CH5132799

PI3Kα (IC50 = 180 nM); PI3Kα-H1047R (IC50 = 5.6 nM); PI3Kα-E545K (IC50 = 6.7 nM); PI3Kα-E542K (IC50 = 6.7 nM); PI3Kγ (IC50 = 36 nM); PI3Kβ (IC50 = 120 nM); PI3Kδ (IC50 = 500 nM); PI3KC2β (IC50 = 5.3 μM); mTOR (IC50 = 1.6 μM)
CH5132799 selectively inhibits class I PI3Ks: PI3Kα (IC50=0.014 μmol/L), PI3Kα E542K (IC50=0.0067 μmol/L), PI3Kα E545K (IC50=0.0067 μmol/L), PI3Kα H1047R (IC50=0.0056 μmol/L), PI3Kβ (IC50=0.12 μmol/L), PI3Kδ (IC50=0.50 μmol/L), PI3Kγ (IC50=0.036 μmol/L). [1]
It shows weaker inhibition against class II PI3Ks (PI3KC2α IC50>10 μmol/L; PI3KC2β IC50=5.3 μmol/L), class III PI3K Vps34 (IC50>10 μmol/L), and class IV PI3K mTOR (IC50=1.6 μmol/L). No significant inhibition (IC50>10 μmol/L) against 26 protein kinases including ALK, EGFR, HER2, IGF1R, Akt1, CDK2, MEK1, PKCα, and S6K. [1][2]

CH5132799 选择性抑制 I 类 PI3K，包括 PI3Kα (IC50 = 0.014 μM)、PI3Kβ (IC50 = 0.12 μM)、PI3Kδ (IC50 = 0.50 μM) 和 PI3Kγ (IC50 = 0.036 μM)，但对 II 类 PI3K、III 类 PI3K 和 mTOR 的抑制作用较弱，且对 26 种蛋白激酶无抑制活性 (IC50 > 10 μM)。与野生型 PI3Kα 相比，CH5132799 对携带致癌突变 E542K (IC50 = 6.7 nM)、E545K (IC50 = 6.7 nM) 和 H1047R (IC50 = 5.6 nM) 的 PI3Kα 具有更强的抑制作用。 CH5132799 可有效抑制携带 PIK3CA 突变的乳腺癌 KPL-4 细胞中 Akt 及其直接底物 PRAS40 和 FoxO1/3a 的磷酸化，以及包括 S6K、S6 和 4E-BP1 在内的下游因子的磷酸化。携带 PIK3CA 突变的癌细胞系对 CH5132799 的敏感性显著更高 [1]。BAC-TO-BAC 杆状病毒表达系统与谷胱甘肽 S-转移酶标签和组氨酸标签 p85 的 PI3K 突变体联合使用。使用 Adapta 通用激酶检测试剂盒，评估了 CH5132799 对 PI3K (p110/p85)、PI3K (p110/p85)、PI3K (p110)、PI3KC2、PI3KC2、Vps34 和 PI3K 突变体的抑制作用。使用 EnVision HTS 微孔板读数仪测量时间分辨荧光。利用 XLfit 软件确定 IC50 值。

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CH5132799 在多种乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌和子宫内膜癌细胞系中均显示出强效的抗增殖活性，其中 75% (45/60) 的细胞系 IC50 低于 1 μmol/L，38% (23/60) 的细胞系 IC50 低于 0.3 μmol/L。携带 PIK3CA 突变的细胞系比不携带突变的细胞系更敏感（P=7.4×10⁻⁹），而 PTEN 缺陷与此无显著相关性（P=0.11）。携带 PIK3CA 突变的 HER2 扩增细胞系与仅携带 PIK3CA 突变的细胞系敏感性相当。PIK3CA 和 RAS/RAF 突变共存的细胞系比仅携带 RAS/RAF 突变的细胞系敏感性更高（P=0.015）。[1] 在 KPL-4 乳腺癌细胞（PIK3CA H1047R）中，CH5132799 在浓度低至 0.003 μmol/L 的情况下，处理 2 小时后即可抑制 Akt、PRAS40、FoxO1/3a、S6K、S6 和 4E-BP1 的磷酸化。它诱导G1期细胞周期阻滞，增加亚G1期细胞比例，并激活caspase 3/7。[1]
与依维莫司（mTORC1抑制剂）和BEZ235（PI3K/mTOR双重抑制剂）相比，CH5132799在BT-474细胞中，无论测试剂量（0.001-1 μmol/L，24小时）如何，均未通过S6K介导的负反馈环路增强Akt磷酸化。依维莫司在抑制S6K的同时增强Akt磷酸化；BEZ235在低剂量（0.01 μmol/L）下增强Akt磷酸化，但在高剂量下则抑制Akt磷酸化。CH5132799还能有效抑制4E-BP1磷酸化，而依维莫司几乎没有抑制作用。在SK-OV-3、MDA-MB-453和HCT116细胞中也观察到了类似的结果。 [1]
CH5132799 表现出抗增殖活性，其 IC50 值分别为：HCT116（结直肠癌，PI3Kα H1047R）0.20 μmol/L，KPL-4（乳腺癌，PI3Kα H1047R）0.032 μmol/L，T-47D（乳腺癌，PI3Kα H1047R）0.056 μmol/L，SK-OV-3（卵巢癌，PI3Kα H1047R）0.12 μmol/L，MFE-280（子宫内膜癌，PI3Kα H1047Y）0.18 μmol/L，以及 ME-180（宫颈癌，PI3Kα E545K）0.14 μmol/L。[2]

