BMS-986142

BTK (IC50 = 0.5 nM); TEC (IC50 = 10 nM); ITK (IC50 = 15 nM); BLK (IC50 = 23 nM); TXK (IC50 = 28 nM); BMX (IC50 = 32 nM); LCK (IC50 = 71 nM); SRC (IC50 = 1100 nM)
BMS-986142 potently inhibits human recombinant BTK with an IC50 of 0.5 nM in enzymatic assays. BMS-986142 exhibits high selectivity against a panel of 384 kinases; only five other kinases (Tec, ITK, BLK, Txk, and BMX) are inhibited with selectivity for BTK that is less than 100 times. Out of these kinases, only Tec (IC50=10 nM) is inhibited with a selectivity that is less than thirty times when compared to BTK. These four kinases are members of the Tec family of kinases. BMS-986142 does not prevent peripheral blood B cells from expressing CD86 or CD69 when stimulated by CD40L (IC50>10,000 nM for both). With an IC50 of 9 nM, BMS-986142 inhibits BTK-dependent calcium flux in response to anti-IgM treatment of Ramos B cells, activating BCR[2].

BMS-986142 有效抑制人重组 BTK，在酶测定中 IC50 为 0.5 nM。 BMS-986142 对一组 384 种激酶表现出高选择性；只有五种其他激酶（Tec、ITK、BLK、Txk 和 BMX）受到抑制，且对 BTK 的选择性小于 100 倍。在这些激酶中，只有 Tec (IC50=10 nM) 受到抑制，其选择性低于 BTK 的 30 倍。这四种激酶是 Tec 激酶家族的成员。当受到 CD40L 刺激时，BMS-986142 不会阻止外周血 B 细胞表达 CD86 或 CD69（两者的 IC50>10,000 nM）。 BMS-986142 的 IC50 为 9 nM，可响应 Ramos B 细胞的抗 IgM 治疗而抑制 BTK 依赖性钙流，从而激活 BCR[2]。

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BMS-986142 在酶学实验中有效抑制人重组BTK，IC50为0.5 nM，并且对包含384种激酶的面板显示出高选择性，主要抑制其他Tec家族激酶。[2]
在原代人B细胞中，通过B细胞受体（BCR）刺激后，BMS-986142 抑制了Ramos B细胞中BCR刺激的钙流（IC50 = 9 nM）、扁桃体B细胞的增殖（IC50 = 3 nM）、外周血B细胞（IC50 = 4 nM）和记忆B细胞（IC50 = 3 nM）上CD86的表达，以及扁桃体B细胞产生TNF-α（IC50 = 3 nM）和IL-6（IC50 = 5 nM）。它不抑制CD40L诱导的CD86表达（IC50 >10,000 nM）。[2]
在Ramos B细胞中，BMS-986142 抑制了抗IgM刺激的磷脂酶C-γ2磷酸化（IC50 ≈20 nM）和BTK在Y551位点的自身磷酸化。[2]
在人外周血单个核细胞（PBMCs）中，BMS-986142 抑制了免疫复合物（IC）刺激的、FcγR依赖的TNF-α（IC50 = 3 nM）和IL-6（IC50 = 4 nM）的产生，但不抑制LPS（TLR4）刺激的TNF-α产生（IC50 >30,000 nM）。[2]
在全血实验中，BMS-986142 抑制了BCR刺激的B细胞上CD69表达（IC50 = 90 nM）和FcεRI刺激的嗜碱性粒细胞上CD63表达（IC50 = 89 nM）。[2]
BMS-986142 剂量依赖性地抑制了RANK配体（RANK-L）诱导的人单核细胞前体细胞的破骨细胞生成，在浓度低至15 nM时即可观察到抑制作用。[2]

在研究结束时，4、10 和 30 mg/kg 的 BMS-986142 导致临床明显疾病分别减少 26%、43% 和 79%，呈剂量依赖性。有趣的是，当与 MTX 一起给药时，4 mg/kg BMS-986142 在临床评分方面提供了额外的益处（54% 抑制），而单独使用 MTX 的抑制率为 19%。与单独使用任一药物分别为 24% 和 10% 相比，BMS-986142 4 mg/kg 与 MTX 联合给药可使炎症和骨吸收减少 53%。此外，10 和 30 mg/kg BMS-986142 显着抑制血清抗 II 型胶原蛋白 IgG 滴度。如果直到第 21 天才施用 BMS-986142（胶原蛋白加强剂），临床评分也会出现剂量依赖性下降。试验结束时，BMS-986142 2、4 和 25 mg/kg 剂量分别使临床评分降低 17%、37% 和 67%[2]。

