| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
SMYD3 (SET and MYND domain-containing protein 3) [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
BCI-121 通过显著抑制染色质募集和 SMYD3 与底物的相互作用，有效降低多种癌细胞的增殖。72 小时后，BCI-121 显著降低了 HT29（降低 46%）和 HCT116（降低 54%）细胞的增殖能力，以及 SMYD3 靶基因的表达水平。组蛋白 H4 优先被 SMYD3 甲基化，而 BCI-121 可抑制体外 SMYD3 介导的 H4 甲基化。经 BCI-121 处理的癌细胞生长能力显著降低，并更多地停滞在细胞周期的 S 期。BCI-121 处理后，靶向甲基化标记（H4K5me 和 H3K4me2）减少，细胞增殖呈剂量依赖性抑制。在过表达SMYD3的癌细胞系中，BCI-121具有抗增殖特性，其作用类似于靶向SMYD3的RNAi。BCI-121抑制SMYD3募集到其靶基因的启动子区域，这一过程与基因表达降低相关，这已在癌细胞中进行的实验得到证实[1]。在SMYD3高表达的CRC细胞系（HT29和HCT116）中，用BCI-121（100 μM）处理48小时后，SMYD3靶向的组蛋白甲基化标记（特别是H3K4me2、H3K4me3和H4K5me）的整体水平显著降低，而非靶向标记H3K27me3则不受影响。 [1]
BCI-121处理（100 μM，48 小时）降低了 HT29 和 HCT116 结直肠癌细胞中 SMYD3 靶基因（cMET、TERT、WNT10B、CDK2）的 mRNA 表达水平。[1] BCI-121以剂量和时间依赖的方式抑制 HT29 和 HCT116 细胞的增殖。在 100 μM 浓度下，72 小时后，HT29 细胞的增殖减少了 46%，HCT116 细胞的增殖减少了 54%。[1] BCI-121的抗增殖作用特异性地针对 SMYD3 高表达的癌细胞系。该治疗仅影响SMYD3高表达的CRC细胞系（如HT29、HCT116）和其他癌细胞系（肺癌A549、胰腺癌Capan-1、前列腺癌DU145、卵巢癌OVCAR-3）的增殖，而对SMYD3低表达的细胞（例如CRC LS174T细胞）无影响。[1] 在HT29结直肠癌细胞中，BCI-121处理（100 μM，48小时）影响细胞周期进程，导致S期细胞比例显著增加，提示SMYD3在调控S/G2期转换中发挥作用。[1] 在同步化的HCT116细胞中，BCI-121处理（48小时）导致细胞无法退出S期，表现为胸苷释放后4小时和8小时BrdU掺入量均高于未处理细胞。 [1] 在OVCAR-3卵巢癌细胞中，用BCI-121（100 μM，72小时）处理可降低SMYD3在其靶基因（cMET、WNT10B、CDK2）启动子区域的结合，染色质免疫沉淀（ChIP）实验证实了这一点。这与这些靶基因mRNA表达的显著降低相关。[1] 在HCT116结直肠癌细胞中，用BCI-121（100 μM，72小时）处理可降低SMYD3在其靶基因（cMET、WNT10B、CDK2）启动子区域的结合，染色质免疫沉淀（ChIP）实验证实了这一点。 [1] 在HT29细胞中，BCI-121处理48小时后，细胞增殖呈浓度依赖性降低（1、10、30、60、100 μM），H4K5me和H3K4me2的整体水平降低，MEK-ERK信号通路活性（pERK水平）也降低。非靶向标记H3K27me3未受影响。[1] 在HCT116细胞（SMYD3高表达）中观察到BCI-121（处理72小时）的剂量依赖性抗增殖作用，但在LS174T细胞（SMYD3低表达）中未观察到。[1] |
| 酶活实验 |
体外甲基化分析：将重组 GST-SMYD3 蛋白与 100 μM BCI-121 或其稀释缓冲液在室温下预孵育 30 分钟。随后，向反应体系中加入小牛胸腺组蛋白和放射性标记的 SAM-³H（S-腺苷甲硫氨酸）的混合物，并在 30°C 下孵育 45 分钟。反应混合物经 SDS-PAGE 电泳分离。放射自显影结果显示，与对照组相比，BCI-121 的存在显著降低了 SMYD3 介导的组蛋白 H4 甲基化。[1] 表面等离子共振 (SPR) 结合分析：为了研究抑制机制，进行了 SPR 实验。将 SMYD3-GST 融合蛋白通过抗 GST 抗体固定在传感器芯片上。首先测定了H4组蛋白肽与SMYD3的结合亲和力（KD）为1.18 × 10⁻⁵ M。为了测试抑制作用，将H4肽（浓度为72.03 μM）单独注射，或与BCI-121以1:1（肽：化合物）和1:2.5的摩尔比混合注射。BCI-121分别抑制了组蛋白H4与SMYD3结合36.5%和51.0%，表明该化合物在组蛋白结合位点上作为竞争性抑制剂发挥作用。[1]
分子建模：分子对接计算预测BCI-121结合于SMYD3底物结合口袋赖氨酸通道的内侧部分。其哌啶环上的4-羧酰胺部分与Ser202和Tyr239形成氢键，而分子的其余部分则在狭窄的口袋内发生疏水相互作用。[1] |
| 细胞实验 |
细胞增殖实验（WST-1 和细胞计数）：将细胞接种后，分别用 BCI-121 或 DMSO（溶剂对照）处理。WST-1 实验中，分别在处理 48、72 或 96 小时后，向每个孔中加入 WST-1 试剂，并在 37°C 下孵育至多 1 小时。然后测量吸光度值。细胞计数实验中，在不同时间点（24、48、72 和 96 小时）使用血细胞计数器计数细胞，以确定增殖细胞的数量。[1]
