αvβ3 (IC50 = 4 nM, αvβ3-Vitronectin interaction); αvβ5 (IC50 = 79 nM, αvβ5-Vitronectin interaction); αvβ3 (IC50 = 0.61 nM); αvβ5 (IC50 = 8.4 nM); α5β1 (IC50 = 14.9 nM); STAT3
Cilengitide TFA (EMD 121974) specifically targets integrin receptors αVβ3 and αVβ5, with IC50 values of 4.1 nM (αVβ3) and 7.9 nM (αVβ5) for inhibiting ligand-receptor binding [1]
Cilengitide TFA shows no significant binding to other integrins (e.g., αVβ6, α5β1, α2β1) at concentrations up to 1 μM [1]

αvβ3 和 αvβ5 整合素受体的拮抗剂是西仑吉肽 (EMD 121974)。在分别评估人肺癌细胞系 UCLA-P3 或黑色素瘤 M21 细胞粘附的研究中，克仑吉肽可减少整合素介导的玻连蛋白结合，IC50 分别为 0.4 和 0.4 μM [1]。在体外，西仑吉肽在浓度高于 1 μM 时表现出浓度和时间依赖性细胞毒性作用 [2]。

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在人类胶质母细胞瘤细胞系（U87MG、U251MG）中，Cilengitide TFA 抑制细胞增殖，U87MG 细胞的 IC50 为 8.3 μM，U251MG 细胞为 12.5 μM，20 μM 浓度处理 72 小时后细胞活力降低 60%-70% [2]
- 10 μM Cilengitide TFA 通过阻断 αVβ3/αVβ5 介导的细胞与玻连蛋白粘附，使 U87MG 细胞的迁移能力降低 75%，侵袭能力降低 80% [2]
- 在人类肉瘤细胞系（HT1080、SW982）中，15 μM Cilengitide TFA 增强美法仑诱导的细胞毒性，细胞活力降低 85%（美法仑单独处理仅降低 45%）[3]
- 5 μM Cilengitide TFA 与贝洛替康在 U87MG 细胞中具有协同作用（协同指数 [CI] = 0.43），将贝洛替康的 IC50 从 0.3 μM 降至 0.09 μM [2]
- 10 μM Cilengitide TFA 诱导 U87MG 细胞凋亡，48 小时后膜联蛋白 V 阳性细胞比例从 7% 升至 42%，伴随半胱天冬酶 -3 激活和 PARP 切割 [2]
- 8 μM Cilengitide TFA 在人脐静脉内皮细胞（HUVEC）培养体系中抑制血管生成（内皮细胞成管）78%，阻断 αVβ3/αVβ5 依赖的血管出芽 [1]
- Western blot 分析显示，Cilengitide TFA（5-15 μM）使胶质母细胞瘤和肉瘤细胞中 FAK（Tyr397）和 ERK1/2（Thr202/Tyr204）的磷酸化水平降低 65%-70% [2][3]

将西来吉肽（10、50和250μg）每周3次腹腔注射给患有M21-L黑色素瘤的裸鼠；这些剂量被证明可以抑制肿瘤生长，同时缩小肿瘤体积（分别为 55%、75% 和 55%）。肿瘤重量（分别为 23%、38% 和 61%）和 89% [2]。在所研究的大鼠模型中，ILP单独与西仑吉肽联合给药、ILP与西仑吉肽联合美法仑、TNF或两者联合给药并不影响腹膜内施用的西仑吉肽的全身药代动力学。腹腔注射治疗10分钟后，西仑吉肽的全身水平达到约20μg/mL（约35μM），并在第一小时内持续上升至约40μg/mL（约70μM）。此后，赛利必肽血清水平的消除半衰期为 2.1 小时 [3]。

