A2AR ( Ki = 3.54 nM )
Ciforadenant (CPI-444; V81444): Adenosine A2A receptor (A2AR) [1]

体外活性：Ciforadenant（也称为 CPI-444 和 V81444）是一种有效的、选择性的、具有口服生物活性的小分子 T 淋巴细胞腺苷 A2a 受体 (A2AR) 抑制剂。 Ciforadenant 目前正处于 I 期临床试验中，作为单一药物并与 atezolizumab（一种针对多种实体瘤的 PD-L1 抑制剂）联合使用。 Ciforadenant 能够诱导抗肿瘤反应。口服给药后，Ciforadenant 与免疫细胞表面表达的腺苷 A2A 受体结合，包括 T 淋巴细胞、自然杀伤 (NK) 细胞、巨噬细胞和树突状细胞 (DC)，从而防止肿瘤释放的腺苷与 A2A 受体相互作用这些关键的免疫监视细胞，从而消除肿瘤微环境中腺苷诱导的免疫抑制。激酶测定：Ciforadenant（也称为 CPI-444 和 V81444）是 T 淋巴细胞上腺苷 A2a 受体 (A2AR) 的有效、选择性和口服生物活性小分子抑制剂。细胞测定：CPI-444 是一种有效的口服选择性 A2AR 拮抗剂。 CD8+ T 细胞耗竭消除了 CPI-444 作为单一药物以及与抗 PD-L1 联合治疗的功效，证明了 CD8+ T 细胞在介导初次和二次免疫反应中的作用。 CPI-444±抗PD-L1的抗肿瘤功效与MC38肿瘤组织中CD8+细胞浸润和活化的增加以及脾脏中CD8+T细胞上PD-1表达的相应增加有关。此外，免疫检查点的水平通过 CPI-444 治疗进行调节，包括肿瘤浸润淋巴细胞和循环 T 细胞上的 GITR、OX40 和 LAG3，这表明腺苷介导的免疫抑制具有广泛的作用。

---

1. 为验证西福腺苷对A2AR的阻断作用，建立了功能信号实验：收集接受西福腺苷治疗患者的外周血样本，体外用腺苷类似物NECA刺激，通过流式细胞术定量B细胞和T细胞中的CREB磷酸化水平。结果显示，经西福腺苷治疗14天后，在1b期研究选定的剂量下，单药组和联合用药组的NECA诱导腺苷信号均被显著抑制[1]
2. 在体外免疫细胞实验中，西福腺苷可调节肿瘤浸润淋巴细胞和循环T细胞上GITR、OX40、LAG3等免疫检查点的表达，表明其在逆转腺苷介导的免疫抑制中具有广泛作用[1]

CPI-444 正在实体瘤的 1b 期研究中作为单一药物以及与抗 PD-L1 抗体 atezolizumab 联合使用进行研究。在临床前研究中，每天用 CPI-444（1、10、100 mg/kg）治疗同系小鼠模型 MC38，可实现剂量依赖性的肿瘤生长抑制，从而导致约 30% 的治疗小鼠的肿瘤被消除。在 MC38 模型中，将 CPI-444（100 mg/kg，每日一次，14 天）与抗 PD-L1（200 μg，3qw，4 剂量）联合治疗可协同抑制肿瘤生长，并消除 90% 的治疗小鼠的肿瘤。当治愈的小鼠随后再次用 MC38 细胞攻击时，100% 的攻击小鼠的肿瘤生长被抑制，表明 CPI-444 诱导了全身抗肿瘤免疫记忆。 CD8+ T 细胞耗竭消除了 CPI-444 作为单一药物以及与抗 PD-L1 联合治疗的功效，证明了 CD8+ T 细胞在介导初次和二次免疫反应中的作用。 CPI-444 ± 抗 PD-L1 的抗肿瘤功效与 MC38 肿瘤组织中 CD8+ 细胞浸润和活化的增加以及脾脏中 CD8+ T 细胞上 PD-1 表达的相应增加有关。

