| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
mTRPC6 (IC50 = 13 nM); hTRPC6 (IC50 = 19 nM); guinea pig TRPC6 (IC50 = 15 nM)[1]
BI-749327 is a potent and selective antagonist of the Transient Receptor Potential Canonical type 6 (TRPC6) channel. The half-maximal inhibitory concentration (IC₅₀) for mouse TRPC6 is 13 nM. It shows 85-fold selectivity over TRPC3 (IC₅₀ = 1,100 nM) and 42-fold selectivity over TRPC7 (IC₅₀ = 550 nM). It also exhibits >700-fold selectivity over TRPC5, and >500-fold selectivity over human TRPM8, TRPV1, TRPA1, and Nav1.5, as well as >150-fold selectivity over human Kv11.1 (hERG). [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在表达野生型或功能获得性 TRPC6 突变体的 HEK293T 细胞中，BI-749327 可减少 NFAT 激活。它还可以防止分离的肌细胞中相关信号传导和促肥大基因的产生[1]。
在这项研究中，研究人员报告了一种口服生物可利用的TRPC6拮抗剂（BI 749327；对小鼠TRPC6的IC50为13 nM，t1/2为8.5-13.5小时），对最密切相关的通道TRPC3和TRPC7具有85倍和42倍的选择性。TRPC6钙电导导致活化T细胞核因子（NFAT）的刺激，从而引发病理性心脏和肾脏纤维化和疾病。BI 749327抑制表达野生型或功能获得性TRPC6突变体（P112Q、M132T、R175Q、R895C和R895L）的HEK293T细胞中NFAT的激活，并阻断分离的肌细胞中促肥大基因的相关信号传导和表达。 在转染了核因子活化T细胞 (NFAT)-荧光素酶报告基因和 TRPC6 的 HEK293T 细胞中，BI-749327 以剂量依赖的方式抑制 TRPC6 介导的 NFAT 活化，500 nM 的浓度可完全消除该信号。此效应是 TRPC6 特异性的，因为 500 nM 的 BI-749327 对转染空载体或 TRPC3 的细胞的 NFAT 活性无影响，对 TRPC7 仅观察到轻微的抑制。[1] BI-749327 (500 nM) 也能完全阻断由几种与人类家族性肾小球硬化相关的功能获得型 TRPC6 突变体 (P112Q, M132T, R175Q, R895C, R895L) 诱导的 NFAT 活化。[1] 在新生的大鼠心室肌细胞中，血管紧张素 II (Ang II, 100 nM, 48 小时) 刺激上调了促肥大基因 (Nppa, Nppb, Myh7) 和钙调磷酸酶/NFAT 通路基因 (Rcan1, Trpc6) 的 mRNA 表达。与 BI-749327 (250 nM 或 500 nM) 共同处理可减弱这种上调。BI-749327 单独处理不改变这些基因的表达。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
BI-749327（30 mg/kg/天；ig）可改善慢性压力超负荷小鼠的左心室功能，降低体积/质量比，并减弱促纤维化基因和间质纤维化的表达[1]。 BI-749327 剂量依赖性地降低单侧输尿管梗阻小鼠的肾纤维化和相关基因表达 [1]。 BI-749327 在小鼠中具有较长的终末半衰期（t1/2 8.5-13.5 小时）（3-30 mg/kg；口服）[1]。
