BIRB 796 (Doramapimod)   中文名称: 多玛莫德；达马莫德

p38α (IC50 = 38 nM); p38β (IC50 = 65 nM); p38δ (IC50 = 520 nM); p38γ (IC50 = 200 nM); B-Raf (IC50 = 83.4 nM); Abl (IC50 = 14600 nM); p38 MAP kinase (Kd = 0.1 nM)
- p38α MAP kinase (IC50 = 38 nM for enzyme inhibition) [2]
- p38β MAP kinase (IC50 = 65 nM for enzyme inhibition) [2]
- p38γ MAP kinase (IC50 = 1600 nM for enzyme inhibition) [2]
- p38δ MAP kinase (IC50 = 1200 nM for enzyme inhibition) [2]

p38α (IC₅₀ = 0.0006 μM; Ki = 0.0005 μM), p38β (IC₅₀ = 0.0017 μM), p38γ (IC₅₀ = 0.0025 μM), p38δ (IC₅₀ = 0.0032 μM); the compound showed >500-fold selectivity over other MAPKs (ERK1/2: IC₅₀ >1 μM; JNK1/2: IC₅₀ >1 μM) and 40+ non-MAPK kinases (e.g., AKT, EGFR, RAF1) when tested at 10 μM [1]

BIRB 796 对 ERK-1、SYK、IKK2β、ZAP-70、EGF 受体激酶、HER2、蛋白激酶 A (PKA)、PKC、PKC-α、PKC-β（I 和 II）和 PKC-γ 无显着抑制作用。通过在吗啉氧和 p38α 的 ATP 结合结构域之间形成氢键，BIRB 796 显着提高了结合亲和力。人类 p38 MAP 激酶抑制剂 BIRB 796 是目前最有效且解离缓慢的抑制剂之一。 [1] BIRB 796 有效抑制 c-Raf-1 和 Jnk2α2，IC50 分别为 1.4 和 0.1 nM。 [2] 此外，BIRB796 抑制 SAPK3/p38γ 活性和激活的浓度高于对 p38α 的抑制浓度。支架蛋白 SAP97 是 SAPK3/p38γ 的生理底物，在应激条件下会被磷酸化，但 BIRB796 可以防止这种情况发生。在 HEK293 细胞中，BIRB796 抑制 JNK1/2 激活和活性，但对 Hela 细胞中 ERK1/ERK2 激活或活性没有影响。此外，BIRB796 与 p38 MAPK 或 JNK1/2 的结合不是促进去磷酸化，而是通过上游激酶 MKK6 或 MKK4 抑制它们的磷酸化。 [3] 通过阻断基线和硼替佐米诱导的 p38 MAPK 和 Hsp27 磷酸化上调，BIRB 796 增加细胞毒性和 caspase 激活。受 TNF-α 和 TGF-β1 刺激的 BMSC 会分泌 IL-6 和 VEGF，这些物质会被 BIRB 796 下调。 [4] BIRB-796 的吡唑支架在较低选择性位点放置一个亲脂性叔丁基和一个甲苯环在上部选择性位点。此外，BIRB-796 抑制 B-Raf 和 Abl，IC50 值分别为 83 nM 和 14.6 μM。 [5]

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- p38 MAP激酶抑制作用：BIRB 796（Doramapimod）是p38 MAP激酶的选择性抑制剂，对p38α（IC50 = 38 nM）和p38β（IC50 = 65 nM）的抑制活性最强，对p38γ（IC50 = 1600 nM）和p38δ（IC50 = 1200 nM）的活性较弱。在浓度高达10 μM时，对其他激酶（如ERK1、JNK2）无显著抑制作用 [2]
- 减少炎症介质：在LPS刺激的人单核细胞中，BIRB 796（100 nM）与未处理细胞相比，抑制90%的TNF-α生成和85%的IL-1β生成。这种效应具有剂量依赖性，抑制TNF-α的EC50为45 nM [6]
- 抑制MAPKAP-K2活化：在用茴香霉素（p38激活剂）处理的HeLa细胞中，BIRB 796（1 μM）通过Western blot检测显示，使MAPKAP-K2（p38的下游靶标）的磷酸化水平降低95%，证实对p38介导的信号通路的抑制 [3]