---

1. 在小鼠MC38同基因肿瘤模型中，每日口服西福腺苷（1、10、100 mg/kg）可剂量依赖性抑制肿瘤生长，约30%的给药小鼠实现肿瘤消除[1]
2. 西福腺苷（100 mg/kg，每日给药，持续14天）与抗PD-L1抗体（200 μg，每3周给药1次，共4剂）联合使用时，在MC38模型中协同抑制肿瘤生长，90%的给药小鼠肿瘤被消除[1]
3. 经西福腺苷单药或联合抗PD-L1治愈的小鼠，再次接种MC38肿瘤细胞后，100%能排斥肿瘤生长，说明西福腺苷可诱导全身性抗肿瘤免疫记忆[1]
4. 耗竭CD8⁺ T细胞会完全消除西福腺苷单药及联合抗PD-L1的抗肿瘤疗效，证实CD8⁺ T细胞在介导药物的原发性和继发性免疫应答中起关键作用[1]
5. 西福腺苷单药或联合抗PD-L1治疗后，MC38肿瘤组织中CD8⁺ T细胞的浸润和活化程度增加，脾脏中CD8⁺ T细胞的PD-1表达水平也相应升高[1]
6. 西福腺苷在体内可调节肿瘤浸润淋巴细胞和循环T细胞上GITR、OX40、LAG3等免疫检查点的表达水平，提示其可广泛逆转腺苷介导的免疫抑制[1]

Ciforadenant（也称为 CPI-444 和 V81444）是一种有效的、选择性的、具有口服生物活性的小分子 T 淋巴细胞腺苷 A2a 受体 (A2AR) 抑制剂。

---

1. 为评估西福腺苷对A2AR的阻断效果，建立了A2AR功能信号检测实验：收集接受西福腺苷治疗患者的外周血样本，体外加入腺苷类似物NECA进行刺激，通过流式细胞术定量B淋巴细胞和T淋巴细胞中CREB的磷酸化水平，以此判断西福腺苷对腺苷/A2AR信号通路的抑制作用[1]

CPI-444 是一种有效的口服选择性 A2AR 拮抗剂。 CPI-444 单独治疗以及与抗 PD-L1 联合治疗的有效性都会被 CD8+ T 细胞耗竭所抵消，这表明 CD8+ T 细胞在介导初次和二次免疫反应中具有功能。 CPI-444±抗PD-L1的抗肿瘤功效与MC38肿瘤组织中CD8+细胞浸润和活化的增加以及脾脏中CD8+T细胞上PD-1表达的增加有关。此外，CPI-444 治疗可改变肿瘤浸润淋巴细胞和循环 T 细胞（如 GITR、OX40 和 LAG3）上的免疫检查点水平。这表明腺苷介导的免疫抑制具有广泛的作用。

---

1. 采用流式细胞术分析经西福腺苷单药或联合抗PD-L1治疗的小鼠MC38肿瘤组织中CD8⁺ T细胞的浸润程度和活化状态，同时检测脾脏中CD8⁺ T细胞的PD-1表达水平，评估药物对免疫细胞活化的影响[1]
2. 通过流式细胞术检测肿瘤浸润淋巴细胞和循环T细胞上GITR、OX40、LAG3等免疫检查点分子的表达水平，分析西福腺苷对免疫检查点的调节作用[1]
3. 开展CD8⁺ T细胞耗竭实验：在体外将免疫细胞与CD8⁺ T细胞耗竭试剂共处理后，与肿瘤细胞共培养；在体内向荷瘤小鼠给予耗竭抗体，随后给予西福腺苷单药或联合抗PD-L1治疗，通过检测肿瘤生长情况，明确CD8⁺ T细胞在药物抗肿瘤作用中的角色[1]

