IKK-2 (IC50 = 0.3 μM); IKK-1 (IC50 = 4 μM)

体外活性：BMS-345541 剂量依赖性地抑制 THP-1 单核细胞中 TNF-α 刺激的 IκBα 磷酸化，IC50 约为 4 μM。 BMS-345541 抑制 THP-1 细胞中脂多糖刺激的肿瘤坏死因子 α、白细胞介素 1β、白细胞介素 8 和白细胞介素 6，IC50 值在 1 至 5 μM 范围内。 BMS-345541 以相互排斥的方式与对应于 IκBα 氨基酸 26 - 42（其中 Ser-32 和 Ser-36 变为天冬氨酸）的肽抑制剂结合，并且以非相互排斥的方式与 ADP 结合。 BMS-345541 与 IKK-1 和 IKK-2 上相似的变构位点结合，从而对亚基的活性位点产生不同的影响。 BMS-345541 影响多种有丝分裂细胞周期转变，包括有丝分裂进入、中期到后期进展和胞质分裂。将 BMS-345541 添加到 G 期停滞释放的细胞中，可阻断 Aurora A、B 和 C 的激活、Cdk1 的激活和组蛋白 H3 的磷酸化。用 BMS-345541 处理有丝分裂细胞会导致细胞周期蛋白 B1 和 securin 过早降解、染色体分离缺陷和胞质分裂不当。 BMS-345541 还被发现可以覆盖诺考达唑抑制细胞中的纺锤体检查点。这些作用并非主要归因于 BMS-345541 对有丝分裂激酶（如 Cdk1、Aurora A 或 B、Plk1 或 NEK2）的直接抑制作用。 BMS-345541 (10 μM) 在 72 小时时分别抑制正常人表皮黑色素细胞和转移性黑色素瘤细胞（SK-MEL-5、A375 和 Hs 294T）的生长 96% 和 99%。将 100 μM BMS-345541 应用到 SK-MEL-5 细胞培养物中，通过不依赖 caspase 和 AIF 依赖的线粒体介导的方式，24 小时可导致 87% 的细胞凋亡。 BMS-345541 处理 (10 μM) 导致 IKK 活性和 NF-kB 活性以及 CXCL1 产量减少 76% 和 95%。激酶测定：通过在 30℃下将酶（终浓度为 0.5 μg/mL）添加到 100 μg/mL GST-IκBα 和 5 μM [33P]ATP 的溶液中，进行测量酶催化的 GST-IκBα 磷酸化的测定。 40 mM Tris HCl，pH 7.5，含有 4 mM MgCl2、34mM 磷酸钠、3 mM NaCl、0.6 mM 磷酸钾、1 mM KCl、1 mM 二硫苏糖醇、3% (w/v) 甘油和 250 μg/mL 牛血清白蛋白。测定中使用的[33P]ATP 的比活度为100 Ci/mmol。 5分钟后，加入2×Laemmli样品缓冲液终止激酶反应，并在90℃下热处理1分钟。然后将样品加载到 NuPAGE 10% BisTris 凝胶上。完成 SDS-PAGE 后，将凝胶在平板凝胶干燥机上干燥。然后使用 445Si PhosphorImager 检测条带，并使用 ImageQuant 软件量化放射性。在这些条件下，GST-IκBα 的磷酸化程度与时间和酶浓度呈线性关系。细胞测定：将每孔 1×105 个细胞（转移性人黑色素瘤细胞 SK-MEL-5）铺在含有 10% 胎牛血清培养基的六孔板中过夜，以使细胞粘附。将细胞在含有BMS-345541的培养基中培养72小时。用血细胞计数器对细胞进行计数。

BMS-345541 以剂量依赖性方式有效抑制黑色素瘤生长。与接受治疗的对照动物相比，接受 75 mg/kg BMS-345541 治疗的荷瘤小鼠可有效抑制 SK-MEL-5、A375 和 Hs 294T 肿瘤的生长，分别达 86%、69% 和 67%单独与车辆。 BMS-345541 以 100 mg/kg 剂量口服给药，可降低小鼠葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎的严重程度，其体重比、结肠临床评分、平均损伤评分和平均炎症评分为 0.86（相比于载体组为 0.77） 、1.0（相对于车辆组的 2.5）、5.66（相对于车辆组的 8.52）、6.82（相对于车辆组的 12.33）。 BMS-345541（100 mg/kg），从第一次胶原蛋白免疫开始，每日一次用水口服灌胃给药，可抑制小鼠 CIA 模型中的疾病临床体征（媒介物组为 0 vs ~8），同时伴随通过减少爪子肿胀。 BMS-345541 (100 mg/kg) 将累积关节炎损伤评分从 4.4 降低至 0，同时降低胫跗关节退化以及炎症、滑膜增生、骨吸收和软骨侵蚀的严重程度。在动物的关节中没有观察到明显的损伤，这在组织学上与年龄匹配、无疾病的对照动物的关节没有区别。 BMS-345541 剂量依赖性地抑制 IL-1β 信息，100 mg/kg 剂量组的动物表现出与无病对照动物相当的水平。

