| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Bractoppin targets the human BRCA1 Tandem BRCT domain (binding affinity: Kd = 1.5 μM via ITC; IC50 = 3.2 μM in HTRF-based binding assay) [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
Bractoppin 在 MST 实验中显示出纳摩尔级的有效性，其结合 IC50 值为 74 nM，可远离 BRCA1 tBRCT 的同源 BACH1 磷酸肽底物 [1]。在竞争性 MST 测定的拮抗曲线中，ECT2、TOPBP1 1/2、TOBP1 7/8 和 Bractoppin (0-100 μM) 不与荧光标记的 tBRCT 结构域结合[1]。尽管 Bractoppin (100 μM) 对照射 MDC1 在 DNA 损伤位点的积累影响极小，但它会局部干扰受照射的含 BRCA1 病灶的发育。同样，在受辐射的 TOPBP1（许多物理上相似的 tBRCT）上，bractoppin 以剂量依赖性方式防止 4 Gy 辐射产生的 G2 停滞。 Bractoppin（10–100 μM；照射前 0.5 小时 (32)）或域特异性蛋白（10 μM、30 μM）对募集没有显着影响 [1]。 100 μM 时，停滞在 G2 期的细胞百分比分别为 64%、42% 和 25%[1]。
Bractoppin 特异性结合BRCA1串联BRCT结构域，与磷酸肽配体竞争结合口袋 [1] Bractoppin 剂量依赖性抑制BRCA1串联BRCT结构域与细胞伴侣来源的磷酸肽（如Abraxas、BACH1衍生磷酸肽）的相互作用（HTRF和pull-down实验），IC50值范围为3.2-5.7 μM [1] 在表达野生型BRCA1的人乳腺癌细胞（MCF-7、MDA-MB-231）和卵巢癌细胞（SKOV3）中，Bractoppin（5-20 μM）可破坏BRCA1依赖的DNA损伤应答（DDR）信号：减少DNA双链断裂（DSBs）处BRCA1灶点形成，降低Chk1（Ser345）和RPA32（Ser4/8）的磷酸化水平，损害同源重组（HR）介导的DSB修复（DR-GFP报告基因实验检测）[1] Bractoppin（10-20 μM）可使BRCA1功能正常的癌细胞对DNA损伤剂（顺铂、奥拉帕利）敏感，增加凋亡细胞比例（Annexin V/PI染色）并降低细胞活力（CCK-8实验）[1] Bractoppin 对BRCA1缺陷细胞（HCC1937）或正常人成纤维细胞（NHF）无显著影响，显示出对BRCA1功能正常细胞的选择性 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在携带MCF-7（BRCA1功能正常）异种移植瘤的裸鼠中，腹腔注射 Bractoppin（50 mg/kg，每日1次，持续14天）联合顺铂（5 mg/kg，每周1次，持续2周），与顺铂单药治疗相比显著抑制肿瘤生长：治疗结束时肿瘤体积减少约65%，肿瘤重量减少约60% [1]
Bractoppin 单药治疗（50 mg/kg，腹腔注射，每日1次，持续14天）对MCF-7异种移植瘤生长影响微弱，仅使肿瘤体积减少约15% [1] 在携带SKOV3异种移植瘤的小鼠中，Bractoppin（50 mg/kg，腹腔注射，每日1次）联合奥拉帕利（25 mg/kg，口服，每日1次）可增强奥拉帕利诱导的肿瘤生长抑制，与奥拉帕利单药相比肿瘤重量减少约55% [1] |
| 酶活实验 |
HTRF结合实验：将重组BRCA1串联BRCT结构域（1646-1863位氨基酸）与荧光标记磷酸肽（FAM偶联的Abraxas衍生磷酸肽）在实验缓冲液中与系列稀释的 Bractoppin 混合，室温孵育1小时后检测HTRF信号，根据BRCT-磷酸肽结合的抑制率计算IC50值 [1]
等温滴定量热法（ITC）：将纯化的BRCA1串联BRCT结构域透析至缓冲液中，Bractoppin 溶解于相同缓冲液。在25°C条件下，将 Bractoppin 注入BRCT结构域溶液进行滴定，通过热谱图拟合单点结合模型确定结合亲和力（Kd）[1] Pull-down实验：将GST标签的BRCA1串联BRCT结构域固定在磁珠上，与His标签磷酸肽和 Bractoppin（0-20 μM）在4°C孵育2小时。洗涤磁珠后，通过抗His抗体western blot检测结合的磷酸肽，密度法量化结合抑制程度 [1] |
| 细胞实验 |
DNA损伤应答（DDR）灶点实验：癌细胞经 Bractoppin（5-20 μM）处理2小时后，暴露于电离辐射（IR，2 Gy）。2小时后固定细胞并透化，用抗BRCA1和抗γH2AX抗体染色，共聚焦显微镜观察灶点形成，计数每个γH2AX阳性细胞中的BRCA1灶点数量 [1]
同源重组（HR）实验：稳定转染DR-GFP报告基因的MCF-7细胞经 Bractoppin（5-20 μM）处理24小时后，转染I-SceI表达质粒诱导DSBs。48小时后，流式细胞术量化GFP阳性细胞（提示HR修复成功）比例 [1] 细胞活力及增敏实验：细胞接种于96孔板，用 Bractoppin（0-40 μM）单药或与顺铂（0-10 μM）/奥拉帕利（0-5 μM）联合处理72小时，CCK-8实验检测细胞活力，计算联合指数（CI）评估协同作用 [1] 凋亡实验：细胞经 Bractoppin（10-20 μM）联合顺铂（5 μM）处理48小时后，用Annexin V-FITC和PI染色，流式细胞术计数凋亡细胞（Annexin V阳性/PI阴性或双阳性细胞）[1] Western blot分析：细胞经 Bractoppin（5-20 μM）和/或IR（2 Gy）处理后裂解，蛋白经SDS-PAGE分离，膜与抗BRCA1、磷酸化Chk1（Ser345）、磷酸化RPA32（Ser4/8）、剪切型caspase-3及内参GAPDH抗体孵育，密度法量化条带强度 [1] |
| 动物实验 |
MCF-7 异种移植模型：将 5×10⁶ MCF-7 细胞皮下注射到 6-8 周龄雌性裸鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分为 4 组（每组 n=6）：载体对照组（DMSO:PEG400:PBS = 10:40:50，腹腔注射，每日一次）、Bractoppin 单药治疗组（50 mg/kg，溶于 DMSO:PEG400:PBS = 10:40:50，腹腔注射，每日一次，持续 14 天）、顺铂单药治疗组（5 mg/kg，溶于 PBS，腹腔注射，每周一次，持续 2 周）以及 Bractoppin + 顺铂联合治疗组 [1]
