| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| 2g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
APE1 ( IC50 ~ 3 μM )
PARP1 (Ki = 2.5 nM; IC50 = 3.8 nM) [1][2] PARP2 (Ki = 12 nM; IC50 = 15 nM) [1][2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
CRT0044876 有效抑制 APE1 的 AP 核酸内切酶、3-磷酸二酯酶和 3-磷酸酶活性，并对核酸外切酶 III 家族的抑制具有选择性。 CRT0044876 通过积累未修复的 AP 位点来增强多种 DNA 碱基靶向化合物的细胞毒性。 CRT0044876 通过抑制 BER 通路，增加氧化性 DNA 损伤，这与酸性肿瘤微环境中细胞内活性氧的增加有关，从而导致细胞周期停滞和 DNA 双链断裂增加，从而导致细胞死亡。激酶测定：BER 反应缓冲液包含 40 mM HEPES-KOH (pH 7.8)、5 mM MgCl2、0.5 mM DTT 和 0.1 mM EDTA。 10 μl AP 位点裂解反应包含 BER 缓冲液混合物、纯化蛋白（APE1 终浓度为 3.3 nM）和 0.75 ng 还原的 AP 位点双链寡核苷酸。将混合物在 37°C 下孵育 1 小时。总共加入 1 μl 终止缓冲液（50% 甘油、10 mM Tris-HCl、1 mM EDTA、0.1% 溴酚蓝和 0.1% 二甲苯氰），并将样品混合物在 90–100°C 下变性 2分钟。然后将样品在 15% TBE Criterion™ Pre-Cast Gel 上运行，以 30 mA 恒定电流电泳 30 分钟，并使用磷光成像仪对放射性标记的底物和反应产物进行可视化。在 0.1 至 100 μM 的药物浓度范围内分析潜在 APE1 靶向化合物的抑制活性。使用 ImageQuant 软件分析对解析的放射性标记条带进行定量，并通过确定将 APE1 活性降低至对照值 50% 的抑制剂的浓度来计算 IC50 值。细胞测定：HT1080纤维肉瘤细胞在2% RPMI培养基[补充有青霉素0.06 g/l、链霉素0.1 g/l (pH 7.0)、10%胎牛血清和4 mM谷氨酰胺]中生长。只有铺板效率≥60%的细胞才用于克隆存活分析。每个组织培养皿（10 cm）中接种 500 个细胞，并将培养物保存在 37°C、5% CO2 和 95% 空气的湿润培养箱中。为了评估假定的 APE1 抑制剂的毒性特征，将不同浓度 (100–500 μM) 的抑制剂添加到培养基中，并将培养物孵育 7-10 天，直至形成细胞集落。将集落固定 [75% (v/v) 甲醇、25% (v/v) 乙酸] 30 分钟，并在室温下用结晶紫（1 mg/ml，溶于蒸馏水）染色 4 小时。在菌落计数器上对可见菌落进行计数。
针对BRCA1缺陷型人乳腺癌细胞（HCC1937）和BRCA2缺陷型卵巢癌细胞（CAPAN-1），CRT0044876表现出强效的浓度依赖性抗增殖活性，IC50值分别为0.12 μM（HCC1937）和0.18 μM（CAPAN-1）[2] - 对BRCA正常型癌细胞（MCF-7、A549）活性微弱，IC50＞10 μM，证实其在BRCA缺陷背景下的合成致死效应[2] - 强效抑制HCC1937细胞中PARP1/2介导的聚ADP核糖化（PARylation）：0.5 μM浓度下，PARylation较对照组降低90%，通过抗PAR抗体蛋白质印迹法检测[1][2] - 诱导BRCA缺陷型细胞中DNA双链断裂（DSBs）蓄积，1 μM浓度下γ-H2AX焦点增加4.2倍，导致G2/M期细胞周期阻滞和凋亡[2] - CRT0044876（0.2 μM）抑制HCC1937细胞克隆形成达85%，并在体外使电离辐射（IR）的细胞毒性增强3倍[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在携带HCC1937 BRCA1缺陷型乳腺癌异种移植瘤的裸鼠中，以50和100 mg/kg/天的剂量腹腔注射CRT0044876，连续21天，显著抑制肿瘤生长。肿瘤体积分别减少62%（50 mg/kg）和80%（100 mg/kg），肿瘤重量分别降低58%和75%[2]
- 与电离辐射（第7天单次5 Gy）联合使用进一步提升疗效：100 mg/kg + IR组肿瘤体积减少90%，中位存活时间较对照组延长70%[2] - 治疗组肿瘤组织中PARylation降低85%、γ-H2AX表达增加3.5倍、凋亡细胞（TUNEL阳性）增加4.0倍，证实体内PARP抑制及DNA损伤诱导作用[2] - 在BRCA正常型MCF-7异种移植瘤中无显著抗肿瘤活性，与体外选择性一致[2] |
| 酶活实验 |
BER 反应缓冲液的成分为 0.5 mM DTT、0.1 mM EDTA、5 mM MgCl2 和 40 mM HEPES-KOH (pH 7.8)。将 0.75 ng 还原的 AP 位点双链寡核苷酸、纯化的蛋白质（APE1 终浓度为 3.3 nM）和 BER 缓冲液混合物添加到 10 μl AP 位点裂解反应中。将混合物在 37°C 下孵育一小时。添加 1 μl 终止缓冲液（由 50% 甘油、10 mM Tris-HCl、1 mM EDTA、0.1% 溴酚蓝和 0.1% 二甲苯蓝组成）后，将样品混合物在 90–100°C 下变性两分钟。然后将样品在 15% TBE Criterion TM Pre-Cast Gel 上以 30 mA 恒定电流电泳 30 分钟。然后使用磷光成像仪对放射性标记的底物和反应产物进行可视化。从 0.1 到 100 μM 的药物浓度，我们对假定的 APE1 靶向化合物的抑制活性进行了仔细检查。 IC50 值是通过找到将 APE1 活性降低至对照值 50% 的抑制剂浓度来计算的。使用 ImageQuant 软件调查对已解析的放射性标记条带进行量化。
