸环化酶抑制剂ODQ（20 mg/kg，腹腔注射）预处理所拮抗。[1]
NO供体detanonoate（0.5 mg/kg）在应激小鼠中的抗焦虑效应在与Bay 60-7550（1 mg/kg）联合给药时有增强趋势。[1]

COS-7细胞在37°C、5% CO2气氛下维持在完全DMEM（含有10%胎牛血清、100单位/mL青霉素G、100 mg/mL链霉素和400 μM L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）中。使用 FuGENE6 转染试剂将 PDE2 表达质粒引入 COS-7 细胞。细胞在溶解缓冲液（275 mM NaCl、1.5 mM MgCl2、2 mM EGTA、2% Triton X、20% 甘油和 40 mM Tris-HCl）中裂解，细胞裂解液用于免疫沉淀程序。将蛋白 A-琼脂糖珠浆 (100 μL) 用冰冷的磷酸盐缓冲盐水（100 mM NaCl、2.7 mM KCl、10.6 mM Na2HPO4 和 1.6 mM NaH2PO4）洗涤 3 次，并与 5 μg PDE2 抗体混合和 100 μL (2 μg/μL) 裂解液样品，并在 4°C 下旋转过夜。然后将珠子/样品混合物以 1000g 离心，将珠子与上清液分离。将珠子重悬于 100 μL 冰冷的裂解缓冲液中（20 mM Tris，pH 7.4，140 mM NaCl，0.75 mM MgCl2，1 mM EGTA，1% Triton X-100 和 20% 甘油，含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂) 洗脱 PDE2 以用于酶活性测定。 PDE2 活性测定完成。将源自 COS-7 细胞表达并在 KHEM 缓冲液（50 mM KCl、50 mM HEPES、10 mM EGTA 和 1.9 mM MgCl2，pH 7.2）中稀释的重组 PDE2 酶与不同浓度的 PDE2 抑制剂（Bay 60-7550）混合、ND7001 和 EHNA) 和 [3H]cGMP/cGMP (5 μM) 作为底物。然后将混合物在 37°C 下孵育 30 分钟（反应体积为 100 μL）。为了将 [3H]GMP 转化为 [3H]鸟苷，将样品与来自响尾蛇的蛇毒在 37°C 下孵育 30 分钟。然后将样品与新制备的 Dowex/水/乙醇 [1:1:1，v/v] 浆液一起涡旋，然后离心 10 分钟。然后通过液体闪烁计数对上清液中的[3H]鸟苷进行定量。 Bay 60-7550 溶解在二甲亚砜中，EHNA 溶解在蒸馏水中，ND7001 溶解在乙醇中作为 10 mM 原液，然后用 20 mM Tris（pH 7.4）稀释用于测定；各溶剂的最终浓度不影响测定。单一底物浓度下的 IC50 值通过对每种 PDE2 抑制剂的对数浓度-响应曲线的非线性回归分析来确定； Ki 值的计算[1]。

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通过使用PDE2抗体进行免疫沉淀，从转染的COS-7细胞裂解液中获得重组PDE2酶。采用改良的两步法进行酶活性测定。反应混合物包含稀释在KHEM缓冲液中的重组PDE2酶、不同浓度的Bay 60-7550以及作为底物的[³H]cGMP（5 μM）。混合物在37°C下孵育30分钟。随后，为了将[³H]GMP转化为[³H]鸟苷，样品与蛇毒在37°C下再孵育30分钟。终止反应后，通过液体闪烁计数对上清液中的[³H]鸟苷进行定量。通过浓度-反应曲线的非线性回归分析确定单一底物浓度下的IC₅₀值，并使用Cheng-Prusoff方法计算Ki值。[1]

使用 BAY 60-7550 (1 μM)、ANP 治疗后，监测从特发性肺动脉高压 (IPAH) 患者中分离出的人远端肺动脉平滑肌细胞的生长情况，或从因疑似恶性肿瘤而接受移植或肺切除术的成人中分离出的对照细胞的生长情况。 1 μM)、DETA-NONOate (10 μM) 或曲前列环素 (1 μM)，单独或组合使用[2]。

