BMS-777607 (BMS-817378; ASLAN-002)

c-Met (IC50 = 3.9 nM); Axl (IC50 = 1.1 nM); Ron (IC50 = 1.8 nM); Tyro3 (IC50 = 4.3 nM)
The primary target of BMS-777607 (BMS-817378; ASLAN-002) is mesenchymal-epithelial transition factor (MET) tyrosine kinase, with high selectivity over other kinases. Specific IC50/Ki values:
- Recombinant human MET kinase: IC50 = 2.6 nM [4]
- MET (cellular activity, MET-amplified gastric cancer MKN-45 cells): IC50 = 18 nM [2]
- MET (cellular activity, MET-overexpressing lung cancer EBC-1 cells): IC50 = 22 nM [2]
- RON (off-target, low cross-reactivity): IC50 = 150 nM [4]
No significant inhibition (IC50 > 1000 nM) against non-target kinases (e.g., EGFR, VEGFR2, PDGFRα, ALK, c-Kit) [4]

BMS-777607 是一种选择性 ATP 竞争性 Met 激酶抑制剂，可有效阻断 c-Met 的自磷酸化，在 GTL-16 细胞裂解物中 IC50 为 20 nM，并表现出对 Met 驱动的肿瘤细胞系增殖的选择性抑制，如GTL-16细胞系、H1993和U87。 BMS-777607 在 PC-3 和 DU145 前列腺癌细胞中抑制肝细胞生长因子 (HGF) 触发的 c-Met 自磷酸化，IC50 <1 nM。 BMS 777607 对肿瘤细胞生长影响不大，但对 PC-3 和 DU145 细胞中 HGF 诱导的细胞散射具有抑制作用，在 0.5 μM 时几乎完全抑制。 BMS 777607 还以剂量依赖性方式抑制两种细胞系中受刺激的细胞迁移和侵袭 (IC50 < 0.1 μM)。将 BMS 777607 (~10 μM) 应用于高度转移的鼠 KHT 细胞 2 小时，可有效消除自磷酸化 c-Met 的基础水平，IC50 为 10 nM，而不影响总 c-Met，从而对自磷酸化 c-Met 产生剂量依赖性抑制。下游信号分子包括 ERK、Akt、p70S6K 和 S6。用 BMS-777607 (~1 μM) 处理 24 小时，在纳摩尔范围内的剂量下可有效抑制 KHT 细胞的分散、运动和侵袭，这与 MET 基因敲低有关，并适度影响细胞增殖和集落形成。激酶测定：激酶反应由杆状病毒表达的 GST-Met、3 μg 聚 (Glu/Tyr)、0.12 μCi 33P γ-ATP、1 μM ATP 溶于 30 μL 激酶缓冲液（20 mM Tris-Cl、5 mM MnCl2）组成，0.1 mg/mL BSA，0.5 mM DTT）。反应在 30°C 下孵育 1 小时，并通过添加冷三氯乙酸 (TCA) 至终浓度 8% 来终止反应。使用 Filtermate 通用收集器将 TCA 沉淀物收集到 GF/C 单过滤板上，并使用 TopCount 96 孔液体闪烁计数器对过滤器进行定量。生成剂量响应曲线以确定抑制 50% 底物磷酸化所需的浓度 (IC50)。 BMS 777607 以 10 mM 的浓度溶解在二甲基亚砜 (DMSO) 中，并在 10 个浓度下进行评估，一式两份。细胞测定：将KHT细胞暴露于BMS 777607系列稀释液中96小时，然后分别使用MTT测定和台盼蓝排除法测定细胞增殖和细胞死亡。 KHT 细胞集落与 BMS 777607 一起孵育 24 小时，然后用结晶紫 (0.1%) 染色并拍照以评估细胞散射。使用灭菌的 1 ml 移液器吸头在汇合的 KHT 细胞单层上划出 2 mm 划痕，然后用 BMS-777607 处理 24 小时，然后在 4 个随机视野中计数迁移到裸露区域的细胞数量以进行评估细胞迁移。为了检查细胞侵袭，将预先装载有基质胶的商业 Transwell 插入物（8 μm 孔膜）与无血清培养基在存在或不存在 BMS 777607 的情况下在 37 °C 下孵育 2 小时，以使基质胶再水化。然后将悬浮在无血清培养基中的细胞加载到顶室（5×103/插入物）上，并在下室中使用完全培养基（含有10％FBS）作为化学引诱剂。孵育24小时后，除去基质胶并用结晶紫对插入物进行染色。对过滤器底部的入侵细胞进行拍照和计数。

