| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
ATM ( IC50 = 4.1 μM )
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：在体外，CP-466722 被确定为一种潜在的抑制剂，可降低纯化的 ATM 激酶磷酸化 GST-p53(1–101) 底物的活性。此外，CP-466722 还显示出对 abl 和 src 激酶的抑制活性。在 HeLa 细胞中，6μM 剂量的 CP-466722 通过可逆抑制电离辐射 (IR) 诱导的 ATM 激酶活性来抑制 ATM 依赖性磷酸化。此外，在 MCF-7 人乳腺癌细胞以及原代和永生化二倍体人成纤维细胞中，CP-466722 也会抑制 ATM 依赖性 p53 诱导。为了响应 IR，CP-466722 增加了 HeLa 细胞中具有 G2/M DNA 含量的细胞比例，并降低了具有 G1 期 DNA 含量的细胞比例。短暂暴露于 CP-466722 4 小时可使 HeLa 细胞对 IR 敏感，而不影响细胞铺板或细胞活力。激酶测定：为了筛选 ATM 激酶活性的小分子抑制剂，采用了体外激酶测定，并开发了 ELISA 测定，可测量 ATM 下游靶标 p53 的磷酸化状态。纯化重组 GST-p53(1-101) 和全长 Flag 标记的 ATM 和 ATR，用于 ELISA 和体外激酶测定。简而言之，将 Nunc 96 孔 Maxisorp 板用 2μg 纯化的重组 GST-p53(1-101) 的 PBS 溶液包被过夜（4°C）。所有后续孵育均在室温下进行。洗涤板（0.05%v/v-Tween/PBS），然后在终体积为 80μL 的反应缓冲液（20 mM HEPES、50 mM NaCl、 10 mM MgCl2、10 mM MnCl2、1 mM DTT 和 1 μM ATP），存在或不存在 CP-466722。将 CP-466722 (10μM) 添加到板中，一式两份，然后孵育激酶测定（90 分钟）。将板洗涤 (0.05%v/v-Tween/PBS)、封闭（1 小时，1%w/v-BSA/PBS）并漂洗，然后添加抗 Phospho(Ser15)-p53 抗体 (1:1000/PBS)到板中并孵育（1小时）。为了减少非特异性结合，在用 HRP 缀合的山羊抗兔 IgG 二抗 (1:5000/PBS) 孵育（1 小时）之前洗涤板（0.05%v/v-Tween/PBS）。使用 TMB 底物试剂检测与磷酸化 GST-p53(1–101) 蛋白连接的二抗。在确定吸光度 (λ450nm) 之前，将板展开（15 分钟–30 分钟）并停止反应（1 M H2SO4 最终浓度）。 CP-466722 在 ELISA 测定中抑制 ATM 激酶活性，其特征在于使用体外激酶测定抑制 ATM/ATR 激酶。使用抗 Phospho(Ser15)-p53 抗体进行的蛋白质印迹可用作 ATM/ATR 抑制的读数。 Upstate 针对市售激酶组对 CP466722 (10 μM) 进行了扩展分析。细胞测定：HeLa 或 AT（表达 hTERT 的 GM02052）细胞一式三份铺板并孵育 24 小时。在 IR (0-10Gy) 之前对细胞进行预处理：DMSO、CP466722 或 KU55933。 IR后将细胞孵育4小时，然后除去培养基，洗涤细胞(PBS)，胰酶消化，计数并在没有药物的情况下重新铺板(2000个细胞/板，10cm板)并孵育10天。在菌落计数之前，对细胞进行洗涤 (PBS)、染色（PBS、0.0037%v/v-甲醛、0.1%w/v-结晶紫）、漂洗 (dH2O) 并干燥。定义的群体（> 50 个细胞）被计为一个存活集落，数据计算为相对于对照板+/- SE 的存活集落百分比。
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| 酶活实验 |
开发了 ELISA 测定法来测量 ATM 下游靶标 p53 的磷酸化状态，并采用体外激酶测定法来筛选 ATM 激酶活性的小分子抑制剂。为了用于 ELISA 和体外激酶测试，纯化了重组 GST-p53(1-101) 和全长带 Flag 标签的 ATM 和 ATR。总之，将 PBS 中的 2μg 纯化重组 GST-p53(1-101) 在 4 °C 下在 Nunc 96 孔 Maxisorp 板上包被过夜。接下来的几次孵育在室温下进行。最终体积为 80μL 的反应缓冲液（20 mM HEPES、50 mM NaCl、10 mM MgCl2、10 mM MnCl2、1 mM DTT 和 1 μM ATP ），洗涤板（0.05%v/v-Tween/PBS），然后在存在或不存在 CP-466722 的情况下添加纯化的重组全长 ATM 激酶（30 ng–60 ng）。将 CP-466722 (10μM) 一式两份添加到板中后，将激酶测定孵育 90 分钟。将抗 Phospho(Ser15)-p53 抗体 (1:1000/PBS) 添加到板中，然后冲洗、封闭（1 小时，1%w/v-BSA/PBS）并孵育（1 小时）清洁板后（0.05%v/v-Tween/PBS）。将板清洗 (0.05%v/v-Tween/PBS) 以减少非特异性结合，然后与 HRP 缀合的山羊抗兔 IgG 二抗 (1:5000/PBS) 孵育 1 小时。 TMB 底物试剂用于识别与磷酸化 GST-p53(1–101) 蛋白连接的二抗。在测定吸光度（λ450nm）之前，将板显色 15-30 分钟，并在最终浓度为 1 M H2SO4 时停止反应。体外激酶测定用于表征 CP-466722，其在 ELISA 测定中抑制 ATM 激酶活性，涉及 ATM/ATR 激酶的抑制。抗 Phospho(Ser15)-p53 抗体用于蛋白质印迹法来测量 ATM/ATR 抑制。 Upstate 针对一组市售激酶对 CP466722 (10 μM) 进行了扩展分析。
