CP-673451   中文名称: CP 673451

PDGFRα (IC50 = 10 nM); PDGFRβ (IC50 = 1 nM)
CP-673451 is a potent and selective inhibitor of platelet-derived growth factor receptors (PDGFRs), with IC₅₀ values of 5 nM for PDGFRβ, 10 nM for PDGFRα, and 40 nM for vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR2) [1]
It exhibits weak inhibitory activity against c-Kit (IC₅₀ = 120 nM) and no significant activity against epidermal growth factor receptor (EGFR), Abl, or Src kinases (IC₅₀ > 1000 nM) [1]
In extended kinase profiling, the drug showed no off-target inhibition of 28 other kinases (IC₅₀ > 500 nM) [2]

CP 673451 是 PDGFRα/β 的选择性抑制剂，IC50 为 10 nM/1 nM，其选择性是其他血管生成受体的 450 倍以上。在胶质母细胞瘤中，CP-673451 (33 mg/kg) 在 4 小时内对 PDGFR-β 受体提供 >50% 的抑制作用，相当于血浆中 Cmax 时的 EC50 为 120 ng/mL。在海绵血管生成模型中，CP-673451 在 3 mg/kg 剂量下可抑制 70% 的 PDGF-BB 刺激的血管生成（qd × 5，口服，相当于 Cmax 时的 5.5 ng/mL）。 CP-673451 通过减少 GSK-3α 和 GSK-3β 磷酸化的机制降低细胞增殖率。在 RD 和 RUCH2 培养物中，CP-673451 会损害横纹球形成能力和细胞分化，导致衰老增加。激酶测定：PDGFR-β 细胞内部分的谷胱甘肽 S 转移酶标记的激酶结构域构建体（氨基酸 693-1401，登录号 J03278）在 Sf-9 细胞（杆状病毒表达系统）中表达。酶动力学通过将酶与磷酸化缓冲液中逐渐增加的 ATP 浓度一起孵育来确定 [50 mmol/L HEPES (pH 7.3)、125 mmol/L NaCl、24 mmol/L MgCl2，在预先涂有 100μl 的 Nunc Immuno MaxiSorp 96 孔板中μL 100 μg/mL 聚-Glu-Tyr（4:1 比例）在 PBS 中稀释。 10分钟后，洗涤板（PBS，0.1% Tween 20），与抗磷酸酪氨酸-辣根过氧化物酶抗体一起孵育，并在PBS、0.05% Tween 20、3% BSA中在室温下稀释30分钟。如上所述洗涤板并与3,3,5,5-四甲基联苯胺一起孵育。添加等体积的 0.09 NaH2SO4 终止反应。然后在读板器上于 450 nm 处对磷酸酪氨酸依赖性信号进行定量。对于常规酶测定，将酶与 10 μM（最终）ATP 在 DMSO 中稀释的化合物存在下（1.6% v/v DMSO 测定最终）在室温下在板中孵育 30 分钟，如上所述，事先涂有 100 μL 6.25 μg/mL 聚-Glu-Tyr。其余测定如上进行，IC 50 值计算为对照的抑制百分比。细胞测定：已产生稳定表达全长PDGFR和VEGFR的PAE细胞。对于基于细胞的选择性测定，PAE 细胞用全长人 PDGFR-a、PDGFR-h 或 VEGFR-2 转染。将细胞以 4×105 个细胞/mL 接种在 50 μL 生长培养基（Hams F-12 培养基中，添加 10% 胎牛血清、青霉素和链霉素各 50,000 单位，以及 500 μg/mL 庆大霉素）于 96 孔板中。 6 至 8 小时后，用 50 μL 去血清培养基（如上所述，但含有 0.1% 胎牛血清）更换生长培养基，并将细胞孵育过夜。在添加化合物之前，立即用 95 μL 去血清培养基替换培养基。将化合物用 100% DMSO 稀释，以 0.25% v/v 的最终 DMSO 浓度添加到细胞中，并在 37°C 下孵育 10 分钟。用适当的配体刺激细胞并如上所述再孵育 8 分钟。除去培养基，用 PBS 洗涤细胞一次，然后用 50 μL HNTG 缓冲液裂解 [20 mmol/L HEPES (pH 7.5)、150 mmol/L NaCl、2% Triton X-100、10% 甘油、5 μmol/ L EDTA、2 mmol/L NaVO4 和 1 片不含 EDTA 的完全蛋白酶抑制剂片剂每 25 mL] 室温 5 分钟。然后用 50 μL HG 缓冲液 [20 mmol/L HEPES (pH 7.5)，10% 甘油] 稀释裂解物。将稀释的细胞裂解液充分混合，将50μL上清液转移至ELISA捕获板，并在室温下振荡孵育2小时。 ELISA 捕获板的制备方法如下：用 100 μL/孔的 5 μg/mL 兔抗人 PDGFR-h、抗 PDGFR-a 或抗 VEGFR-2 抗体包被 96 孔 ReactiBind 山羊抗兔板 60 至 90分钟。 2小时孵育结束时，洗涤板（PBS，0.1% Tween 20），然后与抗磷酸酪氨酸-辣根过氧化物酶抗体（在PBS，0.05% Tween 20中稀释）在室温下孵育30分钟。再次洗涤板，然后与四甲基联苯胺一起温育并如上所述进行评估。 IC50值计算为对照的抑制百分比。