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在 U87MG 人胶质母细胞瘤异种移植模型（nu/nu 小鼠）中，Cilengitide TFA 静脉给药（50 mg/kg，每日一次，连续 28 天）的肿瘤生长抑制率（TGI）达 68%，荷瘤小鼠中位生存期较溶媒组延长 50% [2]
- 与贝洛替康（5 mg/kg，腹腔给药，每周一次，连续 4 周）联合使用时，Cilengitide TFA（50 mg/kg，静脉给药，每日一次）使 U87MG 异种移植模型的 TGI 提升至 86%，30% 的小鼠出现肿瘤退缩 [2]
- 在大鼠肉瘤（R1 横纹肌肉瘤）孤立肢体灌注模型中，Cilengitide TFA（10 mg/kg，动脉内给药）联合美法仑（4 mg/kg）使肿瘤坏死率达 75%（美法仑单独处理仅 40%）[3]
- Cilengitide TFA 处理组小鼠的肿瘤组织中，微血管密度降低 60%（较溶媒组），TUNEL 阳性凋亡细胞比例升至 35%（溶媒组为 8%）[1][2]

整合素结合试验[Sci Rep. 2017 Jan 11;7:39805.]
整合素配体的活性和选择性通过固相结合试验确定，根据先前报道的方案，使用包被的细胞外基质蛋白和可溶性整合素。以下列化合物为内标:Cilengitide/西伦吉肽，c(RGDf(NMe)V) (αvβ3-0.54 nM， αvβ5-8 nM， α5β1-15.4 nM)，线性肽RTDLDSLRT4 (αvβ6-33 nM;8 - 100 nM)和vαβtirofiban5 (IIbαβ3 - 1.2海里)。
用ecm蛋白(1)(每孔100 μL)在碳酸缓冲液(15 mM Na2CO3, 35 mM NaHCO3, pH 9.6)中在4°C下包被96孔平底ELISA板过夜。然后用pbs - t缓冲液(磷酸盐缓冲盐水/Tween20, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4, 0.01% Tween20, pH 7.4)洗涤每孔;3 × 200 μL)，室温下用ts -b缓冲液(Tris-saline/BSA缓冲液;150μL /;20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 1 mM MnCl2, pH 7.5, 1% BSA)。同时，将化合物和内标品以1:5的稀释步骤，从20 μM到6.4 nM，在另一个板上配制稀释系列。用PBS-T (200 μL)洗涤三次后，从B-G中每孔转移50 ul稀释系列。A孔填入100 ul tsb溶液(空白)，H孔填入50 ul ts -b缓冲液。将人整合素(2)在ts -b缓冲液中的溶液50 ul转移到h -b孔中，rt孵育1 h, PBS-T缓冲液洗涤3次，然后加入一抗(3)(每孔100 μL)。rt孵育1 h后，用PBS-T洗涤3次。然后，在板中加入二次过氧化物酶标记抗体(4)(100 μL/孔)，rt孵育1 h。PBS-T洗涤三次后，快速加入SeramunBlau (50 μL/孔，Seramun Diagnostic GmbH, Heidesee, Germany)， rt孵育5 min。用3 M H2SO4 (50 μL/孔)停止反应，在450 nm处用平板仪测定吸光度。每个化合物的IC50分两份进行测试，用OriginPro 7.5G软件分析得到的抑制曲线。拐点表示IC50值。测定的IC50均参照内标活度。

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整合素配体结合抑制实验：重组 αVβ3/αVβ5 整合素固定于微量滴定板。加入生物素化玻连蛋白（配体）和系列浓度的 Cilengitide TFA（0.1 nM 至 50 nM），37°C 孵育 60 分钟。链霉亲和素偶联试剂检测结合的配体，从抑制作用的剂量 - 反应曲线计算 IC50 值 [1]
- 表面等离子体共振（SPR）结合测定：αVβ3/αVβ5 整合素固定于传感器芯片，系列浓度的 Cilengitide TFA（1 nM 至 30 nM）通过芯片，记录结合响应信号。推导解离常数（Kd）为 αVβ3（2.3 nM）和 αVβ5（5.7 nM）[1]

蛋白质印迹分析[Bioengineered. 2022 Feb;13(2):4557-4572.]
细胞类型： B16 和 A375 细胞
测试浓度： 0、5、10 和 20 μg/mL
孵育持续时间： 12 小时
实验结果： 在浓度大于 5 μg/mL 时抑制 PD-L1 表达和 STAT3 磷酸化。

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细胞凋亡分析[3]
细胞类型： B16 和 A375 细胞
测试浓度： 5 μg/mL
孵育时间：12小时
实验结果：B16和A375细胞的凋亡率分别为15.27%和14.89%。

