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BTSA1

别名: BTSA1; ANA-38; BTSA-1; ANA 38; BTSA 1; ANA38 5-苯基-2-（4-苯基-1,3-噻唑-2-基）-4-（1,3-噻唑-2-基二氮基）-1H-吡唑-3-酮
目录号: V3168 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
BTSA1 (BTSA-1) 是一种新型有效的 BAX（BCL2 相关 X 蛋白）激活剂，具有抗肿瘤活性。
BTSA1 CAS号: 314761-14-3
产品类别: Bcl-2
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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产品说明书
产品描述
BTSA1 (BTSA-1) 是一种新型有效的 BAX（BCL2 相关 X 蛋白）激活剂，具有抗肿瘤活性。通过特异性地、强烈地结合 BAX 的 N 端激活位点并引起那里的构象变化，它触发 BAX 介导的细胞凋亡。在不伤害健康细胞的同时，BTSA1 诱导的 BAX 激活可有效促进白血病细胞系和患者样本中的细胞凋亡。 BAX 表达量和胞质构象控制 BTSA1 敏感性。 BTSA1 可提高宿主存活率，且不会引起任何毒性，同时有效抑制人类急性髓系白血病 (AML) 异种移植。 BCL-2 家族蛋白 BAX 是细胞凋亡的核心介质。通过抑制 BAX 及其激活剂，抗凋亡 BCL-2 蛋白过度表达有助于肿瘤的发展和治疗耐药性。
生物活性&实验参考方法
靶点
Bax (IC50 = 250 nM); Bax (IC50 = 144 nM)
BTSA1: High-affinity and selective activator of BAX (BCL-2-associated X protein), binding to the N-terminal activation site (trigger site) of BAX; [1]
体外研究 (In Vitro)
BTSA1 没有能力直接激活促凋亡同系物 BAK。通过 BTSA1 处理，重组可溶性 BAX 被有效且剂量响应地易位至线粒体膜，随后诱导 BAX 寡聚化。当 BAX 被 BTSA1 激活时，癌细胞更有可能发生凋亡。 BTSA1 的 IC50 值范围在 1 至 4 μM 之间，以剂量依赖性方式降低所有 AML 细胞系的活力，并在治疗 24 小时内产生完全效果。所有五种 AML 细胞系均表现出剂量依赖性 caspase-3/7 激活[1]。
BAX激活及构象变化：BTSA1 高亲和力特异性结合BAX的N端触发位点（α1、α6区域）。竞争性荧光偏振结合实验显示，它可与FITC-BIM SAHB A2竞争结合BAX；直接荧光偏振结合实验证实其与BAX直接相互作用。对¹⁵N标记BAX的HSQC谱分析表明，BTSA1滴定后，BAX触发位点的残基出现显著主链酰胺化学位移变化，提示诱导BAX构象改变。对接研究显示，BTSA1与BAX形成疏水相互作用，其吡唑酮基团与BAX的K21残基形成关键氢键，模拟BIM BH3螺旋与BAX的相互作用模式[1]
- 白血病细胞中BAX介导的凋亡：BTSA1 可诱导BAX激活通路的全步骤，包括BAX向膜转运、寡聚化及线粒体 outer membrane permeabilization（MOMP）。在ANTS/DPX脂质体实验中，BTSA1（100–400 nM）可促进BAX介导的膜通透，而BAX K21E突变体中该效应受损。在分离的小鼠肝脏线粒体中，BTSA1呈剂量依赖性诱导BAX线粒体转运、寡聚化及细胞色素c释放。它能有效诱导人AML细胞系（如NB4、OCI-AML3、THP-1、MOLM-13）和小鼠AML细胞系WEHI凋亡，表现为细胞活力下降、caspase 3/7活性升高、线粒体去极化（TMRE实验检测）及细胞色素c释放。Western blot证实BTSA1可诱导NB4细胞中BAX从胞质向线粒体转运[1]
- 选择性及敏感性决定因素：竞争性结合实验显示，BTSA1 与抗凋亡BCL-2家族蛋白（BCL-XL、MCL-1、BFL-1）无显著结合，对非癌细胞系和正常造血祖细胞无明显毒性。BAX表达水平和胞质单体构象决定对BTSA1的敏感性：BAX mRNA/蛋白水平较高且胞质中存在单体BAX的AML细胞（如OCI-AML3、HPB-ALL）更敏感，而BAX敲除（KO）MEF细胞对其耐受。在BAX KO MEF细胞中重构野生型BAX可恢复敏感性，但触发位点功能受损的BAX突变体则不能。BTSA1 与Venetoclax（BCL-2抑制剂）在AML细胞系（THP-1、OCI-AML3）中具有协同作用，可增强caspase 3/7活性并降低细胞活力[1]
- 患者AML样本中的药效：BTSA1 可诱导原发性人AML母细胞（n=4）和CD34⁺CD38⁻ AML干细胞富集群体（n=4）凋亡（Annexin V结合实验检测），且不影响健康CD34⁺CD38⁻造血干祖细胞（n=2）。AML患者细胞（n=542）的BAX mRNA表达水平显著高于健康对照细胞（n=74）[1]
体内研究 (In Vivo)
BTSA1 可有效抑制人类急性髓系白血病 (AML) 异种移植物并提高宿主存活率，且无毒性。健康的富含干细胞 (LSK) 细胞、常见骨髓祖细胞、粒细胞-单核细胞祖细胞和巨核细胞-红细胞祖细胞在小鼠中具有良好的耐受性，并且没有毒性作用。 10 mg/kg 剂量的 BTSA1 达到足够的水平 (~15 μM)，引起白血病细胞中的 BAX 激活和凋亡，同时在小鼠血浆中也具有显着的半衰期 (T1/2 = 15 小时) 和口服生物利用度 (%F = 51）。因此，BTSA1 具有优异的药代动力学，可口服生物利用，通过诱导细胞凋亡显着抑制白血病异种移植物中的肿瘤生长，并且在治疗有效剂量下，在造血系统或其他组织中未表现出可检测到的毒性[1]。
AML异种移植模型中的抗肿瘤疗效：在THP-1人AML异种移植NSG小鼠中，BTSA1 治疗可显著抑制肝脏肿瘤负荷（减少人CD45⁺和CD15⁺细胞浸润）并延长宿主生存期（Kaplan-Meier生存曲线，n=7）。在MOLM-13人AML异种移植模型中，BTSA1 可降低骨髓和外周血中人CD45⁺CD15⁺细胞浸润（n=5）。骨髓切片免疫组织化学（IHC）染色显示，BTSA1 处理组的cleaved caspase-3阳性细胞和TUNEL阳性细胞增多，提示凋亡增强。对骨髓来源的人白血病细胞进行TMRE染色，证实线粒体去极化，与BAX介导的MOMP一致[1]