在体内，BI 749327（30 mg/kg/天，产生约180 nM的未结合谷血浆浓度）改善了持续压力超负荷小鼠的左心功能，降低了体积/质量比，并减弱了促纤维化基因的表达和间质纤维化。此外，BI 749327剂量依赖性地降低单侧输尿管梗阻小鼠的肾纤维化和相关基因表达。这些结果为具有口服生物利用度和适当药代动力学的选择性药理学TRPC6抑制剂改善心脏和肾脏应激诱导的纤维化疾病的治疗效果提供了体内证据[1]。 在小鼠横主动脉缩窄 (TAC) 诱导的心脏压力超负荷模型中，从术后一周开始每日口服 BI-749327 (30 mg/kg/天)，与溶媒组相比，在 7 周内逐渐改善了左心室缩短分数。[1] 有创压力-容积分析显示，BI-749327 治疗显著降低了假手术组和 TAC 手术组小鼠的左心室舒张末期和收缩末期容积，且未改变心率、峰值收缩压或负荷无关的收缩力指数 (前负荷可招募每搏功和收缩末期弹性)。这表明心脏前负荷降低。[1] BI-749327 治疗抑制了 TAC 诱导的心肌胎儿基因 (Nppa, Nppb)、纤维化基因 (Col1a2, Col3a2, Fn1, Mmp2, Tgfb1, Timp2) 以及反馈调节因子 Rcan1 的表达。它还降低了心脏中的 Trpc6 mRNA 水平。[1] 通过组织学评估，与溶媒组相比，接受 BI-749327 治疗的 TAC 小鼠的心肌间质纤维化减少了约 40%。[1] 在小鼠单侧输尿管梗阻 (UUO) 诱导的肾纤维化模型中，从手术开始时每日口服 BI-749327 (3, 10, 30 mg/kg/天) 剂量依赖性地减少了间质胶原沉积 (通过天狼星红染色测量) 和肌成纤维细胞标志物平滑肌α-肌动蛋白 (αSMA) 的表达。[1] BI-749327 治疗还降低了 UUO 诱导的肾脏 Tgfb1、Col4a1 和 Fn1 mRNA 的表达，减少了 T 细胞浸润 (CD3+ 染色)，并减少了间质病变的数量。[1] |
| 酶活实验 |
采用全细胞膜片钳电生理学实验测定 BI-749327 对 TRPC6 通道的抑制效力。转染表达小鼠、人或豚鼠 TRPC6 的 HEK293 细胞。电流由二酰基甘油类似物 OAG 激活。对细胞进行电压钳制，记录响应电压斜坡协议 (从 -80 mV 到 +80 mV) 的电流。施加 BI-749327，测量 OAG 激活电流的浓度依赖性抑制，以计算 IC₅₀ 值。[1]
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| 细胞实验 |
体外细胞检测。[1]
从新生Sprague-Dawley大鼠幼崽中分离出新生大鼠心室肌细胞，用血管紧张素II刺激，然后进行赋形剂或BI 749327治疗。将HEK293T细胞培养至70%融合，用表达NFAT荧光素酶报告基因和另一个表达WT-TRPC6、功能获得TRPC6突变体（P112Q、M132T、R175Q、R895C和R895L）的质粒或空载体pcDNA3.1转染。作为内部对照，转染了肾荧光素酶质粒。 对于 NFAT-荧光素酶报告基因实验，培养 HEK293T 细胞并在 70% 汇合度时进行转染，转染质粒包括 NFAT 响应性荧光素酶报告基因、海肾荧光素酶内参质粒，以及野生型 TRPC6、功能获得型 TRPC6 突变体 (P112Q, M132T, R175Q, R895C, R895L)、TRPC3、TRPC7 或空载体对照。转染后，用 BI-749327 或溶媒处理细胞。测量荧光素酶活性，归一化至 海肾 发光值，并表示为相对于对照的倍数变化。[1] 对于原代心肌细胞实验，从 Sprague-Dawley 乳鼠分离新生大鼠心室肌细胞。用血管紧张素 II (100 nM) 刺激细胞，并与 BI-749327 或溶媒共同处理 48 小时。然后提取 RNA，通过实时定量 PCR 定量靶基因 (Trpc6, Rcan1, Nppa, Nppb, Myh7) 的 mRNA 水平，以 Gapdh 为内参进行归一化。[1] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： C57BL/6J 小鼠[1]
剂量： 30 mg/kg/天 给药途径： po（口服灌胃） 实验结果： 持续应激下小鼠的左心室功能得到改善，容积/质量比降低，促纤维化基因和间质纤维化表达因负荷过重而减弱。 动物/疾病模型： CD-1 小鼠[1] 剂量： 3 mg/kg、10 mg/kg、30 mg/kg 给药途径： 口服 实验结果： t1/2 8.5-13.5 小时 药代动力学研究。[1] 在雄性 CD-1 小鼠中，以 3、10 和 30 mg/kg 的剂量水平，以及在 B6129F1 小鼠中以 30 mg/kg 的剂量水平，研究了 BI 749327 的药代动力学。通过穿刺大隐静脉进行连续血液采样，并使用EDTA涂层微量采血管收集样本。 体内压力超负荷模型。[1] 小鼠在TAC手术前1周开始每日灌胃甲基纤维素/Tween-80载体。TAC术后1周，小鼠每日灌胃给予载体或BI 749327治疗。 TAC术后8周，通过连续超声心动图检查和终末压力-容积分析评估心脏功能。 体内单侧输尿管梗阻模型[1] 进行正中剖腹手术，分离左侧输尿管，并在肾下极边界处结扎，以诱导不可逆性单侧输尿管梗阻（UUO）。 