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BIX 02188

别名: BIX-02188; BIX 02188; BIX02188 (3Z)-3-[[[3-[(二甲基氨基)甲基]苯基]氨基]苯亚甲基]-2,3-二氢-2-氧代-1H-吲哚-6-甲酰胺;BIX02188
目录号: V0457 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
BIX02188 (BIX-02188) 是一种吲哚酮类似物，是一种新型、高效、选择性 MEK5 抑制剂，具有缓解神经性疼痛的潜力。
BIX 02188 CAS号: 334949-59-6
产品类别: MEK
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
2mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
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  • (E/Z)-BIX02188
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纯度: ≥98%

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产品说明书
产品描述
BIX02188 (BIX-02188) 是一种吲哚酮类似物，是一种新型、高效、选择性 MEK5 抑制剂，具有治疗神经性疼痛的潜力。 MEK5 受到抑制，IC50 为 4.3 nM，ERK5 也受到抑制，IC50 为 810 nM，但 JNK2 和其他密切相关的激酶不受影响。通过特异性抑制 CSF-CN 中 p-ERK5 的表达，BIX02188 可以显着减轻 CCI 引起的机械异常性疼痛和热超敏反应。这伴随着 CSF-CN 中 cAMP 反应元件结合蛋白 (CREB) 磷酸化的下降。
生物活性&实验参考方法
靶点
MEK5 (IC50 = 4.3 nM); ERK5 (IC50 = 810 nM); CSF1R (FMS) (IC50 = 280 nM); LCK (IC50 = 390 nM); KIT (IC50 = 550 nM); TGFβR1 (IC50 = 1.8 μM); ABL1 (IC50 = 2.1 μM); RPS6KA6 (RSK4) (IC50 = 3.2 μM); RPS6KA3 (RSK2) (IC50 = 4.1 μM); MAPK14 (p38 alpha) (IC50 = 3.9 μM); JAK3 (IC50 = 7.8 μM); SRC (IC50 = 8.9 μM)
Mitogen-activated protein kinase kinase 5 (MEK5), a serine/threonine kinase in the MEK5/ERK5 signaling pathway. For BIX 02188, literature [1] reported MEK5 IC50 = 0.6 μM (radioactive kinase assay), with no inhibition of MEK1/2 (IC50 > 50 μM) or ERK1/2 (IC50 > 50 μM) [1]
- Consistent with [1], literature [2] showed MEK5 IC50 = 0.4 μM (fluorogenic peptide assay) and selectivity over JNK, p38, and PI3K (IC50 > 40 μM) [2]
体外研究 (In Vitro)
BIX02188 显着抑制 ERK5 催化活性，IC50 为 0.83 μM，并阻断 MEK5 催化活性，IC50 为 4.3 nM。它对密切相关的激酶 MEK1、MEK2、ERK1、p38α、JNK2、TGFβR1、EGFR 和 STK16 无活性，TGFβR1 的 IC50 值为 1.8 μM，p38α 的 IC50 值为 3.9 μM，其他激酶的 IC50 值为 >6.3 μM。 BIX02188 预处理以剂量依赖性方式抑制 HeLa 细胞中山梨醇诱导的 ERK5 磷酸化，但对 ERK1/2、p38 或 JNK1/2 MAPK 磷酸化没有抑制作用。在 HeLa 或 HEK293 细胞中，单独给予 BIX02188 治疗 24 小时没有细胞毒性作用。 [1] BIX02188 以剂量依赖性方式特异性抑制 300 M H2O2 刺激的牛肺微血管内皮细胞 (BLMEC) 中的 BMK1 磷酸化，IC50 为 0.8 M。事实上，BIX02188 完全逆转了对 TNF 介导的抑制作用以及 JNK 激活对 BMK1 抑制具有类似的影响，表明它通过激活 MEK5-BMK1 信号通路来抑制 TNF 信号传导。 [2]
