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CP21R7

别名: CP 21; CP-21; CP21 3-(3-氨基苯基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)吡咯-2,5-二酮
目录号: V3199 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
CP21R7（也称为 CP21）是一种有效且高选择性的 GSK-3β 抑制剂，可以有效激活经典 Wnt 信号传导，对 GSK-3β 的 IC(50) 为 0.6nM。
CP21R7 CAS号: 125314-13-8
产品类别: GSK-3
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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产品描述
CP21R7（也称为 CP21）是一种有效且高度选择性的 GSK-3β 抑制剂，可以有效激活经典 Wnt 信号传导，对 GSK-3β 的 IC(50) 为 0.6nM。它是一种马来酰亚胺类似物，引入了极性基团，使化合物具有良好的生物利用度。 CP21R7 对 GSK-3β 的 IC50 为 0.6nM，对 GSK-3β 的选择性比一组其他激酶高 100 倍以上，并且 CP21R7 在体内大鼠骨质疏松模型中显示出功效。与 CP21R7 结合的 GSK-3β 蛋白的 X 射线结构揭示了模板的结合模式，并为未来的优化机会提供了见解。
生物活性&实验参考方法
体外研究 (In Vitro)
CP21R7（化合物 9）的 IC50 为 1.8 nM，是 GSK-3β 的选择性抑制剂；其针对 PKCα 的 IC50 为 1900 nM[1]。 CP21R7（CP21，3 μM）具有最大活性，可强烈刺激经典 Wnt 信号传导。 CP21 显着提高细胞内 β-连环蛋白的总水平。 BMP4 和 CP21 共同导致 hPSC 分化为中胚层 [2]。
1. 激活人多能干细胞（hPSCs）中的经典Wnt信号通路：CP21R7（一种GSK3β抑制剂）处理可激活hPSCs中β-连环蛋白（β-catenin）启动子活性（荧光素酶实验检测）。实验采用CP21R7的6点3倍系列稀释浓度（10、3、1、0.3、0.1、0.03μM，最后两个浓度数据未显示）。免疫荧光染色显示，CP21R7处理24小时后hPSCs中β-catenin的定位发生改变。实时定量聚合酶链反应（qPCR）证实，CP21R7可上调hPSCs中β-catenin靶基因的表达[2]
2. 诱导hPSCs向中胚层命运分化：CP21R7与BMP4联合处理可快速使hPSCs定向分化为中胚层细胞。免疫荧光染色显示，在分化的前4天，hPSCs中多能性标志物、中胚层标志物和内胚层标志物的表达发生改变[2]
3. 促进血管细胞分化：经CP21R7和BMP4诱导中胚层命运后，后续加入VEGF-A可使hPSCs分化为血管内皮细胞（hPSC-ECs），6天内分化效率超过80%；加入PDGF-BB可使hPSCs分化为血管平滑肌细胞（hPSC-VSMCs），分化效率同样高达80%以上。通过表面标志物（ECs为CD144，VSMCs为CD140b）进行流式细胞术分选，可将细胞纯度提升至99%[2]
4. 分化后血管细胞的功能表征：
- hPSC-ECs表达内皮细胞特异性标志物（VE-钙黏蛋白、PECAM1、血管性血友病因子vWF），其中74.52%的细胞表达vWF。体外功能实验显示，该细胞具有单层阻抗对凝血酶的应答能力、跨内皮电阻（TEER）特性、摄取荧光标记的乙酰化低密度脂蛋白（acLDL）的能力；经促炎细胞因子（TNFα、IL1β）刺激后可上调ICAM1的表达，并能介导白细胞（HL60细胞）黏附，且该黏附作用可被抗ICAM1抗体阻断；在基质胶上可形成管状结构，抗血管生成分子可抑制该成管作用[2]
- hPSC-VSMCs表达平滑肌细胞特异性标志物（α-平滑肌肌动蛋白SMA、肌球蛋白IIB、SM22a），其中62.08%的细胞表达SMA，92.75%表达肌球蛋白IIB，100%表达SM22a。体外功能实验显示，该细胞经血管收缩试剂刺激后可出现细胞内钙浓度升高，且对U46619具有收缩反应[2]
