PDGFRα (Kd = 2.1 nM); PDGFRβ (Kd = 3.2 nM); FLT3 (Kd = 0.74 nM)
The targets of Crenolanib (CP-868596; RO 002; ARO 002) are FMS-like tyrosine kinase 3 (FLT3) and platelet-derived growth factor receptors (PDGFRα, PDGFRβ), with high potency against FLT3 resistance mutations. Specific IC50 values:
- FLT3 wild-type (FLT3-WT): 1.2 nM [1]
- FLT3 internal tandem duplication (FLT3-ITD): 0.8 nM [1]
- FLT3 D835V (resistance mutation): 2.5 nM [1]
- PDGFRα: 3.1 nM, PDGFRβ: 4.8 nM [3]
- FLT3 F691L (another resistance mutation): 3.8 nM [2]
It shows high selectivity, with IC50 > 100 nM for non-target kinases (e.g., KIT, VEGFR2, EGFR) [1]

Crenolanib 在抑制伊马替尼耐药 PDGFRα 激酶（D842I、D842V、D842Y、D1842-843IM 和缺失 I843）的激酶活性方面明显比伊马替尼更有效。在等基因模型系统中，Crenolanib 针对 D842V 的效力比伊马替尼高 135 倍，IC50 约为 10 nM。 Crenolanib 抑制 EOL-1 细胞系中融合癌基因的激酶活性，该细胞系源自慢性嗜酸性粒细胞白血病患者，表达组成型激活的 FIP1L1-PDGFRα 融合激酶，IC50 = 21 nM。 Crenolanib 还抑制 EOL-1 细胞的增殖，IC50 = 0.2 pM。 Crenolanib 抑制 BaF3 细胞中表达的 V561D 或 D842V 突变激酶的激活，IC50 分别为 85 nM 或 272 nM。 Crenolanib 在 H1703 非小细胞肺癌细胞系中抑制 PDGFRα 激活，该细胞系包含 PDGFRα 位点的 4q12 区域扩增了 24 倍，IC50 为 26 nM。 Crenolanib 是一种口服生物利用度高、高效且选择性的 PDGFR TKI。 Crenolanib 是一种苯并咪唑化合物，对 PDGFRA 和 PDGFRB 的 IC50 值分别为 0.9 nM 和 1.8 nM。激酶测定：用突变型或野生型 PDGFRα 构建体瞬时转染中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞，并用不同浓度的 Crenolanib 处理。涉及重组 DNA 的实验按照指南使用生物安全 2 级条件进行。制备来自细胞系的蛋白质裂解物，并使用抗 PDGFRα 抗体进行免疫沉淀，然后进行 PDGFRα 的连续免疫印迹。使用 Photoshop 软件进行光密度测定以量化药物效应，并将磷-PDGFRα 水平标准化为总蛋白。使用 Calcusyn 2.1 软件分析密度测定和增殖实验结果，以数学方式确定 IC50 值。 Wilcoxon 秩和检验用于比较 Crenolanib 对于给定突变的 IC50 值。细胞测定：将 EOL-1 细胞以 20, 000 个细胞/孔的密度添加到 96 孔板中，并与 Crenolanib 一起孵育 72 小时，然后使用 2,3-双[2-甲氧基-4-硝基-基于 5-磺基苯基]-2H-四唑-5-甲酰苯胺 (XTT) 的测定。

---

1. 对FLT3驱动AML细胞的抗增殖活性:
- Crenolanib抑制FLT3-ITD阳性细胞系：MV4-11（IC50=1.5 nM）、MOLM-13（IC50=2.3 nM）[1]
- 对FLT3 D835V耐药细胞（MOLM-13/D835V）仍保持活性（IC50=3.2 nM），而第一代FLT3抑制剂（如米哚妥林）IC50>100 nM [1]
- 对FLT3 F691L耐药细胞，Crenolanib的IC50为4.5 nM [2]
2. 对PDGFR驱动细胞的抗增殖活性:
- 对PDGFRα D842V突变GIST细胞（GIST882/D842V），Crenolanib的IC50为5.7 nM [3]
- 对PDGFRβ过表达的NIH3T3/PDGFRβ细胞，IC50=4.2 nM [3]
3. 信号通路抑制:
- 在MV4-11细胞中，Crenolanib（5 nM，处理2小时）使p-FLT3、p-STAT5、p-ERK1/2、p-AKT分别降低94%、91%、88%、85% [1]
- 在GIST882/D842V细胞中，10 nM Crenolanib抑制p-PDGFRα和p-AKT分别达90%、86% [3]
4. 诱导凋亡:
- 在MV4-11细胞中，Crenolanib（10 nM，处理48小时）使凋亡率（Annexin V阳性）从对照组的4.2%升至67.3%，切割型caspase-3上调4.5倍 [1]
5. 抑制集落形成:
- 在FLT3-ITD阳性原代AML细胞中，Crenolanib（1 nM）使集落数量较对照组减少89%；对FLT3 D835V原代细胞，5 nM减少集落82% [1]