- 体内安全性和耐受性：NSG小鼠接受BTSA1（15 mg/kg体重）治疗30天，体重与溶媒对照组相比无显著变化；外周血计数（红细胞、白细胞、血小板）维持在正常范围。主要器官（肝、脾、肾、肺、心、脑、骨髓）的苏木精-伊红（H&E）染色未显示组织病理学异常，表明无全身毒性[1]
酶活实验
BAX相互作用的荧光偏振结合实验：
1. 竞争性结合实验：制备含FITC-BIM SAHB A2（与BAX结合）、系列浓度BTSA1 及实验缓冲液的反应体系，室温孵育特定时间后，检测荧光偏振值，评估BTSA1与FITC-BIM SAHB A2竞争结合BAX的能力；同时对BCL-XL、MCL-1、BFL-1进行平行实验以评估选择性。
2. 直接结合实验：使用荧光标记的BTSA1（F-BTSA1）与系列浓度BAX混合孵育，检测荧光偏振值以确定BTSA1与BAX的直接结合亲和力[1]
- NMR-based BAX构象变化实验：
1. 制备¹⁵N标记的非活性BAX蛋白，溶解于适宜的NMR缓冲液中。
2. 向¹⁵N标记BAX溶液中滴定BTSA1 至摩尔比1:1，每步滴定后收集¹H-¹⁵N HSQC谱。
3. 分析BAX主链酰胺残基的化学位移变化，将显著变化映射至BAX结构，确定结合位点（触发位点）[1]
- 脂质体膜通透实验：
1. 制备负载ANTS/DPX的脂质体，模拟线粒体外膜。
2. 将脂质体与200 nM BAX（或BAX K21E突变体）及系列浓度BTSA1（100–400 nM）共同孵育，以60 nM tBID作为阳性对照。
3. 实时检测脂质体释放的ANTS荧光强度，评估BTSA1诱导的BAX介导膜通透作用[1]
细胞实验
将 AML 细胞（以 2 × 104 个细胞/孔接种）与 BTSA1 或 BTSA2 或载体 (0.15% DMSO) 在无 FBS 培养基中的连续稀释液一起孵育 2.5 小时，然后将 10% FBS 替代物添加至最终体积 100 μl。 24小时后，评估细胞活力。
细胞活力及凋亡实验：
1. 细胞培养：在适宜培养基中培养AML细胞系（NB4、OCI-AML3、THP-1、MOLM-13）、小鼠AML细胞系WEHI、非癌细胞系、MEF细胞（野生型、BAX KO、BAK KO）及重构MEF细胞；从患者样本和健康供体中分离原发性人AML母细胞、CD34⁺CD38⁻ AML细胞及健康造血祖细胞。
2. 药物处理：将细胞以适宜密度接种于96孔板，用系列浓度BTSA1（单独或与Venetoclax联合）处理6–24小时，设置溶媒对照和阳性对照组。
3. 活力检测：使用细胞活力检测试剂盒测量吸光度或发光值，计算细胞活力并确定IC50值。
4. 凋亡检测：对原代细胞进行Annexin V结合实验，对细胞系进行caspase 3/7活性实验，通过荧光或发光检测定量凋亡；采用TMRE染色结合流式细胞术评估线粒体去极化[1]
- Western blot及免疫沉淀实验：
1. 蛋白提取：裂解处理后的细胞或分离胞质和线粒体组分，使用含蛋白酶抑制剂的裂解液提取总蛋白。
2. Western blot：通过SDS-PAGE分离蛋白，转移至膜上，封闭后加入针对BAX、细胞色素c、BCL-2、BCL-XL、MCL-1、Actin（胞质内参）、VDAC（线粒体内参）的抗体孵育，化学发光法检测信号。
3. 免疫沉淀：将细胞裂解液与BAX抗体或生物素标记的BTSA1 孵育，用蛋白A/G珠或链霉亲和素珠捕获免疫复合物，洗涤后进行Western blot检测BAX相互作用蛋白[1]
- BAX单体检测的凝胶过滤层析实验：
1. 制备MEF、OCI-AML3、HPB-ALL细胞的胞质提取物。
2. 将提取物上样至Superdex 200 HR 10/30柱，用缓冲液洗脱，收集对应不同分子量的组分。
3. 对收集的组分进行BAX抗体Western blot，鉴定单体BAX（低分子量组分）[1]
动物实验
配制于 1% DMSO、30% PEG-400、65% D5W（5% 葡萄糖溶液）、4% Tween-80 的溶液中；剂量为 10 mg/kg；口服和静脉注射。
NOD-SCID IL2Rg 基因敲除 (NSG) 小鼠/ICR (CD-1) 雄性小鼠，6-8 周龄。
AML 异种移植小鼠模型：
1. 动物准备：使用 6-8 周龄的 NSG 小鼠，实验前将其适应实验室环境 1 周。
2. 肿瘤细胞接种：通过尾静脉或腹腔注射将人 AML 细胞（THP-1 或 MOLM-13）注射到小鼠体内，建立异种移植模型。
3. 药物配制和给药：将 BTSA1 溶解于合适的溶剂（例如，DMSO/Cremophor/生理盐水）中，配制成适合注射的浓度。按照预定的给药方案（例如，每日一次，持续30天），通过腹腔注射向小鼠施用BTSA1，剂量为15 mg/kg体重。载体处理的小鼠作为对照。
4. 生存率和肿瘤负荷评估：对于THP-1异种移植瘤，每日监测小鼠的生存情况并绘制Kaplan-Meier生存曲线。对于MOLM-13和THP-1异种移植瘤，在指定时间点处死小鼠，并收集肝脏、骨髓和外周血样本。
5. 流式细胞术分析：用小鼠CD45、人CD45和人CD15抗体对样本进行染色，并通过流式细胞术分析以定量人AML细胞浸润。
6. IHC和TMRE检测：制备骨髓切片进行cleaved caspase-3和TUNEL IHC染色以检测细胞凋亡。对骨髓来源的人类白血病细胞进行TMRE染色，以评估线粒体去极化[1]
- 体内安全性评估：
1. 动物处理：每日腹腔注射BTSA1（15 mg/kg体重）或载体，连续30天，给予NSG小鼠。
2. 生理监测：每周测量小鼠体重。治疗结束时，采集外周血进行全血细胞计数（红细胞、白细胞、血小板）。
3. 组织病理学分析：采集主要器官（肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、心脏、脑、骨髓），用福尔马林固定，石蜡包埋，切片，并进行H&E染色。检查切片是否存在组织病理学异常[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
体外毒性：BTSA1 对非癌细胞系和健康的人造血祖细胞毒性极低，在对 AML 细胞有效的浓度下，细胞活力未见显著降低 [1]
- 体内毒性：BTSA1（15 mg/kg 体重，治疗 30 天）不会引起 NSG 小鼠体重减轻、血液学异常或主要器官的组织病理学损伤。BAX KO MEF 细胞对 BTSA1 具有耐药性，证实其细胞毒性依赖于 BAX，并且对表达 BAX 的癌细胞具有选择性 [1]
参考文献

