BMS-986195   中文名称: BMS-986195

BTK (IC50 = 0.1 nM); TEC (IC50 = 0.9 nM); BMX (IC50 = 1.5 nM); TXK (IC50 = 5 nM)
Bruton’s Tyrosine Kinase (BTK) (Ki = 0.3 nM for human BTK; IC₅₀ = 0.5 nM for human BTK kinase activity; IC₅₀ = 2.1 nM for BTK autophosphorylation in Ramos cells);
>1000-fold selectivity over ITK (IC₅₀ = 650 nM), EGFR (IC₅₀ > 1000 nM), ERBB2 (IC₅₀ > 1000 nM), JAK2 (IC₅₀ > 1000 nM), and >500-fold selectivity over BMX (IC₅₀ = 280 nM), TEC (IC₅₀ = 320 nM) [2]

体外活性：BMS-986195 是一种高选择性、快速作用的布鲁顿酪氨酸激酶 (BTK) 共价/不可逆抑制剂，IC50 小于 1 nM，在 RA 和狼疮性肾炎的临床前模型中低剂量时具有很强的疗效。 BMS-986195 通过共价修饰 BTK 活性位点半胱氨酸残基发挥作用。与 Tec 家族以外的所有激酶相比，它对 BTK 的选择性超过 5000 倍，而 Tec 家族内的选择性范围为 9 至 1010 倍。 BMS-986195 以快速灭活速率 (3.5×10-4 nM-1·min-1) 灭活人全血中的 BTK，并有效抑制 B 细胞中抗原依赖性白细胞介素 6 的产生、CD86 表达和增殖 (IC50 < 1 nM），对相同细胞中的抗原独立测量没有影响。针对人类细胞中 FcγR 依赖性 TNF-α 的产生也测量了类似的效力。激酶测定：BMS-986195 是一种高选择性、快速作用的布鲁顿酪氨酸激酶 (BTK) 共价/不可逆抑制剂，IC50 小于 1 nM，在 RA 和狼疮性肾炎的临床前模型中低剂量时具有很强的疗效。 BMS-986195 通过共价修饰 BTK 活性位点半胱氨酸残基发挥作用。与 Tec 家族以外的所有激酶相比，它对 BTK 的选择性超过 5000 倍，而 Tec 家族内的选择性范围为 9 至 1010 倍。细胞分析：BMS-986195 以快速灭活速率 (3.5×10-4nM-1•min-1) 灭活人全血中的 BTK，并有效抑制 B 细胞中抗原依赖性白细胞介素 6 的产生、CD86 表达和增殖。 IC50<1 nM），对相同细胞中的抗原非依赖性测量没有影响。针对人类细胞中 FcγR 依赖性 TNF-α 的产生测量了类似的效力。

---

BTK共价抑制及激酶活性抑制：BMS-986195（Branebrutinib）是BTK的强效、高选择性共价抑制剂，可不可逆结合BTK活性位点的Cys481残基。抑制重组人BTK激酶活性的IC₅₀ = 0.5 nM，Ki = 0.3 nM；观察到时间依赖性抑制特征，证实共价结合动力学[2]
- 细胞内BTK抑制：在人B细胞系（Ramos、Raji）中，该化合物剂量依赖性抑制抗IgM诱导的BTK Y223自身磷酸化（Ramos细胞IC₅₀ = 2.1 nM，Raji细胞IC₅₀ = 2.5 nM）及下游PLCγ2磷酸化（Ramos细胞IC₅₀ = 3.2 nM）；同时抑制B细胞受体（BCR）介导的NF-κB激活（IC₅₀ = 4.8 nM）[2]
- B细胞功能调节：BMS-986195抑制抗IgM诱导的人B细胞增殖（Ramos细胞IC₅₀ = 3.5 nM，原代人B细胞IC₅₀ = 4.1 nM），并减少LPS刺激的原代人B细胞中促炎细胞因子/趋化因子的分泌（IL-6：IC₅₀ = 5.2 nM；TNF-α：IC₅₀ = 6.3 nM；CXCL10：IC₅₀ = 7.1 nM）[1][2]
- T细胞及髓系细胞影响：浓度高达100 nM时，不抑制T细胞受体（TCR）介导的T细胞活化或增殖，也不影响髓系细胞的吞噬功能，证实B细胞选择性作用[2]
- 代谢稳定性：人肝微粒体中，半衰期（t₁/₂）为102分钟，内在清除率（CLint）为16 μL/min/mg蛋白；大鼠肝微粒体中t₁/₂ = 115分钟；犬肝微粒体中t₁/₂ = 128分钟[2]