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CP-673451剂量依赖性抑制PDGFR过表达肿瘤细胞系增殖：C6大鼠胶质瘤细胞（PDGFRβ阳性，IC₅₀=0.08μM）、UM-UC-3人膀胱癌细胞（PDGFRα阳性，IC₅₀=0.1μM）。浓度≥0.05μM时，可阻断PDGFR磷酸化（β亚型Tyr751，α亚型Tyr754）及下游AKT/ERK1/2信号通路[1]
在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中，该药物（0.5-2μM）在1μM浓度下抑制血管内皮生长因子（VEGF）诱导的管腔形成约50%，1.5μM浓度下减少细胞迁移约60%，发挥抗血管生成作用[2]
对PDGFR低表达肿瘤细胞（如A549肺癌细胞）影响极小，即使在5μM浓度下，细胞活力仍维持在85%以上[1]

CP 673451 可抑制无胸腺小鼠皮下生长的多种人类肿瘤异种移植物的肿瘤生长 (ED50 < 33 mg/kg)，包括 H460 人类肺癌、Colo205 和 LS174T 人类结肠癌以及 U87MG 人类多形性胶质母细胞瘤。在携带 RUCH2 异种移植物的小鼠中，CP 673451 可减少肿瘤生长和基质细胞浸润。

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CP-673451以30mg/kg/天的剂量口服给药21天，显著抑制裸鼠C6胶质瘤异种移植瘤生长。与对照组相比，肿瘤体积减少约60%，瘤内PDGFRβ磷酸化水平下调约80%[1]
在UM-UC-3膀胱癌异种移植瘤小鼠模型中，该药物（50mg/kg/天，口服28天）的肿瘤生长抑制率达70%，中位生存期延长35%[2]
在C6异种移植瘤中减弱肿瘤血管生成：治疗组CD31⁺微血管密度减少约45%，证实其抗血管生成活性[1]

Sf-9 细胞（杆状病毒表达系统）表达 PDGFR-β 细胞内部分的谷胱甘肽 S 转移酶标记的激酶结构域构建体（氨基酸 693-1401，登录号 J03278）。磷酸化缓冲液 [50 mmol/L HEPES (pH 7.3)、125 mmol/L NaCl、24 mmol/L MgCl₂，位于预先涂有 100 μL 100 μg/ 的 Nunc Nutrition MaxiSorp 96 孔板中使用在 PBS 中稀释的 mL 聚-Glu-Tyr（4:1 比例）在逐渐增加的 ATP 浓度下孵育酶，以确定酶的动力学。将板与抗磷酸酪氨酸辣根过氧化物酶抗体一起孵育 10 分钟，然后在 PBS、0.05% Tween 20 和 3% BSA 中进行 30 分钟的室温稀释步骤。在前面提到的洗涤之后，将板与 3,3',5,5'-四甲基联苯胺一起孵育。加入等体积的0.09 NaH₂SO₄，终止反应。接下来，使用读板器在 450 nm 处测量磷酸酪氨酸依赖性信号。对于标准酶测试，在用 DMSO 稀释的化合物存在的情况下，在前面提到的涂有 100 μL 的板中将酶与 10 μM（最终）ATP 一起在室温下孵育 30 分钟（1.6% v/v DMSO 测定最终） 6.25 μg/mL 聚谷氨酸酪氨酸。如前所述完成测定，并计算 IC50 值作为对照抑制的百分比。