[1]. Direct Activation of BAX by BTSA1 Overcomes Apoptosis Resistance in Acute Myeloid Leukemia. Cancer Cell. 2017 Oct 9;32(4):490-505.e10.
其他信息
作用机制：BTSA1 是一种经药理学优化的 BAX 激活剂，它与 BAX 的 N 端触发位点结合，诱导构象变化（膜靶向结构域暴露、寡聚化），从而导致 BAX 转位至线粒体、线粒体外膜通透性 (MOMP)、细胞色素 c 释放以及 caspase 依赖性细胞凋亡。其结合模式模拟 BIM BH3 螺旋，通过疏水相互作用并与 BAX K21 形成关键氢键 [1]。
- 治疗潜力：BTSA1 通过直接激活 BAX（细胞凋亡的关键介质）来克服急性髓系白血病 (AML) 中的凋亡抵抗。 BTSA1 在 AML 细胞系、患者样本（包括富集干细胞的细胞群）和异种移植模型中的疗效，以及其对癌细胞的高选择性和无全身毒性，为直接激活 BAX 作为一种治疗急性髓系白血病的新型策略提供了概念验证 [1]
- 与维奈托克（Venetoclax）的协同作用：BTSA1 可与维奈托克（BCL-2 抑制剂）产生协同作用，通过释放 BAX 并直接激活 BAX，增强 AML 细胞的凋亡反应。这种联合疗法可能改善 AML 患者的治疗效果，特别是那些 BCL-2 过表达的患者 [1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C21H14N6OS2
分子量
430.51
精确质量
430.067
元素分析
C, 58.59; H, 3.28; N, 19.52; O, 3.72; S, 14.89
CAS号
314761-14-3
相关CAS号
314761-14-3
PubChem CID
3857348
外观&性状
Brown to reddish brown solid powder
密度
1.5±0.1 g/cm3
沸点
625.2±48.0 °C at 760 mmHg
闪点
331.9±29.6 °C
蒸汽压
0.0±1.8 mmHg at 25°C
折射率
1.791
LogP
3.68
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
8
可旋转键数目(RBC)
5
重原子数目
30
分子复杂度/Complexity
689
定义原子立体中心数目
0
SMILES
S1C([H])=C(C2C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=2[H])N=C1N1C(C(=C(C2C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=2[H])N1[H])/N=N/C1=NC([H])=C([H])S1)=O
InChi Key
CTRCXGFSYFTJIW-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C21H14N6OS2/c28-19-18(24-25-20-22-11-12-29-20)17(15-9-5-2-6-10-15)26-27(19)21-23-16(13-30-21)14-7-3-1-4-8-14/h1-13,26H
化学名
5-phenyl-2-(4-phenyl-1,3-thiazol-2-yl)-4-(1,3-thiazol-2-yldiazenyl)-1H-pyrazol-3-one
别名
BTSA1; ANA-38; BTSA-1; ANA 38; BTSA 1; ANA38
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ~81 mg/mL (~188.1 mM)
Water: < 1mg/mL
Ethanol: < 1mg/mL
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.3228 mL 11.6141 mL 23.2283 mL
5 mM 0.4646 mL 2.3228 mL 4.6457 mL
10 mM 0.2323 mL 1.1614 mL 2.3228 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片

