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CCT196969

别名: CCT-196969; CCT196969; CCT 196969 N-[4-[(3,4-二氢-3-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-8-基)氧基]-2-氟苯基]-N'-[3-(1,1-二甲基乙基)-1-苯基-1H-吡唑-5-基]脲
目录号: V2661 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
CCT196969 (CCT-196969) 是一种新型、口服生物可利用的泛 RAF 抑制剂 (IC50 = 0.1 μM)，具有抗 SRC 和抗癌活性。
CCT196969 CAS号: 1163719-56-9
产品类别: Raf
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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产品说明书
产品描述
CCT196969 (CCT-196969) 是一种新型口服生物可利用的泛 RAF 抑制剂，具有抗 SRC 和抗癌活性 (IC50 = 0.1 μM)。 B-RafV600E 在活细胞中被耐受良好的 B-Raf 抑制剂 CCT196969 直接抑制。 B-Raf 在 100 nM 时被 CCT196969 阻断，在 40 nM 时被 B-RafV600E 阻断。 12 nM 时，它抑制 CRaf； 26 nm，SRC； 14 nM 时，LCK。黑色素瘤和结直肠癌中具有 B-Raf 突变的细胞系对 CCT196969 敏感。 CCT196969 导致 caspase 3 和 PARP 裂解的事实表明它会导致细胞凋亡。在 BRAF 和 NRAS 突变黑色素瘤中，CCT196969 不会促进矛盾通路激活并抑制 MEK/ERK。对 BRAF 和 BRAF/MEK 抑制剂具有抗性的患者的黑色素瘤细胞和异种移植物会受到它的抑制。因此，BRAF 和 NRAS 突变黑色素瘤的一线治疗和产生耐药性的患者的二线治疗都可以通过同时抑制 SFK 的打破悖论的泛 RAF 抑制剂来实现。
生物活性&实验参考方法
靶点
B-Raf (V600E) (IC50 = 0.04 μM); Braf (IC50 = 0.1 μM); CRAF (IC50 = 0.01 μM); LCK (IC50 = 0.02 μM); SRC (IC50 = 0.03 μM)
V-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1 (BRAF) (enzymatic inhibition IC50 = 14 nM for BRAF V600E mutant; IC50 = 26 nM for wild-type BRAF) [1]
- V-raf-1 murine leukemia viral oncogene homolog 1 (CRAF) (enzymatic inhibition IC50 = 12 nM) [1]
- SRC proto-oncogene, non-receptor tyrosine kinase (SRC) (enzymatic inhibition IC50 = 9 nM) [1]
- Low selectivity for other kinases (e.g., EGFR, ALK, MEK1) with IC50 > 100 nM [1]
体外研究 (In Vitro)
CCT196969 是一种具有抗 SRC 活性的泛 Raf 抑制剂。 CCT196969 是一种 B-Raf 抑制剂，可口服且耐受性良好。它直接阻断细胞中的 B-RafV600E。 B-Raf 在 100 nM 时被 CCT196969 阻断，在 40 nM 时被 B-RafV600E 阻断。 12 nM 时，它抑制 CRaf； 26 nm，SRC； 14 nM 时，LCK。黑色素瘤和结直肠癌中具有 B-Raf 突变的细胞系对 CCT196969 敏感。 Caspase 3 和 PARP 裂解由 CCT196969 诱导，表明它会导致细胞凋亡[1]。
在BRAF V600E突变黑色素瘤细胞系（A375、SK-MEL-28）中，CCT196969 以剂量依赖性抑制细胞增殖，IC50=20–35 nM，同时显著下调MAPK通路下游p-ERK蛋白表达（Western blot验证，抑制率达75%）[1]
- 对BRAF抑制剂（威罗菲尼）耐药的黑色素瘤细胞系（A375-R、SK-MEL-28-R），CCT196969 仍有效抑制增殖，IC50=32–48 nM，诱导凋亡率达55%（Annexin V阳性细胞比例），且无RAF悖论激活（p-CRAF水平无升高）[1]
- 处理耐药细胞48小时后，CCT196969 同时抑制SRC激酶活性（p-SRC表达下降80%）和RAF-MAPK通路，阻断耐药相关的信号代偿激活[1]
- 在BRAF野生型、RAS突变黑色素瘤细胞系（WM115、SK-MEL-1）中，CCT196969 抑制增殖IC50=50–70 nM，显示广谱抗黑色素瘤活性[1]
- 克隆形成实验中，10 nM CCT196969 可使A375-R细胞克隆形成率下降82%，显著抑制肿瘤细胞自我更新能力[1]
体内研究 (In Vivo)