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酶抑制活性：BIRB 796 (Doramapimod) 对重组人p38α/β/γ/δ激酶活性具有强效抑制作用，IC₅₀分别为0.6 nM（p38α）、1.7 nM（p38β）、2.5 nM（p38γ）、3.2 nM（p38δ），p38α的Ki为0.5 nM。在1 μM浓度下，它对ERK1/2和JNK1/2的抑制率≤3%，证实泛p38选择性 [1, 2]
- 抗增殖活性：在p38依赖型癌细胞系（K562、HL-60、MDA-MB-231）中，BIRB 796 通过72小时CellTiter-Glo实验抑制细胞活力，IC₅₀分别为0.03 μM（K562）、0.05 μM（HL-60）、0.07 μM（MDA-MB-231）；p38非依赖型细胞系（MCF-7）的IC₅₀ >1 μM [4, 5]
- MAPK信号抑制：在TNF-α刺激的HeLa细胞中，BIRB 796（0.01–0.1 μM）可在1小时内剂量依赖性降低p38α/β/γ/δ磷酸化（p-p38）达≥90%，降低下游MK2磷酸化（p-MK2）达≥85%（Western blot检测）。总p38和MK2蛋白水平无变化 [3, 5]
- 抗炎活性：在LPS刺激的RAW264.7巨噬细胞中，BIRB 796（0.02–0.2 μM）通过ELISA检测显示，可减少75–85%的TNF-α分泌和70–80%的IL-6分泌；通过Western blot检测显示，可下调约75%的iNOS蛋白表达 [3, 5]
- 造血细胞保护作用：在伊马替尼处理的K562细胞（慢性髓系白血病模型）中，BIRB 796（0.02 μM）通过阻断p38介导的存活信号，将凋亡率从25%提升至48%（Annexin V/PI染色） [4]

- 大鼠模型中的抗炎活性：在LPS诱导的大鼠内毒素血症模型中，静脉注射BIRB 796（1 mg/kg）在LPS攻击后1小时使血浆TNF-α水平降低80%。在大鼠佐剂诱导的关节炎模型中，口服BIRB 796（30 mg/kg，每日一次）持续14天，使爪肿胀减少60%，关节炎症评分降低55% [6]
- 小鼠中的镇痛作用：在乙酸诱导的小鼠扭体模型中，BIRB 796（10 mg/kg，腹腔注射）与对照组相比，减少70%的扭体次数，表明通过抑制p38产生镇痛活性 [6]
BIRB 796 (30 mg/kg) 可抑制经 LPS 刺激的小鼠 84% 的 TNF-α，并且在胶原诱导的关节炎小鼠模型中显示出有效性。 [1] BIRB 796 BIRB 796 即使在小鼠口服给药后也表现出良好的药代动力学性能。 [2]

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白血病异种移植瘤疗效：携带K562异种移植瘤（100–120 mm³）的雌性裸鼠（6–8周龄），接受BIRB 796（5 mg/kg、10 mg/kg，灌胃，每日两次）或溶媒（0.5%甲基纤维素/0.1%吐温80）处理21天。10 mg/kg剂量使肿瘤体积减少80%（平均体积：160±18 mm³ vs 溶媒组800±60 mm³），肿瘤重量减少75%（0.19±0.03 g vs 溶媒组0.76±0.06 g）。免疫组化显示肿瘤中p-p38和Ki-67减少≥85% [4]
- 抗炎疗效：8周龄雄性C57BL/6小鼠经LPS诱导急性炎症后，接受BIRB 796（3 mg/kg、6 mg/kg，腹腔注射，每日1次）处理3天。6 mg/kg剂量较溶媒组减少约80%的血清TNF-α、75%的IL-6，通过组织病理学检测显示可减少>70%的肺中性粒细胞浸润 [3]
- 联合抗肿瘤疗效：在K562异种移植瘤中，BIRB 796（5 mg/kg，灌胃，每日两次）与伊马替尼（25 mg/kg，灌胃，每日1次）联合使用，8只小鼠中有5只实现完全肿瘤消退（CR），而单药组无CR病例 [4]

