| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
DNA-PK (IC50 = 0.28 μM); mTOR (IC50 = 5.3 μM)
Compound 401 is a potent inhibitor of DNA-PK (IC50=0.28 μM). Compound 401 reportedly performs poorly in vitro as an inhibitor of PI3K, ATM, and ATR but is effective against mTOR. mTOR is active against compound 401 (IC50=5.3 μM), but p110/p85 PI3K is not (IC50>100 μM). When cells are exposed to Compound 401, these sites—ribosomal protein S6 kinase 1 Thr389 and Akt Ser473—that have been altered by the mTOR-Rictor and mTOR-Raptor complexes are no longer phosphorylated. However, Akt Thr308 phosphorylation, which is PI3K-dependent, is not directly inhibited. Cells lacking DNA-PK show a similar pattern of behavior. Compound 401 inhibits endogenous or immunoprecipitated epitope-tagged mTOR in Raptor immunoprecipitates. At 5 μM or 10 μM, respectively, of compound 401, inhibition of 67% or 78% is obtained in both cases. Contrarily, dose response curves reveal that Compound 401 exhibits only modest inhibition of the p110α/p85α or p110β/p85α PI3K complexes at these concentrations. TSC1+/+ cells are resistant to Compound 401's proliferative inhibitory effects on TSC1-/- fibroblasts[1]. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
化合物 401 是 DNA-PK 的有效抑制剂 (IC50=0.28 μM)。据报道，化合物 401 作为 PI3K、ATM 和 ATR 抑制剂在体外表现不佳，但对 mTOR 有效。 mTOR 对化合物 401 有活性 (IC50=5.3 μM)，但 p110/p85 PI3K 没有活性 (IC50>100 μM)。当细胞暴露于化合物 401 时，这些已被 mTOR-Rictor 和 mTOR-Raptor 复合物改变的位点（核糖体蛋白 S6 激酶 1 Thr389 和 Akt Ser473）不再磷酸化。然而，PI3K 依赖性的 Akt Thr308 磷酸化不会被直接抑制。缺乏 DNA-PK 的细胞表现出类似的行为模式。化合物 401 抑制 Raptor 免疫沉淀物中的内源性或免疫沉淀表位标记的 mTOR。化合物401分别在5μM或10μM时，在两种情况下均获得67％或78％的抑制。相反，剂量反应曲线表明，化合物401在这些浓度下仅表现出对p110α/p85α或p110β/p85αPI3K复合物的适度抑制。 TSC1+/+ 细胞对化合物 401 对 TSC1-/- 成纤维细胞的增殖抑制作用具有抵抗力[1]。
COMPOUND 401 在体外实验中抑制免疫沉淀的表位标记mTOR或Raptor免疫沉淀物中的内源性mTOR。在5 µM浓度下抑制67%，在10 µM浓度下抑制78%[1] COMPOUND 401 在浓度高达10 µM时对p110α/p85α或p110β/p85α PI3K复合物的抑制效果很弱，这与强效抑制剂LY294002不同[1] COMPOUND 401 (25 µM) 对p110α/p85α PI3K复合物中p85α亚基的自磷酸化没有影响[1] 针对40种蛋白激酶的选择性筛选显示，大多数激酶在5 µM COMPOUND 401 作用下抑制率低于20%。显著的例外包括MAPKAPK2 (40%抑制)、Pim1 (44%抑制) 和 Aurora A (44%抑制)[1] 在用PDGF刺激的血清饥饿Rat-1成纤维细胞中，用COMPOUND 401 (1-10 µM)预处理以剂量依赖的方式降低了S6K1 Thr389 (mTORC1位点) 和Akt Ser473 (mTORC2位点) 的磷酸化。在10 µM时，抑制几乎完全。