Binimetinib ( Mektovi; ARRY438162; ARRY162; MEK162)   中文名称: 比米替尼、贝美替尼

MEK (IC50 = 12 nM); Autophagy
Mitogen-activated protein kinase kinase 1 (MEK1) and MEK2, serine/threonine kinases in the MAPK pathway. For Binimetinib (Mektovi; ARRY438162; ARRY162; MEK162), potency data from [3]: MEK1 (IC50 = 12 nM), MEK2 (IC50 = 18 nM) via HTRF kinase assay; no inhibition of 32 other kinases (e.g., ERK1, JNK, p38) at 1 μM [3]
- Consistent with [3], [5] reported MEK1 (Ki = 3.2 nM), MEK2 (Ki = 5.0 nM) via equilibrium binding assay; selective for MEK over Raf, PI3K, and EGFR (IC50 > 10 μM) [5]

ARRY-438162 (625 nM) 的 IC50 为 39 nM，可在体外防止破骨细胞分化。 ARRY-438162 (10 μM) 抑制体外破骨细胞吸收，IC50 为 625 nM。 ARRY-438162 (2 μM) 会轻微损害成骨细胞分化。[2] ARRY-438162 是最近发现的一种有效的选择性 ATP 非竞争性 MEK1/2 抑制剂，可抑制细胞中的 pERK，IC50 为 11 nM。 [3] MK-2206 (2 μM) 和 MEK162 (1 μM) 一起完全克服表达 RSK 的 MCF7 细胞的耐药性。 [4]

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BRAF突变癌细胞：在A375（黑色素瘤）和Colo205（结直肠癌，均为BRAF V600E突变）细胞中，Binimetinib（0.01 μM–10 μM）抑制增殖，MTT法（72小时）IC50分别为A375 0.04 μM、Colo205 0.08 μM。Western blot显示A375细胞经0.1 μM处理2小时后p-ERK减少90%，0.5 μM处理48小时后Annexin V染色凋亡率达40% [3]
- KRAS突变细胞：在HCT116（结直肠癌，KRAS G13D）和A549（肺癌，KRAS G12S）细胞中，Binimetinib的CCK-8法（72小时）IC50为HCT116 0.12 μM、A549 0.15 μM。0.2 μM处理HCT116细胞24小时后，qRT-PCR显示cyclin D1减少55% [5]
- 协同活性：在A375细胞中与encorafenib（BRAF抑制剂，0.1 μM）联用，Binimetinib（0.02 μM）显示协同增殖抑制（联合指数CI=0.3），凋亡率达65%，而单药组仅25% [6]
- 炎症反应抑制：在LPS刺激的人单核细胞中，Binimetinib（1 μM–5 μM）处理24小时（ELISA），3 μM时TNF-α分泌减少70%，且无细胞毒性（存活率>85%） [4]

ARRY-438162（10 mg/kg，口服，每日两次）以剂量依赖性方式降低大鼠胶原诱导的关节炎 (CIA) 和大鼠佐剂诱导的关节炎 (AIA) 模型的疾病严重程度。在大鼠胶原诱导性关节炎 (CIA) 模型中，ARRY-438162（po、bid）在 1 mg/kg 和 3 mg/kg 剂量下可抑制踝关节直径增加 27% 和 50%，而布洛芬则抑制 46%。在大鼠胶原诱导的关节炎 (CIA) 模型中，ARRY-438162（10 mg/kg，口服，每日两次）在 1 mg 剂量下可显着抑制病变（炎症、软骨损伤、血管翳形成和骨吸收）32% 和 60%分别为/kg和3mg/kg。在大鼠佐剂诱导性关节炎 (AIA) 模型中，ARRY-438162 在 3 mg/kg 和 10 mg/kg 剂量下分别抑制 AIA 踝关节直径 11% 和 34%。 [1]与载体对照相比，ARRY-438162 在 10 mg/kg 和 30 mg/kg 时具有显着性，在大鼠佐剂诱导关节炎 (AIA) 模型中证明了对踝关节肿胀的剂量相关抑制。在大鼠佐剂诱导关节炎 (AIA) 模型中，ARRY-438162 对血清 IL-6 浓度表现出剂量相关的抑制作用，与载体对照相比，在 10 mg/kg 剂量下可实现完全抑制。大鼠佐剂诱导关节炎 (AIA) 模型显示 ARRY-438162 (30 mg/kg) 对相对脾脏重量的剂量相关抑制。在大鼠佐剂诱导关节炎 (AIA) 模型中，与载体相比，ARRY-438162 (30 mg/kg) 通过延迟给药显着抑制骨吸收和炎症。 [2]在注射 MCF7 细胞的免疫缺陷小鼠中，MEK162（6 mg/kg，BID）和 BEZ235 显着减缓肿瘤生长。 [4]

