BMS-777607 (BMS-817378; ASLAN-002)

c-Met (IC50 = 3.9 nM); Axl (IC50 = 1.1 nM); Ron (IC50 = 1.8 nM); Tyro3 (IC50 = 4.3 nM)

体外活性：BMS-777607 是一种选择性 ATP 竞争性 Met 激酶抑制剂，可有效阻断 c-Met 的自磷酸化，在 GTL-16 细胞裂解物中 IC50 为 20 nM，并表现出对 Met 驱动的肿瘤细胞系增殖的选择性抑制，如GTL-16细胞系、H1993和U87。 BMS-777607 在 PC-3 和 DU145 前列腺癌细胞中抑制肝细胞生长因子 (HGF) 触发的 c-Met 自磷酸化，IC50 <1 nM。 BMS 777607 对肿瘤细胞生长影响不大，但对 PC-3 和 DU145 细胞中 HGF 诱导的细胞散射具有抑制作用，在 0.5 μM 时几乎完全抑制。 BMS 777607 还以剂量依赖性方式抑制两种细胞系中受刺激的细胞迁移和侵袭 (IC50 < 0.1 μM)。将 BMS 777607 (~10 μM) 应用于高度转移的鼠 KHT 细胞 2 小时，可有效消除自磷酸化 c-Met 的基础水平，IC50 为 10 nM，而不影响总 c-Met，从而对自磷酸化 c-Met 产生剂量依赖性抑制。下游信号分子包括 ERK、Akt、p70S6K 和 S6。用 BMS-777607 (~1 μM) 处理 24 小时，在纳摩尔范围内的剂量下可有效抑制 KHT 细胞的分散、运动和侵袭，这与 MET 基因敲低有关，并适度影响细胞增殖和集落形成。激酶测定：激酶反应由杆状病毒表达的 GST-Met、3 μg 聚 (Glu/Tyr)、0.12 μCi 33P γ-ATP、1 μM ATP 溶于 30 μL 激酶缓冲液（20 mM Tris-Cl、5 mM MnCl2）组成，0.1 mg/mL BSA，0.5 mM DTT）。反应在 30°C 下孵育 1 小时，并通过添加冷三氯乙酸 (TCA) 至终浓度 8% 来终止反应。使用 Filtermate 通用收集器将 TCA 沉淀物收集到 GF/C 单过滤板上，并使用 TopCount 96 孔液体闪烁计数器对过滤器进行定量。生成剂量响应曲线以确定抑制 50% 底物磷酸化所需的浓度 (IC50)。 BMS 777607 以 10 mM 的浓度溶解在二甲基亚砜 (DMSO) 中，并在 10 个浓度下进行评估，一式两份。细胞测定：将KHT细胞暴露于BMS 777607系列稀释液中96小时，然后分别使用MTT测定和台盼蓝排除法测定细胞增殖和细胞死亡。 KHT 细胞集落与 BMS 777607 一起孵育 24 小时，然后用结晶紫 (0.1%) 染色并拍照以评估细胞散射。使用灭菌的 1 ml 移液器吸头在汇合的 KHT 细胞单层上划出 2 mm 划痕，然后用 BMS-777607 处理 24 小时，然后在 4 个随机视野中计数迁移到裸露区域的细胞数量以进行评估细胞迁移。为了检查细胞侵袭，将预先装载有基质胶的商业 Transwell 插入物（8 μm 孔膜）与无血清培养基在存在或不存在 BMS 777607 的情况下在 37 °C 下孵育 2 小时，以使基质胶再水化。然后将悬浮在无血清培养基中的细胞加载到顶室（5×103/插入物）上，并在下室中使用完全培养基（含有10％FBS）作为化学引诱剂。孵育24小时后，除去基质胶并用结晶紫对插入物进行染色。对过滤器底部的入侵细胞进行拍照和计数。

口服 BMS 777607 (6.25-50 mg/kg) 可显着减少无胸腺小鼠中 GTL-16 人类肿瘤异种移植物的肿瘤体积，且未观察到毒性。注射 BMS 777607（25 mg/kg/天）可减少 KHT 肺肿瘤结节的数量 (28.3%)，改善形态学出血，并显着损害注射的 6-8 周龄雌性 C3H/HeJ 小鼠的转移表型与对照治疗相比，啮齿动物纤维肉瘤 KHT 细胞没有明显的全身毒性。与载体对照相比，低剂量的 BMS 777607 (10 mg/kg) 也对肺结节形成有轻微但不显着的抑制作用。

