Cyclopamine (11-Deoxojervine)   中文名称: 环巴胺

Human Endogenous Metabolite

体外活性：环巴明抑制 Hedgehog 信号通路，IC50 为 46 nM，并在 [3H]Hh-Ag 结合测定中阻断 CHO-K1 细胞中表达的人 Smo 受体的活性，IC50 为 280 nM。 Cyclopamine 在表达 Patched (PTCH) mRNA 的肠源性肿瘤细胞系中以剂量依赖性方式显着抑制 Hedgehog 通路活性，并在 3 μM 浓度下诱导这些肿瘤细胞系生长抑制 75-95%，但对结肠肿瘤细胞没有 PTCH mRNA 表达，表明 Cyclopamine 治疗的效果与 Hedgehog 通路相关，而不是一般的细胞毒性。通过与 Smo 直接相互作用阻断 Hedgehog 信号传导，Cyclopamine (10 μM) 可抑制 SMOhigh Cyclopamine 反应细胞系 L3.6sl 和 Panc 05.04 的增殖 75-80%，并使细胞凋亡增加 2.5 至 3.5 倍，且不产生任何影响。影响 BxPC3-SMOlow 细胞系。环巴明处理显着降低 E3LZ10.7 细胞系中的 Snail mRNA 并增加 E-钙粘蛋白转录物。与细胞生长的抑制无关，Cyclopamine 处理可显着抑制 Hedgehog 依赖性 L3.6pl 细胞的侵袭表型，导致迁移细胞数量减少 500 倍以上，但不影响 Hedgehog 依赖性细胞系 Panc-1 。激酶测定：该测定使用荧光素酶作为读数，测量 Hh 信号通路的末期，即 Gli 的转录调节（Gli-Luc 测定）。环巴明通过在 DMSO 中连续稀释来制备用于测定，然后添加到空测定板中。将 TM3Hh12 细胞（含有 Hh 响应报告基因构建体 pTA-8xGli-Luc 的 TM3 细胞）重悬于含有 5% FBS 和 15 mM Hepes pH 7.3 的 F12 Hams/DMEM (1:1) 中，添加到测定板中并与环巴明一起孵育在 37 °C、5% CO2 下大约 30 分钟。然后将 1 nM Hh-Ag 1.5 添加到测定板中，并在 5% CO2 存在下于 37 °C 下孵育。 48 小时后，将 Bright-Glo 或 MTS 试剂添加到测定板中，并测定 492 nm 处的发光或吸光度。 IC50 值定义为逻辑曲线的拐点，通过使用 R 统计软件包对来自 MTS 测定的 Gli 驱动的荧光素酶发光或吸光度信号与环巴明的 log10（浓度）进行非线性回归来确定。细胞测定：将细胞（SEG1、OE33、KYAE、KYSE180、SNU1、AGS、SNU16、NCI-N-87、HUCCT1、PANC1、PL5、PL6、BXPC3、HS766T、KYSE150、GBD1、DLD1 和 HCT116）暴露于环巴明在 96 孔板中。通过 MTS（可溶性四唑盐）测定法测量细胞活力。使用 CellTiter96 比色测定法在第 2 天和第 4 天在 490 nm (OD490) 处测量光密度来确定活细胞质量。相对生长的计算公式为 OD（第 4 天）﹣OD（第 2 天）/OD（第 2 天）。

以 50 mg/kg/天的剂量给予环巴明 22 天，可根除小鼠体内的 HUCCT1 异种移植物，且没有明显的副作用。在Panc 05.04和L3.6sl衍生的肿瘤中，环巴明以1.2 mg的剂量治疗7天可诱导肿瘤细胞显着凋亡，并使肿瘤质量分别减少50-60%，但在BxPC3-SMOlow肿瘤中则不然。 [3] 单独使用环巴明可显着抑制 E3LZ10.7 和 L3.6pl 异种移植物中的肿瘤转移，并且与吉西他滨联合使用时可完全消除转移。