通过在 30℃下将酶（终浓度为 0.5 μg/mL）添加到 100 μg/mL GST-IκBα 和 5 μM [33P]ATP 的 40 mM Tris 溶液中，进行测量酶催化的 GST-IκBα 磷酸化的测定。 HCl，pH 7.5，含有 4 mM MgCl2、34mM 磷酸钠、3 mM NaCl、0.6 mM 磷酸钾、1 mM KCl、1 mM 二硫苏糖醇、3% (w/v) 甘油和 250 μg/mL 牛血清白蛋白。测定中使用的 [33P]ATP 的比活性为 100 Ci/mmol。 5 分钟后加入 2×Laemmli 样品缓冲液停止激酶反应，然后在 90 °C 下加热 1 分钟。之后，将样品置于 NuPAGE 10% BisTris 凝胶上。 SDS-PAGE 完成后，将凝胶在平板凝胶干燥机上干燥。

将含有10%胎牛血清培养基的六孔板每孔加入1×105个细胞过夜，以促进细胞粘附。将细胞在含有 BMS-345541 的培养基中培养 72 小时。使用血细胞计数器对细胞进行计数。

Mice: Groups of three 18-22 g female BALB/c mice receive BMS-345541 either intravenously through the tail vein or orally. BMS-345541 is created as a 2 mg/mL solution in water with 3% Tween 80. Either a peroral gavage of 10 mg/kg (1 mL/kg) or an intravenous bolus of 2 mg/kg (1 mL/kg) is administered to the mice. Individual mice are given whole blood samples at 0, 0.05, 0.25, 0.5, 1.0, 3.0, 6.0, and 8.0 h after dosing by means of an orbital bleed and a cardiac puncture. Centrifuging whole blood for five minutes at 20×103×g. While awaiting analysis, serum is kept at -20°C.

[1]. J Biol Chem . 2003 Jan 17;278(3):1450-6.

[2]. Cell Cycle . 2007 Oct 15;6(20):2531-40.

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[6]. Inflamm Res . 2003 Dec;52(12):508-11

[7]. Arthritis Rheum . 2003 Sep;48(9):2652-9.

C14H17N5

255.32

255.15

C, 65.86; H, 6.71; N, 27.43

445430-58-0

445430-58-0;547757-23-3 (HCl);445430-59-1 (2HCl);2320261-79-6 (TFA);

Solid powder

CC1=CC2=C(C=C1)N=C(C3=NC=C(N23)C)NCCN

PSPFQEBFYXJZEV-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C14H17N5/c1-9-3-4-11-12(7-9)19-10(2)8-17-14(19)13(18-11)16-6-5-15/h3-4,7-8H,5-6,15H2,1-2H3,(H,16,18)

N'-(1,8-dimethylimidazo[1,2-a]quinoxalin-4-yl)ethane-1,2-diamine

BMS-345541; BMS345541; BMS 345541; UNII-26SU0NEF5F; BMS-345541 free base

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Solubility in Formulation 1: ≥ 1 mg/mL (3.92 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 10.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 400 μL of PEG300 and mix evenly; then add 50 μL of Tween-80 to the above solution and mix evenly; then add 450 μL of normal saline to adjust the volume to 1 mL.
Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH₂ O to obtain a clear solution.

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Solubility in Formulation 2: ≥ 1 mg/mL (3.92 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 10.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of 20% SBE-β-CD physiological saline solution and mix evenly.
Preparation of 20% SBE-β-CD in Saline (4°C，1 week): Dissolve 2 g SBE-β-CD in 10 mL saline to obtain a clear solution.

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Solubility in Formulation 3: ≥ 1 mg/mL (3.92 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 10.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of corn oil and mix evenly.

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Solubility in Formulation 4: 30% propylene glycol, 5% Tween 80, 65% D5W: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。