CHIR-124

Chk1 (IC50 = 0.3 nM); Chk2 (IC50 = 697.4 nM); PDGFR (IC50 = 6.6 nM); FLT3 (IC50 = 5.8 nM); Cdk4/cyclin D (IC50 = 2.05 μM); CDC2/cyclin B (IC50 = 0.5057 μM); Cdk2/cyclin A (IC50 = 0.1911 μM); bFGFR (IC50 = 2.01 μM); FGFR3 (IC50 = 1.29 μM); VEGFR2 FLK1 (IC50 = 0.5779 μM); VEGFR1 FLT1 (IC50 = 0.4636 μM); PKCα (IC50 = 0.58 μM); PKAβ I (IC50 = 2.25 μM); PKCβ II (IC50 = 0.58 μM); PKCγ (IC50 = 0.11 μM); ERK2 (IC50 = 4.31 μM); PKA (IC50 = 0.1031 μM); GSK3 (IC50 = 0.0233 μM)

体外活性：CHIR-124 是一种基于喹诺酮的小分子，其结构与其他已知的 Chk1 抑制剂无关。 CHIR-124 与拓扑异构酶毒物（例如喜树碱或 SN-38）协同相互作用，导致多种癌细胞系生长抑制，包括乳腺癌（MDA-MB-231 和 MDA-MB-435）和结肠癌（SW） -620和Colo205)，它们都含有突变的p53基因。 CHIR-124 废除 SN-38 诱导的 S 和 G2-M 检查点并增强 MDA-MD-435 乳腺癌细胞的凋亡。 p53 的缺失增强了 CHIR-124 对 G2-M 检查点的废除和细胞凋亡的诱导。 CHIR-124 还有效靶向其他激酶，例如 PDGFR 和 Flt3，IC50 分别为 6.6 nM 和 5.8 nM。激酶测定：对于 Chk1 测定，激酶结构域在 Sf9 昆虫细胞中表达，并且含有共有 Chk1/Chk2 磷酸化位点 (*)（生物素-[AHX]SGSGS*GLYRSPSMP-ENLNRPR[CONH2]）的生物素化 cdc25c 肽是用作基材。将 CHIR-124 系列稀释液与激酶反应缓冲液混合，最终浓度为 30 mM Tris-HCl (pH 7.5)、10 mM MgCl2、2 mM DTT、4 mM EDTA、25 mMβ-甘油磷酸盐、5 mM MnCl2、 0.01% 牛血清白蛋白、1.35 nM CHK1 激酶结构域、0.5 μM 肽底物和 1 AM 未标记 ATP，加上 5 nM 33Pγ 标记 ATP（比活性 = 2,000 Ci/mmol）。磷酸盐转移的反应和检测是通过放射性方法进行的。反应在室温下孵育 1 至 4 小时，磷酸化肽被捕获在含有终止反应缓冲液（25 mM EDTA [乙二胺四乙酸]，50 mMHEPES，pH 7.5）的链霉亲和素包被的微量滴定板上。磷酸化肽通过 DELFIA TRF 系统使用铕标记的抗磷酸酪氨酸抗体 PT66 进行测量。 CHIR-124 的 IC50 浓度是使用 XL-Fit 数据分析软件的非线性回归计算得出的。细胞测定：将处于对数期的 MDA-MB-231、MDA-MB-435、SW-620 和 COLO 205 细胞接种到 96 孔微孔板中。 CHIR-124 在六种不同浓度的喜树碱或 0 nM 喜树碱存在下进行连续稀释。在没有 CHIR-124 的情况下，喜树碱也被连续稀释。将 CHIR-124 添加到 96 孔培养皿中的细胞中，并在 37 °C 下孵育 48 小时。每个处理条件一式三份进行。通过3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑(MTS)内盐测定监测细胞增殖。将 MTS 内盐添加到微孔板中，再孵育 3 小时，并在读板器上读取 490 nm 处的吸光度。绘制产生 50% 抑制所需的组合中每种药物的浓度以生成等值线。药物相互作用的等效线图分析基于 Loewe 加和性方程 (1= DA /IC50, A + DB/IC50, B)，其中 IC50、A 和 IC50, B 是每种药物产生 50% 抑制的药物浓度单独使用时，DA 和 DB 是组合中每种药物产生 50% 总体抑制的浓度。每张图中都包含一条表示 Loewe 可加性的对角线。落在该线下方的数据点表示协同作用，而落在该线上方的数据点则表示拮抗作用。