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在小鼠初次抗钥孔戚血蓝蛋白（KLH）抗体反应模型中，预防性口服给予 BMS-986142 （3, 10, 30 mg/kg，每日一次）剂量依赖性地抑制了抗KLH IgM（第7天）和IgG（第14天）抗体滴度，在10和30 mg/kg剂量下观察到显著降低。[2]
在胶原抗体诱导性关节炎（CAIA）小鼠模型中，预防性口服给予 BMS-986142 （5, 20 mg/kg，每日一次）降低了临床关节炎评分（分别抑制72%和>90%）以及炎症和骨吸收的组织学评分。[2]
在胶原诱导性关节炎（CIA）小鼠模型中，预防性口服给予 BMS-986142 （4, 10, 30 mg/kg，每日一次）剂量依赖性地降低了临床评分（抑制率分别为26%、43%、79%）、关节组织学损伤、血清抗II型胶原IgG滴度以及疾病相关的脾浆细胞增加。[2]
在CIA模型中，次优剂量的 BMS-986142 （4 mg/kg，每日一次）与甲氨蝶呤（MTX, 0.25 mg/kg，每日一次）联合给药，比单药治疗产生了对临床评分和组织学更大的抑制。[2]
在CIA模型中，从疾病发作开始进行治疗性口服给药 BMS-986142 （2, 4, 25 mg/kg，每日一次）剂量依赖性地降低了临床评分（抑制率分别为17%、37%、67%）并防止了骨丢失。[2]
在治疗性CIA模型中，低剂量 BMS-986142 （2 或 4 mg/kg，每日一次）与依那西普（15 mg/kg，每周两次，腹腔注射）联合给药，比任一单药治疗产生了显著更强的疗效，改善了临床评分、骨矿物密度和骨表面积。[2]
在预防性CIA模型中，BMS-986142 （10 mg/kg，每日一次）与鼠源CTLA-4-Ig（0.05 或 0.2 mg/kg，每周两次，腹腔注射）联合给药，在降低临床评分和组织学损伤方面比单药治疗产生了叠加益处。[2]

测试化合物、荧光素肽 (1.5 μM)、ATP (20 μM)、人重组 BTK (1 nM) 和测定缓冲液（20 mM HEPES，pH 7.4、10 mM MgCl2、0.015% Brij 35 表面活性剂和 4 mM DTT，溶于将1.6％DMSO加入到V形底384孔板中，最终体积为30μL。室温孵育 60 分钟后，向每个样品中添加 45 μL 35 mM EDTA 以终止反应。通过电泳分离荧光底物和磷酸化产物以分析反应混合物。通过将抑制数据与无抑制剂的对照（0%抑制）和无酶的对照（100%抑制）进行比较，计算抑制水平。通过创建剂量反应曲线找到抑制 50% BTK 活性所需的浓度 (IC50)。将化合物溶解在 DMSO 中，浓度为 10 mM，并在 11 个浓度下进行评估。

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对于主要激酶实验，将人重组BTK与荧光肽底物、ATP和 BMS-986142 在测定缓冲液中于室温下孵育。使用微流控迁移率变动分析系统对产物转化进行定量。对其他激酶（Tec, ITK, BLK, Txk, BMX）使用了类似的实验，ATP浓度设定为每种激酶的表观Km。[2]
使用竞争结合实验检测了高浓度（1000 nM）的 BMS-986142 与包含384种蛋白和脂质激酶的广泛面板的相互作用。此外，使用酶学实验评估了其在200 nM浓度下与包含337种激酶的面板的相互作用，其中测量了³²P-ATP掺入肽或蛋白底物的量。[2]

Ramos B 细胞响应 B 细胞受体 (BCR) 的刺激而磷酸化磷脂酶 C (PLC)-γ2：将 Ramos B 细胞在含有 10% 胎牛血清 (FBS) 的培养基中于 37°C 预孵育一小时后使用不同浓度的 BMS-986142，使用 50 μg/mL 的 AffiniPure F(ab')2 片段山羊抗人免疫球蛋白 (Ig)M 在 37°C 下精确刺激细胞两分钟。然后加入冰冷的磷酸盐缓冲盐水来淬灭细胞。细胞裂解沉淀后，用兔抗人磷酸化Y759-PLCγ2进行免疫印迹测定PLCγ2的水平，并使用Odyssey红外成像系统分析结果。为了保证均匀加载，肌动蛋白控制被标准化。