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将重组人PDGFRα、PDGFRβ和VEGFR2激酶结构域分别与系列稀释的CP-673451（0.001-100nM）在含10μM ATP和合成肽底物（PDGFR/VEGFR特异性序列）的激酶缓冲液中孵育。37°C反应60分钟后，采用放射免疫法（³²P-ATP掺入法）检测磷酸化底物。通过与溶媒对照组的放射性对比计算抑制率，从S型量效曲线中得出IC₅₀值[1]
为评估选择性，采用相同方案检测该药物对重组EGFR、Abl和Src激酶的抑制活性。反应条件（缓冲液成分、温度、ATP浓度）保持一致，在100nM CP-673451浓度下仅观察到<10%的抑制率[1]

可以产生一致表达全长 PDGFR 和 VEGFR 的 PAE 细胞。将全长人 PDGFR-a、PDGFR-h 或 VEGFR-2 转染至 PAE 细胞中，以进行基于细胞的选择性测定。 96 孔板每孔使用 50 μL 生长培养基（Ham's F-12 培养基，添加 10% 胎牛血清、50,000 单位青霉素和链霉素以及 500 μg/mL 庆大霉素），以 4 的密度接种细胞。 ×10 3 细胞/mL。 6 至 8 小时后，将细胞在 50 μL 去血清培养基（如上所述，但含有 0.1% 胎牛血清）中孵育过夜，以代替生长培养基。就在添加化合物之前，将 95 μL 去血清培养基添加至培养基中。将化合物在 100% DMSO 中稀释后，以 DMSO 最终浓度 0.25% v/v 添加到细胞中，然后在 37°C 下孵育 10 分钟。使用适当的配体刺激细胞，然后将它们再孵育八分钟。取出培养基，用 PBS 冲洗细胞一次，然后在 50 μL HNTG 缓冲液（20 mmol/L HEPES (pH 7.5)、150 mmol/L NaCl、2% Triton X-）中室温裂解 5 分钟。每 25 mL 100、10% 甘油、5 μmol/L EDTA、2 mmol/L NaVO₄ 和 1 片不含 EDTA 的完全蛋白酶抑制剂片剂。然后将 50 μL HG 缓冲液（20 mmol/L HEPES (pH 7.5)，10% 甘油）] 添加到裂解液中以稀释它们。稀释的细胞裂解物充分混合后，将 50 μL 上清液添加到 ELISA 捕获板中，并在搅拌的同时在室温下孵育两小时。制备 ELISA 捕获板的过程是用 100 μL/孔的兔抗人 PDGFR-h、抗 PDGFR-a 或抗 VEGFR-2 抗体包被 96 孔 ReactiBind 山羊抗兔板 60 至 90 分钟。 2 小时孵育期后，将板在含有 0.1% Tween 20 的 PBS 中清洗，然后与稀释的抗磷酸酪氨酸辣根过氧化物酶抗体（含有 0.05% Tween 20 的 PBS）在室温下孵育 30 分钟。再次清洁板，添加四甲基联苯胺，并如前所述对它们进行评估。对照的抑制百分比用于计算 IC50 值。

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将C6和UM-UC-3细胞以5×10³个细胞/孔接种到96孔板中，用CP-673451（0.01-10μM）处理72小时，采用四唑盐（MTT）法检测细胞活性并计算IC₅₀值[1,2]
蛋白质印迹分析流程：将C6细胞血清饥饿16小时，用0.02-0.2μM CP-673451处理1小时，再用PDGF-BB（50ng/mL）刺激10分钟。裂解细胞后，将裂解液与抗p-PDGFRβ（Tyr751）、抗p-AKT（Ser473）、抗p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）及抗GAPDH（内参）抗体孵育[1]
HUVEC管腔形成实验：向基质胶包被的24孔板中接种经0.5-2μM CP-673451预处理1小时的HUVECs（2×10⁴个细胞/孔），加入VEGF（20ng/mL）。24小时后，显微镜下观察并定量管腔形成情况[2]

本研究采用裸鼠皮下A549异种移植瘤模型评估CP-673451的抗癌疗效。简而言之，将2×10⁶个A549细胞/只注射到裸鼠腋窝。当肿瘤体积达到70 mm³时，将小鼠随机分为两组：一组为对照组，另一组为CP-673451治疗组（每组n=6），分别给予低剂量（20 mg/kg）和高剂量（40 mg/kg）的CP-673451（载体为10% 1-甲基-2-吡咯烷酮和90%聚乙二醇300）。CP-673451（20或40 mg/kg/天）或载体通过腹腔注射给药。在治疗过程中，每天使用游标卡尺盲法测量移植瘤的大小。同时测量小鼠的体重。计算肿瘤体积。治疗结束后，切除肿瘤并进行检查，然后对小鼠实施安乐死。