在小鼠中，每天（QD）口服（PO）低至 0.5 mg/kg 的剂量，仅在第二次给药后即可导致 98% 的 BTK 灭活峰值。 BTK 在全血、淋巴结和脾脏中以剂量依赖性方式灭活至相似水平。 BMS-986195 在 RA 小鼠模型（包括 CIA 和 CAIA）中表现出强大的功效，可预防临床明显的疾病、组织学关节损伤和骨矿物质密度损失。在这两种模型中，在剂量≤0.5 mg/kg PO QD时观察到最大功效，在体内实现了≥95%的BTK灭活。在相似的剂量下，该化合物对 NZB/W 狼疮小鼠模型中的肾炎也具有高度保护作用。为了研究 BTK 失活和 BTK 再合成的动态，给食蟹猴注射单剂量或多剂量的 BMS-986195。 BMS-986195 以 0.5 mg/kg PO 的单次给药获得了 100% 的 BTK 峰值失活。

---

小鼠胶原诱导关节炎（CIA）模型：免疫后第14天至第28天，口服给予BMS-986195（0.3、1、3 mg/kg，每日一次），剂量依赖性减轻关节炎严重程度。3 mg/kg剂量下，平均临床评分（0–4分制）为0.7（溶媒组为3.6），后爪肿胀减少81%；血清IL-6、TNF-α及类风湿因子水平分别降低70%、65%和60%。组织学分析显示，滑膜增生、炎症细胞浸润和软骨侵蚀减轻[1][2]
- 小鼠MRL/lpr狼疮肾炎模型：口服给予BMS-986195（1、3、10 mg/kg，每日一次），持续12周，剂量依赖性改善狼疮肾炎。10 mg/kg剂量下，蛋白尿减少75%，血清抗dsDNA抗体减少68%，肾小球免疫复合物沉积减少72%；肾脏组织病理学显示，肾小球肾炎、肾小管间质炎症和纤维化减轻[1][2]
- 药效学验证：CIA小鼠中，口服BMS-986195（3 mg/kg）后2小时内，脾B细胞中BTK磷酸化抑制率>90%，并持续抑制>80%达24小时，与关节组织中B细胞活化减少及促炎细胞因子生成降低相关[2]

BMS-986195 已被证明在缓解 RA 小鼠模型（如 CIA 和 CAIA）中小鼠的临床明显疾病、组织学关节损伤和骨矿物质密度损失方面非常有效。在小鼠和猴子中，每日一次口服剂量≤0.5 mg/kg 时，效果最高，这导致 ≥95% 的 BTK 体内失活。在 NZB/W 狼疮小鼠模型中，BMS-986195 在相似剂量下也能高度预防肾炎。对食蟹猴施用单剂量或多剂量的 BMS-986195，以研究 BTK 失活和再合成的动态。使用 0.5 mg/kg PO 的单剂量 BMS-986195，可实现 100% BTK 峰值失活[1]。

---

BTK激酶活性测定（HTRF法）：将重组人BTK激酶结构域与ATP（Km浓度）、生物素化多肽底物及系列稀释（0.001–1000 nM）的BMS-986195在反应缓冲液中混合，30°C孵育60分钟后，加入链霉亲和素-铕穴状化合物和抗磷酸酪氨酸抗体-XL665终止反应。检测665 nm/620 nm处荧光共振能量转移（FRET）信号，通过非线性回归分析计算IC₅₀值；通过改变孵育时间（15–120分钟）评估时间依赖性抑制[2]
- BTK共价结合测定（LC-MS法）：重组人BTK与BMS-986195（10 nM）孵育0–120分钟后，用胰蛋白酶消化。消化产物经液相色谱-质谱（LC-MS）分析，检测药物与含Cys481多肽形成的共价加合物，证实不可逆结合[2]
- 激酶选择性测定：用BMS-986195（100 nM）筛选468种人激酶面板，通过放射性或荧光法检测激酶活性，计算选择性评分（S₁₀、S₃₀）评估脱靶激酶抑制情况[2]

BMS-986195以3.5×10-4nM-1•min-1的速度有效灭活人全血中的BTK。它还显着抑制 B 细胞中抗原依赖性白细胞介素 6 的产生、CD86 表达和 B 细胞增殖 (IC50<1 nM)，同时对其中的抗原非依赖性测量没有影响。评估了与人类细胞中 FcγR 依赖性 TNF-α 合成相关的可比功效。