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对于刺激人外周血B细胞表达CD86和CD69，将PBMCs的E阴性组分在 BMS-986142 存在下，用抗人IgG+IgM F(ab')2片段刺激18小时。用抗CD20和抗CD86或CD69的抗体对细胞进行染色，在圈选CD20+ B细胞后，使用流式细胞术通过中位荧光强度（MFI）定量表达水平。对CD40或TLR4刺激使用了类似的实验设置。[2]
对于全血实验中BCR刺激的B细胞CD69表达，将人全血与 BMS-986142 孵育，并用抗人IgM F(ab')2片段和IL-4刺激18小时。对细胞进行CD20和CD69染色，裂解，固定，并通过流式细胞术分析。[2]
对于BCR刺激的人扁桃体B细胞产生IL-6和TNF-α，分离的细胞先用 BMS-986142 预孵育，然后用抗人IgM F(ab')2片段和IL-4刺激。4.5小时后收集上清液，通过酶免疫分析法测量细胞因子水平。[2]
对于BCR刺激的人扁桃体B细胞增殖，将细胞与 BMS-986142 一起培养，并用抗人IgG+IgM F(ab')2片段刺激72小时，随后通过液体闪烁计数法测量[³H]-胸腺嘧啶核苷掺入量。[2]
对于Ramos B细胞中BCR刺激的钙流，将负载染料的细胞铺板，用 BMS-986142 处理，并用抗人IgM刺激。使用荧光成像板读数仪测量钙流。[2]
对于Ramos B细胞中BCR刺激的PLCγ2磷酸化，先用 BMS-986142 预孵育的细胞用抗人IgM F(ab')2片段精确刺激2分钟，然后裂解。通过免疫印迹法测量磷酸化PLCγ2水平。[2]
对于Ramos B细胞中BCR刺激的BTK磷酸化，类似处理的细胞被刺激、固定，用Alexa647标记的抗磷酸化BTK（Y551）抗体染色，并通过流式细胞术分析。[2]
对于PBMCs中IC刺激的TNF-α和IL-6产生，用 BMS-986142 处理的细胞被预先形成的IgG免疫复合物刺激7小时。通过ELISA测量上清液中的细胞因子水平。[2]
对于RANK-L诱导的破骨细胞生成，将人单核细胞前体细胞与巨噬细胞集落刺激因子、RANK-L和 BMS-986142 一起培养9天。然后固定细胞，对抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）进行染色，并计数TRAP阳性多核细胞的数量。[2]

Mice: In male DBA/1 mice, 200 μg of admixed bovine type II collagen is injected subcutaneously at the base of the tail. Similar stimulation is given to the mice 21 days later. BMS-986142 in EtOH: TPGS: PEG300 (5:5:90) is used to initiate PO QD dosing for preventative administration right away; however, for therapeutic administration, dosing is postponed until day 21 of the booster immunization. In mice used for BMS-986142 plus MTX preventative studies, the doses are as follows: vehicle; 4, 10, or 30 mg/kg of BMS-986142; 4 mg/kg of BMS-986142 plus MTX 0.25 mg/kg; or MTX at 0.25 mg/kg per day. Mice are given vehicle daily, BMS-986142 at 2, 4, or 25 mg/kg daily, BMS-986142 at 2 or 4 mg/kg daily plus etanercept at 15 mg/kg IP twice weekly (BIW), or etanercept at 15 mg/kg IP BIW for therapeutic studies involving BMS-986142 plus etanercept. Mice are given vehicle daily, BMS-986142 at 10 or 30 mg/kg daily, murine CTLA-4-Ig at 0.05 or 0.2 mg/kg IP BIW, or BMS-986142 at 10 mg/kg daily plus murine CTLA-4-Ig at 0.05 or 0.2 mg/kg IP BIW for the preventative studies involving BMS-986142 plus murine cytotoxic T lymphocyte-associated protein 4 immunoglobulin (CTLA-4-Ig). Dosing is done starting on day 0 and continuing for the full 36-day study [2].

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For the primary anti-KLH antibody response study, female BALB/c mice were immunized intraperitoneally (IP) with KLH on day 0. Mice were dosed once daily (QD) by oral gavage (PO) with BMS-986142 (3, 10, 30 mg/kg) formulated in PEG 400:water (80:20 v/v). Blood was collected on days 7 and 14 for anti-KLH antibody titer analysis by ELISA.[2]
For the collagen antibody-induced arthritis (CAIA) model, a mixture of anti-collagen II monoclonal antibodies was administered IP to female BALB/c mice. Oral QD dosing with BMS-986142 (3, 10, 30 mg/kg) formulated in ethanol:tocopherol PEG 1000 succinate:PEG300 (5:5:90) began immediately. Three days later, LPS was injected IP to boost arthritis. Mice were monitored daily for paw inflammation.[2]
For the collagen-induced arthritis (CIA) model, male DBA/1 mice were immunized subcutaneously with bovine type II collagen emulsified in adjuvant on day 0 and boosted on day 21. For preventative studies, oral QD dosing with BMS-986142 formulated in ethanol:TPGS:PEG300 (5:5:90) began on day 0. For therapeutic studies, dosing began on day 21 (booster). Doses varied by experiment (e.g., 4, 10, 30 mg/kg for monotherapy; 2, 4, 25 mg/kg for combination with etanercept). Mice were monitored for paw inflammation several times per week after boosting. Blood was collected at the end for drug level and anti-collagen II antibody measurement. Spleens were processed for flow cytometry. Hind paws were analyzed by micro-CT and histology.[2]
In combination studies within the CIA model, BMS-986142 was administered orally QD. Co-administered agents included: methotrexate (MTX, 0.25 mg/kg, daily PO), etanercept (15 mg/kg, twice weekly IP), or murine CTLA-4-Ig (0.05 or 0.2 mg/kg, twice weekly IP).[2]