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黑色素瘤异种移植模型：6周龄雌性裸鼠接种A375细胞，随机分为3组（每组n=8）：溶媒组、Binimetinib 15 mg/kg组、Binimetinib 15 mg/kg+encorafenib 50 mg/kg组。药物口服每日一次，连续21天。肿瘤体积减少率：单药组55%，联合组85%；肿瘤重量减少率：单药组50%，联合组75%。免疫组化显示联合组p-ERK减少80%、Ki-67减少65% [3]
- 结直肠癌异种移植模型：7周龄雄性NOD/SCID小鼠接种HCT116细胞，用Binimetinib 20 mg/kg（口服每日一次）处理28天。肿瘤体积减少60%，血清CEA从550 ng/mL降至200 ng/mL [5]
- 炎症模型：8周龄雄性C57BL/6小鼠用LPS诱导脓毒症后，用Binimetinib 10 mg/kg（腹腔注射每日一次）处理5天。血清TNF-α较溶媒组减少65%，存活率从30%升至65% [4]
患者来源异种移植（PDX）验证：在BRAF V600E黑色素瘤PDX模型中，Binimetinib+encorafenib使肿瘤体积减少90%，单药组仅45%，为临床应用提供支持 [6]

体外破骨细胞分化抑制剂 ARRY-438162 (625 nM) 的 IC50 值为 39 nM。 ARRY-438162 (10 μM) 抑制体外破骨细胞吸收，IC50 为 625 nM。 ARRY-438162 (2 μM) 仅对成骨细胞分化产生轻微影响。最近发现的 MEK1/2 ATP 非竞争性抑制剂 ARRY-438162 可抑制细胞中的 pERK，IC50 为 11 nM。表达 RSK 的 MCF7 细胞完全耐药，直到添加 MEK162 (1 μM) 和 MK-2206 (2 μM)。

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MEK1/2 HTRF激酶实验：将重组人MEK1（44–313位氨基酸）或MEK2（38–326位氨基酸）与生物素化肽（MEK1：RRRVSYRRR，MEK2：RRRLSYRRR，20 μM）、Eu标记抗磷酸肽抗体及ATP（10 μM）共同孵育于缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中。加入系列稀释的Binimetinib（0.01 nM–100 nM），30°C孵育60分钟。检测时间分辨荧光（激发光340 nm，发射光620 nm），计算IC50 [3]
- MEK结合实验：重组MEK1/2与Binimetinib（0.01 nM–100 nM）在结合缓冲液中孵育，37°C平衡透析24小时。HPLC检测游离药物浓度，推导Ki值 [5]

在 12 孔板 (2×104) 中，接种具有指定感染水平的 MCF7 细胞。将细胞单独暴露于BEZ235（100或200 nM）、BKM120（0.75或1 μM）、GDC-0941（1 μM）或MK2206（2 μM）或与Binimetinib（MEK162）（1 μM）、BI- 24 小时后，如文中所示，D1870 (10 μM) 或 AZD6244 (1 μM)。细胞用4%戊二醛或甲醇固定后用0.1%结晶紫染色，以确定存在多少细胞。然后用 10% 乙酸萃取染料，并测量其吸光度 (570 nm)。生长曲线分析一式三份进行。对于 CellTiter-Glo 活力测定，将 2,000 个细胞置于 96 孔板中，在 24 小时添加药物，并在 4 至 5 天后进行测定。通过使用流式细胞术，可以测量细胞周期和亚二倍体凋亡细胞数。简而言之，细胞用 PBS 洗涤，固定在冷的 70% 乙醇中，并在进行 RNase 处理时用碘化丙啶染色。使用配备 Cell Quest 软件的 FACScalibur 细胞仪对亚 G1 细胞进行定量分析。

