Bovine brain PKC (IC50 = 10 nM); PKCβII (IC50 = 16 nM); PKCβI (IC50 = 17 nM); PKCα(IC50 = 20 nM); PKCγ(IC50 = 20nM); FDGFR (IC50 = 65 μM)

双吲哚马来酰亚胺 I (5 μM) 可抑制 α-凝血酶引起的 P47 磷酸化 [1]。在静止的 Swiss 3T3 细胞中，双吲哚马来酰亚胺 I (0–1 μM) 抑制 DNA 合成 [1]。在脂肪细胞裂解物中，bisindolylmaleimide I (5 μM) 可将 GSK-3 活性降低至 25.1±4.3%[3]。当 PC3 细胞在 24 小时内暴露于双吲哚马来酰亚胺 I (10 μM) 时，无法释放外泌体或微泡 (EMV) [4]。 Bisindolylmaleimide I（10 μM，24 小时）会增加 5-氟尿嘧啶的细胞毒性 [4]。

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Staurosporine是文献中描述的最有效的蛋白激酶C （PKC）抑制剂，其半最大抑制浓度（IC50）为10 nM。然而，这种天然产物在检测其他蛋白激酶时选择性较差。为了获得特异性的PKC抑制剂，合成了一系列双吲哚基马来酰亚胺。结构-活性关系研究允许确定负责赋予高效力和缺乏选择性的硫孢素分子的亚结构。几种氨基烷基双吲哚酰马来酰亚胺被发现是有效的和选择性的PKC抑制剂（IC50值从5到70 nM）。其中的GF 109203X的进一步研究旨在表征该化学家族。GF 109203X是一种竞争性ATP抑制剂（Ki = 14 +/- 3 NM），与五种不同的蛋白激酶相比，对PKC表现出高选择性。我们进一步确定了GF 109203X在两种细胞模型中的效力和特异性：人血小板和Swiss 3T3成纤维细胞。GF 109203X有效地阻止pkc介导的血小板Mr = 47000蛋白和瑞士3T3细胞Mr = 80000蛋白的磷酸化。相反，在相同的模型中，PKC抑制剂未能阻止PKC非依赖性磷酸化。GF 109203X抑制胶原和α -凝血酶诱导的血小板聚集以及胶原引发的ATP分泌。然而，adp依赖性可逆聚集未被修饰。在Swiss 3T3成纤维细胞中，GF 109203X逆转了由phorbol 12,13-二丁酸盐诱导的表皮生长因子结合的抑制，并阻止[3H]胸苷结合到DNA中，只有当激活PKC的生长促进剂才会引起这种抑制。我们的研究结果说明了GF 109203X作为研究PKC参与信号转导途径的工具的潜力。[1]

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研究人员报道了广泛使用的蛋白激酶C抑制剂，双吲哚酰马来酰亚胺I （ GF 109203X）和IX，是糖原合成酶激酶3 （GSK-3）的有效抑制剂。双吲哚酰马来酰亚胺I和IX在体外抑制GSK-3，分别在大鼠附睾脂肪细胞的细胞裂解物（IC(50) 360 nM和6.8 nM）或GSK-3 β免疫沉淀物（IC(50) 170 nM和2.8 nM）中检测。用双吲哚酰马来酰亚胺I（5微米）和IX（2微米）预处理脂肪细胞，使总细胞裂解物中的GSK-3活性分别降低至对照组的25.1+/-4.3%和12.9+/-3.0%。相比之下，双吲哚马来酰亚胺V（5微米）缺乏双吲哚马来酰亚胺I和IX上存在的官能团，效果不明显。我们提出双吲哚酰马来酰亚胺I和IX可以直接抑制GSK-3，这可能解释了一些先前报道的胰岛素样对糖原合成酶活性的影响。[3]

在机械通气 (MV) 组的小鼠中，腹腔注射双吲哚马来酰亚胺 I (0.02 mg/kg) 可降低 NLRP3、P-PKCɑ 和 PKCɑ 升高的水平 [5]。双吲哚马来酰亚胺 I（0-20 mg/kg，腹腔注射）可降低喹吡罗引起的鼩鼱呕吐的平均频率 [6]。