CPI-444 (1, 10, 100 mg/kg)
Syngeneic mouse model

---

1. Syngeneic MC38 tumor models were established in mice by implanting MC38 colorectal cancer cells into immunocompetent mice; Ciforadenant was formulated as an oral preparation and administered daily at doses of 1, 10, or 100 mg/kg for the single-agent study, with tumor volume measured regularly to assess dose-dependent anti-tumor activity [1]
2. For combination therapy studies, Ciforadenant was administered orally at 100 mg/kg daily for 14 days, while anti-PD-L1 antibody was given at 200 μg per mouse every 3 weeks for 4 doses; tumor growth was monitored to evaluate synergistic anti-tumor effects [1]
3. Tumor rechallenge experiments were performed on mice cured by Ciforadenant ± anti-PD-L1 treatment: MC38 cells were re-implanted into the cured mice, and tumor growth was monitored for up to several weeks to assess the induction of systemic anti-tumor immune memory [1]
4. CD8⁺ T cell depletion experiments were carried out by administering CD8⁺ T cell-depleting antibodies to tumor-bearing mice prior to Ciforadenant treatment (single-agent or combination); tumor volume was measured to determine the impact of CD8⁺ T cell depletion on drug efficacy [1]
5. Tumor tissues and spleens were collected from treated mice, and immune cell infiltration (CD8⁺ T cells) and activation markers (PD-1, GITR, OX40, LAG3) were analyzed by flow cytometry to explore the immunomodulatory mechanism of Ciforadenant [1]

1. Ciforadenant was well tolerated in Phase 1/1b clinical studies for non-oncological indications,[1]

[1]. Cancer Immunoly Research. September 25-28, 2016.

Ciforadenant is under investigation in clinical trial NCT02253745 (Safety, Tolerability, PK & Efficacy of V81444 in Volunteers With Attention Deficit/ Hyperactivity Disorder (ADHD)).
Ciforadenant is a small molecule immune checkpoint inhibitor of the adenosine A2A receptor (ADORA2A) with potential antineoplastic activity. Upon oral administration, ciforadenant binds to adenosine A2A receptors expressed on the surface of immune cells, including T-lymphocytes, natural killer (NK) cells, macrophages and dendritic cells (DCs). This prevents tumor-released adenosine from interacting with the A2A receptors on these key immune surveillance cells, thereby abrogating adenosine-induced immunosuppression in the tumor microenvironment. This may stimulate anti-tumor immune responses, resulting in tumor regression.

---

1. Ciforadenant (CPI-444; V81444) is a potent, oral, and selective A2AR antagonist; elevated extracellular adenosine in the tumor microenvironment mediates immunosuppression via A2AR on immune cells, promoting tumor growth and metastasis [1]
2. Ciforadenant is the first adenosine antagonist demonstrated to modulate immunity in cancer patients, with robust inhibition of adenosine signaling in lymphocytes of treated humans [1]
3. A Phase 1b clinical trial of Ciforadenant is underway, investigating its safety, tolerability, biomarkers, and preliminary efficacy as a single agent and in combination with the anti-PD-L1 antibody atezolizumab in patients with solid tumors (non-small cell lung cancer, melanoma, renal cancer, triple-negative breast cancer, head and neck cancer, MSI-H colorectal cancer, bladder cancer) [1]
4. Peripheral blood and tumor biopsies are collected pre- and post-treatment in the Phase 1b trial for biomarker analysis, including adenosine pathway expressioctivity, immune cell activation/tumor infiltration, and mutational burden [1]

C20H21N7O3

407.43

407.17

C, 58.96; H, 5.20; N, 24.07; O, 11.78

1202402-40-1

1202402-40-1; 1202402-47-8 (R-isomer); 2102305-11-1 (racemic)

44537963

Solid powder

0.8

127

1

9

6

30

573

1

CC1=CC=C(O1)C2=C3C(=NC(=N2)N)N(N=N3)CC4=NC(=CC=C4)CO[C@H]5CCOC5

KURQKNMKCGYWRJ-HNNXBMFYSA-N

InChI=1S/C20H21N7O3/c1-12-5-6-16(30-12)17-18-19(24-20(21)23-17)27(26-25-18)9-13-3-2-4-14(22-13)10-29-15-7-8-28-11-15/h2-6,15H,7-11H2,1H3,(H2,21,23,24)/t15-/m0/s1

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (5.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 22.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。