BETP

Human GLP-1 receptor ( EC50 = 0.66 μM ); Rat GLP-1 receptor ( EC50 = 0.755 μM )
Glucagon-like peptide-1 receptor (GLP-1R) allosteric modulator/partial agonist (EC50 = 740 nM for intrinsic partial agonism in a cAMP accumulation assay using HEK293 cells expressing the human GLP-1 receptor; efficacy was 7% relative to maximal GLP-1(7–36)-NH2 effect).[2]

BETP 是一种 GLP-1 受体激动剂，对人和大鼠 GLP-1 受体的 EC50 分别为 0.66 和 0.755 μM。 BETP（化合物 B）在表达 GLP-2、GIP、PTH 或胰高血糖素受体的细胞中无活性。 BETP (1-10 μM) 可增强正常和糖尿病人胰岛的胰岛素分泌。此外，BETP 与 GLP-1 组合显示出增加 GLP-1 受体信号传导的相加效应 [1]。 BETP 将胃酸调节素的效力提高 10 倍（EC50 为 80 pM）。 GLP-1 不会改变胃泌酸调节素和胰高血糖素对胰高血糖素受体的效力和功效。 BETP (0-30 μM) 增加胃泌酸调节素与 GLP-1 受体的结合亲和力[2]。

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BETP 增强了oxyntomodulin在表达人GLP-1受体的HEK293细胞中诱导的cAMP积累。在4 µM BETP 存在下，oxyntomodulin的效价 (EC50) 提高了10倍 (从770 pM提高到76 pM)，同时保持完全激动剂效能。[2]
BETP 在表达胰高血糖素受体的HEK293细胞中，对oxyntomodulin或胰高血糖素的效价或效能没有影响，证明其对GLP-1受体的选择性。[2]
使用表达GLP-1受体的膜进行的放射性配体结合研究表明，BETP 能剂量依赖性地增加oxyntomodulin与125I-exendin-4(9-39)竞争结合的能力。运用操作模型计算出的结合协同因子 (α) 为15，表明BETP 将oxyntomodulin对GLP-1受体的亲和力提高了15倍。[2]
在使用表达GLP-1受体的膜进行的功能性Gαs特异性GTPγS结合实验中，BETP 剂量依赖性地提高了oxyntomodulin刺激的G蛋白激活的效价。在饱和浓度下，增强后的oxyntomodulin效价在GLP-1(7-36)-NH2观察到的效价的2倍范围内。[2]
BETP 本身在GTPγS结合实验中表现为低效价的部分激动剂。[2]
BETP 不能增强完全激动剂GLP-1(7-36)-NH2激活GLP-1受体的效价或效能。[2]
在表达人GLP-1受体的CHO细胞中，BETP 与oxyntomodulin共同作用时，引发了偏向性信号传导。它对cAMP积累表现出强烈的正协同性 (αβ = 12.6)，对细胞内Ca2+动员 (αβ = 1.70) 和β-arrestin1/2招募表现为中性协同性，对ERK1/2磷酸化表现为效能驱动的负协同性 (β = 0.03)。[2]
BETP 对β-arrestin1招募显示出固有的部分激动剂活性 (Emax = GLP-1(7–36)-NH2的45%)。[2]

BETP 对 SD 大鼠具有促胰岛素作用。 BETP（10 mg/kg，颈静脉插管）在静脉葡萄糖耐量试验 (IVGTT) 模型中表现出胰岛素促分泌活性。 BETP（10 mg/kg，静脉注射）治疗的大鼠需要增加 20% 的葡萄糖输注速度，并且在 SD 大鼠高血糖钳夹模型中显示出更高的血浆胰岛素水平[1]。 BETP (5 mg/kg) 增强胃泌酸调节素刺激的胰岛素分泌[2]。

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在禁食、麻醉的Wistar大鼠静脉葡萄糖耐量试验中，单次静脉注射 BETP (5 mg/kg) 本身仅引起比载体组略高的胰岛素分泌。[2]
BETP (5 mg/kg) 与未饱和剂量的oxyntomodulin (30 nmol/kg) 共同给药，与单用oxyntomodulin相比，显著且协同地增强了oxyntomodulin的促胰岛素作用。胰岛素AUC的增加是非叠加性的，并且大于各自效应的总和。[2]

对于Gαs特异性GTPγS结合实验，从稳定表达人GLP-1受体的HEK293细胞制备膜蛋白。反应体系包含膜蛋白、HEPES、NaCl、MgCl2、皂苷、BSA和[35S]GTPγS的缓冲液。肽和BETP 稀释后共同加入。在环境温度下诱导结合30分钟，然后用去污剂溶解，接着加入兔抗Gαs多克隆抗体和抗兔聚乙烯甲苯珠。检测混合物孵育后离心，用闪烁计数器计数。[2]
对于放射性配体结合实验，使用125I-exendin-4(9-39)作为放射性配体，在表达GLP-1受体的膜或全细胞上进行竞争性结合实验。在固定浓度的BETP 存在下，测量oxyntomodulin置换放射性配体结合的能力。数据用变构激动操作模型拟合以确定协同因子。[2]