Gli-Luc 测定使用荧光素酶作为读数，测量 Gli（Hh 信号通路的最后阶段）的转录调节。在 DMSO 中连续稀释后，环巴明即可用于测定，并添加到空的测定板中。重悬于含有 5% FBS 和 15 mM Hepes pH 7.3 的 F12 Ham's/DMEM (1:1) 中后，将 TM3Hh12 细胞（具有 Hh 反应报告基因构建体 pTA-8xGli-Luc 的 TM3 细胞）添加到测定板中并孵育与环巴明在 37°C、5% CO₂ 中反应约 30 分钟。之后，测定板中充满 1 nM Hh-Ag 1.5，并在 37 °C、5% CO₂ 下孵育。 48 小时后，用 Bright-Glo 或 MTS 试剂重新填充测定板，并测量 492 nm 处的吸光度或发光度。 Logistic 曲线的拐点或 IC50 值是通过使用 R 统计软件包对 MTS 测定中的 Gli 驱动的荧光素酶发光或吸光度信号与 log10（环巴明浓度）进行非线性回归来找到的。

在 96 孔板中，细胞暴露于环巴明。可溶性四唑盐（MTS）测定用于测量细胞活力。使用 CellTiter96 比色测定法，第 2 天和第 4 天在 490 nm (OD₄₉₀) 处进行光密度测量以确定活细胞质量。计算相对生长的公式为 OD（第 4 天）⋣OD（第 2 天）/OD（第 2 天）。

[1]. Bioorg Med Chem Lett . 2009 Jan 15;19(2):328-31.

[2]. Nature . 2003 Oct 23;425(6960):846-51.

[3]. Nature . 2003 Oct 23;425(6960):851-6.

[4]. Cancer Res . 2007 Mar 1;67(5):2187-96.

C27H41NO2

411.62

411.31

C, 78.78; H, 10.04; N, 3.40; O, 7.77

4449-51-8

Solid powder

C[C@H]1C[C@@H]2[C@H]([C@H]([C@]3(O2)CC[C@H]4[C@@H]5CC=C6C[C@H](CC[C@@]6([C@H]5CC4=C3C)C)O)C)NC1

QASFUMOKHFSJGL-LAFRSMQTSA-N

InChI=1S/C27H41NO2/c1-15-11-24-25(28-14-15)17(3)27(30-24)10-8-20-21-6-5-18-12-19(29)7-9-26(18,4)23(21)13-22(20)16(27)2/h5,15,17,19-21,23-25,28-29H,6-14H2,1-4H3/t15-,17+,19-,20-,21-,23-,24+,25-,26-,27-/m0/s1

(3S,3'R,3'aS,6'S,6aS,6bS,7'aR,9R,11aS,11bR)-3',6',10,11b-tetramethylspiro[2,3,4,6,6a,6b,7,8,11,11a-decahydro-1H-benzo[a]fluorene-9,2'-3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-3H-furo[3,2-b]pyridine]-3-ol

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Solubility in Formulation 1: ≥ 1.67 mg/mL (4.06 mM) (saturation unknown) in 10% EtOH + 90% Corn Oil (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 16.7 mg/mL clear EtOH stock solution to 900 μL of corn oil and mix well.

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Solubility in Formulation 2: ≥ 1 mg/mL (2.43 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 10.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of corn oil and mix evenly.

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Solubility in Formulation 3: ≥ 0.5 mg/mL (1.21 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 5.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 400 μL PEG300 and mix evenly; then add 50 μL Tween-80 to the above solution and mix evenly; then add 450 μL normal saline to adjust the volume to 1 mL.
Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH₂ O to obtain a clear solution.

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Solubility in Formulation 4: ≥ 0.5 mg/mL (1.21 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 5.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 400 μL PEG300 and mix evenly; then add 50 μL Tween-80 to the above solution and mix evenly; then add 450 μL normal saline to adjust the volume to 1 mL.
Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH₂ O to obtain a clear solution.

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Solubility in Formulation 5: 10% DMSO+30% PEG 300+5% Tween 80+ddH2O: 1mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。