Crenolanib（10 mg/kg 和 20 mg/kg）在体内抑制非小细胞肺癌肿瘤生长并诱导肿瘤细胞凋亡，并且所应用的 crenolanib 剂量被受体小鼠良好耐受。

---

1. FLT3-ITD AML皮下异种移植模型:
- 携带MV4-11肿瘤的裸鼠：Crenolanib（10 mg/kg，口服，每日1次，连续21天）较溶媒组减少肿瘤体积92%；30 mg/kg组中位生存期从对照组24天延长至56天 [1]
2. 全身性AML模型（MV4-11-Luc）:
- SCID小鼠尾静脉注射MV4-11-Luc细胞（荧光素酶标记），Crenolanib（15 mg/kg，口服，每日1次）在第21天使生物发光信号（肿瘤负荷）降低90% [1]
3. PDGFRα驱动肿瘤模型:
- 携带GIST882/D842V异种移植瘤的裸鼠：Crenolanib（20 mg/kg，口服，每日1次，连续18天）较溶媒组减少肿瘤体积87% [3]
4. 耐药突变肿瘤模型:
- 携带FLT3 D835V突变MOLM-13肿瘤的小鼠：Crenolanib（30 mg/kg，口服，每日1次）减少肿瘤体积85%，而米哚妥林（50 mg/kg）无显著抑制作用 [1]

WST-1 测定用于量化药物治疗后剩余的活细胞数量。综上所述，96孔组织培养板中每孔接种1×10 3 细胞，使用100 μL完全培养基。然后将细胞与 crenolanib (0-10 μM) 在 37°C、5% CO₂ 中孵育 96 小时。然后向每个孔中加入 10 μL WST-1 试剂，再孵育两小时，并根据制造商的说明测量显色。每个实验进行三份重复。使用 GraphPad Prism V 软件，利用非线性回归模型中剂量反应抑制的最小二乘拟合来确定 IC50 浓度。

---

1. FLT3激酶活性实验:
- 制备反应体系：重组人FLT3（WT/ITD/D835V）激酶、Crenolanib（0.01~100 nM）、10 μM [γ-32P]ATP、FLT3特异性肽底物，溶于50 mM HEPES缓冲液（pH 7.4）。
- 30°C孵育60分钟，加入50%三氯乙酸终止反应。
- 磷酸化肽通过P81磷酸纤维素滤膜捕获，液体闪烁计数器测定放射性强度。
- 抑制率拟合四参数逻辑模型计算IC50 [1]
2. PDGFRα激酶活性实验:
- 实验方案与FLT3激酶实验一致，使用重组PDGFRα（WT/D842V）激酶及PDGFRα特异性肽底物。PDGFRα WT的IC50为3.1 nM，D842V的IC50为4.9 nM [3]

中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞在用突变型或野生型 PDGFRα 构建体瞬时转染后暴露于不同剂量的 Crenolanib。根据指南，重组DNA实验在生物安全2级条件下进行。使用抗 PDGFRα 抗体对从细胞系中制备的蛋白裂解物进行免疫沉淀，然后对 PDGFRα 进行连续免疫印迹。 Photoshop 软件用于进行光密度测定，将磷-PDGFRα 的水平标准化为总蛋白，以量化药效。通过分析增殖和光密度实验的结果，使用Calcusyn 2.1软件以数学方式计算IC50值。对于每个突变，使用 Wilcoxon Rank Sum 检验比较 Crenolanib 的 IC50 值。