对于HEK293细胞的cAMP积累实验，使用瞬时表达人GLP-1受体或胰高血糖素受体的细胞。细胞转染后接种到96孔板中。实验前，将细胞重悬于低血清培养基中。将测试化合物用含有BSA和磷酸二酯酶抑制剂 (IBMX) 的测定培养基稀释后加入细胞。孵育20分钟后，使用均相时间分辨荧光技术试剂盒测定细胞内cAMP水平。用酶标仪测量荧光，数据表示为相对于参考肽激动剂反应的百分比。[2]
对于β-arrestin招募实验，使用BRET技术构建了稳定表达GLP-1受体-Renilla荧光素酶8融合蛋白以及β-arrestin1-或β-arrestin2-Venus融合蛋白的Flp-In CHO细胞系。将细胞接种于96孔板并培养。实验前，洗涤细胞并在缓冲液中孵育。加入Rluc底物腔肠素-h。孵育后加入激动剂，使用能在两个发射窗口顺序整合信号的发光仪收集BRET读数。BRET信号通过从配体处理样品的比值中减去载体处理样品的比值来计算，得到配体诱导的BRET。[2]
在表达人GLP-1受体的CHO细胞中测量细胞内Ca2+动员和ERK1/2磷酸化，方法如文献先前所述。[2]

Rats: The IVGTT research is carried out. Three male SD rats per cage are kept in groups in polycarbonate cages with filter tops. Rats are kept at 21°C on a 12:12 h light-dark cycle (lights come on at 6:00 a.m.), where they are given an unlimited supply of food and deionized water. Rats are fasted for the entire experiment and given 60 mg/kg of pentobarbital to put them to sleep. The jugular vein is punctured with a 0.84 mm catheter to administer glucose and compounds (BETP, etc.). A larger, 1.02 mm-diameter catheter is placed into the carotid artery to collect blood quickly. At times 0, 2, 4, 6, 10, and 20 minutes following intravenous administration of the BETP, blood is drawn for the measurement of glucose and insulin levels. An intravenous glucose bolus of 0.5 g/kg is then administered right away. Insulin and glucose plasma levels are measured[1].

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For the IVGTT, male Wistar rats were fasted overnight and anesthetized. Catheters were inserted into the jugular vein for compound/glucose administration and into the carotid artery for blood sampling. BETP was solubilized in a dosing solution containing ethanol-Solutol, polyethylene glycol-400, and phosphate-buffered saline (pH 7.4). A single intravenous dose of BETP (5 mg/kg), oxyntomodulin, GLP-1(7–36)-NH2, or their combinations was administered via the jugular vein catheter, immediately followed by an intravenous glucose bolus (0.5 g/kg). Blood samples were collected from the arterial catheter at specified time points (0, 2, 4, 6, 10, 20 min) for insulin measurement.[2]
ADME/Pharmacokinetics: The physicochemical liabilities of BETP (and a related quinoxaline compound) limit longer-term studies; both are reported to be unstable in the presence of nucleophiles.[2]

[1]. Novel small molecule glucagon-like peptide-1 receptor agonist stimulates insulin secretion in rodents and from human islets. Diabetes. 2010 Dec;59(12):3099-107.

[2]. Small molecule allosteric modulation of the glucagon-like Peptide-1 receptor enhances the insulinotropic effect of oxyntomodulin. Mol Pharmacol. 2012 Dec;82(6):1066-73.

BETP is a low molecular weight, pyrimidine-based positive allosteric modulator (PAM) and partial agonist of the GLP-1 receptor.[2]
It increases the binding affinity of the endogenous peptide oxyntomodulin for the GLP-1 receptor, representing an "affinity-driven" mechanism of action.[2]
It is a highly selective allosteric modulator, showing GLP-1 receptor-dependent action without enhancing oxyntomodulin's actions on the glucagon receptor.[2]
BETP engenders biased signaling at the oxyntomodulin-bound GLP-1 receptor, selectively enhancing the cAMP pathway over Ca2+ mobilization, ERK1/2 phosphorylation, or β-arrestin recruitment pathways.[2]
It demonstrates proof-of-concept that a small molecule allosteric modulator can potentiate the activity of an endogenous hormone (oxyntomodulin) on the GLP-1 receptor to enhance insulin secretion, suggesting a novel therapeutic approach for type 2 diabetes.[2]

C20H17N2O2F3S

406.42138

406.096

1371569-69-5

49868481

Light yellow to yellow solid powder

5.734

71.29

0

8

6

28

514

0

FC(C1=CC(C2=CC=CC(OCC3=CC=CC=C3)=C2)=NC(S(CC)=O)=N1)(F)F

NTDFYGSSDDMNHI-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C20H17F3N2O2S/c1-2-28(26)19-24-17(12-18(25-19)20(21,22)23)15-9-6-10-16(11-15)27-13-14-7-4-3-5-8-14/h3-12H,2,13H2,1H3

2-ethylsulfinyl-4-(3-phenylmethoxyphenyl)-6-(trifluoromethyl)pyrimidine

BETP

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~25 mg/mL (~61.5 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。