CHIR-124 通过消除原位乳腺癌异种移植模型中的 G2-M 检查点并增加肿瘤细胞凋亡来增强伊立替康的生长抑制作用。

Sf9 昆虫细胞的激酶结构域用于表达 Chk1 测定，底物是生物素化的 cdc25c 肽，包含共有 Chk1/Chk2 磷酸化位点 (*)（生物素-[AHX]SGSGS*GLYRSPSMP-ENLNRPR[CONH2]） 。激酶反应缓冲液含有 30 mM Tris-HCl (pH 7.5)、10 mM MgCl₂、2 mM DTT、4 mM EDTA、25 mMβ-甘油磷酸、5 mM MnCl2、0.01% 牛血清白蛋白、将 1.35 nM CHK1 激酶结构域、0.5 μM 肽底物、1 AM 未标记 ATP，加上 5 nM ³³Pγ 标记 ATP（比活性 = 2,000 Ci/mmol）与一系列 CHIR-124 稀释液组合。使用放射性技术来进行反应并检测磷酸盐转移。反应在室温下孵育一到四个小时。然后将磷酸化的肽捕获在涂有链霉亲和素并含有终止反应缓冲液（pH 7.5、25 mM 乙二胺四乙酸、50 mMHEPES）的微量滴定板上。 DELFIA TRF 系统使用铕标记的抗磷酸酪氨酸抗体 (PT66) 测量磷酸化肽。使用非线性回归和数据分析程序 XL-Fit，确定 CHIR-124 的 IC50 浓度。

在对数生长期，将 MDA-MB-231、MDA-MB-435、SW-620 和 COLO 205 细胞接种到 96 孔微孔板中。将六种不同浓度的喜树碱或 0 nM 喜树碱添加到连续稀释的 CHIR-124 中。如果不存在 CHIR-124，喜树碱也会被连续稀释。在 96 孔板中，用 CHIR-124 处理细胞，然后在 37 °C 下孵育 48 小时。每个治疗条件都完成三份。 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑 (MTS) 内盐测定用于跟踪细胞增殖。添加 MTS 内盐并让微孔板再静置三小时后，使用读板器测量 490 nm 处的吸光度。为了创建等值线，绘制了产生 50% 抑制所需的组合中的药物浓度。药物相互作用的等效线图分析的基础是 Loewe 加和方程 (1= D _A /IC50, _A + D_B/IC50, < sub>B)，其中 DA 和 DB 是组合中产生 50% 总体抑制的每种药物的浓度，IC50、A 和 B 是每种药物单独产生 50% 抑制的药物浓度。每张图均包含一条代表 Loewe 可加性的对角线。位于该线上方的数据点将显示拮抗作用，而位于该线下方的数据点将显示协同作用。

The following ten treatment groups are randomly assigned to severe combined immunodeficient mice bearing MDA-MD-435 tumor xenografts: the vehicle (captisol) by itself, 5 mg/kg CPT-11, 10 mg/kg CHIR-124, 20 mg/kg CHIR-124, 5 mg/kg CPT-11 plus 10 mg/kg CHIR-124, or 5 mg/kg CPT-11 plus 20 mg/kg CHIR-124. Day 1 (the day following randomization) is when treatment begins. CPT-11 is administered intraperitoneally (i.p.) four times a day (×5) on days 1 through 5, while CHIR-124 is administered orally four times a day ×6 in captisol on days 2 through 7. The formula for calculating percent tumor growth inhibition is T/C, where T is the treatment group mean and C is the control group mean. In a related study, tumor samples taken from mice that were sacrificed on the fourth day of treatment are analyzed for mitotic index using immunofluorescence labeling with phospho-histone H3 antibody and for apoptosis using terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated nick-end labeling staining.

[1]. Clin Cancer Res . 2007 Jan 15;13(2 Pt 1):591-602.

[2]. Clin Cancer Res . 2010 Jan 15;16(2):376-83.

C23H22CLN5O

419.91

419.15

C, 65.79; H, 5.28; Cl, 8.44; N, 16.68; O, 3.81

405168-58-3

Solid powder

C1CN2CCC1[C@@H](C2)NC3=C(C(=O)NC4=C3C=C(C=C4)Cl)C5=NC6=CC=CC=C6N5

MOVBBVMDHIRCTG-LJQANCHMSA-N

InChI=1S/C23H22ClN5O/c24-14-5-6-16-15(11-14)21(25-19-12-29-9-7-13(19)8-10-29)20(23(30)28-16)22-26-17-3-1-2-4-18(17)27-22/h1-6,11,13,19H,7-10,12H2,(H,26,27)(H2,25,28,30)/t19-/m1/s1

4-[[(3S)-1-azabicyclo[2.2.2]octan-3-yl]amino]-3-(1H-benzimidazol-2-yl)-6-chloro-1H-quinolin-2-one

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Solubility in Formulation 1: ≥ 0.71 mg/mL (1.69 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 7.1 mg/mL clear DMSO stock solution to 400 μL PEG300 and mix evenly; then add 50 μL Tween-80 to the above solution and mix evenly; then add 450 μL normal saline to adjust the volume to 1 mL.
Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH₂ O to obtain a clear solution.

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Solubility in Formulation 2: ≥ 0.71 mg/mL (1.69 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 7.1 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of corn oil and mix evenly.

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Solubility in Formulation 3: 1% DMSO +30% polyethylene glycol+1% Tween 80 : 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。