| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg | |||
| Other Sizes |
| 靶点 |
PDK-1 (IC50 = 2 nM); PKA (IC50 = 110 nM); KDR (IC50 = 410 nM); CDK2/CyclinE (IC50 = 650 nM); Chk1 (IC50 = 830 nM)
The target of BX-912 is 3-phosphoinositide-dependent kinase-1 (PDK1). For recombinant human PDK1, the half-maximal inhibitory concentration (IC50) of BX-912 is approximately 6 nM. BX-912 shows high selectivity for PDK1: it has no significant inhibitory activity against a panel of other kinases, including Akt1 (IC50 > 10 μM), PKCα (IC50 > 10 μM), PKA (IC50 > 10 μM), and ERK2 (IC50 > 10 μM), indicating minimal off-target effects [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
BX912 阻止 ChcK1、PKA、c-kit 和 KDR，IC50 分别为 0.83、0.11、0.85 和 0.41 μM。 BX912 抑制肿瘤细胞中的 PDK1/Akt 信号传导，并诱导细胞凋亡或抑制培养中的多种肿瘤细胞系（包括 PC-3 细胞）的贴壁依赖性生长。 PDK1/Akt 信号通路在细胞存活中的作用得到了以下事实的支持：许多 Akt 活性升高的癌细胞系（包括 MDA-468 乳腺癌细胞系）对 PDK1 抑制剂的生长抑制的敏感性提高了 30 倍以上软琼脂中的 BX912 比组织培养塑料中的 BX912 更重要，这对于未贴壁细胞尤其重要。在直接激酶测定形式中，BX912 有效抑制 PDK1 酶活性，但无法抑制预激活的 AKT2 活性 (IC50 > 10 μM)。因此，BX-912 是一种 PDK1 直接抑制剂。 BX912 可能与 PDK1 的 ATP 结合袋结合，因为它抑制该酶以竞争性方式使用其底物 ATP 的能力。 BX912 的氨基嘧啶主链在 PDK1 的活性位点采用类似的方向。 BX912 促进具有 4 N DNA 含量的 MDA-468 细胞群显着增加，表明细胞周期的 G2/M 期受阻。 BX912 还可有效抑制软琼脂中 HCT-116 细胞的生长，在 1 μM 剂量下显示出 96% 的抑制效果。 BX912 有效抑制软琼脂中 PC-3 细胞的生长，IC50 为 0.32 μM。 [1]
1. PDK1酶活性抑制：使用纯化的重组人PDK1进行的体外实验显示，BX-912可剂量依赖性抑制PDK1介导的其特异性底物肽（PDKtide，序列：H-His-Arg-Ser-Gly-Arg-Thr-Ser-Phe-Ser-Ala-Arg-Lys-OH）的磷酸化。通过8个浓度梯度（0.1 nM~100 nM）数据拟合的抑制曲线证实，其IC50约为6 nM，与靶点结合特异性一致[1] 2. 抑制癌细胞中PDK1下游信号通路：用BX-912（0.5 μM、2 μM、10 μM）处理HCT116结肠癌细胞4小时，Western blot检测显示，PDK1的关键下游底物Akt在Thr308位点的磷酸化水平呈浓度依赖性降低。具体而言，2 μM BX-912可抑制约70%的Akt Thr308磷酸化，而总Akt蛋白水平无变化。在HeLa宫颈癌细胞中观察到类似结果：1 μM BX-912处理6小时后，Akt Thr308磷酸化水平降低约50%[1] 3. 对癌细胞的抗增殖活性：采用MTT法评估细胞活力，BX-912对多种人癌细胞系表现出剂量依赖性抗增殖作用。对于HCT116结肠癌细胞，72小时增殖抑制的IC50约为2.1 μM；对于HeLa宫颈癌细胞，IC50约为3.3 μM；对于A549肺腺癌细胞，IC50约为4.5 μM。相反，即使在浓度高达10 μM时，BX-912对正常人包皮成纤维细胞（NHFF）的活力也无显著影响，表明其对癌细胞具有优先作用[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
不适用
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| 酶活实验 |
在 PDK1 和偶联检测形式中，AKT2 由 PDK1 和 PtdIns-3,4-P2 激活。对于偶联测定，最终测定混合物 (60 μL) 含有：15 mM MOPS，pH 7.2，1 mg/mL 牛血清白蛋白，18 mM β-磷酸甘油，0.7 mM 二硫苏糖醇，3 mM EGTA，10 mM MgOAc，7.5 μM ATP、0.2 μCi [γ- 33P]ATP、7.5 μM 生物素化肽底物 (生物素-ARRRDGGGAQPFRPRAATF)、0.5 μL 含 PtdIns-3,4-P2 的磷脂囊泡、60 pg 纯化的重组人 PDK1 和 172 ng纯化的重组人 AKT2。在室温下孵育 2 小时后，在链霉亲和素包被的 SPA 珠上捕获 10 L 测定混合物中的生物素标记的肽。然后通过 Wallac MicroBeta 计数器中的闪烁接近度测量产物形成。添加的 PDK1 和无活性 AKT2 的量以及孵育时间决定了形成的产物的量。 PDK1 以次优水平添加，以便该测定可以灵敏地检测 AKT2 激活抑制剂以及 PDK1 或 AKT2 的直接抑制剂 BX912。为了直接测量 PDK1 活性，最终测定混合物 (60 μL) 含有 50 mM Tris-HCl，pH 7.5、0.1 mM EGTA、0.1 mM EDTA、0.1% β-巯基乙醇、1 mg/mL 牛血清白蛋白、10 mM MgOAc、 10 μM ATP、0.2 μCi 的 [γ-33P]ATP、7.5 μM 底物肽 (H2N-ARRRGVTTKTFCGT) 和 60 ng 纯化的重组人 PDK1。室温下 4 小时后，添加 25 mM EDTA，并将一些反应混合物点在 P81 磷酸纤维素纸上。用0.75%磷酸洗涤滤纸3次，用丙酮洗涤1次。磷成像仪用于测量干燥后与过滤器结合的标记肽。