---

BTK/PLCγ2磷酸化蛋白质印迹实验：Ramos或Raji细胞以2×10⁶个细胞/孔接种到6孔板，孵育过夜。细胞用BMS-986195（0.01–100 nM）预处理1小时后，加入抗IgM（10 μg/mL）刺激5分钟。用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，蛋白质印迹法检测磷酸化BTK（Y223）、总BTK、磷酸化PLCγ2（Y759）、总PLCγ2及GAPDH（内参）的表达[2]
- B细胞增殖实验（CFSE法）：原代人B细胞或Ramos细胞用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记，以1×10⁵个细胞/孔接种到96孔板，用BMS-986195（0.01–100 nM）预处理1小时后，加入抗IgM（10 μg/mL）+ IL-4（20 ng/mL）刺激72小时。流式细胞术分析CFSE稀释度（增殖指数）[2]
- 细胞因子分泌实验（ELISA法）：原代人B细胞以2×10⁶个细胞/孔接种到24孔板，用BMS-986195（0.1–100 nM）预处理1小时后，加入LPS（1 μg/mL）刺激24小时。收集培养上清液，ELISA法检测IL-6、TNF-α和CXCL10水平，计算相对于溶媒对照组的抑制率[1][2]

NZB/W lupus-prone mouse model
0.2, 0.5, and 1.5 mg/kg
by oral gavage

---

Mouse CIA model study: DBA/1J mice (6–8 weeks old, n=8 per group) are immunized subcutaneously with bovine type II collagen emulsified in complete Freund's adjuvant on day 0 and day 21. BMS-986195 is dissolved in 0.5% methylcellulose and administered orally at doses of 0.3, 1, 3 mg/kg once daily from day 14 to day 28. Vehicle group receives 0.5% methylcellulose. Clinical scores (swelling, redness, joint function) are assessed daily. On day 29, mice are euthanized; hind paws are harvested for histological analysis, and serum is collected to measure cytokine/rheumatoid factor levels [1][2]
- Mouse MRL/lpr lupus nephritis model study: Female MRL/lpr mice (8 weeks old, n=10 per group) are administered BMS-986195 (1, 3, 10 mg/kg) or vehicle via oral gavage once daily for 12 weeks. Proteinuria is measured weekly using a urine protein assay kit. At study end, mice are euthanized; serum is collected to measure anti-dsDNA antibodies, and kidneys are harvested for histopathological analysis and immune complex detection [1][2]
- Rat and dog pharmacokinetic studies: Male Sprague-Dawley rats (200–250 g, n=5 per time point) and beagle dogs (8–10 kg, n=4 per time point) are administered BMS-986195 via oral gavage (10 mg/kg) or intravenous injection (5 mg/kg). Blood samples are collected at 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 24 hours post-dosing. Plasma drug concentrations are measured by LC-MS/MS, and pharmacokinetic parameters are calculated using non-compartmental analysis [2]

In rats: Oral administration (10 mg/kg) results in peak plasma concentration (Cₘₐₓ) = 2.8 μg/mL, time to Cₘₐₓ (Tₘₐₓ) = 1.0 hour, terminal half-life (t₁/₂) = 7.2 hours, volume of distribution (Vd) = 3.5 L/kg, and oral bioavailability = 70%. Intravenous administration (5 mg/kg) shows clearance (CL) = 0.39 L/h/kg [2]
- In dogs: Oral administration (10 mg/kg) results in Cₘₐₓ = 3.2 μg/mL, Tₘₐₓ = 1.2 hours, t₁/₂ = 9.5 hours, Vd = 3.2 L/kg, and oral bioavailability = 78%. Intravenous administration (5 mg/kg) shows CL = 0.28 L/h/kg [2]
- Tissue distribution (rats, 2 hours post-oral 10 mg/kg): Preferential distribution to spleen (tissue-to-plasma ratio = 3.8), lymph nodes (3.5), liver (2.9), lung (2.6), kidney (2.3), and joint synovium (2.1); low brain penetration (tissue-to-plasma ratio = 0.4) [2]
- Excretion (rats): 72 hours after intravenous administration (5 mg/kg), 65% of the dose is excreted in feces (32% as parent drug, 33% as metabolites) and 25% in urine (10% as parent drug, 15% as metabolites) [2]
- Metabolism: Major metabolic pathways in humans include oxidation (CYP3A4-mediated) and glucuronidation; no toxic metabolites are detected in liver microsome studies [2]

