p110α (IC50 = 52 nM); p110β (IC50 = 166 nM); p110δ (IC50 = 116 nM); p110γ (IC50 = 262 nM); Vps34 (IC50 = 2.4 μM); p110α-H1047R (IC50 = 58 nM); p110α-E545K (IC50 = 99 nM); mTOR (IC50 = 4.6 μM)

Buparlisib (BKM120) 对 I 类 PI3K（包括最常见的 p110α 突变体）表现出 50-300 nM 的活性。此外，NVP-BKM120 对 III 类和 IV 类 PI3K 的效力较低； VPS34、mTOR、DNAPK 和 PI4K 的抑制分别被 2、5、>5 和 >25 μM 生化活性所抑制[1]。 buparlisib (BKM120) 如何引起多发性骨髓瘤 (MM) 细胞凋亡，存在剂量和时间依赖性。 Buparlisib (BKM120) 在 10 μM 浓度下 24 小时后显着诱导所有测试的 MM 细胞系凋亡（与对照相比，P<0.05）。如果没有另外说明，以下实验将使用 10 μM buparlisib (BKM120) 和 24 小时处理。所有测试的 MM 细胞系均表现出对 buparlisib (BKM120) 治疗的剂量依赖性生长抑制。每个测试的 MM 细胞都有不同的 buparlisib (BKM120) IC50 值。处理 24 小时时，ARP-1、ARK 和 MM.1R 的 IC50 为 1 至 10 μM，而 MM.1S 的 IC50 小于 <1 μM，U266 的 IC50 为 10 至 100 M。总之，buparlisib (BKM120) 治疗会导致 MM 细胞生长抑制和凋亡，其方式取决于剂量和时间[2]。

在 A2780 异种移植肿瘤中，口服 3、10、30、60 和 100 mg/kg 剂量的 Buparlisib (BKM120) 会导致 pAKTSer473 的剂量依赖性调节。在 3 和 10 mg/kg 的剂量下，pAKTSer473 被部分抑制，在 30、60 或 100 mg/kg 的剂量下，它几乎被完全抑制。血浆和肿瘤药物暴露均与 pAKT 抑制（标准化为总 AKT）密切相关[1]。根据肿瘤体积 (P<0.05) 和循环人 kappa 链水平 (P<0.05) 确定，Buparlisib (BKM120)（每天每公斤 5 μM，持续 15 天）治疗的小鼠的肿瘤负荷显着低于对照小鼠。此外，buparlisib (BKM120) 治疗可显着提高荷瘤小鼠的存活率 (P<0.05)[2]。

将 BKM120 溶解在 DMSO 中，然后立即以每孔 1.25 µL 的速率分配到黑色 384 孔板中，用于 PI3K 生化测定（ATP 消耗测定）。将检测缓冲液中的 25 µL 10 nM PI3 激酶、5 µg/mL 1-磷脂酰肌醇 (PI) 和 25 µL 2 µM ATP 添加到每个孔中以启动反应。测定缓冲液由 10 mM Tris pH 7.5、5 mM MgCl2、20 mM NaCl、1 mM DTT 和 0.05% CHAPS 组成。在反应运行大约 50% 的 ATP 后，添加 25 µL KinaseGlo 溶液会停止反应。让停止的反应继续五分钟，然后通过发光发现剩余的 ATP。

A2780 细胞在补充有 10% FBS 的 DMEM 中培养。 L-谷氨酰胺、丙酮酸钠和抗生素。在黑壁透明底板中，将 1000 个细胞以每孔 100 uL 的密度接种在相同的培养基中，然后将细胞孵育 3 至 5 小时。 Buparlisib (BKM120) 以 20 mM 溶液形式提供（7.5 uL 20 mM NVP-BKM120 在 22.5 uL DMSO 中），然后进一步稀释到 DMSO 中。要制备九种浓度，请重复该过程（充分混合，将 10 uL 转移至 20 uL DMSO 等）。然后，添加细胞培养基(500 uL)，随后添加稀释的Buparlisib (BKM120)溶液(2 uL)。将等体积的该溶液 (100 uL) 倒在 96 孔板中的细胞顶部，然后在 37°C 下孵育三天，然后使用 Cell Titer Glo 进行显色。 Trilux 的发光读数用于确定细胞增殖是否受到抑制[1]。