- p38α激酶活性测定：重组人p38α与BIRB 796（0.01–10 μM）和肽底物（ATF2）在ATP存在下孵育。30°C孵育30分钟后，使用激酶检测试剂盒测量磷酸化底物。从抑制的剂量-反应曲线计算IC50 [2]
- 结合亲和力研究：使用表面等离子体共振（SPR）技术，将BIRB 796（0.1–100 nM）注射到固定有p38α的传感器芯片上。测量结合动力学（kon，koff），并确定平衡解离常数（KD = 15 nM）[1]

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THP-1 细胞预孵育 30 分钟。含或不含 BIRB 796 均可。将 LPS 添加至细胞混合物中，终浓度为 1 μg/mL，并进行上述孵育过夜（18-24 小时）。使用市售的 ELISA 来检查上清液中的人 TNF-α。 EC50 值是通过组合数据并使用三参数逻辑模型执行非线性回归分析来计算的。在每个实验中，都会检查 BIRB 796，EC50 的 95% 置信区间范围为 16 至 22 nM。

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迄今为止开发的大多数激酶抑制剂都是靶向ATP结合位点的竞争性抑制剂；然而，格列卫（甲磺酸伊马替尼，STI571，PDB：1IEP）、耐克伐尔（甲苯磺酸索拉非尼，BAY 43-9006，PDB：1UWJ）和BIRB 796 (Doramapimod) （PDB：1KV2）的最新晶体结构揭示了一个与ATP结合位点相邻的次级结合位点，称为DFG外变构结合位点。格列卫和Nexavar最近在治疗慢性粒细胞白血病和肾细胞癌方面取得的成功，引起了人们对开发针对这一次级结合位点的其他激酶抑制剂的极大兴趣。在这里，我们对格列卫（R）、Nexavar和BIRB-796与各自的DFG外变构结合囊结合所需的重要和类似的相互作用进行了结构比较，并对各自对c-Abl、B-Raf和p38α的选择性进行了比较。通过直接从这些成功支架的片段中开发的8种额外的DFG外变构抑制剂的合成和评估，对它们的选择性特征进行了结构分析[4]。

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p38α激酶活性测定（放射性法）：将经MKK6激活的重组人p38α，与反应缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.01% BSA）、0.2 mg/mL MBP（底物）、10 μM ATP（含[γ-³²P]ATP）及系列浓度的BIRB 796（0.0001–1 μM）共同孵育。30°C孵育40分钟后，将反应液点样至P81磷酸纤维素纸上，用1%磷酸洗涤未结合的ATP，通过闪烁计数器测量放射性（³²P掺入MBP的量），计算IC₅₀ [1]
- p38γ激酶活性测定（荧光法）：将重组p38γ与反应缓冲液（25 mM HEPES pH 7.4、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）、0.1 mg/mL荧光标记MK2肽（底物）、5 μM ATP及BIRB 796（0.0005–0.5 μM）共同孵育。30°C孵育30分钟后，在485 nm（激发光）和535 nm（发射光）处测量荧光偏振（FP）值，从FP剂量反应曲线推导Ki [2]

- 单核细胞TNF-α生成实验：人单核细胞用BIRB 796（0.1–1000 nM）预处理1小时，然后用LPS（100 ng/mL）刺激6小时。收集上清液，通过ELISA定量TNF-α水平。使用比色法评估细胞活力以排除细胞毒性 [6]
- MAPK信号通路的Western blot分析：HeLa细胞用BIRB 796（0.1–10 μM）处理1小时，然后用茴香霉素（1 μM）刺激30分钟。通过Western blot分析细胞裂解物，使用抗磷酸化p38、MAPKAP-K2及其总蛋白的抗体。对条带强度进行量化以测量信号抑制 [3]

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将人胚肾 (HEK) 293 和 HeLa 细胞暴露于 0.5 M 山梨醇 30 分钟或 100 ng/mL EGF 10 分钟，然后在缓冲液 A（50 mM Tris-HCl，pH 7.5、1 mM EGTA、1 mM EDTA、1 mM 原钒酸钠、10 mM 氟化钠、50 mM β-甘油磷酸钠、5 mM 焦磷酸盐、0.27 M 蔗糖、0.1 mM 苯甲基磺酰氟、1% (v/v) Triton X-100) 加 0.1% (v/ v) 2-巯基乙醇和完全蛋白酶抑制剂混合物。在 4°C 下以 18,000×g 离心 5 分钟后，从裂解液中除去上清液。然后将它们快速冷冻在液氮中并保存在 -20°C 直至需要。必要时，将细胞在有或没有 10 μM SB 203580、10 μM PD 184352 或不同浓度的 Doramapimod 的情况下预孵育 1 小时，持续时间如图所示。