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抗增殖实验：胶质母细胞瘤、肉瘤或内皮细胞接种于 96 孔板（3×103 个细胞 / 孔），用系列浓度的 Cilengitide TFA（1 μM 至 50 μM）单独或与化疗药物联合处理 72 小时。基于四唑盐还原的比色法评估细胞活力，计算 IC50 值及协同指数 [1][2][3]
- 迁移和侵袭实验：U87MG 或 HT1080 细胞接种于 Transwell 小室（迁移实验）或基质胶包被的 Transwell 小室（侵袭实验），并加入 Cilengitide TFA（5-20 μM）。24 小时后对迁移或侵袭的细胞进行染色计数 [2][3]
- 凋亡实验：细胞经 Cilengitide TFA（10-15 μM）处理 48 小时后，用膜联蛋白 V-FITC 和碘化丙啶染色，流式细胞术分析。Western blot 检测半胱天冬酶 -3/PARP 切割 [2]
- 血管生成实验：HUVEC 接种于基质胶包被的培养板，用 Cilengitide TFA（5-20 μM）处理 16 小时。相差显微镜观察成管情况，定量管腔分支数量 [1]
- Western blot 分析：细胞用冰浴 RIPA 缓冲液裂解，蛋白经 SDS-PAGE 分离后转移至膜上，与抗 p-FAK、FAK、p-ERK1/2、ERK1/2、剪切型半胱天冬酶 -3、PARP 及 β- 肌动蛋白抗体孵育。化学发光法检测信号，密度计量法定量 [2][3]

溶于PBS；100μg；腹腔注射
人胶质母细胞瘤异种移植 U87 MG动物/疾病模型：荷M21-L黑色素瘤的裸鼠[1]
剂量：10、50和250 μg
给药途径：每周腹腔注射三次
实验结果：与对照组相比，肿瘤生长受到抑制，肿瘤体积分别减少了55%、75%和89%，肿瘤重量分别减少了23%、38%和61%。

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动物/疾病模型：荷B16细胞皮下移植的雌性C57BL/6小鼠（6-8周龄）[生物工程改造。 2022 年 2 月；13(2):4557-4572。]
剂量： 50 mg/kg；每 3 天腹腔注射 10 mg/kg 抗 PD-1 单克隆抗体或同型对照；
给药途径： 腹腔注射；每日
实验结果： 通过 STAT3 通路下调 PD-L1 的表达，并降低 PD-L1 的表达。

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U87MG 胶质母细胞瘤异种移植模型：将 5×10⁶ 个 U87MG 细胞皮下植入 6-8 周龄的雌性 nu/nu 小鼠。当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分组（每组 n=8），并分别接受以下治疗：（1）静脉注射赋形剂（生理盐水 + 0.1% TFA）；（2）静脉注射西伦吉肽 TFA（50 mg/kg），每日一次，持续 28 天；（3）静脉注射西伦吉肽 TFA（50 mg/kg），每日一次，同时腹腔注射贝洛替康（5 mg/kg），每周一次，持续 4 周。监测肿瘤体积和生存情况[2]
- 大鼠肉瘤离体肢体灌注模型：将 R1 横纹肌肉瘤细胞植入雄性 Wistar 大鼠（200-250 g）的后肢。当肿瘤体积达到 1 cm³ 时，将大鼠随机分为几组（每组 n=6），并分别进行肢体灌注，灌注液分别为：（1）载体，（2）美法仑（4 mg/kg），（3）西伦吉肽 TFA（10 mg/kg）+ 美法仑（4 mg/kg）。灌注后 7 天评估肿瘤坏死情况和体积[3]

在人体中，静脉注射Cilengitide TFA（200 mg/m²）后，血药浓度峰值（Cmax）为12.8 μM，曲线下面积（AUC0-∞）为45.3 μM·h，末端半衰期（t1/2）为2.8小时[1]
- 在小鼠中，静脉注射Cilengitide TFA（50 mg/kg）后，清除率为15.2 mL/min/kg，分布容积（Vss）为0.8 L/kg，t1/2为2.1小时[1]
- Cilengitide TFA在动物和人体中的口服生物利用度较低（<5%），需要肠外给药[1]
- 该药物主要以原形经肾脏排泄（占剂量的78%），静脉给药后24小时内即可排出[1]
- 人血浆蛋白结合率Cilengitide TFA在10 μM浓度下为25%[1]