1. 试剂制备：首先制备纯化的重组人PDK1（在Sf9昆虫细胞中表达，通过亲和层析纯化）；配制含50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl2、1 mM二硫苏糖醇（DTT）和0.1 mg/mL牛血清白蛋白（BSA）的反应缓冲液；将PDK1特异性底物肽（PDKtide）溶解于反应缓冲液中，终浓度为100 μM；向反应体系中加入[γ-32P]ATP（放射性ATP），终浓度为10 μM，比活度约为1000 cpm/pmol[1] 2. 实验设置：将BX-912用二甲基亚砜（DMSO）进行系列稀释，得到8个浓度梯度（0.1 nM、0.3 nM、1 nM、3 nM、10 nM、30 nM、100 nM、300 nM），并将每个稀释液加入反应缓冲液中，确保DMSO终浓度≤1%（此浓度对PDK1活性无影响）。向BX-912、PDKtide和[γ-32P]ATP的混合物中加入重组PDK1（终浓度2 nM）启动反应。设置空白对照（含DMSO但不含BX-912）和阳性对照（已知的非选择性激酶抑制剂）。每个反应在96孔板中做三重重复，将板在30°C下孵育30分钟[1] 3. 检测与数据分析：孵育后，取20 μL反应混合物点样到磷酸纤维素滤纸上。将滤纸用1%磷酸洗涤3次（每次5分钟）以去除未结合的[γ-32P]ATP，然后用丙酮漂洗1次并风干。使用液体闪烁计数器测量滤纸上的放射性。PDK1抑制率按以下公式计算：[（空白对照放射性-样品放射性）/空白对照放射性]×100%。通过将抑制率数据拟合到四参数逻辑回归模型中，确定IC50值[1] |
| 细胞实验 |
MDA-468、MDA-453 等细胞以低密度（1.5-3 × 103 个细胞/孔，0.1 mL/孔，96 孔板）接种并孵育过夜。 BX912 处理是通过添加 10 μL/孔的化合物于 1% 二甲基亚砜和生长培养基（二甲基亚砜的终浓度为 0.1%）中，然后短暂摇动来进行的。孵育 72 小时后，将代谢染料 WST-1 添加到处理过的细胞中，以确定活力。通过从 WST-1 信号中减去无细胞或零时间细胞背景来计算净信号，该信号在酶标仪上在 450 nm 处读取。
1. 抗增殖实验（MTT法）： - 细胞接种：将人癌细胞系（HCT116、HeLa、A549）和正常NHFF细胞用胰酶消化，重悬于完全培养基（含10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的DMEM）中。将细胞以每孔5×10³个细胞的密度接种到96孔板中，在37°C、5% CO₂条件下孵育24小时，使其贴壁[1] - 药物处理：用完全培养基将BX-912稀释为8个浓度梯度（0.1 μM、0.3 μM、1 μM、3 μM、10 μM、30 μM、100 μM），DMSO终浓度≤1%。更换每孔中的培养基为100 μL稀释后的BX-912溶液，并设置溶剂对照（含1% DMSO的培养基）。每个浓度做三重重复，将板孵育72小时[1] - 活力检测：孵育后，向每孔加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL，溶于PBS），继续孵育4小时。小心吸去上清液，向每孔加入150 μL DMSO溶解甲瓒结晶。使用酶标仪测量570 nm处的吸光度。细胞活力百分比按（样品吸光度/溶剂对照吸光度）×100%计算，通过将活力数据拟合到逻辑模型中，获得抗增殖作用的IC50[1] 2. PDK1下游信号通路Western blot实验： - 细胞制备与处理：将HCT116或HeLa细胞以每孔2×10⁵个细胞的密度接种到6孔板中，在37°C、5% CO₂条件下培养至汇合度达70%-80%。更换培养基为含BX-912（浓度0.5 μM、2 μM、10 μM）的新鲜培养基（溶剂对照：含1% DMSO的培养基），将细胞孵育4-6小时[1] - 蛋白提取与电泳：用冰预冷的PBS洗涤细胞2次，向每孔加入200 μL RIPA裂解缓冲液（添加蛋白酶和磷酸酶抑制剂）。在冰上刮取细胞，将裂解液在4°C下以12,000×g离心15分钟，收集上清液（总蛋白）。采用BCA法测定蛋白浓度。将等量蛋白（每泳道30 μg）通过10% SDS-PAGE分离，转移至PVDF膜上[1] - 免疫检测：将PVDF膜用含5%脱脂牛奶的TBST封闭1小时（室温），然后在4°C下与抗磷酸化Akt（Thr308）、总Akt和β-肌动蛋白（内参）的一抗孵育过夜。用TBST洗涤膜3次后，与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的二抗在室温下孵育1小时。再次洗涤膜后，使用增强化学发光（ECL）试剂显影蛋白条带。采用图像分析软件对条带强度进行定量，计算磷酸化Akt与总Akt的比值，以评估BX-912对PDK1下游信号通路的抑制作用[1] |
| 动物实验 |
NA;
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
N-[3-[[5-bromo-4-[2-(1H-imidazol-5-yl)ethylamino]-2-pyrimidinyl]amino]phenyl]-1-pyrrolidinecarboxamide is a member of ureas.
1. BX-912 is one of the earliest reported selective small-molecule inhibitors of PDK1, designed to target the ATP-binding pocket of PDK1. It exerts its inhibitory effect by competing with ATP for binding to the catalytic domain of PDK1, thereby blocking PDK1’s ability to phosphorylate and activate downstream kinases (e.g., Akt, PKC) in the PI3K-Akt signaling pathway [1] 2. In cancer research, BX-912 serves as a valuable tool compound for dissecting the biological functions of PDK1 and its role in the progression of cancers with dysregulated PI3K-Akt signaling (e.g., colon cancer, cervical cancer). The