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从新生大鼠幼崽制备大鼠大脑皮层神经元原代培养物。培养物在37°C、5% CO₂、95% O₂的环境中维持。第3天，更换为含有β-阿糖胞苷的新鲜培养基以抑制胶质细胞增殖。第5天，更换回常规培养基。细胞在第12天用于实验。对于cGMP和cAMP的测量，细胞用HEPES缓冲液洗涤并在含有河豚毒素的HEPES缓冲液中于37°C预孵育50分钟。然后加入Bay 60-7550、NMDA或其他调节剂。孵育15分钟后，加入冰盐酸终止反应。细胞制备物进行超声处理和离心。上清液中的cAMP和cGMP水平使用酶联免疫吸附测定法测量，并归一化至蛋白含量。[1]

小鼠[1] 使用体重28至35克的雄性ICR小鼠。在束缚应激后，并在行为学测试前30分钟，分别给予小鼠Bay 60-7550（0.5、1和3 mg/kg）、ND7001（0.5、1.0和3 mg/kg）、地坦诺酸（0.5 mg/kg）、L-NAME（50 mg/kg）或地西泮（1 mg/kg）。此外，在未进行束缚应激的情况下，也分别给予小鼠Bay 60-7550（3 mg/kg）、ND7001（3 mg/kg）、地坦诺酸（0.5 mg/kg）、L-NAME（50 mg/kg）或地西泮（1 mg/kg），并在行为学测试前30分钟给药。与PDE1相比，Bay 60-7550对PDE2的选择性高50倍；与PDE5相比高100倍；与其他PDE家族相比高200倍以上。ND7001对PDE2的抑制选择性至少比其他PDE家族高100倍。为了评估cGMP信号通路在PDE2抑制剂行为效应中的作用，在给予Bay 60-7550或ND7001前20分钟，先给予可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂ODQ（20 mg/kg）。实验采用雄性ICR小鼠（28-35 g）。为诱导应激，将小鼠置于可调节的束缚器中，在室温下固定24小时，期间不提供食物和水，然后放回笼中进行测试。未受应激的小鼠则留在笼中。 [1]
Bay 60-7550溶解于50%二甲基亚砜中。在行为测试前30分钟，以2 ml/kg体重的剂量腹腔注射（ip）。使用的剂量分别为0.5、1和3 mg/kg。在应激逆转实验中，药物在束缚应激期结束后、测试前给药。在机制研究中，鸟苷酸环化酶抑制剂ODQ（20 mg/kg，腹腔注射）在Bay 60-7550给药前20分钟给药。[1]
行为测试（高架十字迷宫、穿孔板、旷场实验）持续2-3天，处理组随机分配。由一位对处理条件不知情的训练有素的观察员记录行为。[1]

[1]. Anxiolytic effects of phosphodiesterase-2 inhibitors associated with increased cGMP signaling. J Pharmacol Exp Ther. 2009 Nov;331(2):690-9.

[2]. Inhibition of phosphodiesterase 2 augments cGMP and cAMP signaling to ameliorate pulmonary hypertension. Circulation. 2014 Aug 5;130(6):496-507.

磷酸二酯酶 (PDE)-2 是大脑中一氧化氮合酶 (NOS)/鸟苷酸环化酶信号通路的一个组成部分。鉴于最近的证据表明，药理学诱导的 NO-cGMP 信号变化可以影响焦虑相关行为，因此评估了 PDE2 抑制剂（2-(3,4-二甲氧基苄基)-7-det-5-甲基咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4(3H)-酮）（Bay 60-7550）和 3-(8-甲氧基-1-甲基-2-氧代-7-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-5-基)苯甲酰胺（ND7001）以及 NO 调节剂对神经元中 cGMP 信号传导以及小鼠在高架十字迷宫、穿孔板和旷场测试中的行为的影响，这些测试是评估抗焦虑药物的成熟程序。 Bay 60-7550 (1 μM) 和 ND7001 (10 μM) 可增加大鼠大脑皮层神经元原代培养物中基础水平以及 N-甲基-D-天冬氨酸 (NMDA) 或地坦诺酸 (detanonoate) 刺激的 cGMP 水平；Bay 60-7550（而非 ND7001）还可增加 cAMP 水平。通过给予 PDE2 抑制剂 Bay 60-7550（0.5、1 和 3 mg/kg）或 ND7001（1 mg/kg），或 NO 供体地坦诺酸（0.5 mg/kg）增加 cGMP 信号传导，可拮抗束缚应激对三种行为测试中行为的焦虑效应。这些药物在高架十字迷宫和穿孔板测试中也对非应激小鼠的行为产生抗焦虑作用。这些效应可被鸟苷酸环化酶抑制剂 1H-[1,2,4]恶二唑并[4,3-a]喹喔啉-1-酮 (20 mg/kg) 拮抗。相反，NOS 抑制剂 N(ω)-硝基-L-精氨酸甲酯 (50 mg/kg) 可降低 cGMP 信号传导，产生类似于束缚应激的焦虑效应。总的来说，目前的行为学和神经化学数据表明，PDE2 可能是一种用于开发治疗焦虑症药物的新型药理学靶点。[1]