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| 细胞实验 |
将表达 hTERT 细胞的三重平板 HeLa 或 AT (GM02052) 孵育一整天。在 IR (0-10Gy) 之前用 DMSO、CP466722 或 KU55933 对细胞进行预处理。内反射后，将细胞孵育四个小时。然后，除去培养基，用PBS漂洗细胞，胰蛋白酶处理，计数，并在没有任何药物的情况下重新铺板（2000个细胞/板，10cm板），然后将它们孵育十天。在对集落进行计数之前，细胞要经过一系列程序，包括在 PBS 中洗涤、在 PBS 中染色、在 dH2O 中漂洗和干燥。存活的集落定义为至少有 50 个细胞的群体。数据表示为相对于对照板的存活菌落的百分比加上或减去标准误差。
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| 动物实验 |
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
2-(6,7-dimethoxy-4-quinazolinyl)-5-(2-pyridinyl)-1,2,4-triazol-3-amine is a member of quinazolines.
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| 分子式 |
C17H15N7O2
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|---|---|---|
| 分子量 |
349.35
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| 精确质量 |
349.128
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| 元素分析 |
C, 58.45; H, 4.33; N, 28.07; O, 9.16
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| CAS号 |
1080622-86-1
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
44551660
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
642.3±65.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
342.2±34.3 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.9 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.737
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| LogP |
0.83
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| tPSA |
114.59
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
26
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| 分子复杂度/Complexity |
470
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
NC1=NC(C2=NC=CC=C2)=NN1C3=C4C=C(OC)C(OC)=CC4=NC=N3
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| InChi Key |
ILBRKJBKDGCSCB-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C17H15N7O2/c1-25-13-7-10-12(8-14(13)26-2)20-9-21-16(10)24-17(18)22-15(23-24)11-5-3-4-6-19-11/h3-9H,1-2H3,(H2,18,22,23)
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| 化学名 |
2-(6,7-dimethoxyquinazolin-4-yl)-5-pyridin-2-yl-1,2,4-triazol-3-amine
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.8625 mL | 14.3123 mL | 28.6246 mL | |
| 5 mM | 0.5725 mL | 2.8625 mL | 5.7249 mL | |
| 10 mM | 0.2862 mL | 1.4312 mL | 2.8625 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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ATR kinase-IN-2
ATR kinase-IN-3
CA-M11
ATM Inhibitor-11
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