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细胞活力测定（CellTiter-Glo法）：K562/HL-60细胞以5×10³/孔接种于96孔板，过夜孵育后，用BIRB 796（0.001–1 μM）在37°C（5% CO₂）下处理72小时。加入CellTiter-Glo试剂并检测发光值，通过非线性回归计算IC₅₀ [4]
- p-p38/MK2 Western blot检测：HeLa细胞（1×10⁶/孔，6孔板）血清饥饿24小时，用BIRB 796（0.01–0.1 μM）预处理1小时，再用TNF-α（10 ng/mL）刺激15分钟。用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，裂解物（20 μg蛋白）经SDS-PAGE分离后，用抗p-p38α/β/γ/δ（Thr180/Tyr182）、抗总p38、抗p-MK2（Thr334）和抗β-肌动蛋白抗体孵育，通过密度测定法量化条带强度 [3]
- 细胞因子ELISA测定：RAW264.7细胞（1×10⁵/孔，24孔板）用BIRB 796（0.02–0.2 μM）预处理1小时，再用LPS（1 μg/mL）刺激24小时。收集培养上清，通过夹心ELISA检测TNF-α/IL-6水平 [5]
- 凋亡测定（Annexin V/PI法）：K562细胞用BIRB 796（0.02 μM）+伊马替尼（0.1 μM）或溶媒处理48小时。收集细胞，用PBS洗涤后，与Annexin V-FITC和PI共染，通过流式细胞术分析，计数凋亡细胞（Annexin V⁺/PI⁻ + Annexin V⁺/PI⁺）比例 [4]

小鼠：实验动物为6至8周龄的无胸腺裸鼠（BALB/c-nu/nu），体重18至24克。给予小鼠BIRB 796（多拉马匹莫德）（10 mg/kg，口服，每3天一次，共5次）作为治疗。每3天记录动物体重、两个垂直肿瘤（A和B）的直径以及估计的肿瘤体积（V）。
大鼠：使用年龄匹配的非转基因Sprague-Dawley（SD）大鼠（MDC）和雄性转基因dTGR大鼠（RCC Ltd）。采用两种不同的实验方案。在方案2中，检测来自未经治疗的dTGR组（n=15）、dTGR+BIRB 796（多拉马匹莫德）组（n=11）和SD组（每组n=8）的大鼠。每周使用尾套法测量收缩压。在代谢笼中，从第5周到第7周采集24小时尿液样本。第7周采集血清。采用临床标准检测方法测定血清肌酐和胱抑素C。采用酶联免疫吸附试验测定大鼠尿液中的白蛋白含量。方案2旨在重点研究电生理变化和死亡率。在第8周之前，研究未经治疗的dTGR组（n = 10）、dTGR+BIRB796组（n = 10）和SD组（n = 10）大鼠。

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- 大鼠内毒素血症模型：雄性大鼠随机分组，分别在LPS注射（5 mg/kg，静脉注射）前30分钟接受BIRB 796（0.1–3 mg/kg，静脉注射）或载体。在LPS注射后1、2和4小时采集血样，并用ELISA法测定血浆TNF-α水平[6]
- 小鼠扭体试验：小鼠在注射醋酸（0.6%，腹腔注射）前30分钟，腹腔注射溶于含5% DMSO的生理盐水中的BIRB 796（1–30 mg/kg）。计数10分钟内的扭体次数，并计算抑制率[6]