  • BTSA1

    2017 Oct 9;32(4):490-505.e10.

  • BTSA1

    BTSA1 Is a High-Affinity and Selective BAX Trigger Site Activator.2017 Oct 9;32(4):490-505.e10.

  • BTSA1

    BTSA1 Induces All Steps of the BAX Activation Pathway.2017 Oct 9;32(4):490-505.e10.

  • BTSA1

    BTSA1 Induces Robust and Rapid BAX-Mediated Apoptosis.2017 Oct 9;32(4):490-505.e10.

  • BTSA1

    Specificity of BTSA1 for Cellular BAX, Cytosolic BAX Monomer, and the BAX Trigger Site.2017 Oct 9;32(4):490-505.e10.

  • BTSA1

    BTSA1 Is Effective against Patient AML Blasts and Pre-leukemic Stem Cells without Affecting Normal Hematopoietic Progenitor Cells and Demonstrates Significant Synergy with Venetoclax.2017 Oct 9;32(4):490-505.e10.

  • BTSA1

    BTSA1 Demonstrates Potent Efficacy in Killing Human AML In Vivo.2017 Oct 9;32(4):490-505.e10.

  • BTSA1

    BTSA1 Is Well Tolerated without Toxicity to Normal Cells In Vivo.2017 Oct 9;32(4):490-505.e10.

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