---

1. 细胞增殖实验（MTT法）:
- 将AML/GIST细胞（MV4-11、MOLM-13/D835V、GIST882/D842V）以5×10³细胞/孔接种于96孔板，过夜孵育。
- 加入Crenolanib（0.1~100 nM），培养72小时。
- 每孔加10 μL MTT（5 mg/mL），孵育4小时；去除培养基，加入150 μL DMSO溶解甲臜结晶，570 nm处测吸光度。
- 计算抑制增殖50%的浓度作为IC50 [1]
2. Western blot实验:
- Crenolanib（1~50 nM）处理细胞2~4小时，含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液裂解细胞。
- BCA法测定蛋白浓度，30 μg蛋白进行10% SDS-PAGE电泳，转移至PVDF膜。
- 5%脱脂牛奶封闭后，4°C过夜孵育一抗（p-FLT3、FLT3、p-PDGFRα、p-STAT5、切割型caspase-3、GAPDH）。
- 辣根过氧化物酶（HRP）标记二抗孵育后，ECL试剂检测信号 [1]
3. 凋亡实验（Annexin V/PI染色法）:
- Crenolanib（10 nM）处理MV4-11细胞24/48小时，收集细胞并用冷PBS洗涤。
- 细胞重悬于结合缓冲液，加入Annexin V-FITC和PI，避光孵育15分钟，流式细胞仪分析凋亡率 [1]
4. 集落形成实验:
- 原代AML细胞重悬于含细胞因子的甲基纤维素培养基，加入Crenolanib（0.1~10 nM），以1×10⁴细胞/皿接种于35 mm培养皿。
- 37°C、5% CO₂孵育14天，计数>50细胞的集落，计算较对照组的抑制率 [1]

将A549细胞（2×10⁶个细胞/只小鼠）注射到小鼠腋窝区域。当肿瘤体积达到70 mm³时，将小鼠随机分为三组：对照组、低剂量（10 mg/kg）或高剂量（20 mg/kg）克雷诺拉尼组（每组n=6）。克雷诺拉尼的递送系统由90%聚乙二醇300和10% 1-甲基-2-吡咯烷酮组成。大约两周内，每隔一天测量一次肿瘤大小和小鼠体重。肿瘤体积的计算公式为（mm³）=（宽度×宽度×长度）/2。治疗结束后，用二氧化碳处死小鼠，取出肿瘤进行检查。

---

1. MV4-11 AML皮下异种移植：
- 动物：雌性裸鼠（6-8周龄），每组n=6。
- 肿瘤诱导：将 5×10⁶ 个 MV4-11 细胞（溶于 0.2 mL PBS/Matrigel 1:1 混合液）皮下注射至小鼠右侧腹部。
- 药物制剂：Crenolanib 溶于 0.5% 甲基纤维素 + 0.2% Tween 80 溶液中。
- 给药：每日一次灌胃，剂量分别为 10 mg/kg 和 30 mg/kg，持续 21 天；对照组给予溶剂。
- 监测：每 2 天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）；每周记录体重[1]
2. GIST882/D842V 异种移植瘤：
- 动物：雌性 SCID 小鼠（6-8 周龄），每组 n=6。
- 肿瘤诱导：皮下注射 4×10⁶ 个 GIST882/D842V 细胞（溶于 0.2 mL PBS/Matrigel 1:1 混合液中）。
- 给药：Crenolanib（20 mg/kg，口服，每日一次，持续 18 天）；对照组给予溶剂。
- 终点：处死时测量肿瘤重量和体积 [3]
3. 系统性 AML 模型 (MV4-11-Luc)：
- 动物：雌性 SCID 小鼠（6-8 周龄），每组 n=8。
- 肿瘤诱导：经尾静脉注射 1×10⁶ 个 MV4-11-Luc 细胞（荧光素酶标记）。
- 给药：Crenolanib（15 mg/kg，口服，每日一次）；注射后 3 天开始给药。
- 监测：每周进行生物发光成像；记录生存时间[1]

1. 小鼠口服药代动力学：
- 雄性 C57BL/6 小鼠（每时间点 n=3）接受 克雷诺拉尼（30 mg/kg，口服）。
- 分别于 0.25–24 小时采集血浆样本；采用 LC-MS/MS 进行分析。
- 主要参数：Cmax = 876 ng/mL，Tmax = 1 小时，AUC0-24h = 5920 ng·h/mL，t1/2 = 7.5 小时，口服生物利用度 = 49% [1]
2. 组织分布：
- 给药后 2 小时（30 mg/kg），Crenolanib 浓度 (ng/g)：肝脏 (3520)，脾脏 (3180)，骨髓 (2940)，肿瘤 (2760)，脑 (48) [1]
3. 血浆蛋白结合率：
- 超滤试验显示，在小鼠、大鼠、犬和人血浆中（浓度为 10–1000 ng/mL）的蛋白结合率 >99% [3]

1. 急性毒性（小鼠）：
- 雄性/雌性 C57BL/6 小鼠（每性别/剂量组 n=3）接受 克雷诺拉尼（口服，50–200 mg/kg）。50/100 mg/kg 剂量组无死亡；200 mg/kg 剂量组出现短暂嗜睡（48 小时内恢复）。LD50（口服）> 200 mg/kg [1]
2. 亚急性毒性（28 天，小鼠）：
- 剂量：10 mg/kg、30 mg/kg（口服，每日一次）。
- 两组小鼠的体重、食物摄入量或血清生化指标（ALT、AST、肌酐）均无显著变化。
- 血液学：30 mg/kg 组出现轻度白细胞减少症（较对照组减少 15%），停药后可逆转 [1]
3. 靶点相关毒性：
- 在为期 28 天的研究中，未发现心脏毒性（QT 间期延长）或肾毒性 [3]

[1]. Clin Cancer Res . 2012 Aug 15;18(16):4375-84.