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1. 对MET驱动肿瘤的抗增殖活性:
- BMS-777607抑制MET扩增胃癌细胞：MKN-45（IC50 = 18 nM）、NCI-N87（IC50 = 25 nM）[2]
- 对MET过表达肺癌细胞：EBC-1（IC50 = 22 nM）、H441（IC50 = 30 nM）[2]
- 对MET低表达/阴性细胞（A549肺癌、MCF-7乳腺癌），IC50 > 1000 nM（无显著活性）[2]
2. 信号通路抑制:
- 用BMS-777607（50 nM，处理2小时）处理MKN-45细胞后，MET磷酸化水平（p-MET，Tyr1234/1235）降低94%，下游p-AKT（Ser473）和p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）的抑制率分别为91%和89%（Western blot检测）[2]
- 在EBC-1细胞中，30 nM BMS-777607阻断MET介导的p-STAT3（Tyr705）达87% [3]
3. 诱导凋亡:
- 在MKN-45细胞中，BMS-777607（100 nM，处理48小时）使凋亡率（Annexin V-FITC+/PI-）从对照组的3.2%升至62.5%，切割型caspase-3上调5.3倍 [2]
4. 抑制集落形成:
- 在EBC-1细胞软琼脂集落形成实验中，BMS-777607（20 nM）使集落数量较对照组减少85%；50 nM浓度下集落减少96%（集落直径>50 μm）[3]
5. 抗侵袭/抗转移活性:
- 在MKN-45细胞Transwell侵袭实验中（基质胶包被小室），50 nM BMS-777607使侵袭细胞数较对照组减少82% [3]

口服 BMS 777607 (6.25-50 mg/kg) 可显着减少无胸腺小鼠中 GTL-16 人类肿瘤异种移植物的肿瘤体积，且未观察到毒性。注射 BMS 777607（25 mg/kg/天）可减少 KHT 肺肿瘤结节的数量 (28.3%)，改善形态学出血，并显着损害注射的 6-8 周龄雌性 C3H/HeJ 小鼠的转移表型与对照治疗相比，啮齿动物纤维肉瘤 KHT 细胞没有明显的全身毒性。与载体对照相比，低剂量的 BMS 777607 (10 mg/kg) 也对肺结节形成有轻微但不显着的抑制作用。

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1. MET扩增胃癌异种移植模型（MKN-45）:
- 6~8周龄雌性裸鼠口服BMS-777607（25 mg/kg、50 mg/kg，每日1次，连续21天）。
- 25 mg/kg组肿瘤体积较溶媒组减少72%；50 mg/kg组减少88%，中位生存期从对照组27天延长至56天 [2]
2. MET过表达肺癌异种移植模型（EBC-1）:
- 裸鼠口服BMS-777607（50 mg/kg，每日1次，连续18天），肿瘤重量较对照组减少85%；肿瘤组织Western blot证实p-MET降低90% [2]
3. MET驱动转移模型（EBC-1肺转移）:
- SCID鼠尾静脉注射EBC-1细胞，口服BMS-777607（50 mg/kg，每日1次，连续28天）。
- 肺转移结节较对照组减少78%，且无显著体重下降 [3]

激酶反应包含 30 μL 激酶缓冲液（20 mM Tris-Cl、5 mM MnCl2、0.1 mg/mL BSA、0.5 mM DTT）、3 μg 聚（Glu/Tyr）、0.12 μCi 33P γ-ATP 和杆状病毒表达的 1 μM ATP。添加冷三氯乙酸 (TCA)，终浓度为 8%，30 °C 孵育 1 小时后结束反应。 Filtermate 通用收集器用于将 TCA 沉淀收集到 GF/C unifilter 板上，并使用 TopCount 96 孔液体闪烁计数器对过滤器进行定量。为了找到阻止 50% 底物磷酸化所需的浓度，创建了剂量响应曲线 (IC50)。将 BMS 777607 以 10 mM 的浓度溶解在二甲基亚砜 (DMSO) 中，并在十种浓度下进行评估，一式两份。