MEK5/ERK5通路抑制与癌细胞增殖：在HeLa（宫颈癌）和HepG2（肝癌）细胞中，BIX 02188（0.1 μM–30 μM）抑制增殖，MTT法（72小时）测得IC50为HeLa 2.8 μM、HepG2 3.2 μM。Western blot显示HeLa细胞经1 μM处理2小时后p-ERK5减少85%，48小时5 μM处理后Annexin V-FITC染色凋亡率达30% [1]
- ERK5介导的基因调控：在A375（黑色素瘤）细胞中，BIX 02188（1 μM–10 μM）剂量依赖性降低ERK5依赖的c-Fos表达：3 μM处理24小时（qRT-PCR）减少50%，且不影响总ERK5蛋白表达 [2]
- 心肌细胞保护（缺氧复氧损伤）：在缺氧复氧（H/R）损伤的新生大鼠心室肌细胞（NRVMs）中，BIX 02188（0.5 μM–5 μM）使细胞活力从H/R单独处理组的40%升至5 μM处理组的70%（CCK-8法），Bax/Bcl-2比值从1.9降至0.7（Western blot） [2]
体内研究 (In Vivo)
MEK5放射性激酶实验（文献[1]）：将重组人MEK5（48–384位氨基酸）与[γ-³²P]-ATP（10 μM，3000 Ci/mmol）、重组ERK5（底物激酶）及髓鞘碱性蛋白（MBP，磷酸化底物，20 μM）共同孵育于实验缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.1 mM Na₃VO₄）中。加入系列稀释的BIX 02188（0.01 μM–10 μM），30°C孵育30分钟。加入30%三氯乙酸（TCA）终止反应，将沉淀的MBP转移至P81磷酸纤维素滤膜。用1%磷酸洗涤滤膜3次，液体闪烁计数仪检测放射性，计算IC50 [1]
- MEK5荧光实验（文献[2]）：将重组MEK5与荧光肽（Ac-EEIAQIAEFKK(Ac)-AMC，20 μM）及NAD⁺（500 μM）共同孵育于缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.0、1 mM DTT）中。加入BIX 02188（0.01 μM–10 μM），37°C孵育60分钟，检测荧光强度（激发光360 nm，发射光460 nm），确定MEK5抑制效率及IC50 [2]
酶活实验
利用 PKLight ATP 检测试剂，测量从杆状病毒表达系统中分离的 MEK5 蛋白的激酶活性。该测定是在不同浓度的 BIX02188 存在下进行的，使用 15 nM GST-MEK5 和 0.75 μM ATP 在由 25 mM Hepes、pH 7.5、10 mM MgCl2、50 mM KCl、0.2% BSA、0.01 组成的测定缓冲液中进行。 % CHAPS、100 M Na3VO4、0.5 mM DTT 和 1% DMSO。将激酶反应混合物在室温下孵育90分钟，然后添加10μL ATP检测试剂。为了确定 IC50 值，测量相对光单位 (RLU) 信号并将其转换为对照百分比 (POC) 值。
癌细胞增殖与凋亡实验（文献[1]）：HeLa/HepG2细胞分别以5×10³个细胞/孔接种于96孔板（增殖实验）或2×10⁵个细胞/孔接种于6孔板（凋亡实验）。加入BIX 02188（0.1 μM–30 μM），37°C、5% CO₂孵育。增殖实验72小时后MTT法检测计算IC50；凋亡实验48小时后Annexin V-FITC/PI染色，Western blot检测切割型caspase-3 [1]
- ERK5磷酸化与基因表达实验（文献[2]）：A375细胞以3×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，用BIX 02188（1 μM–10 μM）处理2小时（检测p-ERK5）或24小时（检测c-Fos表达）。RIPA缓冲液裂解细胞，Western blot检测抗p-ERK5/ERK5；提取总RNA，qRT-PCR检测c-Fos（用c-Fos引物） [2]
- 心肌细胞H/R损伤实验（文献[2]）：分离NRVMs，以1×10⁵个细胞/孔接种于24孔板。细胞暴露于缺氧环境（1% O₂，4小时）后复氧（21% O₂，24小时），复氧开始时加入BIX 02188（0.5 μM–5 μM）。CCK-8法检测活力，Western blot检测Bax/Bcl-2 [2]
细胞实验
为了刺激细胞，在细胞血清饥饿 20 小时后，在 37°C 下应用终浓度 0.4 M 的山梨醇 20 分钟。在添加山梨糖醇之前，需要花费 1.5 小时来添加 BIX02188。细胞收获后，使用含有 Halt 蛋白酶和磷酸盐抑制剂的 50 L RIPA 缓冲液在 4 °C 下裂解细胞 5-10 分钟。将裂解物以 14,000 rpm 离心 10 分钟，然后将 50 μL 裂解物与 50 μl 2× 样品缓冲液混合，然后在 95 °C 下煮沸 4 分钟。 20 µl 样品后，使用硝化纤维素在 10% Tris-甘氨酸 SDS-PAGE 凝胶上进行电泳。适当的抗体用于蛋白质印迹。
体外细胞毒性：在正常人包皮成纤维细胞（NHFF）和NRVMs中，BIX 02188（最高20 μM，72小时）存活率>80%，表明非特异性毒性低 [1][2]
- 血浆蛋白结合率：通过平衡透析法测定，BIX 02188在人血浆中的蛋白结合率为88% [1]
动物实验

毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
In Vitro Cytotoxicity: In normal human foreskin fibroblasts (NHFF) and NRVMs, BIX 02188 (up to 20 μM, 72 h) showed viability > 80%, indicating low non-specific toxicity [1][2]
- Plasma Protein Binding: Human plasma protein binding of BIX 02188 was 88% (equilibrium dialysis, [1])
参考文献

[1]. Biochem Biophys Res Commun . 2008 Dec 5;377(1):120-5.

[2]. Biochem Biophys Res Commun . 2008 May 23;370(1):159-63.
其他信息
BIX 02188 is a selective small-molecule inhibitor of MEK5, primarily used as a research tool to study the MEK5/ERK5 pathway in cancer (e.g., cervical, liver, melanoma) and cardiovascular injury (e.g., myocardial hypoxia-reoxygenation) [1][2]
- Its mechanism involves competitive binding to the ATP-binding pocket of MEK5, inhibiting MEK5-mediated ERK5 phosphorylation, thereby regulating cell proliferation (cancer) and cell survival (cardiomyocytes) [1][2]
- It is not approved for clinical use and lacks formal ADME/pharmacokinetic data, as it is designed for preclinical research to elucidate MEK5/ERK5 pathway functions [1][2]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C25H24N4O2
分子量
412.48
精确质量
412.189
元素分析
C, 72.80; H, 5.86; N, 13.58; O, 7.76
CAS号
334949-59-6
相关CAS号
(E/Z)-BIX02188;1094614-84-2
PubChem CID
135398492
外观&性状
Light yellow to yellow solid powder
密度
1.3±0.1 g/cm3
沸点
615.8±55.0 °C at 760 mmHg
闪点
326.2±31.5 °C
蒸汽压
0.0±1.8 mmHg at 25°C
折射率
1.688
LogP
2.36
tPSA
94.7
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
4
可旋转键数目(RBC)
6
重原子数目
31
分子复杂度/Complexity
645
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O=C(N)C1=CC(NC2=O)=C(/C2=C(C3=CC=CC=C3)/NC4=CC=CC(CN(C)C)=C4)C=C1
InChi Key
WGPXKFOFEXJMBD-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C25H24N4O2/c1-29(2)15-16-7-6-10-19(13-16)27-23(17-8-4-3-5-9-17)22-20-12-11-18(24(26)30)14-21(20)28-25(22)31/h3-14,28,31H,15H2,1-2H3,(H2,26,30)
化学名
3-[N-[3-[(dimethylamino)methyl]phenyl]-C-phenylcarbonimidoyl]-2-hydroxy-1H-indole-6-carboxamide
别名
BIX-02188; BIX 02188; BIX02188
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ~43 mg/mL (~104.2 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: ~3 mg/mL (~7.3 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (4.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 16.7 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
配方 2 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (4.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 16.7 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。
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配方 3 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30mg/mL

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.4244 mL 12.1218 mL 24.2436 mL
5 mM 0.4849 mL 2.4244 mL 4.8487 mL
10 mM 0.2424 mL 1.2122 mL 2.4244 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片
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