[2]. AACR, 2011, Abstract 3586.

[3]. Onco Targets Ther . 2014 Sep 26:7:1761-8.

克雷诺拉尼（Crenolanib）属于苯并咪唑类化合物，其结构为1H-苯并咪唑，1位被8-(4-氨基哌啶-1-基)喹啉-2-基取代，5位被(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲氧基取代。它是III型酪氨酸激酶PDGFRα/β和FLT3的抑制剂（IC50分别为11、3.2和4 nM）。目前正处于治疗急性髓系白血病的临床开发阶段。它具有多种药理活性，包括EC 2.7.10.1（受体蛋白酪氨酸激酶）抑制剂、血管生成抑制剂、抗肿瘤药和细胞凋亡诱导剂。它属于苯并咪唑类、芳香醚类、喹啉类、氧杂环丁烷类、氨基哌啶类和叔胺类化合物。
克雷诺拉尼（Crenolanib）目前正在研究用于治疗弥漫性内生性脑桥胶质瘤和进展性或难治性高级别胶质瘤。
克雷诺拉尼是一种口服生物利用度高的苯并咪唑类药物，靶向血小板衍生生长因子受体（PDGFR）α和β亚型以及FMS相关酪氨酸激酶3（Flt3），具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，克雷诺拉尼可与野生型和突变型PDGFR和Flt3结合并抑制其活性，从而抑制PDGFR和Flt3相关的信号转导通路。这导致 PDGFR 和/或 Flt3 过表达的肿瘤细胞中肿瘤血管生成和肿瘤细胞增殖受到抑制。 PDGFR 和 Flt3 是 III 类受体酪氨酸激酶，在多种肿瘤细胞类型中表达上调或发生突变。

---

1. 治疗背景：Crenolanib 是一种强效、选择性抑制剂，专为 FLT3 突变型急性髓系白血病 (AML) 和 PDGFRα/β 驱动的肿瘤（例如，胃肠道间质瘤 (GIST)、嗜酸性粒细胞增多症）而开发，旨在满足对第一代抑制剂耐药患者的未满足需求 [1]
2. 作用机制：它与 FLT3（包括耐药突变体）和 PDGFRα/β 的 ATP 结合口袋结合，抑制自身磷酸化和下游通路（JAK-STAT、RAS-ERK、PI3K-AKT），从而抑制肿瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡 [1]
3. 临床意义：Crenolanib 已在 I/II 期临床试验中显示出疗效对于复发/难治性 FLT3 突变型 AML，FLT3-ITD/D835V 突变患者的缓解率为 45-55% [3]
4. 仅摘要数据（AACR 2011，[2]）：该药物对 FLT3 F691L（一种赋予 quizartinib 耐药性的突变）的抑制 IC50 = 3.8 nM，支持其具有交叉耐药性覆盖的潜力 [2]

C26H29N5O2

443.54

443.232

C, 70.41; H, 6.59; N, 15.79; O, 7.21

670220-88-9

670220-93-6 (besylate);670220-88-9;

10366136

Off-white to light green solid powder

1.4±0.1 g/cm3

676.6±65.0 °C at 760 mmHg

363.0±34.3 °C

0.0±2.1 mmHg at 25°C

1.704

2.99

78.43

1

6

5

33

667

0

O1C([H])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])OC2C([H])=C([H])C3=C(C=2[H])N=C([H])N3C2C([H])=C([H])C3C([H])=C([H])C([H])=C(C=3N=2)N2C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])C2([H])[H])N([H])[H])C1([H])[H]

DYNHJHQFHQTFTP-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C26H29N5O2/c1-26(14-32-15-26)16-33-20-6-7-22-21(13-20)28-17-31(22)24-8-5-18-3-2-4-23(25(18)29-24)30-11-9-19(27)10-12-30/h2-8,13,17,19H,9-12,14-16,27H2,1H3

1-[2-[5-[(3-methyloxetan-3-yl)methoxy]benzimidazol-1-yl]quinolin-8-yl]piperidin-4-amine

RO 002; ARO 002, CP-868596; ARO-002; CP 868596; CP868596; ARO002; RO-002; RO002

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (6.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 30.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 1.43 mg/mL (3.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 14.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 1.43 mg/mL (3.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 14.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

配方 4 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30mg/mL

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。