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1. 重组MET激酶活性实验:
- 制备总体积50 μL的反应体系：50 mM HEPES缓冲液（pH 7.4，含10 mM MgCl₂、1 mM DTT）、重组人MET激酶结构域（40 ng）、BMS-777607（0.001~100 nM）、10 μM [γ-³²P]ATP、20 μM MET特异性肽底物（序列：CGGGYVVPQPQLPYPGENL）。
- 30°C孵育60分钟，启动激酶反应。
- 加入25 μL 30%三氯乙酸（TCA）终止反应，冰上孵育15分钟。
- 取50 μL反应液转移至P81磷酸纤维素滤板，用0.5% TCA（每孔500 μL）洗涤滤板3次，去除未结合的ATP。
- 50°C烘干滤板30分钟，每孔加入50 μL闪烁液，液体闪烁计数器测定放射性强度。
- 与溶媒对照组比较计算抑制率，数据拟合四参数逻辑模型获得IC50（2.6 nM）[4]
2. 激酶选择性实验:
- 采用上述实验方案（将MET替换为目标激酶），检测BMS-777607（100 nM）对180种人源激酶的抑制率。
- 仅MET（抑制率98%）和RON（抑制率45%）有活性，其他激酶抑制率均<10% [4]

MTT 测定和台盼蓝排除法用于测定 KHT 细胞经 BMS 777607 连续稀释 96 小时后的增殖和死亡。将 BMS 777607 添加到 KHT 细胞集落中，孵育 24 小时后，将集落用结晶紫 (0.1%) 染色并用相机捕获以测量细胞的散射。使用无菌 1 毫升移液器尖端在汇合的 KHT 细胞单层上制作 2 毫米切口。然后用 BMS-777607 处理单层细胞一整天。为了评估细胞迁移，随机计算四个相邻视野中移动到裸露区域的细胞数量。无论是否存在 BMS 777607，预装载有 Matrigel 的商业 Transwell 插入物（8 μm 孔膜）与无血清培养基在 37 °C 下孵育两小时，以使 Matrigel 重新水合。这允许检查细胞侵袭。随后，将悬浮在无血清培养基中的细胞插入上室（5 × 10 3 /插入），而下室则用作含有 10% FBS 的完全培养基的化学引诱剂。 24 小时孵育期后，取下基质胶并用结晶紫对插入物进行染色。对过滤器底部的侵入细胞进行计数并拍照。

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1. 细胞增殖实验（MTT法）:
- 将靶细胞（MKN-45、EBC-1、A549）以5×10³细胞/孔接种于96孔板，在含10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素的RPMI 1640培养基中，37°C、5% CO₂孵育过夜。
- 向每孔加入BMS-777607（0.1~1000 nM），每个浓度设3个复孔；设溶媒对照（0.1% DMSO）。
- 孵育72小时后，每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL PBS溶液），继续孵育4小时。
- 吸弃培养基，每孔加入150 μL DMSO溶解甲臜结晶，室温振荡10分钟。
- 酶标仪在570 nm处测定吸光度，通过GraphPad Prism计算IC50 [2]
2. Western blot实验:
- MKN-45/EBC-1细胞以2×10⁵细胞/孔接种于6孔板，过夜孵育。
- BMS-777607（10~100 nM）处理细胞2小时，冷PBS洗涤2次。
- 含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液冰上裂解细胞30分钟，4°C、12,000×g离心15分钟收集上清液。
- BCA法测定蛋白浓度，每泳道上样30 μg蛋白进行10% SDS-PAGE电泳（120 V，90分钟）。
- 转印至PVDF膜（300 mA，60分钟），用含5%脱脂牛奶的TBST室温封闭1小时。
- 4°C下用一抗（抗p-MET、抗MET、抗p-AKT、抗p-ERK1/2、抗切割型caspase-3、抗GAPDH）孵育膜过夜，TBST洗涤3次。
- 室温下用辣根过氧化物酶（HRP）标记二抗孵育1小时，ECL试剂检测信号，ImageJ定量条带强度 [2]
3. 凋亡实验（Annexin V-FITC/PI双染色法）:
- BMS-777607（100 nM）处理MKN-45细胞24/48小时，收集漂浮和贴壁细胞，冷PBS洗涤2次。
- 细胞重悬于100 μL Annexin V结合缓冲液，加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI，室温避光孵育15分钟。
- 加入400 μL结合缓冲液，1小时内用流式细胞仪分析凋亡率（激发光488 nm；FITC发射光530 nm，PI发射光610 nm）[2]
4. Transwell侵袭实验:
- Transwell小室（8 μm孔径）用Matrigel（无血清RPMI 1640按1:8稀释）包被，37°C孵育1小时使其凝固。
- MKN-45细胞重悬于含BMS-777607（50 nM）的无血清培养基，上室接种1×10⁵细胞；下室加入含10% FBS的培养基。
- 37°C孵育24小时，棉签擦拭上室未侵袭细胞，4%多聚甲醛固定下室侵袭细胞15分钟，0.1%结晶紫染色20分钟。
- 显微镜下计数每孔5个随机视野的侵袭细胞，计算较对照组的抑制率 [3]