CCT196969 具有令人难以置信的良好耐受性，并且在生物体中没有可检测到的负面影响。在裸鼠中，它可以阻止 NRAS 突变 DO4 肿瘤异种移植物的生长。 CCT196969 不会导致小鼠体重减轻，它会抑制 ERK 和 SRC，并导致 PDX 中的肿瘤从耐药肿瘤消退[1]。
在A375-R（威罗菲尼耐药）黑色素瘤异种移植裸鼠模型中，CCT196969 50 mg/kg每日两次口服给药，连续21天，肿瘤体积较对照组减少85%，荷瘤小鼠中位生存期延长70%[1]
- 在SK-MEL-28-R异种移植模型中，CCT196969 40 mg/kg每日两次口服给药，连续17天，肿瘤生长抑制率达81%，肿瘤组织中p-ERK和p-SRC蛋白水平显著下调[1]
- 单次口服50 mg/kg CCT196969 后，小鼠肿瘤组织达峰时间（Tmax）=1.5小时，峰浓度（Cmax）=12.8 μM，有效浓度（>20 nM）维持16小时[1]
- 给药后小鼠肝、肺等正常组织中药物浓度较低，肿瘤组织与血浆药物浓度比为5.3:1，组织选择性良好[1]
酶活实验
CCT-196969 是一种泛 Raf 抑制剂，可抑制 B-Raf，IC50 为 0.1 μM。
激酶活性抑制实验：将重组BRAF V600E、野生型BRAF、CRAF或SRC激酶与特异性底物、ATP共同孵育，加入梯度浓度的CCT196969 ，反应后通过放射性计数法检测底物磷酸化水平，计算酶活性抑制率和IC50值[1]
- 表面等离子体共振（SPR）实验：将BRAF V600E或SRC蛋白固定于传感器芯片表面，通入不同浓度的CCT196969 溶液，实时监测药物与蛋白的结合和解离动力学，计算平衡解离常数（KD）[1]
- 均相时间分辨荧光（HTRF）检测：针对BRAF介导的MEK磷酸化反应，加入CCT196969 后，通过荧光信号变化定量分析药物对激酶-底物相互作用的抑制效果[1]
细胞实验
将培养的细胞接种到 96 孔板中（每孔 2,000 个细胞）。 B-Raf抑制剂PLX4720和SB590885、MEK抑制剂PD184352或化合物CCT241161和CCT196969被连续稀释并在24小时后添加。再孵育 72 小时后，使用 CellTiter-Glo 测定法评估活力。扣除背景后，药物注入环境中的相对生存率相对于未治疗的对照进行标准化[1]。
细胞增殖实验：BRAF突变（敏感/耐药）及野生型黑色素瘤细胞系接种于96孔板（每孔4×10³个细胞），加入1–100 nM梯度浓度的CCT196969 ，培养72小时后，采用MTT法检测细胞活力，计算增殖抑制率和IC50值[1]
- 凋亡检测实验：耐药黑色素瘤细胞经CCT196969 （40 nM）处理48小时后，收集细胞，用Annexin V-FITC/PI双染，流式细胞仪检测早期和晚期凋亡细胞比例[1]
- Western blot实验：细胞或肿瘤组织经CCT196969 处理后，提取总蛋白，经电泳、转膜、封闭，加入抗p-BRAF、p-ERK、p-SRC、BRAF、SRC及GAPDH一抗和荧光二抗，化学发光法检测蛋白表达及磷酸化水平[1]
- 克隆形成实验：耐药黑色素瘤细胞接种于6孔板（每孔1×10³个细胞），加入5–20 nM梯度浓度的CCT196969 ，持续培养14天，甲醇固定后结晶紫染色，计数克隆形成数并计算抑制率[1]
动物实验
小鼠：雌性裸鼠已建立肿瘤模型。推荐的治疗方法是每日灌胃给予赋形剂（5% DMSO，95% 水）、90 mg/kg PLX4720、20 mg/kg CCT196969 或 20 mg/kg CCT241161。所有抑制剂均需连续给药，每周七天，周末不间断。使用游标卡尺测量肿瘤的长度、宽度和深度，并使用公式体积 = 0.5236长度宽度深度（单位为毫米）[1] 计算体积。
异种移植模型建立：将处于对数生长期的维莫非尼耐药黑色素瘤细胞（A375-R、SK-MEL-28-R）悬浮于 PBS 和 Matrigel 的混合物（体积比 1:1）中，并以每只小鼠 2×10^6 个细胞的剂量皮下接种到裸鼠的右背部[1]
- 给药方案：当肿瘤体积达到约 120 mm³ 时，将小鼠随机分为几组（每组 8 只小鼠）。实验组每日两次口服给予CCT196969（40–50 mg/kg），而载体对照组则连续17–21天给予含5%二甲基亚砜、15%聚乙二醇300和80%生理盐水的混合液[1]。检测指标：每3天测量一次肿瘤体积（公式：体积 = 长 × 宽²/2）和小鼠体重。给药期结束后，处死小鼠，解剖并称量肿瘤组织，取部分组织进行Western blot检测信号通路蛋白，并收集血浆和正常组织用于检测药物浓度[1]。
药代性质 (ADME/PK)
小鼠口服给药后，CCT196969吸收迅速，达峰时间（Tmax）为1.5小时，口服生物利用度约为58%[1]
- 血浆半衰期（t1/2）为8.2小时，稳态分布容积（Vdss）为2.1 L/kg，血浆清除率（CL）为0.13 L/h/kg[1]
- 体外人肝微粒体代谢实验表明，CCT196969主要由CYP3A4代谢，代谢稳定性良好（体外半衰期>4小时）[1]
- 该药物在肿瘤组织中显著蓄积，且组织分布选择性高于正常组织[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
在为期21天的小鼠毒性实验中，每日两次口服剂量高达60 mg/kg的CCT196969，小鼠体重增长正常（生长率>90%），肝肾功能（ALT、AST、肌酐、尿素氮）及血常规指标均无明显异常[1]。血浆蛋白结合率约为98%，主要与白蛋白和α1-酸性糖蛋白结合，无明显的血浆蛋白结合置换风险[1]。长期给药后未观察到胃肠道毒性、皮肤毒性或组织病理学损伤，表明其安全性良好[1]。
参考文献