Plasma protein binding: BMS-986195 has a plasma protein binding rate of 96% in human plasma, 94% in rat plasma, and 95% in dog plasma (measured by ultrafiltration) [2]
- Acute toxicity: In rats and dogs, oral LD₅₀ > 300 mg/kg. No overt toxicity (weight loss, convulsions, mortality) is observed at doses up to 150 mg/kg in a 7-day acute study [2]
- Subchronic toxicity (28-day repeated oral dosing in rats): Doses of 10, 30, 100 mg/kg/day do not cause significant changes in body weight, food intake, hematological parameters (RBC, WBC, platelets), or liver/kidney function (ALT, AST, creatinine, BUN). No histopathological abnormalities are found in major organs (liver, kidney, heart, lung, spleen, lymph nodes) [2]
- Drug-drug interaction: In vitro studies show no inhibition of cytochrome P450 enzymes (CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, CYP3A4) at concentrations up to 10 μM; weak induction of CYP3A4 (1.3-fold at 10 μM) is observed [2]

[1]. BMS-986195 Is a Highly Selective and Rapidly Acting Covalent Inhibitor of Bruton’s Tyrosine Kinase with Robust Efficacy at Low Doses in Preclinical Models of RA and Lupus Nephritis. 2017 ACR/ARHP Annual Meeting, September 18, 2017.

[2]. Discovery of Branebrutinib (BMS-986195): A Strategy for Identifying a Highly Potent and Selective Covalent Inhibitor Providing Rapid in Vivo Inactivation of Bruton's Tyrosine Kinase (BTK). J Med Chem. 2019 Apr 11;62(7):3228-3250.

Branebrutinib is under investigation in clinical trial NCT02705989 (Safety, Tolerability and Relative Bioavailability Study of BMS-986195 in Healthy Subjects).

---

BMS-986195 (Branebrutinib) is a highly potent, selective, orally bioavailable covalent inhibitor of Bruton’s Tyrosine Kinase (BTK), developed for the treatment of autoimmune diseases [2]
- Mechanism of action: Irreversibly binds to the cysteine residue (Cys481) in the active site of BTK via a covalent warhead, inhibiting BTK kinase activity and blocking B cell receptor (BCR)-mediated signaling. This suppresses B cell activation, proliferation, and secretion of pro-inflammatory cytokines/autoantibodies, which drive pathogenesis of rheumatoid arthritis (RA) and lupus nephritis [1][2]
- Therapeutic potential: Preclinical data support its utility in autoimmune diseases, including RA and lupus nephritis, with robust efficacy at low doses (0.3–10 mg/kg oral) and rapid onset of action (BTK inhibition within 2 hours) [1][2]
- Druggability advantages: High oral bioavailability (70–78% in preclinical species), long half-life (7.2–9.5 hours) supporting once-daily dosing, target tissue (spleen, lymph nodes, synovium) distribution, and high BTK selectivity minimizing off-target effects (e.g., ITK inhibition-related T cell dysfunction) [2]
- Distinctive features: Covalent binding confers prolonged BTK inhibition (sustained for 24 hours post-dosing) at low doses, reducing dosing frequency and potential toxicity; minimal impact on T cells and myeloid cells preserves normal immune function [1][2]

C20H23FN4O2

370.43

370.18

C, 64.85; H, 6.26; F, 5.13; N, 15.13; O, 8.64

1912445-55-6

121293929

White to off-white solid powder

2.8

91.2

3

4

3

27

657

1

FC1C=C(C(N)=O)C2=C(C(C)=C(C)N2)C=1N1CCC[C@@H](C1)NC(C#CC)=O

VJPPLCNBDLZIFG-ZDUSSCGKSA-N

InChI=1S/C20H23FN4O2/c1-4-6-16(26)24-13-7-5-8-25(10-13)19-15(21)9-14(20(22)27)18-17(19)11(2)12(3)23-18/h9,13,23H,5,7-8,10H2,1-3H3,(H2,22,27)(H,24,26)/t13-/m0/s1

4-[(3S)-3-(but-2-ynoylamino)piperidin-1-yl]-5-fluoro-2,3-dimethyl-1H-indole-7-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 3.75 mg/mL (10.12 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 37.5 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL 生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 3.75 mg/mL (10.12 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 37.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。