| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PDK-1 (IC50 = 2 nM); PKA (IC50 = 110 nM); KDR (IC50 = 410 nM); CDK2/CyclinE (IC50 = 650 nM); Chk1 (IC50 = 830 nM)
The target of BX-912 is 3-phosphoinositide-dependent kinase-1 (PDK1). For recombinant human PDK1, the half-maximal inhibitory concentration (IC50) of BX-912 is approximately 6 nM. BX-912 shows high selectivity for PDK1: it has no significant inhibitory activity against a panel of other kinases, including Akt1 (IC50 > 10 μM), PKCα (IC50 > 10 μM), PKA (IC50 > 10 μM), and ERK2 (IC50 > 10 μM), indicating minimal off-target effects [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
BX912 阻止 ChcK1、PKA、c-kit 和 KDR，IC50 分别为 0.83、0.11、0.85 和 0.41 μM。 BX912 抑制肿瘤细胞中的 PDK1/Akt 信号传导，并诱导细胞凋亡或抑制培养中的多种肿瘤细胞系（包括 PC-3 细胞）的贴壁依赖性生长。 PDK1/Akt 信号通路在细胞存活中的作用得到了以下事实的支持：许多 Akt 活性升高的癌细胞系（包括 MDA-468 乳腺癌细胞系）对 PDK1 抑制剂的生长抑制的敏感性提高了 30 倍以上软琼脂中的 BX912 比组织培养塑料中的 BX912 更重要，这对于未贴壁细胞尤其重要。在直接激酶测定形式中，BX912 有效抑制 PDK1 酶活性，但无法抑制预激活的 AKT2 活性 (IC50 > 10 μM)。因此，BX-912 是一种 PDK1 直接抑制剂。 BX912 可能与 PDK1 的 ATP 结合袋结合，因为它抑制该酶以竞争性方式使用其底物 ATP 的能力。 BX912 的氨基嘧啶主链在 PDK1 的活性位点采用类似的方向。 BX912 促进具有 4 N DNA 含量的 MDA-468 细胞群显着增加，表明细胞周期的 G2/M 期受阻。 BX912 还可有效抑制软琼脂中 HCT-116 细胞的生长，在 1 μM 剂量下显示出 96% 的抑制效果。 BX912 有效抑制软琼脂中 PC-3 细胞的生长，IC50 为 0.32 μM。 [1]
1. PDK1酶活性抑制：使用纯化的重组人PDK1进行的体外实验显示，BX-912可剂量依赖性抑制PDK1介导的其特异性底物肽（PDKtide，序列：H-His-Arg-Ser-Gly-Arg-Thr-Ser-Phe-Ser-Ala-Arg-Lys-OH）的磷酸化。通过8个浓度梯度（0.1 nM~100 nM）数据拟合的抑制曲线证实，其IC50约为6 nM，与靶点结合特异性一致[1] 2. 抑制癌细胞中PDK1下游信号通路：用BX-912（0.5 μM、2 μM、10 μM）处理HCT116结肠癌细胞4小时，Western blot检测显示，PDK1的关键下游底物Akt在Thr308位点的磷酸化水平呈浓度依赖性降低。具体而言，2 μM BX-912可抑制约70%的Akt Thr308磷酸化，而总Akt蛋白水平无变化。在HeLa宫颈癌细胞中观察到类似结果：1 μM BX-912处理6小时后，Akt Thr308磷酸化水平降低约50%[1] 3. 对癌细胞的抗增殖活性：采用MTT法评估细胞活力，BX-912对多种人癌细胞系表现出剂量依赖性抗增殖作用。对于HCT116结肠癌细胞，72小时增殖抑制的IC50约为2.1 μM；对于HeLa宫颈癌细胞，IC50约为3.3 μM；对于A549肺腺癌细胞，IC50约为4.5 μM。相反，即使在浓度高达10 μM时，BX-912对正常人包皮成纤维细胞（NHFF）的活力也无显著影响，表明其对癌细胞具有优先作用[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
不适用
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| 酶活实验 |
在 PDK1 和偶联检测形式中，AKT2 由 PDK1 和 PtdIns-3,4-P2 激活。对于偶联测定，最终测定混合物 (60 μL) 含有：15 mM MOPS，pH 7.2，1 mg/mL 牛血清白蛋白，18 mM β-磷酸甘油，0.7 mM 二硫苏糖醇，3 mM EGTA，10 mM MgOAc，7.5 μM ATP、0.2 μCi [γ- 33P]ATP、7.5 μM 生物素化肽底物 (生物素-ARRRDGGGAQPFRPRAATF)、0.5 μL 含 PtdIns-3,4-P2 的磷脂囊泡、60 pg 纯化的重组人 PDK1 和 172 ng纯化的重组人 AKT2。在室温下孵育 2 小时后，在链霉亲和素包被的 SPA 珠上捕获 10 L 测定混合物中的生物素标记的肽。然后通过 Wallac MicroBeta 计数器中的闪烁接近度测量产物形成。添加的 PDK1 和无活性 AKT2 的量以及孵育时间决定了形成的产物的量。 PDK1 以次优水平添加，以便该测定可以灵敏地检测 AKT2 激活抑制剂以及 PDK1 或 AKT2 的直接抑制剂 BX912。为了直接测量 PDK1 活性，最终测定混合物 (60 μL) 含有 50 mM Tris-HCl，pH 7.5、0.1 mM EGTA、0.1 mM EDTA、0.1% β-巯基乙醇、1 mg/mL 牛血清白蛋白、10 mM MgOAc、 10 μM ATP、0.2 μCi 的 [γ-33P]ATP、7.5 μM 底物肽 (H2N-ARRRGVTTKTFCGT) 和 60 ng 纯化的重组人 PDK1。室温下 4 小时后，添加 25 mM EDTA，并将一些反应混合物点在 P81 磷酸纤维素纸上。用0.75%磷酸洗涤滤纸3次，用丙酮洗涤1次。磷成像仪用于测量干燥后与过滤器结合的标记肽。