SKOV3 异种移植模型：将 5×10⁶ 个 SKOV3 细胞皮下注射到裸鼠体内。当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分为 3 组（每组 n=6）：载体对照组（腹腔注射，每日一次）、奥拉帕尼单药治疗组（25 mg/kg，溶于 0.5% CMC-Na 溶液，口服，每日一次，持续 14 天）以及 Bractoppin（50 mg/kg，腹腔注射，每日一次）+ 奥拉帕尼（25 mg/kg，口服，每日一次）联合治疗组 [1] 肿瘤测量：每 2 天使用游标卡尺测量肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2）。治疗结束后处死小鼠，切除肿瘤并称重，收集肿瘤组织进行免疫组织化学 (IHC) 分析 [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在异种移植研究中，Bractoppin（50 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续14天）未引起显著毒性：小鼠未出现体重减轻（>5%）、行为异常或器官（肝脏、肾脏、脾脏）组织病理学损伤[1]
Bractoppin的血浆蛋白结合率约为85%（通过人血浆超滤法测定）[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Bractoppin是一种小分子抑制剂，它通过靶向BRCA1串联BRCT结构域的磷酸肽结合口袋来破坏BRCA1的功能[1]
Bractoppin的作用机制包括阻断BRCA1募集至DNA双链断裂（DSB）位点，抑制同源重组（HR）介导的DNA修复，并使BRCA1功能正常的癌细胞对DNA损伤剂更加敏感[1] Bractoppin对BRCA1功能正常的细胞具有选择性，避免对正常细胞或BRCA1缺陷细胞产生毒性[1] 异种移植瘤的免疫组化（IHC）分析显示，与单独使用顺铂相比，Bractoppin联合顺铂可减少BRCA1聚集灶的形成并增加切割型caspase-3的表达[1] |
| 分子式 |
C25H23FN4O
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|---|---|
| 分子量 |
414.4747
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| 精确质量 |
414.19
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| 元素分析 |
C, 72.45; H, 5.59; F, 4.58; N, 13.52; O, 3.86
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| CAS号 |
2290527-07-8
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| PubChem CID |
137519541
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.299±0.06 g/cm3
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| 沸点 |
625.7±65.0 °C
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| LogP |
4
|
| tPSA |
52.2
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
604
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
FC1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([H])([H])N1C([H])([H])C([H])([H])N(C(C2C([H])=C([H])C3=C(C=2[H])N([H])C(C2C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=2[H])=N3)=O)C([H])([H])C1([H])[H]
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| InChi Key |
UHDGSNOZRAAGIZ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H23FN4O/c26-21-9-5-4-8-20(21)17-29-12-14-30(15-13-29)25(31)19-10-11-22-23(16-19)28-24(27-22)18-6-2-1-3-7-18/h1-11,16H,12-15,17H2,(H,27,28)
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| 化学名 |
[4-[(2-fluorophenyl)methyl]piperazin-1-yl]-(2-phenyl-3H-benzimidazol-5-yl)methanone
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| 别名 |
Bractoppin
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| HS Tariff Code |
2934.99.03.00
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 83~250 mg/mL (200.3~603.2 mM)
Ethanol: ~83 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.02 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.02 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.02 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4127 mL | 12.0636 mL | 24.1272 mL | |
| 5 mM | 0.4825 mL | 2.4127 mL | 4.8254 mL | |
| 10 mM | 0.2413 mL | 1.2064 mL | 2.4127 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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MOMA-341
Morpholino G phosphoramidite
MRL-436
TBIA
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