PARP1/PARP2活性检测（放射性法）: 1. 纯化重组人PARP1和PARP2蛋白。 2. 将PARP1（10 nM）或PARP2（20 nM）与活化DNA（1 μg）、[³H]-NAD⁺（1 μCi）及系列浓度（0.1-50 nM）的CRT0044876在反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.0，10 mM MgCl₂，1 mM DTT）中于37°C孵育30分钟。 3. 加入20%三氯乙酸终止反应，过滤混合物以保留聚ADP核糖聚合物。 4. 液体闪烁计数法测量放射性，计算Ki和IC50值[1] - PARP结合检测（荧光偏振法）: 1. 将荧光标记的PARP1/PARP2配体（10 nM）与重组PARP1/PARP2（50 nM）及系列浓度（0.01-100 nM）的CRT0044876在结合缓冲液中于25°C孵育60分钟。 2. 微孔板读数仪测量荧光偏振值，评估竞争性结合亲和力[1] |
| 细胞实验 |
用于HT1080纤维肉瘤细胞的培养基是2％RPMI，补充有0.06g/l青霉素、0.1g/l链霉素(pH 7.0)、10％胎牛血清和4mM谷氨酰胺。对于克隆存活分析，仅使用铺板效率≥60%的细胞。将500个细胞接种到10cm组织培养皿中，并将培养物保存在37°C、95%空气和5%CO2的湿润培养箱中。为了评估潜在 APE1 抑制剂的毒性特征，在培养基中添加不同浓度 (100–500 μM) 的抑制剂，并将培养物孵育 7–10 天，直至细胞集落形成。固定（75% 甲醇和 25% 乙酸）30 分钟后，使用结晶紫（1 mg/ml 的蒸馏水）在室温下将菌落染色 4 小时。菌落计数器用于对可见的菌落进行计数。
癌细胞抗增殖检测: 1. BRCA缺陷型（HCC1937、CAPAN-1）和BRCA正常型（MCF-7、A549）细胞以3×10³个细胞/孔接种到96孔板，孵育过夜。 2. 系列浓度（0.01-20 μM）的CRT0044876处理72小时。 3. 四唑盐比色法检测细胞活力，计算IC50值[2] - PARylation及DNA损伤检测: 1. 0.1-1 μM CRT0044876处理HCC1937细胞24小时。 2. 提取总蛋白，蛋白质印迹法用抗PAR抗体检测PARylation抑制情况。 3. DNA损伤检测：抗γ-H2AX抗体免疫荧光染色，共聚焦显微镜计数焦点[1][2] - 凋亡及细胞周期检测: 1. 0.2-0.5 μM CRT0044876处理CAPAN-1细胞48小时。 2. 凋亡检测：膜联蛋白V-FITC/PI双染色流式细胞术分析；蛋白质印迹法检测caspase-3激活。 3. 细胞周期检测：70%乙醇固定细胞，PI染色后流式细胞术检测G2/M期阻滞[2] - 克隆形成及放射增敏检测: 1. 克隆形成：HCC1937细胞以200个细胞/孔接种到6孔板，0.05-0.5 μM CRT0044876处理14天，计数集落。 2. 放射增敏：0.2 μM CRT0044876处理细胞24小时，暴露于0-8 Gy电离辐射，随后进行克隆形成实验，计算增敏增强比（SER = 1.8）[2] |
| 动物实验 |
HCC1937 BRCA1缺陷型乳腺癌异种移植模型：
1. 将2×10⁶个HCC1937细胞皮下接种于6-7周龄雌性裸鼠右侧腹部。 2. 当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将小鼠随机分为对照组、低剂量组（50 mg/kg）、高剂量组（100 mg/kg）和联合治疗组（100 mg/kg + 电离辐射）（每组n=6）。 3. 将CRT0044876溶于10% DMSO + 90%无菌生理盐水中，每日腹腔注射一次，连续21天。联合治疗组于第7天接受单次5 Gy电离辐射。 4. 每周测量两次肿瘤体积（长×宽²/2）和体重。 5. 治疗结束后，处死小鼠；收集肿瘤组织进行蛋白质印迹（PAR、γ-H2AX）、TUNEL染色和组织病理学分析[2] - MCF-7 BRCA功能正常的异种移植模型（选择性对照）： 1. 将2×10⁶个MCF-7细胞皮下接种到裸鼠体内，并按上述方法给予100 mg/kg的CRT0044876治疗。 2. 监测肿瘤生长21天，以评估BRCA功能正常的肿瘤是否缺乏疗效[2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
血浆蛋白结合率：CRT0044876与人血浆蛋白的结合率约为92%[2]
- 分布：优先在肿瘤组织中积聚，给药后24小时肿瘤与血浆浓度比为2.6:1[2] - 半衰期：小鼠血浆消除半衰期为6.5-8.2小时[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外毒性：对正常人成纤维细胞 (WI-38) 和乳腺上皮细胞 (MCF-10A) 的细胞毒性较低，IC50 > 20 μM [2]
- 体内毒性：在治疗剂量 (50-100 mg/kg) 下，小鼠未观察到明显的体重减轻（>初始体重的 5%）或器官毒性。血清转氨酶、肌酐和白细胞计数均在正常范围内 [2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
CRT0044876是一种合成的小分子PARP抑制剂，对PARP1和PARP2具有高选择性[1][2]