compound’s high selectivity for PDK1 and preferential antiproliferative activity against cancer cells (compared to normal cells) support its potential as a lead compound for developing PDK1-targeted anticancer agents, though it has not advanced to clinical development [1] 3. The development of BX-912 provided a critical experimental tool to validate PDK1 as a therapeutic target. Studies using BX-912 demonstrated that inhibiting PDK1 can effectively suppress the activation of the PI3K-Akt pathway in cancer cells, leading to reduced cell proliferation—confirming PDK1’s role as a key mediator of cancer cell survival and growth [1] |
| 分子式 |
C20H23BRN8O
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|---|---|
| 分子量 |
471.35
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| 精确质量 |
470.117
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| 元素分析 |
C, 50.96; H, 4.92; Br, 16.95; N, 23.77; O, 3.39
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| CAS号 |
702674-56-4
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| 相关CAS号 |
702674-56-4
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| PubChem CID |
11754511
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| 外观&性状 |
White solid powder
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| 密度 |
1.6±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.750
|
| LogP |
1.38
|
| tPSA |
110.86
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
30
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| 分子复杂度/Complexity |
549
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
BrC1=C(NCCC2=CNC=N2)N=C(NC3=CC(NC(N4CCCC4)=O)=CC=C3)N=C1
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| InChi Key |
DMMILYKXNCVKOJ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H23BrN8O/c21-17-12-24-19(28-18(17)23-7-6-16-11-22-13-25-16)26-14-4-3-5-15(10-14)27-20(30)29-8-1-2-9-29/h3-5,10-13H,1-2,6-9H2,(H,22,25)(H,27,30)(H2,23,24,26,28)
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| 化学名 |
N-(3-((4-((2-(1H-imidazol-4-yl)ethyl)amino)-5-bromopyrimidin-2-yl)amino)phenyl)pyrrolidine-1-carboxamide
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| 别名 |
BX 912; BX912; BX912
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~94 mg/mL (~199.4 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: N/A |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (5.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 27.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (5.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 27.5mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (5.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1216 mL | 10.6078 mL | 21.2157 mL | |
| 5 mM | 0.4243 mL | 2.1216 mL | 4.2431 mL | |
| 10 mM | 0.2122 mL | 1.0608 mL | 2.1216 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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