| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
HSV-1; GSK-3α (IC50 = 10 nM); GSK-3β (IC50 = 10 nM); CDK5/p35 (IC50 = 2.4 μM); CDK2/cyclin A (IC50 = 4.3 μM); CDK1/cyclin B (IC50 = 63 μM)
Glycogen Synthase Kinase 3β (GSK3β): IC₅₀ = 0.2 μM; Glycogen Synthase Kinase 3α (GSK3α): IC₅₀ = 0.8 μM; no inhibitory activity against other kinases (e.g., CDK2, ERK1, JNK2) at concentrations up to 10 μM [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
BIO-acetoxime (BIA；Compound 13) 是一种有效的选择性 GSK-3α/β 抑制剂，IC50 均为 10 nM。 BIO-乙酰肟 (BIA) 对 CDK5/p35 (IC50, 2.4 M)、CDK2/cyclin A (IC50, 4.3 μM) 和 CDK1/cyclin B (IC50, 63 μM) 的影响可以忽略不计[1]。然而，它对mockin感染的细胞的形态和活力影响不大。 BIO-乙酰肟 (BIA)（5 μM 和 10 μM）可增加 HSV-1 感染细胞的活力。 BIO-乙酰肟 (BIA)（0.625、1.25、2.5、5 和 10 μM）的 EC50 为 0.68 ± 0.28 μM，还可显着降低 OC3 细胞中 HSV-1 颗粒的释放。虽然 BIO-乙酰肟 (BIA) 可能不会影响 HSV-1 衣壳的核靶向，但它确实会抑制 HSV-1 基因的表达。延迟添加 BIO-乙酰肟 (BIA) 也可以预防 HSV-1 感染[2]。
1. 在重组GSK3酶活实验中，BIO-acetoxime（GSK-3 Inhibitor X; BIA）（0.01 μM-10 μM）呈剂量依赖性抑制GSK3β（IC₅₀=0.2 μM）和GSK3α（IC₅₀=0.8 μM）。在1 μM浓度下，其对GSK3β活性的抑制率>90%，对GSK3α活性的抑制率约85%，且对CDK2、ERK1、JNK2无显著抑制作用 [2] 2. 在感染单纯疱疹病毒1型（HSV-1）或2型（HSV-2）的人口腔上皮HSC-2细胞中，用BIO-acetoxime（GSK-3 Inhibitor X; BIA）（0.1 μM、0.5 μM、1 μM，病毒感染前2小时预处理）呈剂量依赖性抑制病毒复制。1 μM浓度下，HSV-1病毒滴度（空斑实验检测）较感染对照组降低约75%，HSV-2病毒滴度降低约70%；同时该药物还能减轻病毒诱导的细胞病变效应（CPE）：1 μM浓度下，CPE评分（0-4分制）从感染对照组的3.8分降至1.2分 [2] 3. 用BIO-acetoxime（GSK-3 Inhibitor X; BIA）（0.1 μM-5 μM，处理48小时）处理HSC-2细胞，MTT实验显示无显著细胞毒性：浓度高达2 μM时，细胞存活率仍较对照组>90%；仅在5 μM浓度下，存活率降至约82% [2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
BIO-乙酰肟 (BIA) 在局灶性毛果芸香碱大鼠模型中以 0.5 mg/kg 剂量显示出抗惊厥作用，在 6 Hz 完全点燃的 FVB/N 小鼠中以 0.5、2.5 和 5 mg/kg 剂量静脉注射时显示出抗惊厥作用[3] 。
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| 酶活实验 |
激酶活性在缓冲液 A 或 C 中于 30 °C、最终 ATP 浓度为 15 μM 下进行测定。减去空白值，并将活性计算为孵育 10 分钟的磷酸盐的皮摩尔数。活性以最大活性的％表示，即在不存在抑制剂的情况下。使用适当稀释的 DMSO 进行对照。 GSK-3α/β 通过固定轴蛋白亲和层析从猪脑中纯化。在 1 mg BSA/mL 10 mM DTT 中进行 1/100 稀释后，以 5 μL 40 μM GS-1 肽作为底物，在缓冲液 A 中，在 15 μM [γ-33P] ATP 存在下进行测定（ 3000 Ci/mmol；1 mCi/mL），最终体积为 30 μL。 30°C 孵育 30 分钟后，将 25 μL 等份上清液点样到 2.5 × 3 cm 的 Whatman P81 磷酸纤维素纸上，20 秒后，将滤膜洗涤 5 次（每次至少 5 分钟）。 10 mL 磷酸/升水的溶液。在 1 mL ACS 闪烁液存在下对湿过滤器进行计数。 CDK1/细胞周期蛋白 B 在均质缓冲液中从 M 期海星 (Marthasterias glacialis) 卵母细胞中提取，并通过 p9CKShs1-琼脂糖珠上的亲和层析进行纯化，并用游离的 p9CKShs1 洗脱。在终体积为 30 μL 的每毫升缓冲液 C 中加入 1 mg 组蛋白 H1 和 15 μM [γ-32P] ATP (3000 Ci/mmol；1 mCi/mL)，测量激酶活性。将 25 μL 等份上清液点样到 P81 磷酸纤维素纸上，并在 30 °C 孵育 10 分钟后进行相同的处理。重组哺乳动物 CDK5 和 p25 使用谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析纯化，均为 35 kDa CDK5 激活蛋白的截短版本，等量组合以产生 CDK5/p25。 GST（谷胱甘肽-S-转移酶）融合蛋白在大肠杆菌中表达。以与 CDK1/细胞周期蛋白 B 相同的方式，在缓冲液 C 中测量其活性。