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将C6胶质瘤细胞（5×10⁶个细胞/只小鼠）皮下植入6-8周龄的裸鼠体内，建立异种移植瘤模型。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将小鼠随机分为对照组和治疗组。CP-673451悬浮于0.5%羧甲基纤维素（CMC）溶液中，以30 mg/kg/天的剂量口服给药，连续21天。每3天使用游标卡尺测量肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2）[1]
对于UM-UC-3异种移植研究：将UM-UC-3细胞（4×10⁶个细胞/只小鼠）植入裸鼠体内，并口服CP-673451，剂量为50 mg/kg/天，持续28天。每日记录生存时间，并在处死小鼠时收集肿瘤组织进行CD31免疫组织化学染色（微血管密度分析）[2]

CP-673451在小鼠单次口服30 mg/kg剂量后的生物利用度约为40%。给药后1.5小时达到最大血浆浓度(Cmax)为2.5 μg/mL，血浆半衰期(t₁/₂)约为6小时[1]
在大鼠中，口服50 mg/kg剂量后，24小时AUC₀为38 μg·h/mL。该药物优先分布于肿瘤组织，给药后4小时的肿瘤/血浆浓度比为2.3[2]
它主要在人肝微粒体中通过细胞色素P450 3A4 (CYP3A4)代谢，代谢清除率为1.2 mL/min/mg蛋白[1]

小鼠以 30 mg/kg/天的剂量连续 21 天接受 CP-673451 治疗后，体重略有下降（约 5%），但未出现明显的肝肾毒性。血清 ALT、AST、肌酐和 BUN 水平均在正常范围内 [1]。通过平衡透析法测定，CP-673451 在人血浆中的血浆蛋白结合率约为 90% [1]。体外细胞毒性试验表明，该药物在浓度高达 2 μM 时，对正常人星形胶质细胞 (NHA) 或膀胱上皮细胞 (SV-HUC-1) 均无显著损伤 [2]。

[1]. Cancer Res . 2005 Feb 1;65(3):957-66.

[2]. Cancer Res . 2013 Apr 1;73(7):2139-49.

1-[2-[5-(2-甲氧基乙氧基)-1-苯并咪唑基]-8-喹啉基]-4-哌啶胺是一种氨基喹啉类化合物。

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CP-673451 是一种小分子口服活性抑制剂，旨在靶向 PDGFR/VEGFR2 信号通路，该通路对肿瘤增殖和血管生成至关重要[1]。
它被开发用于治疗 PDGFR 驱动的实体瘤，包括胶质瘤和膀胱癌——在这些肿瘤中，PDGFR 过表达与预后不良相关[2]。
临床前数据表明，其对 PDGFR 和 VEGFR2 的双重抑制作用，通过靶向肿瘤细胞和肿瘤微环境（血管生成），产生协同抗肿瘤效应[1]。

C24H27N5O2

417.5

417.216

C, 69.04; H, 6.52; N, 16.77; O, 7.66

343787-29-1

10158940

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

656.3±65.0 °C at 760 mmHg

350.7±34.3 °C

0.0±2.0 mmHg at 25°C

1.677

2.77

78.43

1

6

6

31

572

0

O(C([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])[H])C1C([H])=C([H])C2=C(C=1[H])N=C([H])N2C1C([H])=C([H])C2C([H])=C([H])C([H])=C(C=2N=1)N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])C1([H])[H])N([H])[H]

DEEOXSOLTLIWMG-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H27N5O2/c1-30-13-14-31-19-6-7-21-20(15-19)26-16-29(21)23-8-5-17-3-2-4-22(24(17)27-23)28-11-9-18(25)10-12-28/h2-8,15-16,18H,9-14,25H2,1H3

1-[2-[5-(2-methoxyethoxy)benzimidazol-1-yl]quinolin-8-yl]piperidin-4-amine

CP-673451; CP673451; CP 673451; CP-673,451; CP 673,451

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (6.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 27.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (6.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 27.5mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 30% PEG 400+5% propylene glycol+1% Tween 80+ddH2O: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。