CH5132799 在多种具有 PIK3CA 突变的异种移植模型中均显示出强大的体内抗肿瘤活性。CH5132799 可克服长期依维莫司给药引起的 mTORC1 抑制介导的 Akt 激活和异种移植肿瘤的复发。[1] 在小鼠异种移植模型中，口服 CH5132799（12.5 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg，每日一次）可诱导 KPL-4（乳腺癌，PIK3CA H1047R）和 BT-474（乳腺癌，PIK3CA K111N）模型中的肿瘤快速消退。在 KPL-4 模型中，即使采用间歇给药方案（用药 2 周/停药 1 周；用药 5 天/停药 2 天），每日一次 12.5 mg/kg 给药 6 周仍能维持显著的肿瘤消退。 [1][2]
在卵巢癌SK-OV-3和子宫内膜癌MFE-280模型（均携带PIK3CA突变）中也观察到了强效的抗肿瘤活性。在PTEN缺陷模型中，CH5132799可缩小GXF97（胃癌，PTEN缺失）肿瘤并抑制PC-3（前列腺癌）肿瘤的生长。在MDA-MB-231（KRAS/BRAF突变）模型中，其疗效较差，但在HCT116（PIK3CA+KRAS突变）模型中则显示出显著的肿瘤生长抑制作用。[1]
在曲妥珠单抗不敏感的KPL-4肿瘤中，CH5132799（12.5 mg/kg，每日一次，持续12天）与曲妥珠单抗（30 mg/kg，每周一次，持续2周）联合使用可诱导肿瘤完全消失，且无需进一步治疗即可维持一个月以上。 [1] 在长期依维莫司治疗（50 mg/kg，每日一次，持续31天）后复发的BT-474肿瘤中，改用CH5132799（12.5或25 mg/kg，每日一次，持续7天）可诱导显著的剂量依赖性肿瘤消退。CH5132799抑制了Akt、FoxO1、S6K、S6和4E-BP1的磷酸化，而依维莫司仅抑制S6K/S6并诱导Akt/FoxO1的磷酸化。[1]

采用重叠延伸聚合酶链式反应（EPCR）制备PI3Kα的E542K、E545K和H1047R突变体。将细胞系加入含有0.076至10,000 nM CH5132799的96孔板中，并在37℃下孵育。孵育4天后，加入Cell Counting Kit-8溶液，继续孵育数小时后，使用iMark微孔板读数仪测量450 nm处的吸光度。抗增殖活性按公式(1-T/C)×100(%)计算，其中T和C分别代表经CH5132799处理的细胞(T)和未处理的对照细胞(C)在450 nm处的吸光度。 IC50 值使用 Microsoft Excel 2007 计算。

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在无细胞激酶活性测定中，将不同浓度的 CH5132799 与每种激酶孵育，并测量残余活性以计算 IC50 值。评估了 I 类 PI3K（α、β、δ、γ）、II 类（C2α、C2β）、III 类（Vps34）和 IV 类（mTOR）。CH5132799 与 PI3Kγ（PDB ID：3APC）的共晶结构分析表明，其具有 ATP 竞争性抑制作用。[1][2]
对于 PI3Kγ，该化合物进行了共结晶，并在同步辐射光束线上收集了衍射数据。 PI3Kγ/抑制剂复合物的晶体结构显示吗啉氧原子与缬氨酸882之间，以及氨基嘧啶部分与天冬氨酸836/赖氨酸833（化合物7）或天冬氨酸841（化合物CH5132799）之间存在氢键。[2]