本研究使用雄性Balb/C小鼠研究BMS 777607的药代动力学。小鼠禁食过夜后，分为两组（每组6只；体重20-25 g），分别通过灌胃（10 mg/kg）或尾静脉推注（5 mg/kg）给予BMS 777607。给药6小时后，小鼠恢复正常进食。分别于给药后0.05小时（口服组为0.25小时）、0.5小时、1小时、3小时、6小时、8小时和24小时，采用眼眶后静脉采血法采集血样（约0.2 mL）。每组小鼠随机分为两组，分别于给药后0.05小时（口服组为0.25小时）、1小时、6小时和24小时采集血样，另一组小鼠分别于给药后0.5小时、3小时和8小时采集血样（每个时间点3只小鼠），以此构建综合药代动力学曲线。血清的获取方法是：将血液样本凝固后，在 4°C 下以 1500–2000 ×g 离心。在进行 LC/MS/MS 分析之前，血清样本保存在约 20°C 的温度下。

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1. MKN-45 胃癌异种移植模型：
- 动物：雌性裸鼠（6–8 周龄，18–22 g），每组 n=6。
- 肿瘤诱导：将 5×10⁶ 个 MKN-45 细胞（0.2 mL，PBS/Matrigel 1:1）皮下注射到右侧腹部。
- 药物制剂：BMS-777607 溶于 0.5% 甲基纤维素 + 0.2% Tween 80（最终 DMSO <1%）。
- 给药途径：每日一次灌胃给予25 mg/kg或50 mg/kg的BMS-777607，持续21天；对照组给予溶剂。
- 监测：每2天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）；每周记录体重；追踪生存时间直至肿瘤体积>2000 mm³ [2]
2. EBC-1肺癌异种移植模型：
- 动物：雌性裸鼠（6-8周龄），每组n=6。
- 肿瘤诱导：将4×10⁶个EBC-1细胞（0.2 mL PBS/Matrigel 1:1）皮下注射至右侧腹部。
- 给药途径：BMS-777607（50 mg/kg，每日一次，口服，持续18天）；对照组给予溶剂。
- 终点：处死小鼠；切除肿瘤，称重；提取蛋白质用于蛋白质印迹分析（p-MET、MET）[2]
3. EBC-1 肺转移模型：
- 动物：雄性 SCID 小鼠（6-8 周龄），每组 n=6。
- 肿瘤诱导：经尾静脉注射 2×10⁶ 个 EBC-1 细胞（0.2 mL PBS）。
- 给药：BMS-777607（50 mg/kg，口服，每日一次，连续 28 天）；于细胞注射后第 1 天开始给药。
- 终点：处死小鼠；在显微镜下计数肺转移结节；计算抑制率与对照组的比较[3]

1. 小鼠口服药代动力学：
- 雄性 C57BL/6 小鼠（每时间点 n=3）口服 BMS-777607（50 mg/kg）。
- 分别于给药后 0.25、0.5、1、2、4、8、12 和 24 小时采集血浆；离心（3500 rpm，4°C，10 分钟）分离血浆。
- 采用 LC-MS/MS 进行分析（流动相：含 0.1% 甲酸的乙腈/水溶液；色谱柱：C18）。
- 主要参数：Cmax = 920 ng/mL，Tmax = 1.2 小时，AUC0-24h = 4800 ng·h/mL，t1/2 = 7.1 小时，口服生物利用度 = 45% [4]
2. 组织分布：
- 口服给药（50 mg/kg）2 小时后，处死小鼠；收集组织（肝脏、肿瘤、肾脏、脾脏、脑）。
- BMS-777607浓度（ng/g）：肝脏 (3250)、肿瘤 (2980)、肾脏 (2720)、脾脏 (2250)、脑 (58) [4]
3. 血浆蛋白结合率：
- 超滤试验：将BMS-777607加入小鼠/大鼠/人血浆中（10–1000 ng/mL）；37°C孵育1小时。
- 使用30 kDa截留分子量的离心装置离心（3000 rpm，30分钟）；通过LC-MS/MS测定游离/总药物浓度。
- 蛋白结合率：在所有物种和浓度下均>99% [4]

1. 小鼠急性毒性：
- 雄性/雌性 C57BL/6 小鼠（每性别每剂量组 n=3）接受 BMS-777607（口服，100–300 mg/kg）。
- 100/200 mg/kg 剂量组无死亡；300 mg/kg 剂量组出现短暂嗜睡（48 小时内恢复）；口服 LD50 >300 mg/kg [2]
2. 亚急性毒性（28 天，小鼠）：
- 剂量：25 mg/kg、50 mg/kg、75 mg/kg（口服，每日一次）。
- 25/50 mg/kg 组：体重、血清生化指标（ALT、AST、肌酐）或血液学指标（白细胞计数、血小板计数、血红蛋白）均无变化。
- 75 mg/kg 组：ALT 轻度升高（1.4 倍对照组）；肝肾组织病理学未见损伤 [2]
3. 心脏毒性：
- 接受 BMS-777607（30 mg/kg，口服）治疗的遥测犬未出现明显的 QT 间期延长或心律失常 [4]

[1]. J Med Chem . 2009 Mar 12;52(5):1251-4.

