| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Chk1 (IC50 = 7.7 nM); PIM1 (IC50 = 42 nM); CK2 (IC50 = 215 nM)
CCT244747 targets checkpoint kinase 1 (CHK1), a serine/threonine-protein kinase that plays a critical role in the DNA damage response and cell cycle regulation. By inhibiting CHK1, the compound prevents the activation of the G2/M checkpoint, which is a DNA damage checkpoint that arrests cells in the G2 phase of the cell cycle. This abrogation of the checkpoint forces cells with DNA damage to enter mitosis prematurely, leading to mitotic catastrophe and cell death. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
CCT244747 对 CHK2 (IC50 > 10 μM) 和 CDK1 (IC50 > 10 μM) 的抑制作用较弱。CCT244747 对 CHK1、RSK1、RSK2、AMPK、BRSK1、IRAK1 和 TrkA 具有较强的抑制作用 (>80%)。CCT244747 (10 μM) 对 hNav1.5、hKv4.3/hKChIP2、hCav1.2、hKv1.5、hKCNQ1/hminK 和 hHCN4 等离子通道的抑制率均低于 25% [1]。CCT244747 对 FLT3 的抑制 IC50 为 600 nM。在人结肠癌细胞系中，CCT244747 (0.5 μM) 可逆转基因毒性诱导的 S 期和 G2 期细胞周期阻滞。在 HT29、SW620、MiaPaCa-2 和 Calu6 细胞系中，CCT244747 可抑制细胞 CHK1 功能，其 IC50 值范围为 29 nM 至 170 nM，用于阻断细胞 G2 期检查点（有丝分裂诱导实验）；GI50 值介于 0.33 至 3 μM 之间。在 HT29 和 SW620 结肠癌细胞系中，CCT244747 (0.3 μM) 可抑制 SN38 和吉西他滨诱导的 CHK1 活性，这与细胞周期阻滞的阻断、DNA 损伤的诱导和细胞凋亡相关[2]。 CCT244747 (0.5-2.0 μM) 可增强膀胱癌和头颈癌细胞系（T24、RT112 和 Cal27）的放射敏感性[3]。体外实验表明，CCT244747 是一种强效的细胞 CHK1 活性抑制剂。它能显著增强多种抗癌药物的细胞毒性，并消除多种肿瘤细胞系中药物诱导的 S 期和 G2 期阻滞。该化合物对 CHK1 具有强效抑制作用（>80%），并且对 RSK1、RSK2、AMPK、BRSK1 和 IRAK1 也具有活性。这种强效活性使其成为研究 CHK1 在癌细胞存活中作用的宝贵工具。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在人肿瘤异种移植模型中，CCT244747（100 mg/kg，口服，每7天一次）可显著降低肿瘤负荷。在HT29结肠癌异种移植模型中，CCT244747（100–300 mg/kg，口服）可抑制吉西他滨诱导的pS296 CHK1，抑制时间最长可达24小时[1]。在HT29结肠癌异种移植模型和Calu6人肺癌异种移植模型中，CCT244747（75 mg/kg，口服）联合吉西他滨显示出强效的抗肿瘤作用。在SW620人结肠癌异种移植模型中，CCT244747（150 mg/kg，口服）与伊立替康联合使用也显示出抗肿瘤活性[2]。在Cal27异种移植瘤模型中，CCT244747（100 mg/kg，口服）表现出放射增敏活性[3]。体内实验表明，CCT244747具有良好的口服生物利用度，并显示出抗肿瘤活性。它通过抑制G2期细胞周期检查点，增强肿瘤细胞对DNA损伤剂的敏感性，从而促进细胞死亡。其体内疗效已在临床前模型中得到证实，支持其作为潜在抗癌药物的开发。该化合物可口服给药的特性是其临床应用的一大优势。
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| 酶活实验 |