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链脲佐菌素（STZ）诱导的慢性高血糖对神经血管偶联有不利影响，与PKC介导的磷酸化增加和PKC异构体表达改变有关。在这里，我们试图确定：1)选择性PKC-α/β/γ抑制剂，GF 109203X，是否可以逆转慢性高血糖对脑血管反应性的影响；2)胰岛移植可预防1型糖尿病大鼠脑血管损伤的发生。我们研究了GF109203X对糖尿病（DM）、非糖尿病（ND）和移植（TR） Lewis大鼠坐骨神经刺激（SNS）或局部应用大电导Ca2+操作的K+(BKCa)通道开启器NS1619或K+向内整流（Kir）通道激动剂KCl的影响。使用封闭颅窗在体显微镜技术监测枕小动脉直径变化。与ND或TR大鼠相比，与SNS相关的动脉小动脉扩张反应降低了约45%。此外，局部KCl和NS1619对DM大鼠的动脉动脉扩张有很大的减弱，而ND和TR动物则没有。在脑表面急性应用GF109203X后，这些反应完全恢复。PKC抑制剂对正常血糖和TR动物的血管反应没有影响。总之，dm相关的神经血管耦合慢性损伤可能很容易通过PKC-α/β/γ抑制剂逆转或通过胰岛移植预防。我们认为特定的PCK亚型（α/β/γ）与高血糖所见的神经血管解耦有机制联系。[2] <人力资源> 为检测PKC抑制剂GF 109203X/双吲哚酰马来酰亚胺I对PKC和NLRP3的影响，将雄性C57BL/6小鼠（7周龄，19 ~ 23 g）随机分为4组：对照组(C)、双吲哚酰马来酰亚胺I预处理组(B)、MV组和双吲哚酰马来酰亚胺I预处理+ MV组（B + MV）。小鼠于注射前1 h腹腔注射双吲哚酰马来酰亚胺I （0.02 mg/kg）。MV在高潮气量（30 ml/kg）下进行。为了探讨EX对VILI的改善作用，将小鼠随机分为C组、MV组、EX组和EX + MV组，分别进行MV和5周的EX训练。通气后采用苏木精-伊红（HE）染色及湿/干重比评价肺病理生理变化。Western blotting检测肺组织中PKC、P-PKC、ASC、procaspase-1、caspase-1、pro-IL-1β、IL-1β、NLRP3、occludin（紧密连接蛋白）的表达。ELISA法测定肺泡灌洗液中IL-6水平。 结果：MV组NLRP3、P-PKC α和PKC α水平升高，但GF 109203X/双吲哚酰亚胺I治疗逆转了这一变化。抑制PKC的产生可阻止NLRP3的激活。此外，MV升高ASC、procaspase-1、caspase-1、pro-IL-1β和il -1β水平，occludin水平降低，但EX减轻了这些变化。HE染色及肺损伤评分证实C组和EX组均未见明显肺损伤。MV组肺损伤最为严重，EX + MV组肺损伤有所改善。总的来说，这些发现表明，MV通过激活PKC和诱导occludin降解来激活NLRP3炎性体，而运动则减弱NLRP3炎性体和PKC的激活。此外，运动可以改善循环拉伸引起的闭塞蛋白降解。 结论：PKC激活可使NLRP3水平升高，导致肺损伤。运动可以通过抑制PKC和NLRP3的激活来减轻肺损伤。运动可能是临床预防VILI的一种潜在措施。[5]

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多巴胺有5种受体亚型（D1-5），与许多神经系统疾病有关。多巴胺D2受体激动剂治疗引起恶心和呕吐。多巴胺D2受体引发呕吐的信号机制尚不清楚。在呕吐能力强的动物中，磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-和蛋白激酶C （PKC）相关的信号级联刺激注射各种催吐因子后的呕吐。本研究利用最小鼩鼱研究了多巴胺D2受体介导的呕吐的潜在机制。我们发现，选择性多巴胺D2受体激动剂喹匹罗（2mg /kg，口服）引起的呕吐可被以下药物显著抑制：1)多巴胺D2偏好拮抗剂舒必利（s.c）；ii)选择性PI3K抑制剂LY294002 (i.p.)；iii) PKCαβII抑制剂，GF 109203X (p.)；iv)细胞外信号调节蛋白激酶1/2 （ERK1/2）的选择性抑制剂，U0126 （i.p.）。喹匹罗诱发的孤束核（NTS） c-fos免疫荧光被磺胺吡啶（8mg /kg, s.c）预处理抑制。对鼩鼱脑干呕吐位点蛋白裂解物的Western blot分析显示，暴露于喹匹罗（2mg /kg, i.p） 30分钟后，Akt（蛋白激酶B (PKB)）的Ser473位点磷酸化显著且时间依赖性增加。使用有效止吐剂量的舒匹利、LY294002、 GF 109203X或U0126进行预处理，可显著降低喹匹罗刺激的呕吐相关蛋白磷酸化，包括p-85PI3K、mTOR （Ser2448/2481）、PKCαβII （Thr638/641）、ERK1/2 （Thr202/204）和Akt （Ser473）。我们的研究结果证实了PI3K/mTOR/Akt和PI3K/PKCαβII/ERK1/2/Akt信号通路在多巴胺D2受体介导的呕吐中的作用。潜在的新型止吐药靶向与这些信号级联相关的呕吐蛋白，可能提供增强的效力和/或对呕吐的疗效。［6］