1. 试剂制备：首先制备纯化的重组人PDK1（在Sf9昆虫细胞中表达，通过亲和层析纯化）；配制含50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl2、1 mM二硫苏糖醇（DTT）和0.1 mg/mL牛血清白蛋白（BSA）的反应缓冲液；将PDK1特异性底物肽（PDKtide）溶解于反应缓冲液中，终浓度为100 μM；向反应体系中加入[γ-32P]ATP（放射性ATP），终浓度为10 μM，比活度约为1000 cpm/pmol[1] 2. 实验设置：将BX-912用二甲基亚砜（DMSO）进行系列稀释，得到8个浓度梯度（0.1 nM、0.3 nM、1 nM、3 nM、10 nM、30 nM、100 nM、300 nM），并将每个稀释液加入反应缓冲液中，确保DMSO终浓度≤1%（此浓度对PDK1活性无影响）。向BX-912、PDKtide和[γ-32P]ATP的混合物中加入重组PDK1（终浓度2 nM）启动反应。设置空白对照（含DMSO但不含BX-912）和阳性对照（已知的非选择性激酶抑制剂）。每个反应在96孔板中做三重重复，将板在30°C下孵育30分钟[1] 3. 检测与数据分析：孵育后，取20 μL反应混合物点样到磷酸纤维素滤纸上。将滤纸用1%磷酸洗涤3次（每次5分钟）以去除未结合的[γ-32P]ATP，然后用丙酮漂洗1次并风干。使用液体闪烁计数器测量滤纸上的放射性。PDK1抑制率按以下公式计算：[（空白对照放射性-样品放射性）/空白对照放射性]×100%。通过将抑制率数据拟合到四参数逻辑回归模型中，确定IC50值[1] |
| 细胞实验 |
MDA-468、MDA-453 等细胞以低密度（1.5-3 × 103 个细胞/孔，0.1 mL/孔，96 孔板）接种并孵育过夜。 BX912 处理是通过添加 10 μL/孔的化合物于 1% 二甲基亚砜和生长培养基（二甲基亚砜的终浓度为 0.1%）中，然后短暂摇动来进行的。孵育 72 小时后，将代谢染料 WST-1 添加到处理过的细胞中，以确定活力。通过从 WST-1 信号中减去无细胞或零时间细胞背景来计算净信号，该信号在酶标仪上在 450 nm 处读取。
1. 抗增殖实验（MTT法）： - 细胞接种：将人癌细胞系（HCT116、HeLa、A549）和正常NHFF细胞用胰酶消化，重悬于完全培养基（含10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的DMEM）中。将细胞以每孔5×10³个细胞的密度接种到96孔板中，在37°C、5% CO₂条件下孵育24小时，使其贴壁[1] - 药物处理：用完全培养基将BX-912稀释为8个浓度梯度（0.1 μM、0.3 μM、1 μM、3 μM、10 μM、30 μM、100 μM），DMSO终浓度≤1%。更换每孔中的培养基为100 μL稀释后的BX-912溶液，并设置溶剂对照（含1% DMSO的培养基）。每个浓度做三重重复，将板孵育72小时[1] - 活力检测：孵育后，向每孔加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL，溶于PBS），继续孵育4小时。小心吸去上清液，向每孔加入150 μL DMSO溶解甲瓒结晶。使用酶标仪测量570 nm处的吸光度。细胞活力百分比按（样品吸光度/溶剂对照吸光度）×100%计算，通过将活力数据拟合到逻辑模型中，获得抗增殖作用的IC50[1] 2. PDK1下游信号通路Western blot实验： - 细胞制备与处理：将HCT116或HeLa细胞以每孔2×10⁵个细胞的密度接种到6孔板中，在37°C、5% CO₂条件下培养至汇合度达70%-80%。更换培养基为含BX-912（浓度0.5 μM、2 μM、10 μM）的新鲜培养基（溶剂对照：含1% DMSO的培养基），将细胞孵育4-6小时[1] - 蛋白提取与电泳：用冰预冷的PBS洗涤细胞2次，向每孔加入200 μL RIPA裂解缓冲液（添加蛋白酶和磷酸酶抑制剂）。在冰上刮取细胞，将裂解液在4°C下以12,000×g离心15分钟，收集上清液（总蛋白）。采用BCA法测定蛋白浓度。将等量蛋白（每泳道30 μg）通过10% SDS-PAGE分离，转移至PVDF膜上[1] - 免疫检测：将PVDF膜用含5%脱脂牛奶的TBST封闭1小时（室温），然后在4°C下与抗磷酸化Akt（Thr308）、总Akt和β-肌动蛋白（内参）的一抗孵育过夜。用TBST洗涤膜3次后，与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的二抗在室温下孵育1小时。再次洗涤膜后，使用增强化学发光（ECL）试剂显影蛋白条带。采用图像分析软件对条带强度进行定量，计算磷酸化Akt与总Akt的比值，以评估BX-912对PDK1下游信号通路的抑制作用[1] |
| 动物实验 |
不适用；
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
N-[3-[[5-溴-4-[2-(1H-咪唑-5-基)乙基氨基]-2-嘧啶基]氨基]苯基]-1-吡咯烷甲酰胺是脲类化合物。
1. BX-912是最早报道的PDK1选择性小分子抑制剂之一，旨在靶向PDK1的ATP结合口袋。 BX-912 通过与 ATP 竞争结合 PDK1 的催化结构域发挥抑制作用，从而阻断 PDK1 磷酸化并激活 PI3K-Akt 信号通路中的下游激酶（例如 Akt、PKC）的能力 [1]。 2. 在癌症研究中，BX-912 是一种有价值的工具化合物，可用于解析 PDK1 的生物学功能及其在 PI3K-Akt 信号通路失调的癌症（例如结肠癌、宫颈癌）进展中的作用。该化合物对 PDK1 的高选择性以及对癌细胞（与正常细胞相比）的优先抗增殖活性，支持其作为开发 PDK1 靶向抗癌药物的先导化合物的潜力，尽管它尚未进入临床开发阶段 [1]。 3. BX-912 的开发为验证 PDK1 作为治疗靶点提供了重要的实验工具。使用BX-912的研究表明，抑制PDK1可以有效抑制癌细胞中PI3K-Akt通路的激活，从而降低细胞增殖——证实了PDK1作为癌细胞存活和生长关键介质的作用[1] |