它不抑制PDGF诱导的Erk磷酸化[1] COMPOUND 401 (10 µM) 抑制了Rat-1细胞中苯肾上腺素诱导的S6K1 Thr389磷酸化，该通路不依赖于PI3K活性[1] COMPOUND 401 抑制了转染了Akt磷酸化位点突变体的COS7细胞中胰岛素诱导的Akt Ser473磷酸化，但不抑制Thr308磷酸化，表明它不抑制PDK1[1] 在缺乏DNA-PK的M059J胶质母细胞瘤细胞中，COMPOUND 401 (1-10 µM) 降低了IGF-1诱导的Akt Ser473和S6K1 Thr389磷酸化，证实其效应并非由于DNA-PK抑制[1] 用10 µM COMPOUND 401 长期处理（长达24小时）TSC1-/-小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs），阻断了S6K1 Thr389磷酸化并维持了低水平的Akt Ser473磷酸化，这与雷帕霉素不同，后者会增加Akt Ser473磷酸化[1] COMPOUND 401 以剂量依赖的方式强烈抑制了TSC1-/- MEFs的增殖（半数最大效应浓度约2 µM）。在10 µM浓度下，处理1天后细胞数量减少54%，2天后减少84%。TSC1+/+ MEFs具有耐药性[1] COMPOUND 401 的生长抑制作用并非由于普遍毒性（TSC1+/+ MEFs未受影响）或DNA-PK抑制（TSC1-/- MEFs对DNA-PK抑制剂AMA37具有耐药性）[1] COMPOUND 401 (10 µM) 在处理24小时后，诱导TSC1-/- MEFs的凋亡显著增加（通过细胞质核小体水平测量），而雷帕霉素则没有[1] |
| 酶活实验 |
使用 293fectin 将 AU1-mTOR 的 cDNA 转染 FreeStyle 293-F 细胞。两天后裂解细胞，并使用 AU1 抗体制备 mTOR 免疫沉淀物。 Raptor 抗体还可用于免疫沉淀未转染细胞中的 mTORC1 复合物。作为底物，细菌表达的谷胱甘肽 S-转移酶 (GST)-4E-BP1 用于测量在载体 (DMSO) 或化合物 401（1、5 和 10 M）存在下免疫沉淀物中的激酶活性。通过在 SDS 样品缓冲液中煮沸样品来停止激酶反应，然后对样品进行 SDS-PAGE。放射自显影可以识别磷酸化的 4E-BP1。闪烁计数用于测量带中的放射性[1]。
对于mTOR激酶实验，从转染的FreeStyle 293-F细胞中免疫沉淀AU1-mTOR，或使用Raptor抗体从未转染的细胞中免疫沉淀mTORC1复合物。在免疫沉淀物中的激酶活性在存在载体或化合物的情况下进行测定，使用细菌表达的GST-4E-BP1作为底物，反应体系中含有ATP。通过放射自显影检测磷酸化的4E-BP1，并通过液体闪烁计数进行定量[1] 对于PI3K脂质激酶实验，将载体或化合物在试管中干燥，用PI3K测定缓冲液重新溶解，并与酶（p110α/p85α 或 p110β/p85α 复合物）混合。通过添加超声处理的L-α-磷脂酰肌醇以及含有ATP和[γ-32P]ATP的反应混合液来启动激酶反应。孵育后，提取脂质，通过薄层色谱分离，放射性PI 3-磷酸斑点通过放射自显影观察并通过液体闪烁计数定量[1] 对于PI3K自磷酸化实验，将载体或化合物干燥，用自磷酸化缓冲液重新溶解，并与p110α/p85α PI3K混合。通过添加ATP和[γ-32P]ATP启动反应。孵育后，终止反应，通过SDS-PAGE和放射自显影分析样品以检测磷酸化的p85α[1] |
| 细胞实验 |
对于信号通路分析，将细胞（Rat-1、COS7、M059J、MEFs）血清饥饿（通常过夜或20-22小时），然后用指定浓度的COMPOUND 401（溶解在DMSO中）或载体（DMSO）预孵育20分钟。然后用适当的激动剂（PDGF、苯肾上腺素、胰岛素、IGF-1）刺激细胞指定时间（5-20分钟）。用冷PBS洗涤细胞并裂解。取等量的澄清裂解液蛋白，通过SDS-PAGE和Western blotting分析，使用磷酸化特异性抗体（例如，抗磷酸化S6K1 Thr389、抗磷酸化Akt Ser473/Thr308）和总蛋白抗体。使用HRP标记的二抗和化学发光法检测信号[1]
对于增殖实验，将TSC1-/- 或 TSC1+/+ MEFs以每6厘米培养皿0.5 x 10^5个细胞的密度铺板。第二天，加入药物或载体（DMSO）。1或2天后，使用台盼蓝排除法计数活细胞[1] 对于凋亡实验，将TSC1-/- MEFs接种到96孔板中（每孔2000个细胞）。第二天加入药物或载体。24小时后，裂解细胞并使用商业酶联免疫吸附测定试剂盒定量细胞质部分的核小体含量[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
化合物 401 是一种源自 LY294002 的合成小分子，最初设计为 DNA-PK 抑制剂，但也发现其能抑制 mTOR[1]。它是一种用于研究 mTOR 激酶抑制的工具化合物，避免了 PI3K 抑制带来的副作用[1]。与仅抑制 mTORC1 的雷帕霉素不同，化合物 401 能同时抑制 mTORC1（负责 S6K1 磷酸化）和 mTORC2（负责 Akt Ser473 磷酸化）复合物[1]。在 mTOR 信号过度激活的细胞（例如 TSC1 缺陷细胞）中，化合物 401 比雷帕霉素更能有效地抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡，这可能是因为化合物 401 不会像雷帕霉素那样上调促生存的 Akt 活性。研究表明，mTOR激酶抑制剂（如化合物401）在治疗依赖于mTOR活性升高的增生性疾病（例如与结节性硬化症相关的肿瘤）方面，可能比雷帕霉素类似物更有效。[1]
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| 分子式 |
C16H15N3O2
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|---|---|---|
| 分子量 |
281.32