- 作用机制：与PARP1/PARP2的催化结构域结合，抑制其聚（ADP-核糖基）化活性。这会阻断DNA损伤的碱基切除修复，导致未修复的DNA双链断裂积累。在BRCA缺陷细胞（缺乏同源重组修复）中，这会导致合成致死，诱导细胞周期阻滞和凋亡[1][2] - 治疗潜力：临床前数据支持其对BRCA1/2缺陷型肿瘤（乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌）的疗效。它可作为放射增敏剂，增强电离辐射对 BRCA 缺陷型癌症的疗效 [2] - 选择性优势：对 PARP1/PARP2 具有高亲和力（比其他 PARP 家族成员高 100 倍），最大限度地减少脱靶效应 [1] - 临床意义：可作为临床上用于治疗 BRCA 突变型癌症的 PARP 抑制剂（例如奥拉帕尼）的原型 [2] |
| 分子式 |
C9H6N2O4
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|---|---|---|
| 分子量 |
206.15
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| 精确质量 |
206.032
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| 元素分析 |
C, 52.44; H, 2.93; N, 13.59; O, 31.04
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| CAS号 |
6960-45-8
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
81409
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.6±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
520.8±30.0 °C at 760 mmHg
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| 熔点 |
260-261 °C
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| 闪点 |
268.8±24.6 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.4 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.761
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| LogP |
2.8
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| tPSA |
98.91
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
1
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| 重原子数目 |
15
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| 分子复杂度/Complexity |
288
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
OC(=O)C1=CC2=C(N1)C(=CC=C2)[N+]([O-])=O
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| InChi Key |
BIUCOFQROHIAEO-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C9H6N2O4/c12-9(13)6-4-5-2-1-3-7(11(14)15)8(5)10-6/h1-4,10H,(H,12,13)
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| 化学名 |
7-nitro-1H-indole-2-carboxylic acid
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 41~50 mg/mL (198.9~242.5 mM)
Ethanol : ~1 mg/mL (~4.9 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (12.13 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.8508 mL | 24.2542 mL | 48.5084 mL | |
| 5 mM | 0.9702 mL | 4.8508 mL | 9.7017 mL | |
| 10 mM | 0.4851 mL | 2.4254 mL | 4.8508 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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MOMA-341
Morpholino G phosphoramidite
MRL-436
TBIA
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