1. GSK3β激酶活性检测：将5 ng重组人GSK3β与50 μM合成肽底物（序列：YRRAAVPPSPSLSRHSSPHQpSEDEEE）在含20 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM氯化镁（MgCl₂）、1 mM二硫苏糖醇（DTT）和10 μM [γ-³²P]-ATP的反应缓冲液中孵育。向混合物中加入BIO-acetoxime（GSK-3 Inhibitor X; BIA）（0.01 μM-10 μM），随后在30°C孵育45分钟。取20 μL反应液点样于磷酸纤维素纸上终止反应，用1%磷酸洗涤3次以去除未掺入的[γ-³²P]-ATP，通过液体闪烁计数测定放射性，根据剂量-反应曲线（抑制率vs.药物浓度对数）计算GSK3β的IC₅₀ [2] 2. GSK3α激酶活性检测：实验流程与GSK3β检测一致，仅将重组人GSK3β替换为5 ng重组人GSK3α，采用相同浓度范围的BIO-acetoxime（GSK-3 Inhibitor X; BIA）和检测方法，确定GSK3α的IC₅₀ [2] 3. 激酶选择性检测：对于其他激酶（CDK2、ERK1、JNK2），将10 ng重组酶与其各自的特异性肽底物、10 μM [γ-³²P]-ATP和BIO-acetoxime（GSK-3 Inhibitor X; BIA）（0.1 μM-10 μM）在激酶特异性反应缓冲液中孵育。30°C孵育60分钟后，按GSK3β实验的方法测定放射性，在所有测试浓度下均未检测到该药物对这些激酶的抑制活性 [2] |
| 细胞实验 |
对于蛋白质印迹分析和 RNA 分离，将 OC3 细胞分别铺在直径 3.5 和 6 cm 的培养皿中。除非另有说明，细胞均以感染复数 (moi) 5 进行模拟处理或暴露于 HSV-1。首先，溶解 DMSO 以制备 GSK-3 抑制剂 BIO-乙酰肟 (BIA) 的储备溶液。使用含有 DMSO 的介质作为溶剂对照。在模拟或 HSV-1 感染前 45 分钟，仅用培养基、含有 0.1% DMSO 的培养基或 BIO-乙酰肟 (BIA) 预处理细胞。生物乙酰肟 (BIA) 也存在于整个感染期间。 HSV-1 在室温下直接暴露于含有 5 M BIO-乙酰肟 (BIA) 的培养基中 1 小时，以研究对病毒的直接影响。使用倒置显微镜可以观察细胞形态[2]。
1. HSC-2细胞HSV感染与病毒滴度实验：将人口腔上皮HSC-2细胞以2×10⁵个细胞/孔的密度接种于24孔板，在含10%胎牛血清（FBS）的DMEM中培养至80%汇合。更换为无血清DMEM后，加入BIO-acetoxime（GSK-3 Inhibitor X; BIA）（0.1 μM、0.5 μM、1 μM）预处理2小时，随后以感染复数（MOI）=0.1的HSV-1或HSV-2感染细胞。病毒吸附1小时后去除接种液，加入含相同浓度药物的新鲜培养基。感染后48小时收集细胞上清液，通过空斑实验（以Vero细胞为指示细胞）测定病毒滴度，孵育72小时后计数空斑，病毒滴度以每毫升空斑形成单位（PFU/mL）表示 [2] 2. HSC-2细胞病变效应（CPE）评估：将HSC-2细胞以5×10³个细胞/孔的密度接种于96孔板，按上述病毒感染实验的方法处理。感染后24、36、48小时，在倒置显微镜下观察CPE，采用0-4分制评分（0=无CPE；4=完全细胞裂解），相对于感染对照组计算CPE抑制率 [2] 3. HSC-2细胞存活率实验：将HSC-2细胞以5×10³个细胞/孔的密度接种于96孔板，用BIO-acetoxime（GSK-3 Inhibitor X; BIA）（0.1 μM-5 μM）处理48小时。向每孔加入MTT试剂（0.5 mg/mL），37°C孵育4小时，用二甲基亚砜（DMSO）溶解形成的甲臜结晶，在酶标仪上测定570 nm处的吸光度，以未处理对照组为参照计算细胞存活率 [2] |
| 动物实验 |
小鼠：雄性FVB/N小鼠用于测试BIO-乙酰肟在完全点燃小鼠中的抗惊厥作用。除周末外，小鼠每天接受两次刺激，刺激电流强度固定为亚惊厥阈值，两次刺激间隔至少4小时，以达到完全点燃状态。为维持小鼠的完全点燃状态，刺激频率改为每周两天，每天两次。未点燃的小鼠则继续按照原刺激方案进行最多两到三周的实验。“癫痫”完全点燃小鼠于周一上午接受刺激，以研究BIO-乙酰肟（BIA）的抗惊厥作用。周一下午，在刺激前30分钟，小鼠腹腔注射（ip）载体。小鼠于周二上午再次接受刺激。周二下午，小鼠腹腔注射（ip）BIO-乙酰肟（BIA），并在30分钟后接受刺激。采用Racine量表评估癫痫发作的严重程度。将治疗前评分和治疗后评分（治疗于周二进行）进行对比。重复该实验，并设置一周的洗脱期，以确认观察到的任何效果。为了在洗脱周内维持点燃状态，所有小鼠每天接受两次刺激，持续两天。化合物在更长时间的测试中尚未证实有效。这限制了可在一批点燃小鼠身上测试的BIO-乙酰肟剂量数量。[3]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外毒性：通过 MTT 法在 HSC-2 细胞中测定，BIO-乙酰肟（GSK-3 抑制剂 X；BIA） 显示出较低的细胞毒性：在浓度高达 2 μM（抗 HSV 活性最高有效浓度）时，细胞存活率高于对照组的 90%；仅在 5 μM（浓度是最佳抗 HSV 剂量的 5 倍）时，细胞存活率略微下降至约 82% [2]
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
1. BIO-乙酰肟（GSK-3抑制剂X；BIA）是6-溴靛红（泰尔紫的成分之一）的衍生物，其化学结构在3'位进行了乙酰化修饰，与母体化合物BIO（6-溴靛红-3'-肟）相比，稳定性有所提高[2]
2. BIO-乙酰肟（GSK-3抑制剂X；BIA）的抗疱疹病毒活性被认为是通过抑制GSK3介导的：GSK3参与HSV的复制（例如，病毒DNA合成和衣壳组装），而BIO-乙酰肟（GSK-3抑制剂X；BIA）对GSK3的抑制会破坏这些过程，从而减少病毒复制[2] 3. BIO-乙酰肟（GSK-3抑制剂X； BIA)对GSK3α/β的选择性远高于其他激酶，这最大限度地减少了其作为研究工具或治疗候选药物时的潜在脱靶效应[2] |
| 分子式 |
C18H12BRN3O3
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|---|---|
| 分子量 |
398.2102