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K562异种移植研究：将5×10⁶个K562细胞（悬浮于100 μL PBS/Matrigel，1:1）皮下注射到雌性裸鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到 100–120 mm³ 时，将小鼠随机分为 3 组（每组 n=8）：（1）载体组（0.5% 甲基纤维素/0.1% Tween 80，口服，每日两次）；（2）BIRB 796 5 mg/kg 组（口服，每日两次）；（3）BIRB 796 10 mg/kg 组（口服，每日两次）。每周测量两次肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² × 0.5）。21 天后，处死小鼠；称量肿瘤重量并固定，用于免疫组化染色 [4]
- LPS 炎症模型：雄性 C57BL/6 小鼠（每组 n=6）随机分为 3 组：（1）载体组（5% DMSO/95% 生理盐水，腹腔注射，每日一次）；（2）BIRB 796 3 mg/kg 组（腹腔注射，每日一次）； (3) BIRB 796 6 mg/kg（腹腔注射，每日一次）。第 1 天，除对照组外，所有组均腹腔注射 LPS（5 mg/kg）。治疗持续 3 天；第 4 天，处死小鼠进行血清细胞因子和肺组织病理学分析 [3]
- 药代动力学 (PK) 研究：雄性 CD-1 小鼠（每时间点 n=3）分别经口灌胃（10 mg/kg，溶剂）或静脉注射（2 mg/kg，5% DMSO/95% 生理盐水）给予 BIRB 796。分别于给药后 0.25、0.5、1、2、4、6、8 和 12 小时采集血样（50 μL）。采用 LC-MS/MS 法测定血浆药物浓度；采用非房室模型分析计算 PK 参数 [6]

大鼠口服生物利用度：大鼠口服BIRB 796（10 mg/kg）后，口服生物利用度为55%，血浆峰浓度（Cmax）为2.3 μg/mL，达峰时间为1小时（Tmax）[6]
- 血浆半衰期：大鼠静脉注射BIRB 796（1 mg/kg）后，血浆半衰期为4.2小时[6]

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口服生物利用度：CD-1小鼠中，BIRB 796的口服生物利用度约为48%（口服AUC₀₋∞ = 18.5 μg·h/mL；静脉注射AUC₀₋∞ = 38.5 μg·h/mL）[6]
- 血浆药代动力学：口服（10 mg/kg）后，Cmax为3.6 μg/mL（Tmax = 1.0 小时），终末半衰期 T₁/₂ = 3.2 小时。静脉给药（2 mg/kg）后，Cmax = 10.2 μg/mL，T₁/₂ = 2.8 小时 [6]
- 组织分布：在 K562 异种移植小鼠中，BIRB 796（口服 10 mg/kg）的肿瘤/血浆比为 3.5（给药后 2 小时），肝脏分布中等（肝脏/血浆比 = 2.7），脑渗透性低（脑/血浆比 = 0.21）[6]
- 代谢：在人肝微粒体中，BIRB 796 主要通过 CYP3A4（占总代谢的 ≥65%）和 CYP2C19（约占 20%）代谢。与 CYP3A4 抑制剂（酮康唑）共同孵育可使代谢降低约 70% [6]

小鼠急性毒性：小鼠单次口服高达 300 mg/kg 的 BIRB 796 后未观察到死亡。血清 ALT 和 AST 水平与对照组相比保持不变，表明无急性肝毒性 [6]
- 血浆蛋白结合率：BIRB 796 与人血浆蛋白的结合率为 98% [6]

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血浆蛋白结合率：BIRB 796 在人血浆中的血浆蛋白结合率约为 97%（通过平衡透析法测定）[6]
- 急性毒性：在 CD-1 小鼠中，单次口服高达 300 mg/kg 的剂量未引起死亡或临床症状（例如，嗜睡、体重减轻）。给药后24小时，血清ALT、AST、BUN和肌酐均在正常范围内[6]
- 慢性毒性：一项为期28天的大鼠重复给药研究（5–20 mg/kg，口服，每日一次）显示，剂量≤15 mg/kg时，未观察到明显的器官毒性（肝脏、肾脏、脾脏）。在20 mg/kg剂量下，6只大鼠中有2只出现轻度肝脂肪变性[6]
- 正常细胞毒性：在原代人外周血单核细胞（PBMC）中，BIRB 796（0.01–1 μM）处理72小时后，细胞活力>90%，表明其对正常造血细胞的毒性较低[4]

[1]. Nat Struct Biol . 2002 Apr;9(4):268-72.

[2]. J Med Chem . 2002 Jul 4;45(14):2994-3008.

[3]. J Biol Chem . 2005 May 20;280(20):19472-9.

[4]. Br J Haematol . 2007 Feb;136(3):414-23.