激酶反应包含 30 μL 激酶缓冲液（20 mM Tris-Cl、5 mM MnCl2、0.1 mg/mL BSA、0.5 mM DTT）、3 μg 聚（Glu/Tyr）、0.12 μCi ³³P γ-ATP 和杆状病毒表达的 1 μM ATP。添加冷三氯乙酸 (TCA)，终浓度为 8%，30 °C 孵育 1 小时后结束反应。 Filtermate 通用收集器用于将 TCA 沉淀收集到 GF/C unifilter 板上，并使用 TopCount 96 孔液体闪烁计数器对过滤器进行定量。为了找到阻止 50% 底物磷酸化所需的浓度，创建了剂量响应曲线 (IC50)。将 BMS 777607 以 10 mM 的浓度溶解在二甲基亚砜 (DMSO) 中，并在十种浓度下进行评估，一式两份。

MTT 测定和台盼蓝排除法用于测定 KHT 细胞经 BMS 777607 连续稀释 96 小时后的增殖和死亡。将 BMS 777607 添加到 KHT 细胞集落中，孵育 24 小时后，将集落用结晶紫 (0.1%) 染色并用相机捕获以测量细胞的散射。使用无菌 1 毫升移液器尖端在汇合的 KHT 细胞单层上制作 2 毫米切口。然后用 BMS-777607 处理单层细胞一整天。为了评估细胞迁移，随机计算四个相邻视野中移动到裸露区域的细胞数量。无论是否存在 BMS 777607，预装载有 Matrigel 的商业 Transwell 插入物（8 μm 孔膜）与无血清培养基在 37 °C 下孵育两小时，以使 Matrigel 重新水合。这允许检查细胞侵袭。随后，将悬浮在无血清培养基中的细胞插入上室（5 × 10³/插入），而下室则用作含有 10% FBS 的完全培养基的化学引诱剂。 24 小时孵育期后，取下基质胶并用结晶紫对插入物进行染色。对过滤器底部的侵入细胞进行计数并拍照。

Male Balb/C mice are used to study the pharmacokinetics of BMS 777607. After an overnight fast, two groups of animals (N = 6 per group; 20–25 g) receive BMS 777607 either by gavage (10 mg/kg) or as an intravenous (IV) bolus dose (5 mg/kg) through the tail vein. Six hours after the dose, the mice are fed. Retro-orbital bleeding is used to collect blood samples (about 0.2 mL) at 0.05 (or 0.25 for oral), 0.5, 1, 3, 6, 8, and 24 hours after the dose. A composite pharmacokinetic profile is produced by blenching half of the animals in each group at 0.05 (or 0.25 for oral), 1, 6, and 24 hours, and the other half at 0.5, 3, and 8 hours (3 mice per time point). Serum is obtained by allowing blood samples to coagulate and centrifuging them at 4°C (1500–2000 ×g). Before being analyzed by LC/MS/MS, serum samples are kept at about 20°C.

[1]. J Med Chem . 2009 Mar 12;52(5):1251-4.

[2]. Mol Cancer Ther . 2010 Jun;9(6):1554-61.

[3]. Clin Exp Metastasis . 2012 Mar;29(3):253-61.

[4]. J Med Chem . 2008 Sep 11;51(17):5330-41.

C25H19CLF2N4O4

512.89

512.11

C, 58.54; H, 3.73; Cl, 6.91; F, 7.41; N, 10.92; O, 12.48

1025720-94-8

1025720-94-8; 1196681-44-3 (deleted);

white solid powder

CCOC1=C(C(=O)N(C=C1)C2=CC=C(C=C2)F)C(=O)NC3=CC(=C(C=C3)OC4=C(C(=NC=C4)N)Cl)F

VNBRGSXVFBYQNN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H19ClF2N4O4/c1-2-35-19-10-12-32(16-6-3-14(27)4-7-16)25(34)21(19)24(33)31-15-5-8-18(17(28)13-15)36-20-9-11-30-23(29)22(20)26/h3-13H,2H2,1H3,(H2,29,30)(H,31,33)

N-[4-(2-amino-3-chloropyridin-4-yl)oxy-3-fluorophenyl]-4-ethoxy-1-(4-fluorophenyl)-2-oxopyridine-3-carboxamide

ASLAN 002; BMS 817378; BMS 777607; ASLAN-002; ASLAN002; BMS-817378; BMS817378; BMS-777607; BMS777607

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Solubility in Formulation 1: ≥ 2.5 mg/mL (4.87 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 400 μL PEG300 and mix evenly; then add 50 μL Tween-80 to the above solution and mix evenly; then add 450 μL normal saline to adjust the volume to 1 mL.
Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH₂ O to obtain a clear solution.

---

Solubility in Formulation 2: ≥ 2.5 mg/mL (4.87 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of 20% SBE-β-CD physiological saline solution and mix evenly.
Preparation of 20% SBE-β-CD in Saline (4°C，1 week): Dissolve 2 g SBE-β-CD in 10 mL saline to obtain a clear solution.

---

View More

Solubility in Formulation 3: ≥ 2.5 mg/mL (4.87 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of corn oil and mix evenly.

---

Solubility in Formulation 4: 4% DMSO+30% PEG 300+ddH2O: 5 mg/mL

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。