| 分子式 |
C20H23BRN8O
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|---|---|
| 分子量 |
471.35
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| 精确质量 |
470.117
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| 元素分析 |
C, 50.96; H, 4.92; Br, 16.95; N, 23.77; O, 3.39
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| CAS号 |
702674-56-4
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| 相关CAS号 |
702674-56-4
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| PubChem CID |
11754511
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| 外观&性状 |
White solid powder
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| 密度 |
1.6±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.750
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| LogP |
1.38
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| tPSA |
110.86
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
7
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| 重原子数目 |
30
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| 分子复杂度/Complexity |
549
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
BrC1=C(NCCC2=CNC=N2)N=C(NC3=CC(NC(N4CCCC4)=O)=CC=C3)N=C1
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| InChi Key |
DMMILYKXNCVKOJ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H23BrN8O/c21-17-12-24-19(28-18(17)23-7-6-16-11-22-13-25-16)26-14-4-3-5-15(10-14)27-20(30)29-8-1-2-9-29/h3-5,10-13H,1-2,6-9H2,(H,22,25)(H,27,30)(H2,23,24,26,28)
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| 化学名 |
N-(3-((4-((2-(1H-imidazol-4-yl)ethyl)amino)-5-bromopyrimidin-2-yl)amino)phenyl)pyrrolidine-1-carboxamide
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| 别名 |
BX 912; BX912; BX912
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~94 mg/mL (~199.4 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: N/A |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (5.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 27.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (5.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 27.5mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (5.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1216 mL | 10.6078 mL | 21.2157 mL | |
| 5 mM | 0.4243 mL | 2.1216 mL | 4.2431 mL | |
| 10 mM | 0.2122 mL | 1.0608 mL | 2.1216 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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OSU-02067
PDKtide TFA
PDK1-IN-5
PDK1-IN-3
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COA
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463611831