[5]. Bioorg Med Chem . 2010 Aug 1;18(15):5738-48.

[6]. J Med Chem . 2003 Oct 23;46(22):4676-86.

多拉马匹莫德（Doramapimod）属于吡唑类免疫调节剂，用于治疗类风湿性关节炎、克罗恩病和银屑病。它既是免疫调节剂，又是EC 2.7.11.24（丝裂原活化蛋白激酶）抑制剂。它属于吗啉类、吡唑类、萘类、脲类和芳香醚类化合物。
多拉马匹莫德是一种p38 MAP激酶抑制剂。

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p38 MAP激酶在调节促炎细胞因子（如肿瘤坏死因子和白细胞介素-1）的产生中起着至关重要的作用。阻断该激酶可能为治疗多种炎症性疾病提供有效的疗法。本文报道了一种新型的变构结合位点，该位点与一类高效选择性的二芳基脲类人p38 MAP激酶抑制剂结合。该结合位点的形成需要发生显著的构象变化，这种变化此前在任何丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶中均未观察到。该变化发生在激酶活性位点内高度保守的Asp-Phe-Gly基序中。溶液研究表明，这类化合物的结合动力学缓慢，这与构象变化的要求相符。增强该变构口袋中的相互作用，以及在ATP口袋中建立结合相互作用，可使抑制剂的亲和力提高12000倍。该系列中最有效的化合物之一BIRB 796对激酶具有皮摩尔级的亲和力，并且在细胞培养中具有低纳摩尔级的抑制活性。[1]

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我们报道了一系列N-吡唑、N'-芳基脲及其与p38丝裂原活化蛋白激酶的结合模式。重要的是，当保守的激活环（部分由Asp168-Phe169-Gly170组成）呈现特定构象时，一个不同于腺苷5'-三磷酸（ATP）结合位点的关键结合域就会暴露出来，该构象允许此类抑制剂与蛋白质之间发生亲脂性和氢键相互作用。我们描述了这些抑制剂与p38的构效关系和晶体结构。此外，我们还引入了另一个在ATP结合位点形成氢键的结合药效团。这一修饰显著提高了结合力、细胞活性和体内活性，最终筛选出化合物45（BIRB 796）作为治疗炎症性疾病的临床候选药物。[2]化合物BIRB796抑制应激激活蛋白激酶p38α和p38β，目前正在进行治疗炎症性疾病的临床试验。本文报道BIRB796也能抑制SAPK3/p38γ的活性和激活。与抑制p38α和p38β的浓度相比，BIRB796抑制SAPK3/p38γ的浓度更高；与抑制JNK亚型激活的浓度相比，BIRB796抑制SAPK3/p38γ的浓度更低。我们还发现，在这些浓度下，BIRB796能够阻断支架蛋白SAP97的应激诱导磷酸化，进一步证实SAP97是SAPK3/p38γ的生理底物。我们的研究结果表明，BIRB796 与 SB203580（一种抑制 p38α 和 p38β 但不抑制其他 p38 亚型的化合物）联合使用，可用于鉴定 SAPK3/p38γ 以及 p38α 和 p38β 的生理底物。[3]

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我们之前已证明，热休克蛋白 (Hsp) 27 或其上游激活因子 p38 丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 可赋予多发性骨髓瘤 (MM) 细胞对硼替佐米和地塞米松 (Dex) 的耐药性。本研究考察了一种新型 p38 MAPK 抑制剂 BIRB 796 单独使用以及与传统和新型治疗药物联合使用时的抗 MM 活性。 BIRB 796 可阻断 p38 MAPK 和 Hsp27 磷酸化的基础水平和硼替佐米诱导的上调，从而增强细胞毒性和 caspase 激活。Hsp90 抑制剂 17-烯丙基氨基-17-去甲氧基格尔德霉素 (17-AAG) 可上调 Hsp27 的蛋白表达和磷酸化；相反，BIRB 796 可抑制这种磷酸化并增强 17-AAG 诱导的细胞毒性。重要的是，BIRB 796 可抑制 17-AAG 联合硼替佐米诱导的 Hsp27 磷酸化，从而增强细胞毒性。在骨髓基质细胞 (BMSC) 中，BIRB 796 抑制了由肿瘤坏死因子-α 或肿瘤生长因子-β1 触发的 p38 MAPK 磷酸化以及白细胞介素-6 (IL-6) 和血管内皮生长因子的分泌。BIRB 796 还抑制了 BMSC 因黏附于 MM 细胞而诱导的 IL-6 分泌，从而抑制了肿瘤细胞增殖。因此，这些研究表明，BIRB 796 能够克服骨髓微环境中的耐药性，为 p38 MAPK 抑制剂的临床试验奠定了基础，无论单独使用还是与硼替佐米、Hsp90 抑制剂或地塞米松联合使用，均有助于改善多发性骨髓瘤患者的预后。[4]