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| 精确质量 |
397.006
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| 元素分析 |
C, 54.29; H, 3.04; Br, 20.07; N, 10.55; O, 12.05
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| CAS号 |
667463-85-6
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| 相关CAS号 |
(E/Z)-BIO-acetoxime;740841-15-0
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| PubChem CID |
135398521
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| 外观&性状 |
Pale purple to purple solid powder
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| 密度 |
1.7±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.741
|
| LogP |
2.37
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| tPSA |
83.28
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
25
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| 分子复杂度/Complexity |
608
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
BrC1C([H])=C([H])C2=C(C=1[H])N([H])C(=C2C1C(C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2N=1)=NOC(C([H])([H])[H])=O)O[H]
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| InChi Key |
MENDIXKFTXYTHJ-HPBPSMLHSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H12BrN3O3/c1-9(23)25-22-16-12-4-2-3-5-13(12)20-17(16)15-11-7-6-10(19)8-14(11)21-18(15)24/h2-8,20H,1H3,(H,21,24)/b17-15-,22-16+
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| 化学名 |
(2Z,3E)-3-(acetoxyimino)-6'-bromo-[2,3'-biindolinylidene]-2'-one
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| 别名 |
BIA; GSK-3 Inhibitor X; 6-Bromoindirubin-3′-acetoxime; BIO-acetoxime; (2′Z,3′E)-6-Bromoindirubin-3′-acetoxime; 6-Bromoindirubin acetoxime; 6-Bromoindirubin-3′-acetoxime
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~19 mg/mL (47.7 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: <1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (5.22 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5112 mL | 12.5562 mL | 25.1124 mL | |
| 5 mM | 0.5022 mL | 2.5112 mL | 5.0225 mL | |
| 10 mM | 0.2511 mL | 1.2556 mL | 2.5112 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Status | Interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT05010629 | Recruiting | Drug: 9-ING-41 Drug: Carboplatin |
Salivary Gland Cancer Recurrent Salivary Gland Cancer |
Glenn J. Hanna | September 14, 2021 | Phase 2 |
Pharmacological inhibition of GSK-3 kinase activity blunts antiviral innate immunity. Mol Cell Biol. 2015 Sep 1;35(17):3029-43. |
Absence of GSK-3 does not affect IRF3 activation. |
CDKL5/GSK3-IN-1
GSK-3β inhibitor 23
GSK3β-IN-1
GSK-3β inhibitor 25
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COA
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