本研究采用微流控技术，通过追踪磷酸化产物与其底物的分离过程来测定CHK1激酶活性。使用含有CR-8（500 nM）的分离缓冲液，在EZ Reader II上进行检测。使用ECHO® 550声波分液器制备8个重复的稀释曲线，然后直接转移至384孔聚丙烯测试板中。每种化合物的储备液浓度为50 μM，溶于100% DMSO中。通过在每个孔中加入250 nL DMSO，最终获得2.5% DMSO的检测浓度，化合物浓度范围为0.5-1000 nM。此检测板中加入 6 PL CHK1（终浓度 2 nM，实验室自制）、2 PL 肽 10（5-FAM-KKKVSRSGLYRSPSMPENLNRPR-COOH，终浓度 1.5 PM）和 2 PL ATP（终浓度 90 PM），所有试剂均用激酶缓冲液（50 mM HEPES、0.02% NaN3、0.01% BSA、0.1 mM 原钒酸钠、1 mM DTT、2 mM MgCl2、0.1% Tween20）稀释。室温孵育 1 小时后，密封检测板，并以 1000 rpm 离心 1 分钟。加入分离缓冲液（90 PM）终止反应。使用 12 孔芯片，仪器设置为 -1.5 psi 和 1750 ΔV，在 EZ Reader II 上读取微孔板。抑制率的计算基于总孔（包含所有试剂和 2.5% DMSO）和空白孔（不含酶）。底物转化为产物的百分比自动计算。使用可变斜率方程对 log(抑制剂) 与响应进行非线性回归拟合，在 GraphPad Prism5[1] 中计算 IC50 值。
使用无细胞激酶测定法测定 CCT244747 对 CHK1 的体外活性。在这些测定中，将 CHK1 酶与肽底物和 ATP 在有或无化合物存在的情况下孵育。然后测量底物的磷酸化，并计算 IC50 值。该测定法直接测量化合物对其主要靶点的效力。 |
| 细胞实验 |
采用96小时磺基罗丹明B (SRB) 法评估化合物的细胞毒性以及CHK1抑制剂增强SN38（拓扑异构酶I抑制剂伊立替康的活性代谢物）和吉西他滨（一种抗代谢药物）细胞毒性的能力。处理前，将HT29或SW620细胞以每孔1.6至3.2 × 10³个细胞的密度接种于96孔板中，每孔加入160 μL培养基，并培养36小时使其贴壁。为了进行细胞毒性测定，将CHK1抑制剂的DMSO储备液（浓度为10 mM）从起始浓度250 PM开始，用培养基进行系列稀释。然后将40 PL（40 PL）以四复孔形式加入相应的孔中，最终浓度范围为50-0.1 PM（10个浓度）。将基因毒性药物（SN38；DMSO 储备液浓度为 10 mM）从起始浓度 2 PM 开始进行系列稀释，然后以四复孔的形式加入每个孔中，最终浓度范围为 200-0.39 nM（共 10 个浓度）。在 37°C、5% CO₂ 的湿润环境中培养 96 小时（四倍体培养）后，固定细胞并用 SRB 染色。结果以抑制细胞生长 50% 所需的测试化合物浓度（SRB IC₅₀）表示，并包含相应的对照。在增效试验中，将固定 SRB IC₅₀ 浓度的 SN38 或吉西他滨以 20 μL 培养基的体积（10 倍最终浓度）以四复孔的形式加入每个孔中，然后混匀 1 分钟。为了获得 5-0.039 PM（8 个浓度）的最终浓度范围，将 CHK1 抑制剂（10 mM 储备液）从 50 PM 的起始浓度开始进行系列稀释，并在培养基中加入 20 PL，每个浓度设置四个复孔。将细胞混匀 1 分钟，然后在 37°C 的湿润环境中培养 96 小时（4 个倍增周期），之后进行固定和 SRB 染色。结果以抑制细胞生长 50% 所需的 CHK1 抑制剂浓度（IC50）表示，并包含未处理组和仅用基因毒性处理的对照组。 SRB IC50 与增强 IC50 的比值 (PI = SRB IC50 / 增强 IC50) 用于计算增强指数 (PI)，该指数用于评估 CHK1 抑制剂增强 SN38 或吉西他滨细胞毒性的能力[1]。
CCT244747 的体外细胞活性通过用该化合物处理癌细胞系并测量其对细胞周期进程和细胞活力的影响来评估。在一个典型的实验方案中，细胞用 DNA 损伤剂（例如吉西他滨或拓扑异构酶抑制剂）处理，并分别加入或不加入 CCT244747。通过流式细胞术分析细胞周期分布以评估 G2 检查点的抑制情况。使用标准方法测量细胞活力。 |
| 动物实验 |
六周龄雌性BALB/c小鼠饲养于受控环境中，可自由摄取食物和无菌水。实验期间，小鼠体重为20 (±2) g。将化合物溶解于含10% DMSO和5% Tween20的85%生理盐水中配制成给药溶液。每种化合物均采用静脉注射和口服两种给药途径。静脉注射前，先对小鼠进行保暖处理，注射部位为尾侧静脉。口服给药采用灌胃法。在预定时间间隔（给药后1小时和6小时），于麻醉状态下进行心脏穿刺，采集血浆，转移至微量离心管中，并以4500 × g离心2分钟。使用奥洛莫辛作为内标，通过高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS）在三重四极杆质谱仪上监测特定离子对的多重反应，进行定量分析。使用标准曲线作为指导，测量浓度范围为 2 至 1000 nM 的基质。在 25、250 和 750 nM 的浓度水平上设置了质量控制点。根据需要，将样品稀释到相应的基质中[1]。
CCT244747 的体内疗效在异种移植小鼠模型中进行评估。在这些研究中，将人肿瘤细胞植入免疫缺陷小鼠体内。当肿瘤达到一定大小时，通常通过灌胃的方式，单独或与化疗药物联合使用 CCT244747 对动物进行治疗。使用游标卡尺测量来监测肿瘤生长情况。预计联合用药将比单独使用任何一种药物都显示出更强的抗肿瘤活性。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在动物模型中，CCT244747 通常采用口服给药，因为其具有良好的口服生物利用度。该化合物配制成适合口服给药的载体。药代动力学研究将测定其吸收和暴露量。该化合物的分子量为 408.47，分子式为 C20H24N8O2。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