免疫印迹分析（Western Blot）：为了评估蛋白质水平和组蛋白修饰，从用 BCI-121 处理的细胞中制备全细胞提取物或核富集组分。蛋白质经 SDS-PAGE 分离后转移至膜上进行免疫印迹分析。使用针对 SMYD3、H3K4me2、H3K4me3、H4K5me、H3K27me3、总 H3、pERK、总 ERK 的一抗以及内参（β-肌动蛋白、β-微管蛋白、层粘蛋白 A/C），随后使用 HRP 标记的二抗和化学发光检测。[1] 定量实时 PCR (qPCR)：从 BCI-121 处理的细胞中提取总 RNA，并反转录为 cDNA。使用 SYBR Green PCR Master Mix 在实时 PCR 系统上定量 SMYD3 靶基因（cMET、TERT、WNT10B、CDK2）的基因表达水平。使用 ddCT 法进行相对定量，以 β-肌动蛋白作为管家基因进行标准化。 [1] BrdU掺入实验：采用双胸苷阻滞法同步化细胞。同步化过程中，用BCI-121或DMSO处理细胞。在最后一次胸苷释放后4小时和8小时，向培养基中加入BrdU并孵育2小时。然后固定细胞，并使用抗BrdU一抗和荧光标记的二抗检测BrdU掺入。通过荧光显微镜定量BrdU阳性细胞的百分比。[1] 流式细胞术分析：对于细胞周期分析，收集用BCI-121或DMSO处理的细胞，用乙醇固定，并用碘化丙啶染色。然后使用流式细胞仪测量细胞周期分布。 [1]染色质免疫沉淀 (ChIP)：用或不用 BCI-121 处理的细胞进行交联。使用抗 SMYD3 抗体或对照 IgG 对染色质进行免疫沉淀。然后使用针对 SMYD3 靶基因（cMET、WNT10B、CDK2）启动子区域的特异性引物，通过实时 PCR 分析沉淀的 DNA，这些靶基因包含 SMYD3 结合位点。定量采用输入百分比法。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
SMYD3 是一种组蛋白赖氨酸甲基转移酶，在多种癌症（结直肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌和卵巢癌）中过度表达，并发挥致癌作用。[1]
BCI-121（一种哌啶-4-甲酰胺乙酰苯胺化合物）是通过对约 26 万个分子进行虚拟高通量筛选而发现的，其靶点为 SMYD3 催化结构域的组蛋白结合位点。根据分子对接评分和目测结果，BCI-121 是从 15 个被选用于实验测试的化合物之一。[1] 研究表明，BCI-121 的疗效与癌细胞中 SMYD3 的基础表达水平相关，提示 SMYD3 表达可能作为潜在的 SMYD3 靶向治疗中患者分层的预测性生物标志物。 [1] 这项研究首次证实SMYD3参与卵巢癌细胞的生长，因为基因敲除和BCI-121治疗均能抑制卵巢癌细胞系的增殖。[1] 该研究初步证明SMYD3是一个可成药的靶点，并且像BCI-121这样的小分子抑制剂可以开发为新型治疗药物。据推测，BCI-121能够将细胞阻滞在S/G2期，这可能增强传统化疗的疗效。[1] |
| 精确质量 |
339.058
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|---|---|
| CAS号 |
432529-82-3
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| 相关CAS号 |
432529-82-3
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| PubChem CID |
795875
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
576.1±50.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
302.2±30.1 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.6 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.619
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| LogP |
1.8
|
| tPSA |
75.4
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
20
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| 分子复杂度/Complexity |
348
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
NC(C1CCN(CC(NC2=CC=C(Br)C=C2)=O)CC1)=O
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| InChi Key |
KSUYPIXCRPCPGF-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C14H18BrN3O2/c15-11-1-3-12(4-2-11)17-13(19)9-18-7-5-10(6-8-18)14(16)20/h1-4,10H,5-9H2,(H2,16,20)(H,17,19)
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| 化学名 |
4-(Aminocarbonyl)-N-(4-bromophenyl)-1-piperidineacetamide
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| 别名 |
BCI-121 BCI 121 BCI121
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 100 mg/mL (~293.93 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (8.08 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 27.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (8.08 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 27.5mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (8.08 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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BI-9466
MRK-740-NC
SKLB-03220
(Rac)-NSD2-PWWP1-IN-4
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