对于心脏压力负荷模型，C57BL/6J小鼠接受横向主动脉缩窄术（TAC）或假手术。所有小鼠在术前一周每日灌胃给予载体（甲基纤维素/Tween-80）以适应环境。TAC术后一周，将小鼠随机分为两组，分别每日灌胃给予载体或BI-749327（30 mg/kg/天），持续7周。每周通过超声心动图评估心脏功能。在研究终点，通过左心室压力-容积导管进行终末血流动力学评估。[1] 对于肾纤维化模型，小鼠接受单侧输尿管梗阻（UUO）手术。术后立即开始给予BI-749327治疗（3、10或30 mg/kg/天）或赋形剂，每日通过灌胃给药。术后10-14天采集肾脏进行组织学和分子分析。[1] 对于药代动力学研究，配制BI-749327，并以指定剂量口服给予CD-1、B6129F1或C57BL/6J小鼠。通过大隐静脉连续采集血样至EDTA抗凝管中，用于血浆药物浓度分析。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
为了测试 BI 749327 的体内疗效，我们首先进行了单剂量药代动力学 (PK) 实验以指导后续研究。对 CD-1 小鼠口服 3、10 或 30 mg/kg BI 749327 后，最大血浆浓度 (Cmax) 和总系统暴露量均呈剂量比例增加（见补充信息附录图 S2A 和表 S3）。该化合物的终末半衰期 (t1/2) 为 8.5–13.5 小时，适合每日一次口服给药。对 B6129F1、CD-1 和 C57BL/6J 小鼠口服 30 mg/kg BI 749327 后，药物暴露量相当（见补充信息附录图 S2）。随后，我们利用这些数据建立了一个双室药代动力学模型来模拟多次给药。通过平衡透析法测得 BI 749327 与小鼠血浆蛋白的结合率较高，为 98.4 ± 0.1%（浓度为 1 µM），相应的游离分数为 1.6%。基于此，每日口服 30 mg/kg 剂量时，谷浓度游离浓度约为 180 nM，是 TRPC6 IC50 的 10 倍，是 TRPC7 和 TRPC3 IC50 的 1/5 至 1/6。[1]
对 CD-1 小鼠单次口服 BI-749327（3、10、30 mg/kg）后，最大血浆浓度 (Cₘₐₓ) 和总系统暴露量 (AUC) 均呈剂量比例增加。 [1] 在小鼠体内，终末半衰期 (t₁/₂) 为 8.5 至 13.5 小时，支持每日一次口服给药。[1] 在小鼠体内，通过 1 μM 浓度下的平衡透析法测得的血浆蛋白结合率较高 (98.4 ± 0.1%)，导致游离药物浓度为 1.6%。[1] 在小鼠体内，每日口服 30 mg/kg 剂量后，模拟谷浓度游离血浆浓度约为 180 nM。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在压力超负荷小鼠中，每日口服 30 mg/kg/天的 BI-749327，持续长达 8 周，未显著改变清醒动物的平均动脉压或心率。[1]
该文章未报告具体的体外或体内毒性数据，例如致死剂量、器官毒性（除疗效相关的组织学外）、药物相互作用或详细的毒代动力学参数。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
本研究存在一些局限性。首先，BI 749327 与靶点结合的证据仍是间接的，依赖于通路中激活的生物标志物。对于肾脏而言，可能需要进一步的细胞特异性基因表达分析来证实其作用。我们没有在 TRPC6 KO 小鼠中测试每种疾病模型以评估其选择性，因为这些模型本身会改变疾病状态：TRPC6 基因缺失发生在疾病发生之前，其他通道的上调可能起到代偿作用。TAC 心脏模型无法测试 TRPC6 拮抗剂是否能逆转肺充血（肺充血是前负荷下降的潜在后果），因为它模拟的是部分代偿性肥厚而非心力衰竭。UUO 模型会产生间质纤维化，但不会产生肾小球疾病或蛋白尿。未来需要利用能够模拟这些异常的模型（例如糖尿病肾病和其他肾脏疾病）来测试 BI 749327 对这些疾病的治疗潜力。表达导致人类严重肾损伤的TRPC6功能获得性突变的小鼠很少出现明显的疾病症状，因此这类试验最终可能最好在人体中进行。[1]
总之，我们揭示了一种口服生物利用度高的TRPC6拮抗剂在体内治疗慢性促纤维化疾病方面的疗效证据。除了心脏和肾脏疾病外，TRPC6过度激活还与肺部和其他组织的重要病理生理过程相关，而BI 749327良好的口服特性也支持探索其在这些器官中的治疗作用。[1] BI-749327是通过高通量筛选和后续的药物化学优化而发现的，其具有纳摩尔级的效力、高选择性（特别是对TRPC3和TRPC7的选择性）以及适合每日一次口服给药且峰谷比低的药代动力学特性。 [1] 这是一种口服生物利用度高的药理学工具，可在成年动物疾病发作后抑制TRPC6，这与基因敲除模型形成对比。[1] 其治疗作用机制与抑制TRPC6介导的钙离子内流有关，从而抑制钙调磷酸酶-NFAT信号通路。该通路是心脏和肾脏中病理基因表达、肌成纤维细胞活化和纤维化的关键驱动因素。[1] 使用BI-749327治疗后观察到的心腔容积减少，且与收缩力变化无关，这提示其可能对静脉张力或循环血容量产生全身性影响，这可能对充血性心力衰竭有益。[1] |