PKC的测定通过测量从[γ-32Pi]ATP转移到富含赖氨酸的组蛋白Ill-s型的32Pi来排列。反应混合物（80μL）含有50mM Tris-HCI，pH 7.4。100μM CaCl2、10 mM MgCI2、37.5μg/mL组蛋白型Ill-s、10μM[γ-32Pi]ATP（1250cpm/pmol）、31μM牛脑磷脂酰丝氨酸和0.5μM 1,2-sn二醇甘油。将15μL纯化的PKC（测定中的最终浓度0.38μg/mL）加入孵育混合物中。10分钟后，通过加入30μL酪蛋白30 mg/mL和0.9 mL 12%的三氯乙酸来停止反应[1]。

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GSK-3活性测定[3]
测定细胞裂解物和GSK-3β免疫沉淀物中GSK-3的活性。用4 μl抗GSK-3β单克隆抗体和3.75 mg蛋白A-Sepharose在4℃下翻滚2 h，免疫沉淀GSK-3β。免疫沉淀在激酶测定缓冲液（20 mM HEPES, pH 7.5, 20 mM β-甘油磷酸和1 mM EDTA）中洗涤3次，最后在300 μl含有0.1%巯基乙醇和2.5 μM camp依赖性蛋白激酶抑制剂肽（IP20）的激酶测定缓冲液中重悬。用合成肽底物RRAAEELDSRAGS(P)PQL (0.71 mg/ml)[14]分别在20 μl细胞裂解液或20 μl GSK-3β免疫沉淀物中测定GSK-3的活性，无论是否存在GSK-3抑制剂氯化锂（50 mM）。在P81离子交换纸上标记[γ- 32P]ATP孵育15分钟后终止实验。用0.6%的磷酸洗涤4次，用闪烁计数法测定结合放射性。脂肪细胞裂解物和GSK-3β免疫沉淀物对多肽的磷酸化作用基本上被氯化锂完全抑制。提取物中GSK-3的平均活性为1220±144 pmol肽磷酸化/min/g脂肪细胞干重（n=11）。免疫沉淀物中GSK-3β的平均活性为276±54 pmol肽磷酸化/min/g脂肪细胞干重（n=11）。

研究者进一步确定了GF 109203X在两种细胞模型中的效力和特异性：人血小板和瑞士3T3成纤维细胞。GF 109203X有效地阻止血小板中Mr=47000蛋白和Swiss 3T3细胞中Mr=80000蛋白的PKC介导的磷酸化。相反，在相同的模型中，PKC抑制剂未能阻止PKC非依赖性磷酸化。GF 109203X抑制胶原和α-凝血酶诱导的血小板聚集以及胶原触发的ATP分泌。然而，ADP依赖性可逆聚集没有改变。在瑞士3T3成纤维细胞中，GF 109203X逆转了佛波醇12，13-丁酸诱导的表皮生长因子结合的抑制作用，并阻止[3H]胸苷掺入DNA，只有当这是由激活PKC的生长促进剂引起时。我们的结果说明了GF 109203X作为研究PKC参与信号转导途径的工具的潜力[1]。