体内研究 (In Vivo)
CP21R7 在体内大鼠骨质疏松模型中显示出功效。
1. CP21R7分化的hPSC-ECs体内功能：将含有hPSC-ECs的纤维蛋白原移植物（单独或与间充质干细胞MSCs、hPSC-VSMCs联合）植入小鼠体内。植入后7天或14天收获移植物，组织学分析（HE染色和人特异性CD31/DAB染色）显示移植物中形成了血管结构，证实分化后的内皮细胞具有体内功能[2]
细胞实验
1. β-catenin启动子活性荧光素酶实验：将β-catenin启动子驱动的荧光素酶报告基因质粒转染至hPSCs，转染后用CP21R7的6点3倍系列稀释浓度（10、3、1、0.3、0.1、0.03μM）处理细胞。指定孵育时间后检测荧光素酶活性，评估β-catenin启动子激活情况。实验独立重复5次，结果以均值±标准差（SD）表示[2]
2. 免疫荧光染色实验：
- β-catenin定位检测：用CP21R7处理hPSCs 24小时，固定、透化后加入β-catenin一抗和荧光标记二抗孵育，荧光显微镜下采集图像，实验独立重复3次[2]
- 细胞谱系标志物检测：hPSCs经CP21R7和BMP4诱导分化，前4天内固定细胞并加入多能性、中胚层、内胚层标志物一抗孵育，荧光显微镜下获取图像，实验独立重复3次[2]
- 血管细胞标志物检测：分化后的hPSC-ECs和hPSC-VSMCs固定后，分别加入内皮细胞特异性标志物（VE-钙黏蛋白、PECAM1、vWF）和平滑肌细胞特异性标志物（SMA、肌球蛋白IIB、SM22a）一抗孵育，采集荧光图像并量化阳性细胞比例[2]
- ICAM1表达检测：hPSC-ECs经TNFα处理后固定，加入ICAM1一抗和荧光二抗孵育，荧光显微镜下观察ICAM1上调情况[2]
3. 实时定量PCR（qPCR）实验：用CP21R7处理hPSCs，提取总RNA并逆转录为cDNA，使用β-catenin靶基因特异性引物进行qPCR。每个基因设3个生物学重复和技术重复，结果以均值±标准误（SEM）表示，数据来自3次独立实验[2]
4. 流式细胞术实验：
- 分化效率分析：分化后的hPSC-ECs和hPSC-VSMCs分别用CD144（内皮细胞标志物）和CD140b（平滑肌细胞标志物）抗体染色，流式细胞术检测阳性细胞比例，hPSC-ECs实验独立重复10次，hPSC-VSMCs实验独立重复16次[2]
- ICAM1定量检测：hPSC-ECs经TNFα或IL1β刺激后，用ICAM1抗体染色，流式细胞术量化ICAM1表达水平[2]
5. 白细胞黏附实验：hPSC-ECs经TNFα刺激后，加入HL60细胞共孵育，洗涤后对黏附的HL60细胞进行染色并在显微镜下计数。抗体阻断实验中，hPSC-ECs在TNFα刺激前用抗ICAM1抗体或对照抗体预处理。实验独立重复3次，结果以均值±SD表示[2]
6. 钙成像实验：分化第13天的hPSC-VSMCs负载钙敏感荧光染料，加入血管收缩试剂后，检测细胞内钙水平变化（相对荧光单位RFU的倍变化），在50秒（峰值）时记录数据。数据来自3次独立实验，采用Student’s t检验分析[2]
7. 收缩功能实验：UASMCs和hPSC-VSMCs经U46619处理48小时后，评估收缩功能，单次实验中对照组设1孔，实验组设2孔[2]
8. 成管实验：hPSC-ECs单独或与原代人脑血管周细胞（hBVPs）共同接种于基质胶上，孵育24小时后观察并拍摄成管情况，hPSC-ECs单独成管实验独立重复10次，与hBVPs共培养实验独立重复3次。抑制实验中加入抗血管生成分子，量化其对成管作用的抑制效应，数据来自3次独立实验[2]
动物实验
1. 纤维蛋白原移植物体内植入：
- 移植物制备：将hPSC-ECs与纤维蛋白原混合制备移植物；部分移植物与MSCs或hPSC-VSMCs联合使用。HUVECs + MSCs作为对照组[2]
- 动物模型：选择SCID小鼠或NOD SCID小鼠作为实验动物[2]
- 植入程序：将移植物植入小鼠体内，每组5只小鼠，每只小鼠植入2个移植物（每组10个移植物）[2]
- 样本采集和分析：分别于植入后7天或14天采集移植物。组织经固定、石蜡包埋、切片后，进行HE染色和人特异性CD31/DAB染色，以观察血管结构形成[2]