| 分子式 |
C23H21F3N4O2
|
|---|---|
| 分子量 |
442.433655500412
|
| 精确质量 |
442.161
|
| 元素分析 |
C, 62.44; H, 4.78; F, 12.88; N, 12.66; O, 7.23
|
| CAS号 |
2361241-23-6
|
| PubChem CID |
138377580
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
3.6
|
| tPSA |
81.3
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
32
|
| 分子复杂度/Complexity |
611
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
FC(C1C=CC(=CC=1)OC1C=CC(=CC=1)C(N1CCC(C2=CC=C(N)N=N2)CC1)=O)(F)F
|
| InChi Key |
RGYMFGHHIDRCBN-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C23H21F3N4O2/c24-23(25,26)17-3-7-19(8-4-17)32-18-5-1-16(2-6-18)22(31)30-13-11-15(12-14-30)20-9-10-21(27)29-28-20/h1-10,15H,11-14H2,(H2,27,29)
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| 化学名 |
[4-(6-aminopyridazin-3-yl)piperidin-1-yl]-[4-[4-(trifluoromethyl)phenoxy]phenyl]methanone
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| 别名 |
BI749327; BI 749327; (4-(6-Aminopyridazin-3-yl)piperidin-1-yl)(4-(4-(trifluoromethyl)phenoxy)phenyl)methanone; BI 749327; [4-(6-aminopyridazin-3-yl)piperidin-1-yl]-[4-[4-(trifluoromethyl)phenoxy]phenyl]methanone; BI749327; SCHEMBL21274829; GTPL12530; BI-749327
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~31.25 mg/mL (~70.63 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.70 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.70 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.70 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2602 mL | 11.3012 mL | 22.6024 mL | |
| 5 mM | 0.4520 mL | 2.2602 mL | 4.5205 mL | |
| 10 mM | 0.2260 mL | 1.1301 mL | 2.2602 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
L-R4W2 acetate
TRPM2-IN-1
TRPA1-IN-4
TRPA1 agonist-1
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COA
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463611831