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肿瘤细胞的微囊泡（MV）释放影响药物保留，有助于癌症耐药。策略性地调节MV释放可能会增加癌细胞内的药物保留，并允许降低化疗药物的剂量。外泌体对药物潴留的作用尚不清楚。潜在的外泌体和MV （EMV）生物发生抑制剂，在人前列腺癌（PC3）细胞上测试了其抑制EMV释放的能力，也在PC3和MCF-7（乳腺癌）细胞上测试了其改善化疗的能力。在维持细胞活力的同时，抑制EMV释放最显著的药物是氯脒(Cl-amidine；50µM)和双吲哚马来酰亚胺i（10µM）。凋亡介导的化疗药物5 -氟尿嘧啶(研究者用)在生物细胞显著增强这两种EMV抑制剂的存在,导致62% (Cl-amidine +研究者用)和59% (GF 109203X/bisindolylmaleimide-I +研究者用)减少数量的可行的生物相比,研究者用仅24 h后,MCF-7细胞有相似的增加减少可行的细胞相比,研究者用治疗仅从67% (Cl-amidine +研究者用)到58% (bisindolylmaleimide-I +研究者用)。通过联合治疗，这两种EMV抑制剂进一步减少了活的癌细胞数量。两种抑制剂均不影响细胞活力。联合选定的EMV抑制剂可能是一种提高化疗药物介导的细胞凋亡疗效的新策略。[4]

动物/疾病模型： 喹吡罗处理的鼩鼱[2]
剂量： 0-20 mg/kg
给药途径： 腹腔注射
实验结果： 降低了喹吡罗诱导呕吐的平均频率。阻断了鼩鼱脑干中喹吡罗介导的 ERK1/2 磷酸化。

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在典型的神经血管耦合实验中，麻醉由异氟烷切换至芬太尼 1 小时后，并进行常规的人工脑脊液灌注（平衡期），对大鼠进行一次或两次坐骨神经刺激，随后在颅窗下灌注 NS1619（10 和 50 µM）或 K+（KCl 6 和 12 mM），每种浓度持续 5 分钟。在DM组和ND组中，经过至少5分钟的恢复期后，我们开始灌注GF 109203X（也称为双吲哚基马来酰亚胺I或Gö 6850）。浓度为20 nM的GF109203X倾向于抑制PKC-α（IC50为8 nM）。然而，该浓度也被认为会抑制PKC-βI、-βII和-γ（IC50分别为18、20和21 nM），但不会抑制其他PKC亚型，例如δ、ε和ζ（IC50分别为210、132和5800 nM）。因此，所有常规的PKC亚型都可能受到GF109203X的类似影响。在颅窗下灌注 GF109203X (20 nM) 40 分钟后，与基线相比，软脑膜小动脉直径的变化不大，非糖尿病大鼠和糖尿病大鼠之间的差异无统计学意义（分别为 -2 ± 3% 和 -3 ± 6%；P > 0.05）。40 分钟后，进行第二次坐骨神经刺激，随后重新评估 NS1619 和 K+ 诱导的血管扩张。[2]

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7 周龄雄性 C57BL/6N 小鼠（体重 19–23 g）饲养 1 周以适应环境。小鼠饲养于 25 °C 恒温、12 小时光照/12 小时黑暗循环的环境中，并喂以标准颗粒饲料和水。为了确定 PKC 激活与 NLRP3 之间的关系，将小鼠随机分为以下四组（每组 n = 6）：对照组 (C)，GF 109203X/双吲哚马来酰亚胺 I 预处理组 (0.02 mg/kg) (B)，机械通气组 (MV) 和双吲哚马来酰亚胺 I 预处理 (1 h) 后机械通气组 (B + MV)。C 组和 B 组未进行机械通气。其余两组使用 ALC-V8 动物呼吸机进行 4 小时机械通气。通气参数设置如下：潮气量 30 ml/kg，呼吸频率 60 次/分钟，吸呼比 1:2，无呼气末正压，吸入氧浓度 21%，室温 25 °C。[5]

[1]. The bisindolylmaleimide GF 109203X is a potent and selective inhibitor of protein kinase C. J Biol Chem. 1991 Aug 25;266(24):15771-81.

[2]. Impairment of neurovascular coupling in Type 1 Diabetes Mellitus in rats is prevented by pancreatic islet transplantation and reversed by a semi-selective PKC inhibitor. Brain Res. 2017 Jan 15;1655:48-54.

[3]. The protein kinase C inhibitors bisindolylmaleimide I (GF 109203x) and IX (Ro 31-8220) are potent inhibitors of glycogen synthase kinase-3 activity. FEBS Lett. 1999 Nov 5;460(3):433-6.

[4]. Chloramidine/Bisindolylmaleimide-I-Mediated Inhibition of Exosome and Microvesicle Release and Enhanced Efficacy of Cancer Chemotherapy. Int J Mol Sci. 2017 May 9;18(5):1007.

[5]. Aerobic exercise alleviates ventilator-induced lung injury by inhibiting NLRP3 inflammasome activation. BMC Anesthesiol. 2022 Dec 1;22(1):369.