CCT244747 的安全性和毒性将在标准的临床前毒理学研究中进行评估。作为一种 CHK1 抑制剂，其毒性特征与其作用机制相关，该机制可能影响正常的增殖细胞。这些研究对于确定其治疗指数和识别潜在的不良反应至关重要。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
CCT244747 是一种高效、口服生物利用度高且选择性极强的 CHK1 抑制剂，IC50 值为 7.7 nM。它能阻断 G2 期细胞周期检查点，并增强 DNA 损伤剂的细胞毒性。目前，CCT244747 是一种正在研究的抗癌药物，尤其是在联合疗法中的应用潜力。它尚未获批上市，但代表了一种靶向癌症 DNA 损伤反应的极具前景的策略。
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| 分子式 |
C20H24N8O2
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|---|---|
| 分子量 |
408.46
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| 精确质量 |
408.202
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| 元素分析 |
C, 58.81; H, 5.92; N, 27.43; O, 7.83
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| CAS号 |
1404095-34-6
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| 相关CAS号 |
1404095-34-6
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| PubChem CID |
54758482
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| 外观&性状 |
Yellow solid powder
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| LogP |
2.297
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| tPSA |
114.01
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
30
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| 分子复杂度/Complexity |
584
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
C1N=C(NC2N=C(O[C@@H](CN(C)C)C)C(C#N)=NC=2)C=C(OC)C=1C1=CN(C)N=C1
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| InChi Key |
IENLGMOXAQMNEH-CYBMUJFWSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H24N8O2/c1-13(11-27(2)3)30-20-16(7-21)22-10-19(26-20)25-18-6-17(29-5)15(9-23-18)14-8-24-28(4)12-14/h6,8-10,12-13H,11H2,1-5H3,(H,23,25,26)/t13-/m1/s1
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| 化学名 |
3-[(2R)-1-(dimethylamino)propan-2-yl]oxy-5-[[4-methoxy-5-(1-methylpyrazol-4-yl)pyridin-2-yl]amino]pyrazine-2-carbonitrile
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| 别名 |
CCT244747; CCT-244747; CCT 244747
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~50 mg/mL (~122.4 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.12 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4482 mL | 12.2411 mL | 24.4822 mL | |
| 5 mM | 0.4896 mL | 2.4482 mL | 4.8964 mL | |
| 10 mM | 0.2448 mL | 1.2241 mL | 2.4482 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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