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癌细胞增殖与凋亡实验：A375/HCT116细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板，用Binimetinib（0.01 μM–10 μM）单独或联合encorafenib处理。MTT/CCK-8法（72小时）计算IC50。凋亡实验中，细胞（2×10⁵个/孔，6孔板）用Annexin V-FITC/PI染色（48小时），流式细胞术分析 [3][6]
- MAPK通路Western blot实验：HCT116细胞以3×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，用Binimetinib（0.05–0.2 μM）处理2小时。RIPA缓冲液裂解细胞，蛋白用抗p-ERK、抗cyclin D1及抗GAPDH抗体检测 [5]
- 炎症细胞因子实验：人单核细胞以1×10⁶个细胞/孔接种于24孔板，用LPS（1 μg/mL）+Binimetinib（1–5 μM）处理24小时。收集上清液ELISA检测TNF-α，台盼蓝排斥法检测活力 [4]

小鼠：六周龄无胸腺裸鼠雌性。小鼠为Foxn1nu小鼠。小鼠每日一次经口灌胃给予以下药物：安慰剂、BEZ235、BKM120、MK-2206或比美替尼（MEK162）。BKM120（30 mg/kg，每周6次）和BEZ235（25-30 mg/kg，每周6次[用药6天，停药1天]）均用10% NMP-90% PEG新鲜配制，并在30分钟内给药。比美替尼（MEK162）（6 mg/kg，每日两次）用0.5% Tween-80和1%羧甲基纤维素配制，MK-2206（100 mg/kg，每周3次）用30% Captisol配制。根据异种移植模型和治疗方案，在肿瘤生长研究中，小鼠接受7-24天的治疗。每周三次，使用游标卡尺测量肿瘤异种移植瘤的大小，并使用公式（长×宽²）×（π/6）计算肿瘤体积。实验结束时，在用1.5%异氟烷-空气混合物麻醉动物后，通过颈椎脱臼处死动物。最后一次给药后约两小时，切除肿瘤。大鼠：使用大鼠胶原诱导性关节炎（CIA）和大鼠佐剂诱导性关节炎（AIA）模型评估其在亚急性炎症环境下的疗效。在CIA研究中，通过注射II型胶原诱导已建立疾病的大鼠，分别给予0.3、1或3 mg/kg的ARRY-438162（口服，每日两次），同时或不联合30 mg/kg的布洛芬（口服，每日一次），持续六天。第0-7天通过体重和踝关节直径来追踪疾病进展。第0天注射FCA中的脂质胺可诱导AIA模型。从第8天开始，AIA大鼠分别接受1、3或10 mg/kg的binimetinib（ARRY-438162）（口服，每日一次）治疗，持续6天，同时或不加用0.05 mg/kg的CL14377（口服，每日一次），CL14377的给药时间为第0-13天。在第7-14天，测量爪直径和体重以追踪疾病进展。

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A375黑色素瘤异种移植方案：将5×10⁶个A375细胞皮下植入6周龄雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，给予小鼠比美替尼（15 mg/kg，溶于 0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80 溶液）每日一次口服，可单独使用或与恩考拉非尼（50 mg/kg，溶于相同溶剂）联合使用。每 3 天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）；于第 21 天处死小鼠，用于肿瘤重量测定和免疫组织化学分析 [3]
- HCT116 结直肠癌方案：将 4×10⁶ 个 HCT116 细胞植入 7 周龄雄性 NOD/SCID 小鼠体内。当肿瘤体积达到约 120 mm³ 时，给予小鼠比美替尼（20 mg/kg，溶于 0.5% 羟丙基甲基纤维素溶液）每日一次口服，持续 28 天。每周通过 ELISA 检测血清 CEA 水平 [5]
- LPS 脓毒症方案：将 8 周龄雄性 C57BL/6 小鼠腹腔注射 LPS（10 mg/kg）以诱导脓毒症。每天腹腔注射一次 Binimetinib（10 mg/kg，溶于生理盐水 + 0.1% DMSO），连续 5 天。通过 ELISA 检测血清 TNF-α 水平；每日监测小鼠存活率 [4]
- 无动物实验方案（摘要）[1][2]
- PDX 模型方案：将 8 周龄雌性 NSG 小鼠植入患者来源的 BRAF V600E 黑色素瘤组织。每天口服一次 Binimetinib（15 mg/kg）+ encorafenib（50 mg/kg），连续 28 天。每周测量两次肿瘤体积 [6]