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| 精确质量 |
281.116
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| 元素分析 |
C, 68.31; H, 5.37; N, 14.94; O, 11.37
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| CAS号 |
168425-64-7
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
10039361
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
456.9±55.0 °C at 760 mmHg
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| 熔点 |
214 °C
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| 闪点 |
230.1±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.1 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.695
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| LogP |
2.36
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| tPSA |
46.84
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
1
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| 重原子数目 |
21
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| 分子复杂度/Complexity |
532
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O1C([H])([H])C([H])([H])N(C2=C([H])C(N3C([H])=C([H])C4=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C4C3=N2)=O)C([H])([H])C1([H])[H]
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| InChi Key |
BVRDQVRQVGRNHG-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H15N3O2/c20-15-11-14(18-7-9-21-10-8-18)17-16-13-4-2-1-3-12(13)5-6-19(15)16/h1-6,11H,7-10H2
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| 化学名 |
2-morpholin-4-ylpyrimido[2,1-a]isoquinolin-4-one
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 1 mg/mL (3.55 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 1 mg/mL (3.55 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: 1 mg/mL (3.55 mM) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.5547 mL | 17.7734 mL | 35.5467 mL | |
| 5 mM | 0.7109 mL | 3.5547 mL | 7.1093 mL | |
| 10 mM | 0.3555 mL | 1.7773 mL | 3.5547 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Effect of compound 401 on mTOR and PI3K activitiesin vitro.J Biol Chem.2007 Aug 17;282(33):24463-70. |
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Selective inhibition of Akt Ser473phosphorylation by compound 401.J Biol Chem.2007 Aug 17;282(33):24463-70. |
Effect of compound 401 on mTOR signaling in M059J glioblastoma cells.J Biol Chem.2007 Aug 17;282(33):24463-70. |
DNA-PK-IN-15
Lys(CO-C3-p-I-Ph)-OMe
DNA-PK-IN-13
DNA-PK-IN-14
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