[6]. Signal transduction pathways involved in dopamine D2 receptor-evoked emesis in the least shrew (Cryptotis parva). Auton Neurosci. 2021 Jul;233:102807.

Bim-1 属于吲哚类化合物。
总之，在 1 型糖尿病大鼠模型中，伴随慢性高血糖的脑灌注失调已被充分证实。上述病理生理过程已被证实包括 BKCa 和 Kir 通道介导的血管舒张功能丧失，以及链脲佐菌素处理的糖尿病大鼠通过坐骨神经刺激诱发的体感激活引起的软脑膜小动脉扩张显著减少。目前的研究结果还表明，通过移植胰岛内源性产生胰岛素来恢复和维持正常血糖水平，能够预防糖尿病动物中观察到的神经血管耦合受损。此外，急性局部应用经典 PKC 亚型抑制剂 GF109203X 能够逆转糖尿病脑血管损伤。这两种神经保护机制可能具有重要的临床意义。[2]

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多个研究小组报道，双吲哚基马来酰亚胺IX能够以不依赖于蛋白激酶C (PKC) 的方式激活细胞中的JNK。在表达胰岛素受体的CHO细胞中，沃特曼宁可阻断胰岛素对JNK的激活，因此，胰岛素激活JNK很可能位于PI3激酶激活的下游。这提示抑制GSK-3活性可能间接地激活JNK。这一假设与以下观察结果相符：在大鼠脂肪细胞中，双吲哚基马来酰亚胺IX和胰岛素刺激的JNK激活并非叠加效应。该假设需要进行严格的验证，尤其因为已知双吲哚基马来酰亚胺IX能够抑制其他蛋白激酶，例如MAPKAP激酶和p70S6激酶。然而，值得注意的是，这些特定的激酶不太可能参与其中，因为胰岛素和双吲哚基马来酰亚胺IX对它们的活性具有相反的作用。
JNK 的底物之一是 c-Jun，它是激活蛋白-1 复合物 (AP-1 复合物) 的组成部分，并被 JNK 在两个调控位点 Ser-63 和 Ser-73 上磷酸化。这些位点的磷酸化可反式激活 c-Jun，也可能解释了双吲哚基马来酰亚胺 IX 诱导的 c-Jun 表达增加。因此，双吲哚基马来酰亚胺 IX 刺激 AP-1 活性很可能是由于 JNK 活性增强导致 c-Jun 合成增加和/或 c-Jun 在 Ser-63 和 Ser-73 位点磷酸化所致。然而，GSK-3 可磷酸化 c-Jun DNA 结合域附近区域（氨基酸残基 227-252）的三个位点，导致 c-Jun DNA 结合能力和转录活性降低。事实上，转染实验表明，GSK-3 的共表达可抑制 AP-1 活性。因此，双吲哚基马来酰亚胺 IX 对 GSK-3 活性的抑制可能消除这种负调控，从而增加 c-Jun/AP-1 的活性。
总之，我们已证明双吲哚基马来酰亚胺 I 和 IX 均为 GSK-3 的强效直接抑制剂。我们的结果提示，双吲哚基马来酰亚胺 IX 的一些胰岛素样作用，特别是糖原合成酶的激活作用，可能是由于这些化合物能够抑制 GSK-3 所致。[3]

C25H24N4O2

412.48

412.189

C, 72.80; H, 5.86; N, 13.58; O, 7.76

133052-90-1

Bisindolylmaleimide I hydrochloride;176504-36-2

2396

Pink to red solid

1.3±0.1 g/cm3

685.6±55.0 °C at 760 mmHg

208-210ºC

368.5±31.5 °C

0.0±2.1 mmHg at 25°C

1.687

3.88

70.13

2

3

6

31

748

0

O=C1C(=C(C(N1[H])=O)C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12)C1=C([H])N(C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12

QMGUOJYZJKLOLH-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H24N4O2/c1-28(2)12-7-13-29-15-19(17-9-4-6-11-21(17)29)23-22(24(30)27-25(23)31)18-14-26-20-10-5-3-8-16(18)20/h3-6,8-11,14-15,26H,7,12-13H2,1-2H3,(H,27,30,31)

3-(1-(3-(dimethylamino)propyl)-1H-indol-3-yl)-4-(1H-indol-3-yl)-1H-pyrrole-2,5-dione

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再将50 μL Tween-80+加入到上述溶液中，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。