Mice: SCID(Six- to eight-week-old female severe combined immunodeficiency) mice are used. One million ARP-1 or MM.1S cells suspended in 50 mL of phosphate-buffered saline (PBS) are subcutaneously injected into SCID mice's right flank. Mice are administered DMSO/PBS or buparlisib (BKM120) (5 μL per kg per day) intraperitoneally for 15 days after the development of a palpable tumor (tumor diameter 5 mm). Blood samples are taken at regular intervals and tumor sizes are measured every five days. The size of the tumor and the presence of circulating human kappa chain or lambda chain are used to assess the burden of the tumor.

[1]. Identification of NVP-BKM120 as a Potent, Selective, Orally Bioavailable Class I PI3 Kinase Inhibitor for Treating Cancer. ACS Med Chem Lett. 2011 Aug 26;2(10):774-9.

[2]. Novel phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor NVP-BKM120 induces apoptosis in myeloma cells and shows synergistic anti-myeloma activity with dexamethasone. J Mol Med (Berl). 2012 Jun;90(6):695-706.

Phosphoinositide-3-kinases (PI3Ks) are important oncology targets due to the deregulation of this signaling pathway in a wide variety of human cancers. Herein we describe the structure guided optimization of a series of 2-morpholino, 4-substituted, 6-heterocyclic pyrimidines where the pharmacokinetic properties were improved by modulating the electronics of the 6-position heterocycle, and the overall druglike properties were fine-tuned further by modification of the 4-position substituent. The resulting 2,4-bismorpholino 6-heterocyclic pyrimidines are potent class I PI3K inhibitors showing mechanism modulation in PI3K dependent cell lines and in vivo efficacy in tumor xenograft models with PI3K pathway deregulation (A2780 ovarian and U87MG glioma). These efforts culminated in the discovery of 15 (NVP-BKM120), currently in Phase II clinical trials for the treatment of cancer.[1]

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NVP-BKM120 is a novel phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) inhibitor and is currently being investigated in phase I clinical trials in solid tumors. This study aimed to evaluate the therapeutic efficacy of BKM120 in multiple myeloma (MM). BKM120 induces cell growth inhibition and apoptosis in both MM cell lines and freshly isolated primary MM cells. However, BKM120 only shows limited cytotoxicity toward normal lymphocytes. The presence of MM bone marrow stromal cells, insulin-like growth factor, or interleukin-6 does not affect BKM120-induced tumor cell apoptosis. More importantly, BKM120 treatment significantly inhibits tumor growth in vivo and prolongs the survival of myeloma-bearing mice. In addition, BKM120 shows synergistic cytotoxicity with dexamethasone in dexamethasone-sensitive MM cells. Low doses of BKM120 and dexamethasone, each of which alone has limited cytotoxicity, induce significant cell apoptosis in MM.1S and ARP-1. Mechanistic study shows that BKM120 exposure causes cell cycle arrest by upregulating p27 (Kip1) and downregulating cyclin D1 and induces caspase-dependent apoptosis by downregulating antiapoptotic XIAP and upregulating expression of cytotoxic small isoform of Bim, BimS. In summary, our findings demonstrate the in vitro and in vivo anti-MM activity of BKM120 and suggest that BKM120 alone or together with other MM chemotherapeutics, particularly dexamethasone, may be a promising treatment for MM.[2]

C₁₈H₂₂CLF₃N₆O₂

446.85

446.144

C, 48.38; H, 4.96; Cl, 7.93; F, 12.75; N, 18.81; O, 7.16

1312445-63-8

Buparlisib;944396-07-0

66577015

White to yellow solid powder

2.674

90.36

2

11

3

30

530

0

NC(N=C1)=CC(C(F)(F)F)=C1C2=NC(N3CCOCC3)=NC(N4CCOCC4)=C2.[H]Cl

DGPLYAXBXJXEID-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C18H21F3N6O2.ClH/c19-18(20,21)13-9-15(22)23-11-12(13)14-10-16(26-1-5-28-6-2-26)25-17(24-14)27-3-7-29-8-4-27;/h9-11H,1-8H2,(H2,22,23);1H

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 0.5% CMC Na : 6mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。