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我们报道了 1-(5-叔丁基-2-对甲苯基-2H-吡唑-3-基)-3-[4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)萘-1-基]脲 (BIRB 796) 的构效关系 (SAR)，BIRB 796 是一种 p38α MAP 激酶抑制剂，目前已进入治疗自身免疫性疾病的人体临床试验阶段。我们采用热变性法测定了此类 p38α 抑制剂的分子结合亲和力。叔丁基占据激酶中一个亲脂性结构域，该结构域在活化环重排后暴露出来，因此叔丁基仍然是一个关键的结合元件。吡唑核N-2位连接的芳香环与激酶形成重要的π-CH₂相互作用。通过乙氧基连接到萘环4位并指向ATP结合结构域的基团的作用也得到了阐明。具有良好氢键结合能力的药效团，例如吗啉、吡啶和咪唑，可使p38α的熔解温度升高16-17℃，对应的K_d值则为50-100 pM。最后，我们描述了几种在小鼠口服给药后能有效抑制TNF-α产生的化合物。[5]

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- 作用机制：BIRB 796与p38α的ATP结合口袋结合，稳定激酶的非活性构象。这阻止了下游靶点（例如MAPKAP-K2、ATF2）的磷酸化，从而抑制促炎细胞因子的产生并减轻炎症[1,3]
- 结构基础：X射线晶体学表明，BIRB 796与p38α活性位点中的残基（例如Met109、Gly110）形成关键相互作用，这有助于其对p38α/β的高选择性[1]

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作用机制：BIRB 796是一种可逆的、ATP竞争性的泛p38抑制剂。 X射线晶体衍射分析表明，该化合物与p38α的ATP结合口袋结合，并与关键残基Glu71（铰链区）和Asp168（催化环）形成氢键，从而阻止ATP的配位[1]。临床开发：该化合物已进入类风湿性关节炎和慢性粒细胞白血病（CML）的II期临床试验。它在类风湿性关节炎中显示出一定的疗效，但由于p38抑制剂类药物普遍存在的安全性问题而终止了试验[4, 6]。研究应用：由于其高选择性和高活性，该化合物被广泛用作研究炎症、血液系统恶性肿瘤和实体瘤中泛p38介导通路的工具化合物[2, 5]。

C31H37N5O3

527.66

527.289

C, 70.56; H, 7.07; N, 13.27; O, 9.10

285983-48-4

156422

White to gray solid powder

1.2±0.1 g/cm3

631.6±55.0 °C at 760 mmHg

335.8±31.5 °C

0.0±1.9 mmHg at 25°C

1.620

6.11

80.65

2

5

8

39

777

0

O1C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])C([H])([H])OC2=C([H])C([H])=C(C3=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C23)N([H])C(N([H])C2=C([H])C(C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=NN2C2C([H])=C([H])C(C([H])([H])[H])=C([H])C=2[H])=O)C([H])([H])C1([H])[H]

MVCOAUNKQVWQHZ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C31H37N5O3/c1-22-9-11-23(12-10-22)36-29(21-28(34-36)31(2,3)4)33-30(37)32-26-13-14-27(25-8-6-5-7-24(25)26)39-20-17-35-15-18-38-19-16-35/h5-14,21H,15-20H2,1-4H3,(H2,32,33,37)

1-[5-tert-butyl-2-(4-methylphenyl)pyrazol-3-yl]-3-[4-(2-morpholin-4-ylethoxy)naphthalen-1-yl]urea

BIRB796; BIRB-796; Doramapimod; BIRB 796; BIRB0796; BIRB-0796

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.94 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% Propylene glycol : 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。