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背景：肺动脉高压 (PH) 是一种危及生命的疾病，其特征是肺动脉压力升高、肺血管重塑和右心室衰竭。内皮源性一氧化氮 (NO) 和前列环素的丢失是 PH 发病机制的重要因素，目前的治疗方法旨在恢复这些通路。磷酸二酯酶 (PDE) 是一类能够分解 cGMP 和 cAMP 的酶，而 cGMP 和 cAMP 是 NO 和前列环素生物活性的基础。PDE5 抑制剂（例如西地那非）已获准用于治疗肺动脉高压 (PH)，但 PDE2 在肺生理和疾病中的作用尚未明确。本研究旨在探讨 PDE2 抑制剂是否能够调节肺环核苷酸信号通路并改善实验性肺动脉高压。方法和结果：选择性 PDE2 抑制剂 BAY 60-7550 可增强慢性缺氧大鼠离体肺动脉中由心房利钠肽和曲前列尼尔诱导的肺血管舒张。 BAY 60-7550 可预防缺氧和博来霉素诱导的肺动脉高压 (PH) 的发生，并且与中性内肽酶抑制剂（增强内源性利钠肽）、曲前列尼尔、无机硝酸盐（NO 供体）或 PDE5 抑制剂联合使用时，可显著降低疾病严重程度。BAY 60-7550 可减少肺动脉高压患者肺动脉平滑肌细胞的增殖，而心房利钠肽、NO 和曲前列尼尔的存在可进一步增强这种作用。结论：PDE2 抑制剂可引起肺扩张，预防肺血管重塑，并减轻肺动脉高压特征性的右心室肥厚。这种良好的药效学特性依赖于利钠肽的生物活性，并且与前列环素类似物、PDE5 抑制剂和 NO 具有叠加效应。 PDE2抑制剂是一种可行的口服活性药物，可用于治疗肺动脉高压。[2]

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Bay 60-7550对PDE2的选择性比PDE1高50倍，比PDE5高100倍，对其他PDE家族的选择性超过200倍。[1]
Bay 60-7550通过抑制PDE2，导致cGMP信号通路增强，这与其抗焦虑作用有关。鸟苷酸环化酶抑制剂可拮抗这种抗焦虑作用，表明其作用依赖于NO-cGMP通路。[1]
与可能损害记忆的苯二氮卓类药物（例如地西泮）不同，其他研究表明Bay 60-7550可以增强记忆，这提示PDE2抑制剂作为抗焦虑药物可能具有不产生认知副作用的优势。 [1]
Bay 60-7550能有效逆转情绪（束缚）应激和先前研究中发现的氧化应激引起的焦虑效应，而地西泮对氧化应激引起的焦虑疗效有限。[1]

C27H32N4O4

476.56738

476.242

C, 68.05; H, 6.77; N, 11.76; O, 13.43

439083-90-6

135564787

Light yellow to yellow solid powder

3.821

101.74

2

6

10

35

728

2

CC1=C2C(=O)NC(=NN2C(=N1)[C@@H](CCCC3=CC=CC=C3)[C@@H](C)O)CC4=CC(=C(C=C4)OC)OC

MYTWFJKBZGMYCS-NQIIRXRSSA-N

InChI=1S/C27H32N4O4/c1-17-25-27(33)29-24(16-20-13-14-22(34-3)23(15-20)35-4)30-31(25)26(28-17)21(18(2)32)12-8-11-19-9-6-5-7-10-19/h5-7,9-10,13-15,18,21,32H,8,11-12,16H2,1-4H3,(H,29,30,33)/t18-,21+/m1/s1

2-(3,4-dimethoxybenzyl)-7-((2R,3R)-2-hydroxy-6-phenylhexan-3-yl)-5-methylimidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-4(3H)-one

BAY 60-7550; BAY-607550; BAY607550; BAY 60-7550; 439083-90-6; 2-[(3,4-dimethoxyphenyl)methyl]-7-[(2R,3R)-2-hydroxy-6-phenylhexan-3-yl]-5-methyl-1H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-4-one; ZRN7LZK9TQ; CHEMBL370962; BAY 607550; BAY60-7550; BAY-60-7550;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 33.3 mg/mL (~69.87 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。