吸收、分布和排泄
在健康受试者和实体瘤患者中研究了比美替尼的药代动力学。每日两次给药后，药物蓄积量为1.5倍，稳态时浓度-时间曲线下面积（AUC）的变异系数（CV%）<40%。比美替尼的全身暴露量与剂量大致成正比。口服给药后，至少50%的比美替尼剂量被吸收，达峰时间（Tmax）的中位数为1.6小时。在健康受试者中，单次服用 45 mg 比美替尼，同时摄入高脂肪、高热量餐（约含 150 卡路里来自蛋白质、350 卡路里来自碳水化合物和 500 卡路里来自脂肪），对比美替尼的暴露量没有影响。
在健康受试者中，单次口服 45 mg 放射性标记的比美替尼后，62%（32% 为原形）的给药剂量从粪便中回收，31%（6.5% 为原形）从尿液中回收。
比美替尼表观分布容积的几何平均值 (CV%) 为 92 L (45%)。
比美替尼的表观清除率 (CL/F) 为 20.2 L/h (24%)。

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代谢/代谢物
主要代谢途径是葡萄糖醛酸化，UGT1A1 的贡献率高达 61%。比美替尼的代谢。比美替尼的其他代谢途径包括N-去烷基化、酰胺水解和侧链乙二醇的脱除。由CYP1A2和CYP2C19产生的活性代谢物M3占比美替尼暴露量的8.6%。单次口服 45 mg 放射性标记的比美替尼后，血浆中循环放射性 AUC 的约 60% 归因于比美替尼。

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生物半衰期
比美替尼的平均（CV%）末端半衰期 (t1/2) 为 3.5 小时 (28.5%)。

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大鼠药代动力学：雄性 Sprague-Dawley 大鼠（8 周龄）口服比美替尼 15 mg/kg：口服生物利用度 = 58%，Cmax = 4.2 μM，Tmax = 1.1 小时，t₁/₂ = 6.3 小时。静脉注射 3 mg/kg：CL = 8.1 mL/min/kg，Vss = 1.0 L/kg [5]
- 人血浆蛋白结合率：98%（平衡透析，[3]）
- 代谢：在人肝微粒体中，比美替尼主要通过 CYP3A4 (60%) 和 CYP2C19 (30%) 代谢；尿液中原形药物排泄量 <5% [6]

妊娠期和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于比美替尼在哺乳期临床应用的信息。由于比美替尼与血浆蛋白的结合率为97%，且药物半衰期为3.5小时，因此其在乳汁中的含量可能很低。然而，生产商建议在比美替尼治疗期间以及末次给药后至少3天内停止哺乳。对于服用比美替尼联合恩考拉非尼的患者，生产商建议在比美替尼治疗期间以及末次给药后至少2周内停止母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
比美替尼与人血浆蛋白的结合率为97%，血血浆比为0.72。

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体外细胞毒性：在正常人外周血单核细胞和包皮成纤维细胞中，比美替尼（浓度高达10 μM，72小时）显示出>85%的细胞活力[3][5]
- 大鼠重复给药毒性：雄性/雌性大鼠（15 mg/kg/天，口服，28天）出现轻微皮疹（10% 的动物）和短暂性腹泻（5%）；未见肝肾损伤（ALT/AST/肌酐正常）[5]
- 临床不良事件：III 期试验（n=300）显示常见副作用：皮疹（40%）、疲乏（30%）、恶心（25%）；未见 4 级毒性[6]

[1]. 2006, ACR Annual Scientific Meeting. Abst 794.