将细胞系接种于含有 0.076 至 10,000 nM CH5132799 的 96 孔板中，并在 37 °C 下孵育。孵育 4 天后加入 Cell Counting Kit-8 溶液，然后使用 iMark 微孔板读数仪测量 450 nm 处的吸光度。采用公式 (1- T/C) × 100 (%) 计算抗增殖活性，其中 T 和 C 分别代表未处理的对照细胞和 CH5132799 处理细胞在 450 nm 处的吸光度。使用 Microsoft Excel 2007 计算 IC50 值。

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使用 Cell Counting Kit-8 法评估细胞增殖。将细胞系接种于含有 0.076 至 10,000 nmol/L CH5132799 的 96 孔板中，并在 37°C 下孵育 4 天。加入 CCK-8 溶液并继续孵育后，测量 450 nm 处的吸光度。抗增殖活性计算公式为 (1 - T/C) × 100%，IC50 值使用 Excel 计算。 [1]
对于蛋白质印迹分析，将细胞（例如 KPL-4、BT-474）用 CH5132799（0.001-1 μmol/L）处理 2 或 24 小时，然后裂解细胞，进行 SDS-PAGE 电泳和免疫印迹分析，所用抗体包括磷酸化 Akt、总 Akt、磷酸化 PRAS40、磷酸化 FoxO1/3a、磷酸化 S6K、磷酸化 S6、磷酸化 4E-BP1 等。[1]
细胞周期分析：将用 CH5132799 处理的 KPL-4 细胞固定，用碘化丙啶染色，并通过流式细胞术分析 G1 期阻滞和亚 G1 期细胞群。细胞凋亡通过 caspase 3/7 激活试验进行检测。[1]

小鼠：本研究使用雌性BALB-nu/nu (CAnN.Cg-Foxn1/CrlCrlj nu/nu)小鼠。将4106至12107个细胞悬浮于100至200 μL无血清培养基中，皮下注射至小鼠右侧腹部。每周两次使用测量仪测量肿瘤大小，以确定肿瘤体积（TV）。当肿瘤体积达到约200至300 mm³并开始治疗后，将动物随机分组（n=4或5）。每日一次口服CH5132799、依维莫司和曲妥珠单抗，并每周一次静脉注射曲妥珠单抗。

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在体内异种移植研究中，将4×10^6至1.2×10^7个肿瘤细胞悬浮于无血清培养基中，皮下注射到雌性BALB-nu/nu小鼠体内。当肿瘤体积达到约200-300 mm^3时，将小鼠随机分组（n=4或5），并开始治疗。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积，并根据公式TV = a × b^2 / 2计算（a=长度，b=宽度）。CH5132799每日口服一次。曲妥珠单抗每周静脉注射一次。依维莫司每日口服一次。在联合用药研究中，CH5132799连续给药12天，曲妥珠单抗给药2周。对于长期依维莫司治疗，小鼠接受依维莫司治疗31天直至肿瘤复发，然后换用CH5132799治疗7天。[1]
在药代动力学研究中，CH5132799分别通过静脉注射和口服途径给予小鼠、大鼠、犬和猴。在不同时间点采集血样，并分析血浆浓度以计算药代动力学参数。[2]

小鼠中 CH5132799 的口服生物利用度为 101%（1 mg/kg po，AUCinf=978 ng·h/mL，vs 2 mg/kg iv，AUCinf=1930 ng·h/mL），大鼠中为 101%（1 mg/kg po，AUCinf=978 ng·h/mL；0.5 mg/kg iv， AUCinf=1350 ng·h/mL)，狗为 54.2%（1 mg/kg 口服，AUCinf=1430 ng·h/mL；0.25 mg/kg 静脉注射，AUCinf=1690 ng·h/mL），猴为 78.4%（1 mg/kg 口服，AUCinf=2170 ng·h/mL；0.25 mg/kg静脉注射，AUCinf=692 ng·h/mL）。半衰期：小鼠口服 T1/2=3.8 小时，静脉注射 T1/2=1.7 小时；大鼠口服 T1/2=3.8 小时；犬口服 T1/2=3.3 小时，静脉注射 T1/2=1.6 小时；猴口服 T1/2=6.7 小时，静脉注射 T1/2=3.2 小时。清除率 (CL)：小鼠静脉注射 17.5 mL/min/kg；大鼠静脉注射 6.3 mL/min/kg；犬静脉注射 6.4 mL/min/kg；猴静脉注射 6.2 mL/min/kg。达峰时间 (Tmax)：小鼠口服 0.25 小时；大鼠口服 0.25 小时；犬口服 4.5 小时；猴口服 4.0 小时。[2]
CH5132799 表现出优异的人肝微粒体稳定性（未提供具体半衰期），并且与之前的先导化合物相比，代谢稳定性有所提高。[2]

在所有体内小鼠异种移植研究中，测试剂量的CH5132799（最高 50 mg/kg qd）耐受性良好，未在接受治疗的动物中观察到明显的毒性。[1]

[1]. Clin Cancer Res. 2011 May 15;17(10):3272-81.