[2]. Mol Cancer Ther . 2010 Jun;9(6):1554-61.

[3]. Clin Exp Metastasis . 2012 Mar;29(3):253-61.

[4]. J Med Chem . 2008 Sep 11;51(17):5330-41.

N-[4-[(2-氨基-3-氯-4-吡啶基)氧基]-3-氟苯基]-4-乙氧基-1-(4-氟苯基)-2-氧代-3-吡啶甲酰胺是一种芳香酰胺。
BMS-777607 已在恶性实体瘤的基础科学研究中得到应用。
MET 酪氨酸激酶抑制剂 BMS-777607 是一种具有潜在抗肿瘤活性的 MET 酪氨酸激酶抑制剂。MET 酪氨酸激酶抑制剂 BMS-777607 与 c-Met 蛋白或肝细胞生长因子受体 (HGFR) 结合，阻止肝细胞生长因子 (HGF) 的结合，从而破坏 MET 信号通路；该药物可能诱导表达 c-Met 的肿瘤细胞死亡。 c-Met 是一种受体酪氨酸激酶，在多种肿瘤细胞类型中过度表达或发生突变，在肿瘤细胞增殖、存活、侵袭和转移以及肿瘤血管生成中发挥重要作用。

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1. 治疗背景：BMS-777607 是一种强效、选择性的 ATP 竞争性 MET 酪氨酸激酶抑制剂，已开发用于治疗 MET 驱动的实体瘤（胃癌、非小细胞肺癌和转移性疾病）[4]
2. 作用机制：它与 MET 的 ATP 结合口袋竞争性结合，抑制 MET 的自身磷酸化和下游信号传导（PI3K-AKT、RAS-ERK1/2、JAK-STAT3）。该药物可抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和转移，同时诱导细胞凋亡[2]
3. 临床意义：该药物已进入MET扩增晚期实体瘤的I期临床试验，显示出可控的毒性（轻度疲劳、恶心），但由于疗效不如新型MET抑制剂（例如卡马替尼）而终止[3]
4. 研究意义：该药物为MET作为转移性癌症的靶点提供了重要的临床前证据，验证了MET抑制在阻断肿瘤扩散中的作用[3]

C25H19CLF2N4O4

512.89

512.106

C, 58.54; H, 3.73; Cl, 6.91; F, 7.41; N, 10.92; O, 12.48

1025720-94-8

1025720-94-8; 1196681-44-3 (deleted);

24794418

White solid powder

1.5±0.1 g/cm3

667.9±55.0 °C at 760 mmHg

357.7±31.5 °C

0.0±2.0 mmHg at 25°C

1.672

4.86

112.69

2

8

7

36

867

0

ClC1C(N([H])[H])=NC([H])=C([H])C=1OC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1F)N([H])C(C1=C(C([H])=C([H])N(C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])F)C1=O)OC([H])([H])C([H])([H])[H])=O

VNBRGSXVFBYQNN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H19ClF2N4O4/c1-2-35-19-10-12-32(16-6-3-14(27)4-7-16)25(34)21(19)24(33)31-15-5-8-18(17(28)13-15)36-20-9-11-30-23(29)22(20)26/h3-13H,2H2,1H3,(H2,29,30)(H,31,33)

N-[4-(2-amino-3-chloropyridin-4-yl)oxy-3-fluorophenyl]-4-ethoxy-1-(4-fluorophenyl)-2-oxopyridine-3-carboxamide

ASLAN 002; BMS 817378; BMS 777607; ASLAN-002; ASLAN002; BMS-817378; BMS817378; BMS-777607; BMS777607; ASLAN-002; N-(4-(2-Amino-3-chloropyridin-4-yloxy)-3-fluorophenyl)-4-ethoxy-1-(4-fluorophenyl)-2-oxo-1,2-dihydropyridine-3-carboxamide; ASLAN002;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 4% DMSO+30% PEG 300+ddH2O: 5 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。