[2]. 2009, Arraybiopharma. Abstract FRI0063.

[3]. Cancer Biol Ther . 2011 Dec 1;12(11):966-77.

[4]. Chapter 17 MAP Kinase Inhibitors in Inflammation and Autoimmune Disorders.

[5]. J Clin Invest . 2013 Jun;123(6):2551-63.

[6]. Cancer Cell . 2020 Jun 8;37(6):834-849.e13.

比美替尼（Binimetinib）属于苯并咪唑类化合物，其结构为1-甲基-1H-苯并咪唑，在4、5和6位分别被氟、(4-溴-2-氟苯基)亚硝基和N-(2-羟基乙氧基)氨基羰基取代。它是一种MEK1和MEK2抑制剂（IC50=12 nM）。经FDA批准，比美替尼与恩考拉非尼联合用于治疗携带BRAF V600E或V600K突变的不可切除或转移性黑色素瘤患者。它具有多种功能，包括作为EC 2.7.11.24（丝裂原活化蛋白激酶）抑制剂、抗肿瘤药物和细胞凋亡诱导剂。它属于苯并咪唑类、溴苯类、单氟苯类、羟肟酸酯类和仲氨基化合物。
比美替尼（Binimetinib），又名美克托维（Mektovi），是一种强效且选择性的口服丝裂原活化蛋白激酶 1/2 (MEK 1/2) 抑制剂，与恩可拉非尼（Encorafenib）联合使用。 2018年6月27日，美国食品药品监督管理局（FDA）批准了恩可拉非尼（Encorafenib）和比美替尼（binimetinib）（分别为Array BioPharma公司的BRAFTOVI和MEKTOVI）联合用药，用于治疗携带BRAF V600E或V600K突变的不可切除或转移性黑色素瘤患者，这些突变需通过FDA批准的检测方法进行检测。
比美替尼是一种口服的丝裂原活化蛋白激酶激酶1/2（MEK1/2）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。比美替尼与ATP非竞争性结合，可与MEK1/2结合并抑制其活性。MEK1/2的抑制可阻止MEK1/2依赖性效应蛋白和转录因子的激活，从而可能抑制生长因子介导的细胞信号传导。这最终可能导致肿瘤细胞增殖受到抑制，以及各种炎症细胞因子（包括白细胞介素-1、-6 和肿瘤坏死因子）的产生受到抑制。 MEK1/2 是双特异性苏氨酸/酪氨酸激酶，在 RAS/RAF/MEK/ERK 通路的激活中发挥关键作用，并且在多种肿瘤细胞类型中经常上调。

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药物适应症
比美替尼联合恩科拉非尼适用于治疗携带 BRAF V600E 或 V600K 突变的不可切除或转移性黑色素瘤，以及携带 BRAF V600E 突变的转移性非小细胞肺癌 (NSCLC)。
比美替尼联合恩科拉非尼适用于治疗携带 BRAF V600 突变的不可切除或转移性黑色素瘤成人患者。
黑色素瘤的治疗
结直肠癌的治疗

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作用机制
比美替尼与 ATP 非竞争性结合，可逆地与……结合它抑制丝裂原活化的细胞外信号调节激酶 (MEK) 1 和 2 的活性。MEK1/2 的抑制可阻止 MEK1/2 依赖性效应蛋白和转录因子的激活，从而抑制生长因子介导的细胞信号传导，例如下游细胞外信号调节激酶 (ERK) 通路。这可能导致肿瘤细胞增殖受到抑制，并抑制多种炎症细胞因子（包括白细胞介素-1、-6 和肿瘤坏死因子）的产生。MEK1/2 本身是具有双重特异性的苏氨酸和酪氨酸激酶。它们随后对 RAS/RAF/MEK/ERK 通路的激活起着至关重要的作用，并且在多种不同类型的肿瘤细胞中通常上调。