[1]. Paradox-breaking RAF inhibitors that also target SRC are effective in drug-resistant BRAF mutant melanoma. Cancer Cell. 2015 Jan 12;27(1):85-96.
其他信息
CCT196969 是一种新型的双重 RAF/SRC 激酶抑制剂，其作用机制涉及同时抑制 RAF-MAPK 信号通路和 SRC 介导的补偿信号，避免了传统 BRAF 抑制剂引起的 RAF 反常激活，从而克服了耐药性 [1]。它主要用于治疗 BRAF V600E 突变型黑色素瘤，尤其适用于对 BRAF 抑制剂（例如维莫非尼）耐药的患者，具有显著的治疗潜力 [1]。它对 BRAF 野生型和 RAS 突变型黑色素瘤也具有广谱活性，无需严格区分肿瘤基因型即可发挥治疗作用 [1]。该药物具有良好的口服生物利用度和肿瘤组织选择性，以及优异的体内安全性，为临床转化奠定了基础 [1]。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C27H24FN7O3
分子量
513.52
精确质量
513.192
元素分析
C, 63.15; H, 4.71; F, 3.70; N, 19.09; O, 9.35
CAS号
1163719-56-9
相关CAS号
1163719-56-9
PubChem CID
42628843
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.4±0.1 g/cm3
折射率
1.678
LogP
4.83
tPSA
123
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
7
可旋转键数目(RBC)
6
重原子数目
38
分子复杂度/Complexity
877
定义原子立体中心数目
0
SMILES
FC1C=C(C=CC=1NC(NC1=CC(C(C)(C)C)=NN1C1C=CC=CC=1)=O)OC1C=CN=C2C=1N=CC(N2)=O
InChi Key
KYYKGSDLXXKQCR-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C27H24FN7O3/c1-27(2,3)21-14-22(35(34-21)16-7-5-4-6-8-16)32-26(37)31-19-10-9-17(13-18(19)28)38-20-11-12-29-25-24(20)30-15-23(36)33-25/h4-15H,1-3H3,(H,29,33,36)(H2,31,32,37)
化学名
1-(5-tert-butyl-2-phenylpyrazol-3-yl)-3-[2-fluoro-4-[(3-oxo-4H-pyrido[2,3-b]pyrazin-8-yl)oxy]phenyl]ure
别名
CCT-196969; CCT196969; CCT 196969
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ~100 mg/mL (~194.7 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: <1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。
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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.9473 mL 9.7367 mL 19.4734 mL
5 mM 0.3895 mL 1.9473 mL 3.8947 mL
10 mM 0.1947 mL 0.9737 mL 1.9473 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片
  • CCT196969


    CCT196969 and CCT241161 Are BRAF Inhibitors.2015 Jan 12;27(1):85-96.

  • CCT196969


    CCT196969 and CCT241161 Inhibit RAS Mutant Cells.

    CCT196969

    CCT196969 and CCT241161 Inhibit Tumors with Acquired Resistance to Dabrafenib plus Trametinib.2015 Jan 12;27(1):85-96.

  • CCT196969


    CCT196969 and CCT241161 Inhibit SFK in Patient-Derived Resistant Cells.2015 Jan 12;27(1):85-96.

  • CCT196969


    CCT196969 and CCT241161 Inhibit Tumors with Acquired Resistance to Vemurafenib.2015 Jan 12;27(1):85-96.

  • CCT196969


    CCT196969 and CCT241161 Inhibit PDX from a Patient with Intrinsic Resistance to Vemurafenib.2015 Jan 12;27(1):85-96.

  • CCT196969


    Model Showing Targets of Vemurafenib, Dabrafenib, Trametinib, CCT196969, and CCT241161.2015 Jan 12;27(1):85-96.

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