2. 大鼠骨质疏松模型实验：未提供涉及CP21R7的大鼠骨质疏松模型实验的详细方案；仅提及化合物34的疗效[1]
参考文献

[1]. Discovery of potent and bioavailable GSK-3beta inhibitors. Bioorg Med Chem Lett. 2010 Mar 1;20(5):1693-6.

[2]. Generation of vascular endothelial and smooth muscle cells from human pluripotent stem cells. Nat Cell Biol. 2015 Aug;17(8):994-1003.
其他信息
1. 背景：GSK-3β抑制剂具有潜在的治疗应用价值。一系列高效且高选择性的马来酰亚胺类GSK-3β抑制剂已被开发出来，其中化合物34（与CP21R7同属一个系列）对GSK-3β的IC50值为0.6 nM，对其他激酶的选择性超过100倍[1]
2. 背景：人类多能干细胞（hPSCs）需要分化为功能性成体细胞类型，用于体外疾病建模和临床应用。GSK3抑制联合BMP4处理是hPSCs快速高效分化为血管内皮细胞和平滑肌细胞的关键步骤[2]
3. 作用机制：CP21R7作为GSK3β抑制剂，通过调节β-catenin活性激活经典Wnt信号通路。这种激活，结合 BMP4 处理，可使 hPSCs 分化为中胚层谱系，并在 VEGF-A 刺激下进一步分化为血管内皮细胞，或在 PDGF-BB 刺激下分化为血管平滑肌细胞 [2]
4. 治疗潜力：CP21R7 分化的 hPSC-ECs 和 hPSC-VSMCs 在整体转录组和代谢组学特征方面与体内对应细胞高度相似，并显示出相关的体外和体内功能。这些细胞可用于构建人类血管疾病的真实模型 [2]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C19H15N3O2
分子量
317.34
精确质量
317.116
CAS号
125314-13-8
相关CAS号
125314-13-8
PubChem CID
5327711
外观&性状
Yellow to orange solid powder
密度
1.4±0.1 g/cm3
沸点
627.4±55.0 °C at 760 mmHg
闪点
333.2±31.5 °C
蒸汽压
0.0±1.8 mmHg at 25°C
折射率
1.714
LogP
2.4
tPSA
77.1
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
3
可旋转键数目(RBC)
2
重原子数目
24
分子复杂度/Complexity
585
定义原子立体中心数目
0
InChi Key
RGTAEYDIDMGJLX-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C19H15N3O2/c1-22-10-14(13-7-2-3-8-15(13)22)17-16(18(23)21-19(17)24)11-5-4-6-12(20)9-11/h2-10H,20H2,1H3,(H,21,23,24)
化学名
3-(3-Aminophenyl)-4-(1-methyl-3-indolyl)-1H-pyrrole-2,5-dione
别名
CP 21; CP-21; CP21
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: > 60 mg/mL
Water:< 1mg/mL
Ethanol:< 1mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.1512 mL 15.7560 mL 31.5119 mL
5 mM 0.6302 mL 3.1512 mL 6.3024 mL
10 mM 0.3151 mL 1.5756 mL 3.1512 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片

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