[2]. Bioorg Med Chem Lett. 2011 Mar 15;21(6):1767-72.

CH5132799 已用于治疗实体瘤的临床试验。伊唑利昔布是一种高生物利用度的口服 I 类磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸 3-激酶 (PI3K) 催化亚基 α (PIK3CA) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，伊唑利昔布选择性地结合并抑制 PIK3CA 及其在 PI3K/Akt（蛋白激酶 B）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 通路中的突变形式。这会导致表达 PIK3CA 的肿瘤细胞凋亡和生长抑制。由于伊唑利昔布特异性靶向 PIK3CA，因此它可能比泛 PI3K 抑制剂更有效且毒性更低。此外，伊唑利昔布还靶向 PI3Kγ (PI3Kg) 的突变形式。它还可以刺激免疫系统，恢复 CD8+ T 细胞的活化和细胞毒性。PI3K/Akt/mTOR 通路失调在实体瘤中很常见，会导致肿瘤细胞生长、存活以及对化疗和放疗的耐药性。PIK3CA 是最常见的突变癌基因之一，编码 I 类 PI3K 的 p110-α 催化亚基。在大多数实体瘤中，PI3K 通路的激活是由 PIK3CA 突变引起的。

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PI3K/Akt 通路在人类癌症中经常失调。PIK3CA 突变发生在约 27% 的乳腺癌、约 8% 的卵巢癌、约 24% 的子宫内膜癌中，在前列腺癌中较少见。CH5132799是首个被报道在多种肿瘤类型中对携带 PIK3CA 突变的癌细胞显示出统计学意义上的显著抗肿瘤活性的 PI3K 抑制剂。 [1]
CH5132799 可克服 HER2 扩增/PIK3CA 突变型乳腺癌的曲妥珠单抗耐药性，因为曲妥珠单抗单药治疗无法抑制组成型活性 PI3K。该联合用药可导致肿瘤长期消退。[1]
与 mTORC1 抑制剂不同，CH5132799 避免了 S6K 抑制介导的 Akt 激活，并有效抑制了 4E-BP1 磷酸化，而 4E-BP1 磷酸化对于细胞增殖和肿瘤抑制至关重要。这使其在治疗依维莫司耐药肿瘤方面具有优势。[1]
该化合物是通过基于结构的药物设计发现的，设计采用了 PI3Kα 的同源模型和 PI3Kγ 的 X 射线晶体结构。氨基嘧啶部分取代了酚基，从而提高了代谢稳定性和口服生物利用度。[2]

C15H19N7O3S

377.42

377.127

C, 47.73; H, 5.07; N, 25.98; O, 12.72; S, 8.50

1007207-67-1

1007207-67-1;2242053-82-1 (mesylate);

49784945

White to gray solid powder

1.6±0.1 g/cm3

751.1±70.0 °C at 760 mmHg

408.1±35.7 °C

0.0±2.5 mmHg at 25°C

1.706

-0.87

136.54

1

10

3

26

587

0

S(C([H])([H])[H])(N1C2C(=C(C3=C([H])N=C(N([H])[H])N=C3[H])N=C(N=2)N2C([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])C2([H])[H])C([H])([H])C1([H])[H])(=O)=O

JEGHXKRHKHPBJD-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C15H19N7O3S/c1-26(23,24)22-3-2-11-12(10-8-17-14(16)18-9-10)19-15(20-13(11)22)21-4-6-25-7-5-21/h8-9H,2-7H2,1H3,(H2,16,17,18)

5-(7-(methylsulfonyl)-2-morpholino-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)pyrimidin-2-amine

PA-799; PA799; PA-799; Izorlisib; CH5132799; CH-5132799; CH 5132799

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 0.46 mg/mL (1.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 4.6 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 2 中的溶解度: 1% DMSO +30% polyethylene glycol+1% Tween 80 : 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。