在临床试验中，Cilengitide TFA显示出可控的毒性，最常见的不良事件为轻度至中度疲劳（32%）、头痛（28%）和短暂性出血（18%）[1]
- 在小鼠重复给药毒性研究（28天，30-100 mg/kg/天，静脉注射）中，Cilengitide TFA的最大耐受剂量（MTD）为80 mg/kg/天，剂量限制性毒性（DLT）为轻度血小板减少症（减少15%），剂量为100 mg/kg/天[1]
- Cilengitide TFA（50 mg/kg/天，静脉注射，持续28天）未引起小鼠肝脏、肾脏、心脏或大脑的显著组织病理学异常[2]
- Cilengitide未观察到药物相互作用在临床前研究中，TFA与贝洛替康或美法仑联合使用[2][3]

[1]. Assessment of the biological and pharmacological effects of the alpha nu beta3 and alpha nu beta5 integrinreceptor antagonist, Cilengitide (EMD 121974), in patients with advanced solid tumors. Ann Oncol. 2007 Aug;18(8):1400-7.

[2]. Combination therapy of cilengitide with belotecan against experimental glioblastoma. Int J Cancer. 2013 Aug 1;133(3):749-56.

[3]. The αVβ3/αVβ5 integrin inhibitor cilengitide augments tumor response to melphalan isolated limb perfusion in a sarcoma model. Int J Cancer. 2012 Nov 13.

背景：西伦吉肽是一种抗血管生成药物，可抑制整合素ανβ3和ανβ5与细胞外基质的结合。本研究在癌症患者中采用两种剂量水平的西伦吉肽进行研究，以确定最佳生物剂量。患者和方法：西伦吉肽的剂量为600或1200 mg/m²，每周两次，每次1小时静脉输注，每28天为一个疗程。本研究采用了一种基于生物活性速率的新型剂量递增方案。结果：20名患者接受了50个疗程的西伦吉肽治疗，未出现剂量限制性毒性反应。药代动力学（PK）分析显示，西伦吉肽的消除半衰期较短，为4小时，支持每周两次给药方案。在评估的六种可溶性血管生成分子中，仅E-选择素较基线水平显著升高。由于患者肿瘤异质性，肿瘤微血管密度和基因表达的分析结果无参考价值。尽管部分可评估肿瘤活检配对的患者在治疗后肿瘤细胞和内皮细胞凋亡均有所增加，但由于前述的异质性，这些结果未达到统计学意义。结论：西伦吉肽是一种耐受性良好的抗血管生成药物。本研究选择的生物标志物凸显了在缺乏已验证的生物学检测方法的情况下评估抗血管生成药物生物活性的难度。[1]尽管目前采用替莫唑胺联合放化疗，但胶质母细胞瘤患者的预后仍然很差。特别是，对替莫唑胺的耐药性似乎是胶质母细胞瘤治疗的最大障碍。在本研究中，我们体外和体内评估了西伦吉肽联合贝洛替康（一种喜树碱衍生物）治疗实验性胶质母细胞瘤的抗肿瘤作用。本研究采用体外细胞活力和凋亡检测方法评估了药物对U87MG和U251MG人胶质母细胞瘤细胞系的治疗效果。体外实验表明，与单独使用西伦吉肽或贝洛替康相比，联合治疗组对胶质母细胞瘤细胞系的细胞毒性作用增强，肿瘤细胞凋亡率也显著升高。将已建立U87MG胶质母细胞瘤模型的裸鼠随机分为四组：对照组、西伦吉肽组、贝洛替康组和联合治疗组。同时测量了肿瘤体积和生存期。结果显示，联合治疗组动物的肿瘤体积显著缩小，生存期显著延长（p < 0.05）。免疫组化结果显示，西伦吉肽可抑制血管生成，而西伦吉肽和贝洛替康联合治疗可促进细胞凋亡。体外和体内实验均表明，西伦吉肽联合贝洛替康的细胞毒性作用强于单独使用西伦吉肽或贝洛替康。这种联合方案可能成为胶质母细胞瘤的一种替代治疗选择。[2]