In the KLH study, plasma drug levels of BMS-986142 were measured on day 14. At doses of 3, 10, and 30 mg/kg PO QD, drug levels were maintained above the mouse whole blood BCR-stimulated CD69 IC50 (140 nM) for less than 11, 14, and 17 hours per day, respectively. Levels at 24 hours for the 3 mg/kg dose were below the limit of detection.[2]
In the CAIA model, a dose of 5 mg/kg PO QD provided approximately 16 hours of daily coverage above the mouse whole blood BCR CD69 IC50, while 20 mg/kg provided near-complete (24-hour) coverage.[2]
In the preventative CIA model, doses of 4, 10, and 30 mg/kg PO QD provided 9, 14, and 21 hours of daily coverage above the mouse whole blood BCR CD69 IC50, respectively.[2]
In the therapeutic CIA model, doses of 2, 4, and 25 mg/kg PO QD provided less than 10, 11, and 22 hours of daily coverage above the mouse whole blood BCR CD69 IC50, respectively.[2]

[1]. Discovery of 6-Fluoro-5-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-methyl-2,4-dioxo-1,2-dihydroquinazolin-3(4H)-yl)-2-methylphenyl)-2-(S)-(2-hydroxypropan-2-yl)-2,3,4,9-tetrahydro-1H-carbazole-8-carboxamide (BMS-986142): A Reversible Inhibitor of Bruton'

[2]. Bruton'styrosine kinase inhibitor BMS-986142 in experimental models of rheumatoid arthritis enhances efficacy of agents representing clinical standard-of-care. PLoS One. 2017; 12(7): e0181782.

BMS-986142 is under investigation in clinical trial NCT02880670 (Pharmacokinetics and Metabolism Study of Radiolabeled BMS-986142 in Healthy Male Subjects).

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BMS-986142 is a novel, oral, reversible, small-molecule inhibitor of Bruton's tyrosine kinase (BTK). BTK is a key intracellular enzyme expressed in B cells and myeloid cells, regulating critical pathways in rheumatoid arthritis (RA) pathobiology, including B-cell receptor (BCR) signaling, Fcγ receptor (FcγR)-dependent cytokine production, and RANK ligand (RANK-L)-induced osteoclastogenesis.[2]
The drug demonstrated efficacy in murine models of RA (CIA and CAIA) both as monotherapy and in combination with standard-of-care agents (methotrexate, etanercept, CTLA-4-Ig), suggesting its potential for clinical investigation in RA.[2]
Efficacy in these models was observed without requiring continuous, complete inhibition of BTK, as drug levels providing only partial daily coverage of the target IC50 were effective.[2]
The reversible nature of BMS-986142 may allow for precise titration and potentially mitigate risks associated with prolonged immunosuppression, especially in combination therapies.[2]
The safety and efficacy of BMS-986142 were being evaluated in clinical trials for rheumatoid arthritis and primary Sjögren's syndrome at the time of publication.[2]

C32H30F2N4O4

572.61

572.223

C, 67.12; H, 5.28; F, 6.64; N, 9.78; O, 11.18

1643368-58-4

86582336

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

746.5±70.0 °C at 760 mmHg

405.3±35.7 °C

0.0±2.6 mmHg at 25°C

1.667

4.51

120

3

6

4

42

1090

1

FC1C=C(C(N)=O)C2=C(C=1C1C=CC=C(C=1C)N1C(N(C)C3C(=CC=CC=3C1=O)F)=O)C1=C(C[C@@H](C(C)(C)O)CC1)N2

ZRYMMWAJAFUANM-INIZCTEOSA-N

InChI=1S/C32H30F2N4O4/c1-15-17(7-6-10-24(15)38-30(40)19-8-5-9-21(33)28(19)37(4)31(38)41)25-22(34)14-20(29(35)39)27-26(25)18-12-11-16(32(2,3)42)13-23(18)36-27/h5-10,14,16,36,42H,11-13H2,1-4H3,(H2,35,39)/t16-/m0/s1

(7S)-3-fluoro-4-[3-(8-fluoro-1-methyl-2,4-dioxoquinazolin-3-yl)-2-methylphenyl]-7-(2-hydroxypropan-2-yl)-6,7,8,9-tetrahydro-5H-carbazole-1-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.63 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.63 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.63 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。