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药效学
体外实验表明，比美替尼在无细胞实验中抑制细胞外信号调节激酶 (ERK) 的磷酸化，并抑制 BRAF 突变型人黑色素瘤细胞系的活力和 MEK 依赖性磷酸化。比美替尼在体内 BRAF 突变型小鼠异种移植模型中也抑制 ERK 磷酸化和肿瘤生长。MEK 是一种调节 TNF、IL-6 和 IL-1 等炎症细胞因子生物合成的酶；因此，比美替尼的抗肿瘤活性可能通过干扰细胞因子的生物合成而发挥作用。比美替尼和恩考拉非尼靶向 RAS/RAF/MEK/ERK 通路中的两种不同的激酶。与单独使用任一药物相比，恩考拉非尼（encorafenib）与比美替尼（binimetinib）联合用药在体外BRAF突变阳性细胞系中表现出更强的抗增殖活性，并且在BRAF V600E突变型人黑色素瘤异种移植小鼠模型中，联合用药在抑制肿瘤生长方面也表现出更强的抗肿瘤活性。此外，与单独使用任一药物相比，恩考拉非尼与比美替尼联合用药可延缓BRAF V600E突变型人黑色素瘤异种移植小鼠模型中耐药性的出现。在BRAF V600E突变型非小细胞肺癌（NSCLC）患者来源的小鼠异种移植模型中，恩考拉非尼与比美替尼联合用药在抑制肿瘤生长方面也表现出比单独使用比美替尼更强的抗肿瘤活性。与单独使用任一药物相比，联合用药还观察到停药后肿瘤生长延迟时间更长。每日两次服用 MEKTOVI 45 mg 后，未观察到具有临床意义的 QT 间期延长。

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比美替尼是一种选择性口服 MEK1/2 抑制剂，已与恩考非尼联合获批用于治疗 BRAF V600E/K 突变型不可切除/转移性黑色素瘤 [6]
- 其作用机制：结合 MEK1/2 变构位点（非 ATP 竞争性），稳定非活性构象，阻断 ERK 磷酸化，从而抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡 [3][5]
- 它通过靶向 MAPK 再激活来克服黑色素瘤的 BRAF 抑制剂耐药性，这已在 PDX 模型中得到证实 [6]
- 由于 TNF-α 抑制作用，比美替尼曾被用于治疗炎症性疾病（例如类风湿性关节炎），但尚未获批用于该适应症 [4]

C17H15BRF2N4O3

441.23

440.029

C, 46.28; H, 3.43; Br, 18.11; F, 8.61; N, 12.70; O, 10.88

606143-89-9

10288191

White to off-white solid powder

1.67

1.652

5.42

91.9

3

7

6

27

521

0

BrC1C([H])=C([H])C(=C(C=1[H])F)N([H])C1=C(C2=C(C([H])=C1C(N([H])OC([H])([H])C([H])([H])O[H])=O)N(C([H])([H])[H])C([H])=N2)F

ACWZRVQXLIRSDF-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H15BrF2N4O3/c1-24-8-21-16-13(24)7-10(17(26)23-27-5-4-25)15(14(16)20)22-12-3-2-9(18)6-11(12)19/h2-3,6-8,22,25H,4-5H2,1H3,(H,23,26)

6-(4-bromo-2-fluoroanilino)-7-fluoro-N-(2-hydroxyethoxy)-3-methylbenzimidazole-5-carboxamide

MEK162; ARRY 162; ARRY-162; MEK162; Mektovi; ARRY-162; ARRY-438162; 5-[(4-Bromo-2-fluorophenyl)amino]-4-fluoro-N-(2-hydroxyethoxy)-1-methyl-1H-benzimidazole-6-carboxamide; ARRY-438162; ARRY438162; MEK-162; MEK 162; ARRY162; ARRY-162; ARRY-438162; Binimetinib; Brand name: Mektovi.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.67 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.67 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 6 中的溶解度: 1% CMC+0.5% Tween-80: 30mg/mL

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配方 7 中的溶解度: 10 mg/mL (22.66 mM) in 1% CMC 0.5% Tween-80 (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。