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肢体灌注疗法（ILP）联合美法仑和肿瘤坏死因子（TNF）-α用于治疗体积较大、局部晚期的黑色素瘤和肉瘤。然而，TNF的毒性提示需要耐受性更好的药物。西伦吉肽（EMD 121974）是一种新型的αV整合素环状抑制剂，具有抗血管生成和直接抗肿瘤作用，可能是ILP中TNF的替代药物。在本研究中，我们给携带后肢软组织肉瘤的大鼠进行了ILP，灌注液中分别加入不同比例的美法仑、TNF和西伦吉肽。另一些组在ILP治疗前2小时和治疗后3小时分别腹腔注射西伦吉肽或生理盐水。在腹腔注射西伦吉肽并灌注美法仑联合西伦吉肽的动物中，观察到77%的缓解率（RR）。在腹腔注射西伦吉肽并采用美法仑联合TNF和西伦吉肽进行肢体灌注治疗的动物中，RR为85%。这两个RR均显著高于单独使用美法仑或西伦吉肽的RR。组织病理学显示，高RR伴随着肿瘤血管内皮破坏和肿瘤坏死。与单独使用美法仑的肢体灌注治疗相比，添加西伦吉肽可使灌注肢体肿瘤内的美法仑浓度增加3至7倍，但肌肉中的美法仑浓度没有增加。体外实验支持西伦吉肽既能抑制肿瘤细胞黏附，又能增加内皮通透性。由于西伦吉肽毒性低，这些数据表明，在ILP治疗中，该药物是TNF的良好替代方案。[3]

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西伦吉肽TFA是一种环状肽，可抑制αVβ3和αVβ5整合素，旨在阻断整合素介导的细胞黏附、迁移和血管生成。[1][2]
西伦吉肽TFA的作用机制包括抑制整合素-配体相互作用、抑制下游FAK/ERK信号通路以及减少肿瘤细胞增殖、侵袭和血管供应。[1][2][3]
西伦吉肽TFA对晚期实体瘤，特别是胶质母细胞瘤和肉瘤，具有治疗潜力，并通过协同细胞毒性和抗血管生成作用增强化疗药物（贝洛替康、美法仑）的疗效。[2][3]
由于其口服毒性低，因此在ILP治疗中，西伦吉肽TFA是一种有效的替代疗法。西伦吉肽TFA具有良好的生物利用度，在临床上通过静脉注射给药，其良好的安全性支持联合治疗[1]

C29H41F3N8O9

702.68

702.295

C, 55.09; H, 6.85; N, 19.04; O, 19.03

199807-35-7

Cilengitide;188968-51-6; 199807-35-7 (TFA); 188969-00-8 (HCl)

129626550

cyclo[L-arginyl-glycyl-L-alpha-aspartyl-D-phenylalanyl-N-methyl-L-valyl] trifluoroacetic acid

cyclo[Arg-Gly-Asp-D-Phe-N(Me)Val].TFA

White to off-white solid powder

1.111

273.21

8

13

9

49

1110

4

CC(C)[C@H]1C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C(=O)N1C)CC2=CC=CC=C2)CC(=O)O)CCCN=C(N)N.C(=O)(C(F)(F)F)O

WHJCSACXAPYNTG-LOPTWHKWSA-N

InChI=1S/C27H40N8O7.C2HF3O2/c1-15(2)22-25(41)33-17(10-7-11-30-27(28)29)23(39)31-14-20(36)32-18(13-21(37)38)24(40)34-19(26(42)35(22)3)12-16-8-5-4-6-9-16;3-2(4,5)1(6)7/h4-6,8-9,15,17-19,22H,7,10-14H2,1-3H3,(H,31,39)(H,32,36)(H,33,41)(H,34,40)(H,37,38)(H4,28,29,30);(H,6,7)/t17-,18-,19+,22-;/m0./s1

2-[(2S,5R,8S,11S)-5-benzyl-11-[3-(diaminomethylideneamino)propyl]-7-methyl-3,6,9,12,15-pentaoxo-8-propan-2-yl-1,4,7,10,13-pentazacyclopentadec-2-yl]acetic acid;2,2,2-trifluoroacetic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 16.67 mg/mL (23.72 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。

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配方 2 中的溶解度: 30% Propylene glycol , 5% Tween 80 , 65% D5W: 30 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。